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Avalia??o da a??o antitumoral isolada e combinada do anti-hipertensivo carvedilol e nanopart?cula de ouro em c?lulas de carcinoma hepatocelular humano

Pessoa, Jonas Bispo 06 December 2016 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-06-02T23:35:26Z No. of bitstreams: 1 JonasBispoPessoa_DISSERT.pdf: 2858666 bytes, checksum: e23bdc728a23ba1b10c5f54490f0ed53 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-06-12T22:35:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JonasBispoPessoa_DISSERT.pdf: 2858666 bytes, checksum: e23bdc728a23ba1b10c5f54490f0ed53 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T22:35:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JonasBispoPessoa_DISSERT.pdf: 2858666 bytes, checksum: e23bdc728a23ba1b10c5f54490f0ed53 (MD5) Previous issue date: 2016-12-06 / As nanopart?culas de ouro (NPO) t?m despontado como uma importante modalidade de tratamento para o c?ncer, devido ?s suas caracter?sticas f?sico-qu?micas. Somado a isso, o anti-hipertensivo carvedilol tem demonstrado, na literatura recente, potencial antitumoral. Diante disto, o objetivo do trabalho foi avaliar a a??o antitumoral, isolada e combinada, da nanopart?cula de ouro e do anti-hipertensivo carvedilol sobre c?lulas tumorais (HepG2) e n?o tumorais (HEK-293) nos tempos de 24 horas e 48 horas. Para tanto, foi realizado o teste de viabilidade pela exclus?o do azul tripan para as doses de NPO (1 ?g/ml, 3 ?g/ml, 6,25 ?g/ml, 12,5 ?g/ml, 25 ?g/ml e 50?g/ml) e carvedilol (1,5 ?M, 3 ?M, 6,25 ?M, 12,5 ?M, 50 ?M, 100 ?M, 200 ?M e 300 ?M) para selecionar as que provocassem baixa inibi??o do crescimento das c?lulas da linhagem HepG2. No tratamento combinado, as c?lulas foram submetidas ao tratamento com a NPO e, 24 horas depois, tratadas com carvedilol em diferentes doses (3 ?g/ml de NPO + 1,5 ?M de carvedilol e 6,25 ?g/ml de NPO + 3 ?M de carvedilol). As doses selecionadas do teste de viabilidade da NPO (3 ?g/ml e 6,25 ?g/ml) e carvedilol (1,5 ?M e 3 ?M) foram utilizadas, isoladas e em combina??o, para an?lise de morte celular por citometria de fluxo pela marca??o da Anexins V-FITC e iodeto de prop?dio (PI). A an?lise de estresse oxidativo foi realizada atrav?s da dosagem de GSH e dos n?veis de Malondialde?do (MDA). Posteriormente, as c?lulas tumorais foram analisadas quanto a express?o das prote?nas caspase-3, caspase-8, Bcl-2 e MAPK/ERK atrav?s da microscopia de imunofluoresc?ncia. Em seguida, os n?veis de mRNA de FADD, Apaf-1, survivin, MDR-1, EGFR, Akt e mTOR foram analisados relacionando-os a resist?ncia e morte celular. Os n?veis proteicos de Akt, mTOR e MAPK, para o tratamento combinado, foram mensurados atrav?s do western blotting. A avalia??o dos alvos intracelulares da NPO, isolada e em combina??o, foi realizada atrav?s da microscopia eletr?nica de transmiss?o (MET). As melhores doses do teste de viabilidade celular com a NPO (3 ?g/ml e 6,25 ?g/ml) e carvedilol (1,5 ?M e 3 ?M) apresentaram, atrav?s da citometria de fluxo, atividade pr?-apopt?tica sobre as c?lulas tumorais humanas (HepG2) com resultados estaticamente significativos para a combina??o (P<0,001). Em rela??o ?s c?lulas n?o tumorais (HEK-293), houve redu??o da apoptose total (P<0,05), para a maior dose da combina??o, e redu??o do estresse oxidativo na qual, os n?veis de GSH, mostrou-se elevado (P=0,0003) e os de MDA reduzidos (P<0,01), demonstrando capacidade protetora. Ao se observar a imunofluoresc?ncia, houve forte marca??o para caspase-3 (P<0,01) e caspase-8 (P<0,001), nos grupos tratados com a NPO (6,25 ?g/ml) e carvedilol (3?M), isoladamente e em combina??o, aus?ncia de marca??o de MAPK/ERK (P<0,001) e manuten??o da express?o de Bcl-2 (P>0,05) para os mesmos grupos. Al?m disso, a express?o de mRNA de prote?nas anti-apopt?ticas (EGFR Akt, mTOR), com P<0,001, e de resist?ncia (MDR-1), com P<0,01, mostrou-se subregulado, enquanto que, a express?o g?nica de prote?nas proapopt?ticas (FADD), com P<0,01, apresentou-se sobre-regulado para o tempo de 48 horas para combina??o de 6,25 ?g/ml de NPO e 3 ?M de carvedilol. Al?m disso, os n?veis proteico de Akt, mTOR e MAPK se encontraram reduzidos. A MET demonstrou a internaliza??o da NPO isolada, nas proximidades da membrana plasm?tica e, em combina??o, nas proximidades do n?cleo Com isso, pode-se concluir que a a??o combinada da NPO e carvedilol mostra efeitos proapopt?ticos sobre c?lulas tumorais mais efetivos que as doses isoladas e prote??o de c?lulas n?o tumorais. / Gold nanoparticles (NPO) have emerged as an important modality of treatment for cancer, due to their physicochemical characteristics. In addition to this, the antihypertensive carvedilol has been shown in the recent literature to be antitumor potential. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antitumor action, isolated and combined, of the gold nanoparticle and antihypertensive carvedilol on tumor cells (HepG2) and non-tumor cells (HEK-293) at 24 hours and 48 hours. The viability test was carried out by exclusion of tripan blue at doses of NPO (1 ?g / ml, 3 ?g / ml, 6.25 ?g / ml, 12.5 ?g / ml, 25 ?g / ml and 50 ?g / Ml) and carvedilol (1.5 ?M, 3 ?M, 6.25 ?M, 12.5 ?M, 50 ?M, 100 ?M, 200 ?M and 300 ?M) were used to select those that would cause low inhibition of growth of HepG2 cells . In the combined treatment, cells were treated with NPO and 24 hours later treated with carvedilol at different doses (3 ?g / ml NPO + 1.5 ?M carvedilol and 6.25 ?g / ml NPO + 3 ?M carvedilol). Selected doses of NPO viability test (3 ?g / ml and 6.25 ?g / ml) and carvedilol (1.5 ?M and 3 ?M) were used, alone and in combination, for cell death analysis by flow cytometry By the labeling of Anexins V-FITC and propidium iodide (PI). Oxidative stress analysis was performed by the determination of GSH and the levels of Malondialdehyde (MDA). Subsequently, tumor cells were analyzed for expression of caspase-3, caspase-8, Bcl-2 and MAPK / ERK proteins by immunofluorescence microscopy. Then, mRNA levels of FADD, Apaf-1, survivin, MDR-1, EGFR, Akt and mTOR were analyzed by relating them to resistance and cell death. Protein levels of Akt, mTOR and MAPK, for the combined treatment, were measured by western blotting. The evaluation of the intracellular targets of NPO, isolated and in combination, was performed by transmission electron microscopy (MET). The best doses of the cell viability test with NPO (3 ?g / ml and 6.25 ?g / ml) and carvedilol (1.5 ?M and 3 ?M) showed, by flow cytometry, pro-apoptotic activity on cells (HepG2) with statically significant results for the combination (P <0.001). In relation to the non-tumor cells (HEK-293), there was a reduction of total apoptosis (P <0.05), for the highest dose of the combination, and reduction of oxidative stress in which GSH levels were elevated P = 0.0003) and those of reduced MDA (P <0.01), showing protective capacity. When the immunofluorescence was observed, there were strong markers for caspase-3 (P <0.01) and caspase-8 (P <0.001) in the groups treated with NPO (6.25 ?g / ml) and carvedilol (3 ?M) Isolated and in combination, absence of MAPK / ERK labeling (P <0.001) and maintenance of Bcl-2 expression (P> 0.05) for the same groups. In addition, the expression of mRNA of anti-apoptotic proteins (EGFR Akt, mTOR), with P <0.001, and resistance (MDR-1), with P <0.01, was shown to be underregulated, whereas expression (PADF), with P <0.01, was overregulated for 48 hours for the combination of 6.25 ?g / ml NPO and 3 ?M carvedilol. In addition, the protein levels of Akt, mTOR and MAPK were reduced. The MET demonstrated the internalization of NPO alone, in the vicinity of the plasma membrane and, in combination, in the vicinity of the nucleus. Thus, it can be concluded that the combined action of NPO and carvedilol shows proapoptotic effects on tumor cells more effective than isolated doses And protection of non-tumor cells.
