Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-26T13:44:42Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO RAYANA 2012.pdf: 1271704 bytes, checksum: 17747d56ccd490af5f242277a6e895d9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T13:44:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO RAYANA 2012.pdf: 1271704 bytes, checksum: 17747d56ccd490af5f242277a6e895d9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / CAPES, Embrapa Suínos e Aves (SC) e CNPq / A bronquite infecciosa das aves (BI) é causada por um vírus da família Coronaviridae e caracteriza-se por uma enfermidade contagiosa, de distribuição mundial. A presença de novas variantes do vírus tem trazido grandes perdas econômicas á indústria avícola. A grande variabilidade genética do VBI das aves, o difícil controle vacinal e as diferenças em patogenicidade principalmente a falta de conhecimento da interação patógeno-hospedeiro, surge à necessidade de maiores estudos relacionados à imunopatogênese viral para que possam auxiliar futuras abordagens de controle. O objetivo deste trabalho foi estudar o perfil de transcrição da resposta a infecção causada por uma cepa clássica (M41), através dos estudos de expressão gênica dos genes TLR3 e INF tipo I, envolvidos na resposta imune inata, em diferentes horas pós infecção. Nós demonstramos aqui que galinhas infectadas com a cepa clássica do Vírus da Bronquite Infecciosa (M41) apresentaram na fase inicial da infecção, primeiras (6,12,24) horas pós infecção, aumento na expressão de IFNα, seguido por uma supressão da via de sinalização TLR3 enquanto que os níveis basais de IFNβ permaneceram inalterados. O aumento imediato da resposta IFNα logo nas primeiras 6 horas pós infecção caracteriza esta citocina como principal mediadora da resposta inata à infecção pelo VBI (M41).

Orientador: Jose Pedrazzoli Jr / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T19:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_RoselidaRocha_M.pdf: 13374341 bytes, checksum: afc3bb4b47a2cf673d652775764d53a0 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) é uma doença caracterizada pela obstrução crônica ao fluxo aéreo, de caráter progressivo e irreversível. Está relacionada ao consumo excessivo de cigarros e envolve duas doenças; a Bronquite Crônica e o Enfisema Pulmonar. O tabaco produz inflamação no sistema respiratório, com acúmulo de neutrófilose macrófagos nas vias aéreas. A fumaça do cigarro também altera o mecanismo de defesa mucociliar,ocorrendo hipertrofia glandular,com aumento de secreção de muco, porém com características viscoelásticas alteradas. Além disso, a atividade ciliar está alterada, por paralisia e destruição dos cílios, o que facilita o acúmulo de secreções e a colonização por bactérias. A obstrução das pequenas vias aéreas, provavelmente é decorrente de um processo inflamatório crônico induzido por substâncias irritantes, com conseqüente infiltração neutrofilica e com a liberação de substâncias quimiotáticas, tais como a interleucina 8 e o leucotrieno B4, pelos macrófagos. Em função destas alterações, os sintomas que envolvem o DPOC são, decorrentes em parte à inflamação brônquica e à limitação ao fluxo aéreo. As células que envolvem este processo, presentes em lavado broncoalveolar, de pacientes portadores de DPOC, englobam a presença principalmente dos neutrófilos, sendo que não é freqüente a presença de eosinófilos, nestas secreções. Este trabalho consiste na utilização pelos pacientes portadores de DPOC, de corticóide inalatório (propionato de Fluticasona) de forma inalatória por um período de seis meses ininterruptos. Visamos avaliar a resposta inflamatória que envolve a presença de interleucina 8 (IL-8) no lavado broncoalveolar e no soro, quimiotaxia de neutrófilos, presença de neutrófilos e eosinófilos em lavado broncoalveolar (BAL), Prova de Função Pulmonar, estudo em sangue periférico do número total de leucócitos, neutrófilos e eosinófilos,além é claro da avaliação clínica destes pacientes ao longo do tratamento. Os resultados demonstram melhora dos sintomas que envolvem a hiperreatividade brônquica, melhora dos parâmetros de obstrução brônquica e melhora da eosinofilia. Os demais parâmetros estudados não obtiveram alteração do início para o final do experimento. Diante destes resultados, podemos observar que o corticóide inalatório age diretamente sobre os eosinófilos, não interferindo nos índices de neutrófilos e agentes quimiotáticos como a IL-8 / Abstract: Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by the chronic, progressive and irreversible obstruction of air flow and is related to the exaggerated use of cigarettes and is comprised oftwo disorders, chronic bronchitis and lung emphysema. Cigarette smoking causes inflammation of the respiratory system, accumulating neutrophils and macrophages in the airways. The smoke of cigarettes also alters the mucociliar defense mechanism, causing glandular hypertrophy, with a subsequent increase in mucus secretion and altered viscoelastic characteristics. In addition, cilia activity is altered by the paralysis and destruction of the cilia, facilitating the accumulation of secretions and the bacterial colonization. The obstruction of small airways is probably caused by a chronic inflammatory process caused by irritant substances, with posterior neutrophil infiltration and the release of chemotatic substances, such as interleukin 8 and lleucotrieno B4, by the macrophages. As a consequence of these alterations, the symptoms of COPD partly lead to bronchital inflammation and air flow limitation. The cells that participate in this process within the bronchoalveolar lavage (BAL) of the patients with COPD are mainly neutrophils, although eosinophils can also be found in these secretions. This study investigated patients with COPD that were treated with inhalatory corticoid (fluticasone propionate) during six months without interruption. We aimed to evaluate the inflammatory response involving the presence of IL 8 in the bronchoalveolar lavage and in the serum, neutrophil chemotaxis, presence of neutophils and eosinophils in the BAL, spirometry, peripheral blood study of the total number of leukocytes, neutrophils and eosinophils, in addition to the clinical evaluation of these patients during the treatment. The results demonstrated the clínical improvement of the symptoms related to the airway hyper-reactivity, improvement of airflow obstruction parameters and improvement of the eosinophilia. Other parameters tested did not change from the beginning to the end of the experiment. Thus, we observed that the inhalatory corticoid fimctions directly on the eosinophils and is not related to the neutrophil leveI and chemotatic agents such as IL 8 / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Clarice Weis Arns / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:34:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 D'Arce_ReginaCeliaFreitas_D.pdf: 5035070 bytes, checksum: 70450102e2aa6208d35d5a038918c516 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de técnicas moleculares diferenciais para o diagnóstico do Vírus da Bronquite Infecciosa (VBI), responsável por infecções respiratória e urogenital agudas, altamente contagiosas em frangos e galinhas, e do Pneumovírus Aviário (PVA), agente etiológico da Rinotraqueíte dos Perus e associado à Síndrome da Cabeça Inchada (SCI) em galinhas. Sorotipos do VBI e subtipos do PV A foram cultivados em ovos embrionados e em células CER (Chicken Embryo Related), respectivamente. Foram adaptadas as técnicas de extração do RNA viral, RT -PCR, nested-PCR subtipo-especmco. para o PVA e RT -PCR-RFLP para o VBI a partir dos vírus cultivados, sendo testadas posteriormente em material coletado de aves infectadas experimentalmente. Tanto o PVA como o VBI foram detectados por RT-PCR e/ou nested-PCR nos grupos infectados com os agentes isoladamente ou em co-infecção, principalmente nos dias 3 e 6 pós-inoculação. As técnicas diagnósticas desenvolvidas foram então utilizadas na detecção viral de materiais clínicos, obtidos de plantéis avícolas com histórico de problemas respiratórios e sorologia positiva para os agentes estudados. Para o PVA obteve-se a detecção de oito vírus de campo, todos pertencentes ao subtipo A, donde foi possível o isolamento de quatro amostras. No caso do VBI foram detectadas três amostras de campo, todos diferenciados