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Estudos estruturais e de química medicinal aplicados às enzimas da via glicolítica de protozoários: enolase de Plasmodium falciparum e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de Trypanosoma cruzi / Structural studies and medicinal chemistry on glycolysis pathway of protozoan enzymes: enolase from Plasmodium falciparum and glyceraldehyde-3-phosphate from Trypanosoma cruzi

Fernando Vasconcelos Maluf 31 July 2015 (has links)
A melhor compreensão dos mecanismos fisiopatológicos e farmacológicos aliados a métodos modernos de investigação tornaram possível a descoberta e o desenvolvimento de fármacos para diversas doenças e disfunções orgânicas em humanos. Os fármacos desenvolvidos atualmente são resultados de intensos esforços em pesquisa por equipes multidisciplinares, impactando diretamente na qualidade de vida das diversas populações no mundo. Nesse cenário, os grupos de pesquisas estabelecidos em Universidades com foco no planejamento de fármacos para doenças tropicais têm crescido. A Malária e a Doença de Chagas figuram com especial importância, a primeira pela expressiva mortalidade mundial, enquanto a segunda pela morbidade e seus impactos na população brasileira. O tratamento de ambas possui limitações que se agravam, seja pelo baixo número de opções terapêuticas, ou pelo desenvolvimento de cepas resistentes. As enzimas investigadas nesse doutoramento, enolase (PfEnolase) de Plasmodium falciparum e gliceraldeído3fosfato desidrogenase de Trypanosoma cruzi (TcGAPDH), são componentes da via glicolítica destes parasitas e são considerados alvos moleculares atrativos para o desenvolvimento de inibidores enzimáticos, dada a importância destas enzimas no processo de obtenção de energia do parasita. Os estudos fundamentamse na busca por modulação seletiva da atividade biológica dos alvos selecionados através do desenvolvimento de novas moléculas bioativas. O estabelecimento de protocolo de expressão e purificação para enzima Pfenolase permitiu sua obtenção em quantidade e pureza suficiente para condução de estudos cinéticos e de triagem biológica, com a identificação de cinco novas classes químicas bastante promissoras; além de ensaios de cristalização, que culminaram na determinação da enzima em diversos complexos cristalográficos. Os dados estruturais produzidos foram fundamentais para condução da abordagem computacional de triagem virtual, que permitiu a identificação de 31 moléculas candidatas a inibidoras de Pfenolase. Avanços significativos foram obtidos também com a enzima TcGAPDH, destacando-se as adaptações nos processos de obtenção da proteína recombinante e ensaio cinético, condução de ensaio de bioprospecção orientada com a identificação e caracterização da molécula isolada (tilirosídeo). Novas condições de cristalização foram identificadas e poderão ser empregadas no processo de obtenção de complexos cristalográficos futuros. Adicionalmente, desenvolveu-se uma ferramenta computacional, Kinecteasy, para processamento automatizado dos dados produzidos das etapas de triagem biológica. Os trabalhos integrados de biologia estrutural e química medicinal desenvolvidos contribuem significativamente para o avanço no processo de planejamento de novos inibidores para as enzimas selecionadas. / A better understanding of the pathophysiological and pharmacological mechanisms together with the modern research methods made possible the discovery and development of drugs for several humans´ diseases. The drugs currently developed are the result of intense efforts in research of multidisciplinary teams having as a direct consequence a remarkable impact on life quality of populations all over the world. In this scenario, research groups established at universities, with their focus on drug development for tropical diseases, are increasing. Malaria and Chagas disease deserve special attention, the former by the expressive world mortality, while the second by the morbidity and its impact on Brazilian population. Treatment for both has limitations, whether by the low number of therapeutic options, or by development of resistance. The target enzymes for this PhD project, enolase (PfEnolase) of Plasmodium falciparum and glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase from Trypanosoma cruzi (TcGAPDH), are essential components of glycolytic pathway and therefore related to the parasite energy production, thus, are considered attractive molecular targets for enzyme inhibitors development. Essentially, the proposed studies seek selective modulation of the target´s biological activity through the development of new bioactive molecules. The expression and purification protocols developed for Pfenolase have allowed us to obtain recombinant protein at suitable yield and purity for conducting screening assays, which has revealed five new chemical classes as Pfenolase inhibitors. Crystallization experiments were successfully conducted and 3D structure were determined for different complexes. Structural data was essential for performing the computational approach of virtual screening, which has allowed us to identify 31 inhibitor candidates for Pfenolase. Significant advances were obtained with TcGAPDH, highlighting the adaptations on recombinant protein protocol and kinetic assay. Assay-guided bioprospecting experiments were successfully performed with identification and characterization of isolated inhibitor (tiliroside). New crystallization conditions were identified and will be employed in future co-crystallization and soaking studies. Additionally, Kinecteasy, a computational tool, were developed for automated data processing of biological screening assays. The structure and medicinal chemistry studies presented here contribute significantly in the process of drug development for the selected enzymes.
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Desenvolvimento de um algoritmo para identificação e caracterização de cavidades em regiões específicas de estruturas tridimensionais de proteínas / Development of an algorithm to identify and characterize cavities in specific regions of three-dimensional structures of proteins.

Saulo Henrique Pires de Oliveira 25 May 2011 (has links)
A identificação e caracterização geométrica e físico-química de espaços vazios na estrutura tridimensional de proteínas é capaz de agregar informações importantes para guiar o desenho racional de drogas e a caracterização funcional de sítios de ligação e sítios catalíticos. Dessa forma, algumas ferramentas computacionais foram desenvolvidas nas últimas duas décadas, visando efetuar essas caracterizações. Contudo, as ferramentas existentes lidam com uma série de limitações, dais quais merecem destaque a falta de precisão, falta de capacidade de integração em protocolos de larga escala, falta de capacidade de customização e a falta de uma caracterização eletrostática . Tendo em mente estas limitações, desenvolvemos uma nova ferramenta, denominada KV-Finder, com o objetivo de estender as funcionalidades dos programas existentes, fornecendo assim uma caracterização sistemática mais eficiente e mais informativa dos espaços vazios da estrutura tridimensional de proteínas. Através de uma modelagem matricial baseada em um direcionamento realizado pelo usuário, nossa ferramenta identifica e caracteriza espaços vazios em topologias proteicas. O utilitário é capaz de quantificar o volume, a forma, a extensão de sua superfície, os resíduos proteicos que interagem com os espaços vazios e um mapa de cargas parciais da superfície encontrada. Nossa rotina foi integrada com ferramentas gráficas de modelagem molecular, fornecendo uma interação fácil e eficiente com o usuário. A validação de nosso algoritmo foi realizada em um conjunto de proteínas cujos diversos tipos de espaços vazios englobam os mais variados sítios de ligação e sítios catalíticos. O cálculo do volume de cavidades enzimáticas foi efetuado em larga escala, acompanhando a evolução do tamanho de bolsões na superfamília ALDH. Com relação aos outros softwares existentes, nossa ferramenta apresenta uma série de vantagens das quais merecem destaque menor tempo de execução, maior precisão, maior acessibilidade e facilidade de integração com outros programas, além das características únicas de permitir que a busca ocorra em regiões específicas dentro da proteína e de realizar um mapeamento parcial de cargas da superfície encontrada. / The identification and characterization of geometrical and physical-chemical properties in protein vacant spaces aggregates important information for steering rational drug designing and functional characterization of binding and catalytic sites. Therefore, several softwares have been develop during the past two decades in order to perform such characterization. Nevertheless, the existing tools still present a series of limitations such as lack of precision, lack of integrability in large scale protocols, lack of customization capacity and the lack of a proper electrostatic depiction. We developed a new software, dubbed KV-Finder, in order to complement and extend the functionality of existing softwares, providing a systematic and more descriptive portrayal of protein vacant spaces. By employing a user-driven matrix modeling, our tool identifies and characterizes empty spaces in all sorts of protein topologies. The software quantifies the volume, the area and the shape of the surface, the residues that interact with the vacant spaces and a partial charge map of the computed surface. Our routine was integrated with a graphical molecular modeling software, providing the user with a simple and easy-to-use interface. KV-Finder has been validated with a distinct set of proteins and binding sites. The volume computation was carried in large scale, accompanying the evolution of the pocket volume in the ALDH superfamily. Compared with existing software, KV-Finder presents greater precision, greater accessibility and ease of integration in large scale protocols and visualization softwares. Also, the software possesses unique and innovative features such as the ability to segment and subsegment the empty spaces, a electrostatic depiction and a ligand interaction highlight feature.
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Distribui??o do ?xido n?trico no compartimento subcortical do telenc?falo e hipocampo do Moc? (Kerodon rupestris)

Andrade, Wylqui Mikael Gomes de 24 July 2017 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-11-06T21:20:56Z No. of bitstreams: 1 WylquiMikaelGomesDeAndrade_DISSERT.pdf: 4821607 bytes, checksum: ca631cc1d1edb98183b539cabd333625 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-11-21T00:04:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 WylquiMikaelGomesDeAndrade_DISSERT.pdf: 4821607 bytes, checksum: ca631cc1d1edb98183b539cabd333625 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-21T00:04:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 WylquiMikaelGomesDeAndrade_DISSERT.pdf: 4821607 bytes, checksum: ca631cc1d1edb98183b539cabd333625 (MD5) Previous issue date: 2017-07-24 / O ?xido n?trico (NO) ? uma mol?cula gasosa que exerce papel de neurotransmissor, regulando eventos sin?pticos e participando de fun??es neurais como mem?ria e aprendizado. No sistema nervoso, o NO ? catalisado pela ?xido n?trico sintase neuronal (nNOS). Por ser uma mol?cula gasosa, o NO pode se difundir livremente atravessando a membrana das c?lulas, desta forma agindo como um neurotransmissor retr?grado, geralmente considerado um moderador de a??o local. NO e nNOS s?o mol?culas altamente conservadas entre as esp?cies e est?o presentes no sistema nervoso de diversos vertebrados. N?s realizamos imunoistoqu?micas anti-nNOS e histoqu?micas para revela??o de NADPH-diaforase com o objetivo de investigar a distribui??o de c?lulas nitr?rgicas no compartimento subcortical do telenc?falo de moc? (Kerodon rupestris). Os dados mostram uma distribui??o heterog?nea de neur?nios imunorreativos a nNOS ou com atividade NADPH-diaforase ao longo de todo o compartimento subcortical. Observou-se neur?nios imunorreativos a nNOS no n?cleo accumbens, associando o NO a mecanismos de v?cio e recompensa; nos n?cleos da am?gdala e no hipocampo, podendo estar associados a aprendizado e mem?ria; no n?cleo intersticial da estria terminal, associado a comportamentos de defesa, analgesia e fun??es cardiovasculares; e nos n?cleos da base, sugerindo papel neuroprotetor e de regula??o neural do movimento, associando-se ainda a doen?as neurodegenerativas nessas regi?es. A distribui??o de NO no telenc?falo subcortical de moc? ? ampla, heterog?nea e complexa, mas guarda muitas semelhan?as com a distribui??o em outros roedores, o que pode significar um amplo papel do NO nas fun??es cerebrais desta esp?cie. Al?m disso, o mapeamento da distribui??o de nNOS est? sendo importante para a defini??o morfol?gica de certas ?reas encef?licas de moc?, em compara??o com outras esp?cies de roedores e outros mam?feros. / Nitric oxide (NO) is a gaseous molecule that acts as a neurotransmitter, regulating synaptic events and participating in neural functions such as memory and learning. In the nervous system, NO is catalysed by neuronal nitric oxide synthase (nNOS). As a gaseous molecule, NO can diffuse freely trespassing the cells membrane. Because of this NO can act as a retrograde neurotransmitter and is usually treated as a local moderator. NO and nNOS are highly conserved among species and are present in the nervous system of many vertebrates. We performed immunohistochemical anti-nNOS and histochemical for NADPH-diaphorase in order to investigate the distribution of nitrergic cells in the subcortical compartment of the rock cavy (Kerodon rupestris) telencephalon. The data show a heterogeneous distribution of neurons immunoreactive to nNOS or with NADPH-diaphorase activity throughout the subcortical compartment. Neurons immunoreactive to nNOS were observed in the nucleus accumbens, associating NO with mechanisms of addiction and reward; in the nuclei of the amygdala and in the hippocampus, that are associated with learning and memory; in the bed nucleus of the stria terminalis, associated to defense behaviors, analgesia and cardiovascular functions; and in the basal nuclei, suggesting a putative neuroprotector role and neural regulation of the movement, being still associated with neurodegenerative diseases in these regions. The distribution of NO in the subcortical telencephalon of the rock cavy is broad, heterogeneous and complex, suggesting a broad role of NO in the cerebral functions of this species. In addition, the mapping of nNOS distribution is being important for the morphological definition of the rock cavy's brain areas in comparison with other species of rodents and other mammals.