da amostra vacinal por RFLP, dos quais isolou-se duas amostras em ovos embrionados. Amostras positivas tiveram seus fragmentos de PCR seqüenciados, confirmando a classificação obtida através da nested-PCR para o PVA e do RFLP para o VBI. A análise das seqüências do VBI mostrou que os isolados de campo diferem de todos os sorotipos descritos até o momento. As técnicas molecu1ares otimizadas nesse estudo confinaram sua capacidade em diferenciar os subtipos A e B do PV A, bem como as variantes detectadas de VBI de campo e o sorotipo vacinal, demonstrando ser adequadas alternativas diagnósticas e valiosas ferramentas para estudos de epidemiologia molecular / Abstract: The aim of this study was the development of molecu1ar techniques able to differentiate Infectious Bronchitis Virus (IBV), responsible for high 'contagious acute respiratory and renal infections in chickens, and Avian Pneumovirus (APV), causal agent of Turkey Rhinotracheitis and associated to Swollen head Syndrome (SHS) in chickens. APV and IBV strains, representatives of subtypes A and B and serotype Massachussets, were multiplied in Chicken Embryo Related (CER) cell line and embrionated eggs, respectively. The techniques of RNA extraction, RT -PCR, APV subtype-specific nested-PCR and RT -PCR-RFLP for IBV diagnosis were adapted, and then tested in experimentally infected chickens. Both viruses were detected by RT -PCR and/or nested-PCR in the groups infected with the agents separately or in co-infection, mainly at 3rd end 6th day post infection. Moreover, these techniques were utilised in clinical field samples from chicken and turkey flocks with respiratory problems and positive APV and IBV serology. Eight APV were detected, all of them classified as subtype A, where four samples were isolated. In the case of IBV, three field samples were detected, originating two viral isolation, all different from vaccine serotype by RFLP. The PCR products were sequenced, confirming the APV nested-PCR and IBV RFLP classification. IBV sequence analysis showed that the Brazilian field samples detected in this study are distinct from all serotype described 50 far. These optimised techniques could be useful to direct differentiation of APV subtypes A and B, and IBV field and vaccine strains, proving to be a valuable molecular epidemiological tool / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Hélio José Montassier / Coorientador: Renata Fonseca Vianna Lopez / Banca: Cintia Hiromi Okino / Banca:Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Banca: Edison Luiz Durigon / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Resumo: Vacinação é a forma mais eficiente para prevenir e controlar a infecção pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI). Vacinas formuladas com nanopartículas de quitosana têm sido utilizadas como sistema de entrega de antígenos pela via mucosa e imunopotenciador. O objetivo do presente estudo foi desenvolver e avaliar a eficácia de uma vacina inativada formulada com o genótipo BR-I do VBI encapsulado em nanopartículas de quitosana (VBI-CS) administrada por via mucosa em aves. Além disso, objetivou-se comparar a eficácia da vacina desenvolvida com a de uma vacina inativada convencional do mesmo vírus incorporada a um adjuvante oleoso (Montanide ISA 71) (VBI-O), administrada por via intramuscular. Foram avaliadas as respostas imunes humoral e celular (RIC) nos compartimentos de mucosa e sistêmico induzidas pelas vacinas VBI-CS e VBI-O quando associadas ou não a uma vacina viva atenuada da estirpe H120 do VBI. A proteção induzida pelos diferentes protocolos vacinais foi avaliada após o desafio com a estirpe homóloga virulenta do genótipo BR-I. A vacina VBI-CS usada sozinha induziu altos níveis de anticorpos IgA anti-VBI na mucosa e também a expressão dos genes de RIC (CD8β, Granzima A e IFNγ) na traqueia, enquanto que associada a uma vacina viva atenuada heteróloga, induziu maiores níveis de anticorpos IgG anti-VBI (mucosa e sistêmico) e RIC caracterizada pelo aumento da expressão dos genes CD8β, Granzima A e IFNγ, principalmente na traqueia. Além disso, foi observado que os protocolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vaccination