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Citoarquitetura e imunoistoqu?mica para tirosinahidroxilase dos n?cleos dopamin?rgicos mesencef?licos do morcego (Artibeus planirostris)

Medeiros, Helder Henrique Alves de 26 June 2015 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-16T00:08:09Z No. of bitstreams: 1 HelderHenriqueAlvesDeMedeiros_DISSERT.pdf: 5892652 bytes, checksum: 483b84205306ccbbdee7acffe7f76a61 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-22T20:12:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 HelderHenriqueAlvesDeMedeiros_DISSERT.pdf: 5892652 bytes, checksum: 483b84205306ccbbdee7acffe7f76a61 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-22T20:12:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HelderHenriqueAlvesDeMedeiros_DISSERT.pdf: 5892652 bytes, checksum: 483b84205306ccbbdee7acffe7f76a61 (MD5) Previous issue date: 2015-06-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A 3-Hidroxitiramina/Dopamina (DA) ? uma monoamina do grupo dascatecolaminas e consiste na subst?ncia precursora da s?ntese de noradrenalina eadrenalina, tendo a enzima Tirosina-Hidroxilase (TH) como reguladora desse processo.Al?m disso, a DA tem a capacidade de atuar como neurotransmissor no SistemaNervoso Central - SNC, sendo o neurotransmissor principal de neur?nios de noven?cleos encef?licos, nomeados de A8 ao A16. Os n?cleos do mesenc?falo queexpressam DA s?o a Zona Retrorubral (RRF, grupo A8), a Subst?ncia Negra parscompacta (SNc, grupo A9) e a ?rea Tegmental Ventral (VTA, grupo A10). Tais n?cleosest?o envolvidos em tr?s complexas circuitarias que s?o a mesoestriatal, mesol?mbica emesocortical, os quais est?o relacionadas diretamente com diversas manifesta??escomportamentais como controle da motricidade, sinaliza??o de recompensa naaprendizagem comportamental, motiva??o e nas manifesta??es patol?gicas da Doen?ade Parkinson e esquizofrenia. Todavia, muitos aspectos de car?ter morfofuncionaldesses n?cleos ainda continuam sem esclarecimentos. Considerando a relev?ncia dosn?cleos dopamin?rgicos mesencef?licos, o objetivo deste trabalho ? caracterizarmorfologicamente os n?cleos dopamin?rgicos (grupamentos A8, A9 e A10) domesenc?falo do morcego (Artibeus planirostris). O Artibeus planirostris ? um morcegocomum no Rio Grande do Norte. Foram utilizados dez animais nesta pesquisa. Osanimais foram anestesiados, perfundidos e os enc?falos removidos da cavidadecraniana. Ap?s desidrata??o em sacarose, os enc?falos foram submetidos a microtomiae sec??es coronais foram obtidas e coletadas em seis compartimentos distintos. Oscompartimentos foram submetidos a colora??o pela t?cnica de Nissl para an?lisecitoarquitet?nica e as demais s?ries foram submetidas a imunoistoqu?mica para TH.Com base na t?cnica de Nissl e na imunoistoqu?mica para TH foi poss?vel verificar oslimites anat?micos, assim como a citoarquitetura e poss?veis subdivis?es dos tr?sn?cleos dopamin?rgicos do mesenc?falo. No sentido rostro-caudal, os primeirosneur?nios dopamin?rgicos a surgirem fazem parte da SNc e se estendem at? n?veis maiscaudais do mesenc?falo. A VTA surge nas sec??es rostrais e continua at? o n?vel caudal.No n?vel caudal surge a RRF. A SNc apresentou a exist?ncia de uma subdivis?o, acauda da subst?ncia negra, encontrada em apenas dois outros animais estudados. Opresente estudo indica que os n?cleos dopamin?rgicos do mesenc?falo do Artibeusplanirostris apresenta semelhan?as citoarquitet?nicas, bem como no padr?o dedistribui??o de neur?nios imunorreativos a Tirosina Hidroxilase em compara??o a10 outras esp?cies de mam?feros estudados, com pequenas varia??es, identificada nasubst?ncia negra. / The 3-Hidroxytyramine/dopamine (DA) is a monoamine of catecholamine family and isthe precursor substance synthesis of noradrenaline and adrenaline, having the enzymeTyrosine Hydroxylase (TH) as this regulatory process. In addition, the DA has theability to act as a neurotransmitter in the Central Nervous System - SNC, being themain neurotransmitter of brain nuclei, namely of A8 to A16. The nuclei of the midbrainthat express DA are the Retrorubral Field (RRF, A8), the Substantia Nigra parsCompacta (SNc, A9) and the Ventral Tegmental Area (VTA, A10). Such nuclei areinvolved in complex three circuitry that are the mesostriatal, mesolimbic andmesocotical and are directly related with several behavioral manifestations as motricitycontrol, reward signaling in behavioral learning, motivation and pathologicalconditions, such as Parkinson's Disease and schizophrenia. Interestingly, many of themorphological bases of these neural disturbance remain unknown. Considering therelevance of mesencephalic dopaminergic nuclei, the aim of this research is tocharacterize morphologically the dopaminergic nuclei (clusters A8, A9 and A10) of themidbrain of the bat (Artibeus planirostris). The Artibeus planirostris is a common bat inRio Grande do Norte. Ten animals were used in this research. The animals wereanesthetized, perfused, and the brain was removed from the skull. After dehydration insucrose, the brain was underwent microtomy. Saggital and coronal sections wereobtained and collected in six separate series. The series were Nissl-stained to identifythe cytoarchitectonic boundaries and the other series were subjected toimmunohistochemistry for TH. After cytoarchitectonic analysis and TH+ cellsidentification was possible to establish the anatomical boundaries of the nuclei, as wellas the subdivisions of three of the midbrain dopaminergic nuclei. The SNc is the mostrostral nucleus observed in the midbrain and is identified throughout the rostrocaudalextension of the midbrain. The VTA neurons were seen immediately caudal to the SNcappearance. The RRF neurons were observed just in the caudal levels of the midbrain.The SNc in Artibeus planirostris shows a particular feature, the tail of the SNc. The tailhave been described just in two other studied species. The present work shows aparticular variation in the organizational morphology of the SNc in the artibeus andcontribute to understand the phylogenetic routes by which the dopaminergic system hasevolved.
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O efeito da inje??o intracerebroventricular de neuropept?deo S na express?o de Fos em n?cleos dos circuitos de medo em camundongo Swiss

Silva, Fladjany Emanuelly Faustino da 05 August 2016 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-13T20:44:53Z No. of bitstreams: 1 FladjanyEmanuellyFaustinoDaSilva_DISSERT.pdf: 1465669 bytes, checksum: 76f9e44b1ed2cc1d2970fdd63a651050 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-16T23:07:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FladjanyEmanuellyFaustinoDaSilva_DISSERT.pdf: 1465669 bytes, checksum: 76f9e44b1ed2cc1d2970fdd63a651050 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T23:07:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FladjanyEmanuellyFaustinoDaSilva_DISSERT.pdf: 1465669 bytes, checksum: 76f9e44b1ed2cc1d2970fdd63a651050 (MD5) Previous issue date: 2016-08-05 / O medo e a ansiedade s?o emo??es adaptativas caracterizadas por um conjunto de altera??es fisiol?gicas e comportamentais que ocorrem quando os indiv?duos se sentem amea?ados fisicamente e/ou psicologicamente. Apesar dos comportamentos de medo e ansiedade serem caracter?sticos, estudo das ?ltimas duas d?cadas t?m mostrado que diferentes fontes de medo podem ativar diferentes vias neurais e que h? diferen?as entre medo condicionado (aprendido) e medo incondicionado (inato). As vias do medo condicionado envolvem o c?rtex frontal medial e os n?cleos central e basolateral da am?gdala, enquanto o medo de predador (inato) envolve o n?cleo medial da am?gdala e n?cleos da zona medial do hipot?lamo. Sabe-se que as fun??es encef?licas s?o coordenadas por sistemas de neurotransmissores e seus receptores que s?o expressos nas mais diversas regi?es do sistema nervoso, exercendo diferentes fun??es. O Neuropept?deo S (NPS) ? um neurotransmissor cujo estudos em roedores mostra sua import?ncia como regulador de ansiedade e vig?lia, reduzindo a ansiedade, aumentando a vig?lia e o comportamento locomotor, sendo ent?o um ansiol?tico e estimulante, o que o torna um potencial alvo para estudos farmacol?gicos e cl?nicos. Neste trabalho realizamos a inje??o intracerebroventricular (icv) de NPS em camundongos e mapeamento da express?o de Fos (prote?na indicadora de atividade celular) em n?cleos envolvidos nas vias de medo condicionado e incondicionado. A an?lise dos nossos resultados mostraram que a administra??o icv de NPS promoveu uma express?o de Fos diferenciada nos n?cleos central e basolateral da am?gdala, indicando um papel no medo condicionado. / Fear and anxiety are emotions featured by a group of physiological and behavioral changes that occur when subjects feel threatened physically and/or psychologically. For the last two decades many studies have showed that different sources of fear are able to activate different neural pathways, where conditioned (learned) and unconditioned (innate) fear run over different trails. The conditioned fear involves the frontal medial cortex and the central and basolateral nuclei of the amygdala, when the fear of predator (unconditioned) involves nuclei of the medial hypothalamus. It is known that the brain functions are coordinated by neurotransmitter's systems and its receptors that are expressed in many different places around the brain, having different functions. The Neuropeptide S (NPS) is a neurotransmitter whose studies have showed its important role as an anxiety and awake regulator. NPS decreases anxiety and increases awakeness and locomotor behavior, been thus an anxiolytic and stimulating neurotransmitter, what makes it a potential target for pharmacological and clinical studies. In the present work we injected NPS icv in mice and looked for the Fos-expressing neurons in the nuclei of the conditioned and unconditioned pathways. The analysis of our results showed that the icv NPS promoted the increase in Fos expression in the central and basolateral amygdala, what indicates its role in the conditioned fear.
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Mapeamento de neur?nios nitr?gicos no tronco encef?lico do Moc? (Kerodon rupestris) / Mapping the nitrergic neurons in the brainstem of the rock cavy (Kerodon rupestris)

Ara?jo, Lucim?rio Thiago Felix de 21 December 2016 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-03-21T18:32:42Z No. of bitstreams: 1 LucimarioThiagoFelixDeAraujo_DISSERT.pdf: 1666805 bytes, checksum: 491f0cadf9aec790018979edc6e49605 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-27T21:53:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LucimarioThiagoFelixDeAraujo_DISSERT.pdf: 1666805 bytes, checksum: 491f0cadf9aec790018979edc6e49605 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T21:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LucimarioThiagoFelixDeAraujo_DISSERT.pdf: 1666805 bytes, checksum: 491f0cadf9aec790018979edc6e49605 (MD5) Previous issue date: 2016-12-21 / ?xido n?trico (NO) ? uma mol?cula gasosa importante em processos intra e extracelular, est? presente em v?rios tecidos, exercendo um papel importante no sistema imune, na regula??o da press?o sangu?nea, no relaxamento do m?sculo liso e na vasodilata??o via nervos perif?ricos. Por ser um g?s o NO atravessa livremente as membranas celulares. Portanto, na parte central do sistema nervoso age como um neurotransmissor em circuitos locais, distribuindo-se em curtas dist?ncias, difundindo-se de c?lula em c?lula participando de v?rias fun??es, como aprendizado e mem?ria, podendo mediar respostas excitat?rias a certos amino?cidos. O NO est? presente em v?rios n?cleos distribu?dos por todo o sistema nervoso e tem sido descrito em diversas esp?cies animais atrav?s da express?o de sua enzima de s?ntese, a NOS. Utilizando as t?cnicas de imunoistoqu?mica contra NOS e de histoqu?mica para marcar a atividade enzim?tica da NADPH diaforase, a NADPHd, n?s mapeamos a distribui??o de NO no tronco encef?lico de um roedor end?mico da caatinga brasileira que habita ?reas rochosas e tem h?bitos crepusculares, o moc? (Kerodon rupestris). Diversas regi?es e n?cleos do tronco encef?lico apresentaram imunorreatividade ao NOS ou atividade NADPHd. O presente trabalho mostra que em moc?, entre outras regi?es, NO est? em n?cleos do sistema visual prim?rio como os n?cleos pr?-tectais e col?culo superior; n?cleos do sistema auditivo como o complexo olivar, col?culo inferior e n?cleo coclear; em diversas subdivis?es da subst?ncia cinzenta periaquedutal, estrutura envolvida em comportamentos defensivos, nocicep??o e ansiedade, assim como o locus cer?leos onde NO tamb?m foi encontrado; subst?ncia negra, onde NO est? relacionado a encefalopatia hep?tica e com a doen?a de Parkinson em outros roedores. O grande n?mero de n?cleos nitr?rgicos e seu padr?o de distribui??o no tronco encef?lico de moc? foi semelhante ao observado em outras esp?cies de mam?feros, nos levando a concluir que a proximidade filogen?tica das esp?cies ? mantida na distribui??o de NO no tronco encef?lico de moc?. / Nitric oxide (NO) is a gas very important in intra and extracellular process. It is present in many tissues, having an important role in the immunological system, regulation of blood pressure, relaxation of the smooth muscle and vasodilatation through peripheral nervous system. As a gas, NO can pass freely through cell membranes. Therefore, it acts as a neurotransmitter of local action in the central nervous system, reaching short distances, diffusing from cell to cell. It has many functions as learning and memory and modulation of excitatory responses to