is the most efficient way to prevent and control infection caused by the infectious bronchitis virus (IBV). Vaccines formulated with chitosan nanoparticles have been used as an antigen delivery system in mucosal and immunopotentiator. The aim of this study was to develop and evaluate the efficacy of an inactivated vaccine formulated with IBV BR-I genotype encapsulated in chitosan nanoparticles (IBV-CS) administered by the mucosal route in chickens. In addition, this study aimed to compare the efficacy of the developed vaccine with a conventional inactivated vaccine of the same virus incorporated into oily adjuvant (Montanide ISA 71) (IBV-O) administered intramuscularly. The humoral and cellular (CMI) mediated immune responses in the mucosal and systemic compartments induced by IBV-CS and IBV-O vaccines were evaluated, when these vaccines were associated or not with a live attenuated H120 serotype vaccine. The protection induced by the different vaccine protocols was evaluated after the challenge with the virulent homologous strain of BR-I genotype. The IBV-CS vaccine used alone induced high levels of IgA anti-IBV antibodies in mucosal and also the expression of CMI genes (CD8β, Granzyme A and IFNγ genes) in the trachea, while associated with a live attenuated vaccine, it induced higher levels of IgG anti-IBV antibodies (mucosal and systemic compartments) and the expression of CMI genes, mainly in trachea. In addition, the vaccine protocols using the IBV-CS vaccine... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

As doenças respiratórias são bastante comuns na avicultura industrial, entre as quais a bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença de importância econômica. A doença é causada pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI) e gera grandes perdas em todas as etapas do processo de produção de aves, seja em frangos de corte, reprodutores e/ou poedeiras. Além do quadro respiratório, o VBI pode se apresentar de outras formas clínicas. As diferentes cepas do vírus possuem tropismo diferenciado pelos sistemas digestório, reprodutivo e urinário. Diversos dados recentes de caracterização genética do vírus no país demonstram a ocorrência de um único genótipo variante no Brasil (BR-I), além do genótipo vacinal Massachusetts (Mass). No entanto, pouco se sabe sobre a frequência e distribuição tecidual destas variantes nos plantéis brasileiros. A presente dissertação é composta por dois artigos científicos sobre este tema. O objetivo do primeiro trabalho foi avaliar os genótipos de ocorrência em lotes de comercialização industrial no país. Para isso, foram obtidas amostras de lotes da Região Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do país. A caracterização foi realizada a partir do sequenciamento parcial do gene S de 49 amostras que foram comparadas com sequências de referência do GenBank e de isolados de campo do país. Onze amostras (22,4%) foram filogeneticamente similares ao genótipo vacinal Mass e 34 amostras (69,4%) agruparam com o genótipo brasileiro, previamente descrito, denominado BR-I. No entanto, quatro amostras (8,2%) formaram um novo grupo, denominado BR-II. Estes resultados demonstram a maior ocorrência do genótipo variante de campo tipicamente brasileiro. O segundo trabalho teve por objetivo determinar a frequência do VBI em diferentes regiões do país, além de determinar a frequência dos genótipos brasileiros em duas categorias de aves (frangos de corte e matrizes), de diferentes idades e nos diferentes sistemas fisiológicos infectados pelo VBI. Para isso, foram obtidos pools de órgãos de 198 lotes de frangos e 234 lotes de matrizes com sinais clínicos de BIG, das regiões Sul, Centro-Oeste e Nordeste do país. A detecção do VBI foi realizada por real time RT-PCR (qRT-PCR) da região 5’ UTR e a determinação dos genótipos por sequenciamento parcial do gene S1. Os resultados demonstraram frequência similar do VBI nas granjas das diferentes regiões do país, com índice maior em frangos de corte (média de 54%) do que em matrizes (média de 30,8%). O VBI foi detectado em aves de todas as idades, no entanto, o genótipo Mass foi mais frequentemente encontrado em frangos de até quatro