aminoacids. NO is present in many areas throughout the brain and has been described in many animal species by the expression of its enzyme of synthesis, the NOS. Using immunohistochemistry against NOS and NADPH diaphorase histochemistry we described the distribution of NO in the brainstem of a rodent typical from the Brazilian caatinga, that inhabits rocky areas and has crepuscular habits, the rock cavy (Kerodon rupestris). Several brainstem areas and nuclei presented immunorreactivity to NOS or NADPHd activity. Some of them showed a high density of immunostained neurons, for example the periaqueductal gray, the magnocellular nucleus of the posterior commissure and the interpeduncular nucleus. Others nuclei presented a moderated, as the posterior pretectal nucleus, olivary pretectal nucleus, layers of the superior colliculus and cuneate nucleus. Several showed a low density as the posterior commissure nuclei, paranigral nucleus external cortex of the inferior colliculus and the inferior oliva. Finally, there is nuclei with a very low density, for example the reticular part of the substantia nigra, the pararubral nucleus, the dorsal raphe nucleus, the gracile nucleus and interstitial nucleus of the medulla. The great number of nitrergic nuclei and its pattern of distribution in the rock cavy's brainstem is similar to the other mammals, leading us to conclude that the phylogenetic proximity between species is kept in the brainstem. The present work shows that among other regions the NO is in nuclei of the primary visual system as the pretectal nuclei and the superior coliculum; nuclei of the auditory system as the olivar complex, inferior coliculum and the coclear nuclei; it is in several divisions of the periaqueductal grey matter, strutucture involved in defensive behavior, nociception and anxiety, like the locus coeruleus, where NO also was find; the substantia nigra, where the NO has been related to hepatic encephalopatia and Parkinson's disease in other rodents.The great number of nitrergic nuclei and its pattern of distribution in the rock cavy's brainstem looked alike what is seen in other mammals, leading us to conclude that the philogenetic proximity of the species is mantained in the distribution of NO in the rock cavy's brainstem.
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Distribui??o de neur?nios nitr?rgicos no dienc?falo do moc? (Kerodon rupestris)

Reis, Maria Emanuela Martins dos 20 December 2016 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-03-21T18:43:42Z No. of bitstreams: 1 MariaEmanuelaMartinsDosReis_DISSERT.pdf: 5769860 bytes, checksum: 74ddebdf2f9b77f3786b50ef1260466c (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-28T00:21:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MariaEmanuelaMartinsDosReis_DISSERT.pdf: 5769860 bytes, checksum: 74ddebdf2f9b77f3786b50ef1260466c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T00:21:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaEmanuelaMartinsDosReis_DISSERT.pdf: 5769860 bytes, checksum: 74ddebdf2f9b77f3786b50ef1260466c (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O ?xido n?trico (NO) ? uma mol?cula muito simples (N=O), gasosa, com propriedades qu?micas de um radical livre e at? meados da d?cada de 1980 era considerado apenas membro de uma fam?lia de poluentes ambientais indesej?veis e carcin?genos potenciais. Desde sua descoberta no sistema nervoso, NO tem sido implicado em diversas fun??es, o que condiz com sua ampla distribui??o no enc?falo. NO tamb?m tem sido descrito no enc?falo de diversas esp?cies animais, mas ainda n?o foi descrito em moc? (Kerodon rupestris), um roedor end?mico da caatinga brasileira que habita ?reas rochosas e tem h?bitos crepusculares. Devido a estas caracter?sticas interessantes objetivamos descrever a distribui??o do NO do dienc?falo do moc?. Atrav?s das t?cnicas de imunoperoxidase padr?o contra a ?xido n?trico sintase (NOS), enzima de s?ntese de NO, e histoqu?mica para NADPH-diaforase pudemos identificar de forma indireta a presen?a de neur?nios nitr?rgicos ao longo de todo dienc?falo. O hipot?lamo apresentou uma densidade alta de neur?nios imunorreativos a NOS (NOS-IR) em v?rios n?cleos, dentre eles alguns como o n?cleo supra?ptico, decussa??o supra?ptica e a parte lateral da ?rea retroquiasm?tica. Com densidade moderada temos a ?rea pr?-?ptica lateral, o n?cleo pr?-?ptico magnocelular, a parte parvocelular anterior e a parte parvocelular medial do n?cleo paraventricular do hipot?lamo, o n?cleo ventrolateral do hipot?lamo, a parte peduncular da ?rea hipotal?mica lateral e o n?cleo posterior do hipot?lamo. A divis?o anterior do n?cleo ventromedial do hipot?lamo e a ?rea hipotal?mica dorsal apresentaram densidade baixa, e a parte lateral do n?cleo pr?-?ptico medial apresentou densidade muito baixa. No t?lamo, neur?nios NOS-IR estiveram presentes no n?cleo geniculado ventral com densidade alta. Na parte lateral do n?cleo habenular lateral, o n?cleo tal?mico posterodorsal ventral e a parte mediocaudal do n?cleo tal?mico posterior com densidade moderada. O n?cleo paraventricular do t?lamo, zona incerta e o n?cleo tal?mico parafascicular, apresentaram densidade baixa. Comparando nossos resultados com o descrito em outros animais podemos dizer que o sistema nitr?gico ? um sistema de neurotransmissor evolutivamente bem conservado. / Nitric oxide (NO) is a simple molecule (N=O), a gas with a free radical property whose until the 80s was considered a member of a family of environmental pollutants and a potential carcinogen. Since its discovery in the nervous system, NO has been implicated in several functions, what suits with its wide distribution in the brain. NO has been described in the brain of many animal species, but it was not described in the brain of the rocky cave (Kerodon rupestris), an endemic rodent of the Brazilian caatinga that inhabits rocky areas and have crepuscular habits. Due to these interesting characteristics we aim to describe the NO distribution of the rocky cavy diencephalon. Using standard immunoperoxidase against nitric oxide synthase (NOS), the NO synthesis enzyme, and histochemistry for NADPH-diaphorase, we were able to indirectly identify the presence of nitrergic neurons throughout the entire diencephalon. The hypothalamus showed a high density of NOS-IR neurons in several nuclei, among them the supraoptic nucleus, supraoptic decussation and the lateral part of the retrochiasmatic area. With moderate density we have the lateral pre-optic area, the preocular magnocellular nucleus, the anterior parvocellular part and the medial parvocellular part of the paraventricular nucleus of the hypothalamus, the ventrolateral nucleus of the hypothalamus, the peduncular part of the lateral hypothalamic area and the posterior nucleus of the hypothalamus. The anterior division of the ventromedial nucleus of the hypothalamus and the dorsal hypothalamic area presented low density, and the lateral part of the medial pre-optic nucleus presented very low density. In the thalamus, NOS-IR neurons were present in the ventral geniculate nucleus with high density. In the lateral part of the lateral habenular nucleus, the ventral posterodorsal thalamic nucleus and the mediocaudal part of the posterior thalamic nucleus with moderate density. The paraventricular nucleus of the thalamus, zona incerta and the parafascicular thalamic nucleus, presented low density. Comparing our results with those described in other animals we can say that the nitric system is an evolutionarily well-conserved neurotransmitter system.
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Aspectos reprodutivos em tartarugas marinhas da bacia potiguar RN/CE

Fabr?cio, Mar?lia Anielle da Silva 19 December 2016 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-04-04T19:56:26Z No. of bitstreams: 1 MariliaAnielleDaSilvaFabricio_DISSERT.pdf: 3688508 bytes, checksum: 5f01a70876dd9ae37f19f323e534b5a3 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-04-12T23:55:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MariliaAnielleDaSilvaFabricio_DISSERT.pdf: 3688508 bytes, checksum: 5f01a70876dd9ae37f19f323e534b5a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T23:55:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariliaAnielleDaSilvaFabricio_DISSERT.pdf: 3688508 bytes, checksum: 5f01a70876dd9ae37f19f323e534b5a3 (MD5) Previous issue date: 2016-12-19 / Existem no mundo apenas sete esp?cies de tartarugas marinhas. Dentre essas, h? registros de ocorr?ncia de cinco esp?cies no litoral do Brasil: Dermochelys coriacea, Chelonia mydas, Caretta caretta, Eretmochelys imbricata e Lepidochelys olivacea. De acordo com a Lista Vermelha da Uni?o Internacional para a Conserva??o da Natureza, todas as esp?cies de tartarugas marinhas existentes no Brasil se encontram amea?adas de extin??o. A maioria dos trabalhos relacionados a propor??o sexual desses r?pteis indicam um desequil?brio populacional, havendo um n?mero excessivo de f?meas. Assim, pesquisas sobre a biologia reprodutiva desses animais s?o extremamente necess?rias e importantes para conserva??o de gera??es futuras dessas esp?cies. Este trabalho tem como objetivo estudar diferentes aspectos morfohistol?gicos das g?nadas de machos e f?meas de tartarugas marinhas na Bacia Potiguar. Foram avaliados animais vivos e mortos, provenientes de encalhes entre as praias de Icapu?/CE e Cai?ara do Norte/RN, totalizando aproximadamente 300 km. Os animais encalhados mortos ou que vieram a ?bito na Base de Reabilita??o do Projeto Cet?ceos da Costa Branca-UERN foram necropsiados por uma equipe veterin?ria. As g?nadas foram coletadas e fixadas em formol a 10%, e posteriormente submetidas a prepara??o histol?gica, atrav?s das t?cnicas de Hematoxilina-Eosina, sendo analisadas em microsc?pio ?ptico. No per?odo de janeiro de 2011 a dezembro de 2015 foram registrados 3.960 encalhes de tartarugas marinhas na ?rea estudada. A amostra apresentou propor??o sexual de 3:1, com predom?nio de f?meas. Oitenta e cinco por cento dos animais registrados foram classificados como pertencentes a fase de desenvolvimento "juvenil". Foram analisadas microscopicamente 86 amostras de tecido gonadal, sendo 53 f?meas e 25 machos da esp?cie Chelonia mydas, 3 f?meas e 3 machos de Eretmochelys imbricata e 2 f?meas de Caretta caretta. Foi poss?vel estabelecer tr?s est?gios de matura??o gonadal: pr? pubescente, pubescente e maduro. O predom?nio das g?nadas analisadas foi de indiv?duos pr? pubescentes, com f?meas apresentando ov?citos homog?neos e machos com t?bulos semin?feros de pequeno di?metro com aus?ncia de espermatozoides. Os esp?cimes pr? pubescentes f?meas apresentaram comprimento curvil?neo da carapa?a (CCC) m?dio de 37,07 cm e os machos 38,68 cm; Pubescentes f?meas 77,04 cm e machos 89,92 cm, F?meas maduras com 101,35 cm e um indiv?duo macho maduro com 105 cm. Pesquisas sobre aspectos histol?gicos relacionados ao desenvolvimento ovariano e testicular de tartarugas marinhas s?o escassas, mas, os resultados obtidos est?o em concord?ncia com o que j? foi descrito. Considera-se a necessidade de continuidade de trabalhos como esse, associando os dados morfol?gicos e biom?tricos ?s an?lises histol?gicas para o melhor entendimento sobre a matura??o sexual das tartarugas marinhas e implementa??o de propostas de conserva??o para essas esp?cies. / Among the seven species of sea turtles, five occurs on the Brazilian coast: Dermochelys coriacea, Chelonia mydas, Caretta caretta, Eretmochelys imbricata e Lepidochelys olivacea. According to the Red List of the IUCN, all species of sea turtles in Brazil are endangered. The majority of works related that the sexual proportion of these animals indicate a population imbalance, having a number excessive of females. Thus, studies of reproductive biology of sea turtles are extremely necessary and important for the conservation of these species for future generations. This work aims to study different morphohistological aspects of male and female's gonads of sea turtle in Potiguar Basin. For this, were evaluated dead and living animals, from strandings between the beaches of Icapu?/CE and Cai?ara do Norte/RN, totaling approximately 300 km. The dead animals were necropsied. During the procedure, the gonads were collected and fixed in formalin 10%, then submitted to histological process, through the techniques of hematoxylin-eosin, according Tolosa (2005), being analyzed in an optical microscope. Between January 2011 and December 2015 were recorded 3.960 stranding of sea turtles in the study area. The sample showed sex ratio of 3:1, with a predominance of females. . Eighty-five percent of the animals were classified juvenile. 86 samples of gonadal tissue wereanalized microscopically, being 58 females and 28 males, of Chelonia mydas, Eretmochelys imbricata e Caretta caretta. It was possible to establish three stages of maturation: pre-pubertal, pubertal and mature. The predominance was of pre-pubertal individuals, females presenting homogeneous oocytes and males with seminiferous tubules with a small diameter with absence of sperm. The pre-pubertal females specimens exhibit an average of 37,07 cm (CCC) and the males 38,68 cm (CCC); Pubertal females with an average of 77,04 cm and males 89,92 cm; mature females with 101,9 cm (CCC) and a single mature male with 105 cm. Researches on histological aspects related to ovarian and testicular development of sea turtles are scarce, but, the obtained results are in agreement with what has already been described. Researches like this, associating morphological and biometric data to histological analyzes, are necessary for the best knowledge about sexual maturity of these animals and implementation of conservation proposals for these species.
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Characterization of structure, dynamics, function and interactions of components from the type IV secretion system of Xanthomonas citri by solution nuclear magnetic resonance / Caracterização da estrutura, dinâmica, interações e função de componentes do sistema de secreção tipo IV de Xanthomonas citri por ressonância magnética nuclear em solução

Oliveira, Luciana Coutinho de 01 February 2016 (has links)
Bacteria use specialized systems, called secretion systems, in order to translocate substrates to the environment or to other cells, or even to uptake molecules from the exterior environment. Six different secretion systems have been described in Gram-negative bacteria. The Type IV Secretion System (T4SS) is involved in translocation of virulence factors, bacterial conjugation, uptake and release of DNA, and in the secretion of antibacterial toxins. The T4SS channel corresponds to a toroidal upramolecular complex consisting of 14 repetitions of the VirB7-VirB9-VirB10 heterotrimer. This channel, also called \"core complex\", is divided in two layers, an outer layer consisting of the VirB7 lipoprotein in complex with the C-terminal domains of VirB9 (VirB9CT) and VirB10 (VirB10CT), and an inner layer composed by the N-terminal domains of VirB9 (VirB9NT) and VirB10 (VirB10NT). Xanthomonas citri pv. citri (Xac) is a gram-negative bacterium that infects citrus plants causing a disease called \"citrus canker\". Although not directly involved in causing the disease, the chromosomally encoded T4SS is responsible for the secretion of toxins, working as a bacterial killing machine (Souza et al., 2015). The three-dimensional structure of Xac\'s VirB7 obtained by Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy (PDB 2L4W) revealed that, unlike the canonical VirB7, Xac\'s VirB7 consists of a flexible N-terminal domain followed by a C-terminal globular domain. The flexible N-terminal tail is involved in interaction with VirB9CT. In this thesis, the NMR structure of the complex formed between VirB9CT and a peptide derived from the N-terminal tail of Xac-VirB7 (VirB7NT) was solved. This complex is stabilized by hydrophobic interactions involving the side chains of particular amino acid residues such as Phe30, Trp34 and Val37 in VirB7, and Arg250, Tyr167 and Tyr169 in VirB9. Mutations of such amino acids affect not only the stability of the VirB9:VirB7 complex in vitro, but also reduce the T4SS activity and impairs its assembly in vivo. Furthermore, the ability of forming VirB7:VirB7 oligomers is essential for a functional T4SS, although it is not required for assembling the complex. The structural propensity and flexibility of a fragment derived from the proline-rich region (PRR) of the N-terminal tail of VirB10 (VirB10NT - residues 85 to 182) were studied. Measurements of the {1H}-15N heteronuclear NOE showed that VirB10NT is highly flexible on a sub-nanosecond time scale. Analysis of chemical shifts and NOEs showed that the ensemble and time average conformation of VirB10NT consists of a short alpha helix between residues 151-163, and that this helix is involved in interactions with VirB9NT. These findings provide the first compelling evidence for the interaction between the N-terminal domains of VirB9 and VirB10, and for the existence of significant flexibility within Xacs T4SS. / Bactérias usam sistemas especializados, denominados sistemas de secreção, a fim de translocar substratos para o ambiente ou para outras células, ou até mesmo para capturar moléculas do meio externo. Seis diferentes sistemas de secreção foram descritos em bactérias gram-negativas. O Sistema de Secreção do Tipo IV (T4SS) está envolvido na translocação de fatores de virulência, conjugação bacteriana, absorção e liberação de DNA, e secreção de toxinas antibacterianas. O canal do T4SS (core complex) corresponde a um complexo formado por 14 repetições do heterotrimero VirB7-VirB9-VirB10. A camada externa deste canal é constituída por VirB7 em complexo com os domínios C-terminal de VirB9 (VirB9CT) e VirB10 (VirB10CT). Os domínios N-terminal de VirB9 (VirB9NT) e VirB10 (VirB10NT) formam a camada interna do core complex. Xanthomonas citri pv. citri (Xac) é uma bactéria gram-negativa que infecta plantas cítricas causando uma doença chamada \"cancro cítrico\". Embora não esteja diretamente envolvido na infecção, o T4SS cromossomal secreta toxinas capazes de matar outras bactérias gram-negativas. VirB7 de Xac possui uma cauda N-terminal flexível e um domínio globular C-terminal ausente em outras proteínas VirB7. VirB7 interage com VirB9CT através de sua cauda N-terminal. Nesta tese, a estrutura de RMN do complexo formado por VirB9CT e um peptídeo derivado do segmento N-terminal de VirB7 foi resolvida. O complexo é estabilizado, principalmente, por interações hidrofóbicas envolvendo as cadeias laterais de determinados resíduos de aminoácidos, particularmente a Phe30, o Trp34 e a Val37 em VirB7 e a Arg250, a Tyr167 e a Tyr169 em VirB9. A substituição de alguns destes aminoácidos por alanina afeta não só a constante de dissociação do complexo in vitro, como também a atividade e a montagem do T4SS in vivo. Além disso, resíduos específicos envolvidos em oligomerização de VirB7 são essenciais para a manutenção de um T4SS funcional, embora não sejam essenciais para a montagem do sistema. Estudos estruturais, de dinâmica e de interações de um fragmento derivado da região rica em prolinas (proline-rich region - PRR) contida no N-terminal de VirB10 (VirB10NT - resíduos 85-182) também foram realizados. Medidas de {1H}-15N NOE heteronuclear mostraram que VirB10NT é altamente flexível. Análises de deslocamentos químicos e NOEs mostrou que VirB10NT forma uma hélice curta entre os resíduos 151-163. Ensaios de interação por RMN indicaram que esta hélice está envolvida em interações com VirB9NT. Estes resultados são a primeira evidência convincente para a especificidade de interação entre os domínios N-terminal de VirB9 e VirB10. Estes dados apontam também para a existência de flexibilidade dentro do T4SS de Xac.

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