semanas de idade, em frangos com idade próxima ao abate (> 4semanas) e matrizes houve o predomínio do genótipo BR. O sistema com maior frequência de detecção do VBI, em matrizes, foi o digestório (40%), com diferença significativa. Em frangos, a frequência de detecção nos sistemas digestório (43,5%) e respiratório (37,7%) não apresentou diferença significativa. Estes resultados demonstram a alta frequência dos genótipos brasileiros nos plantéis, sendo encontrados principalmente nos órgãos do sistema digestivo. / Infectious bronchitis (IB) is one of the most important respiratory diseases in the poultry industry. The agent, infectious bronchitis virus (IBV), generates losses in all stages of the poultry production (broilers, breeders and/or layers). Besides respiratory signs, IBV may present other different clinical forms: digestive, reproductive and urinary. IBV presents also a high genetic diversity among strains in different poultry-producing regions of the world. Recent studies demonstrate a large dissemination of local variant strains in Brazil (genotype BR-I), but the vaccine genotype Massachusetts (Mass) is also frequently found in poultry flocks. The present Masters Dissertation has two scientific articles on this topic. The aim of the first study was to evaluate the genotypes occurring in industrial poultry production flocks in Brazil. Samples of poultry flocks were obtained from different regions (South, Southeast, Midwest and Northeast). Molecular characterization was performed by partial sequencing of the S gene and comparison with reference (obtained in Genbank database) and field isolates sequences. Eleven samples (22.4%) were phylogenetically similar to Mass vaccine genotype and 34 samples (69.4%) grouped with the BR-I genotype. However, four samples (8.2%) originated a new group, denominated BR-II. These results demonstrate a high prevalence of the variant genotype BR-I in Brazil and the emergence of the novel BR-II genotype in the Midwest region. The second study aimed to determine the occurrence of IBV in different regions of the country and to evaluate the viral frequency in two poultry production types of birds (broilers and breeders), in different ages and in different physiological systems. Organs pools were collected from 198 broilers and 234 breeder flocks with IB clinical signs and from the three different Brazilian geographic regions: South, Midwest and Northeast. IBV detection was carried out by real time RT-PCR (qRT-PCR) of the 5' untranslated region and genotyping by partial sequencing of the S1 gene. The results showed similar IBV frequency on farms of different regions of the country with a higher rate in broilers (average 54%) than in breeders (mean 30.8%). IBV was detected in birds of all ages. Mass genotype was more often found in chickens up to four weeks of age, while BR genotypes were more frequent in broilers next to slaughter age and in all ages of breeders. The system with highest frequency of IBV was the digestive (40%) in breeders. In broilers, the frequency of detection in the digestive (43.5%) and respiratory (37.7%) systems showed no significant difference. These results demonstrate the high frequency of the Brazilian genotypes in the flocks, being found mainly in the organs of the digestive system.

As doenças respiratórias são bastante comuns na avicultura industrial, entre as quais a bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença de importância econômica. A doença é causada pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI) e gera grandes perdas em todas as etapas do processo de produção de aves, seja em frangos de corte, reprodutores e/ou poedeiras. Além do quadro respiratório, o VBI pode se apresentar de outras formas clínicas. As diferentes cepas do vírus possuem tropismo diferenciado pelos sistemas digestório, reprodutivo e urinário. Diversos dados recentes de caracterização genética do vírus no país demonstram a ocorrência de um único genótipo variante no Brasil (BR-I), além do genótipo vacinal Massachusetts (Mass). No entanto, pouco se sabe sobre a frequência e distribuição tecidual destas variantes nos plantéis brasileiros. A presente dissertação é composta por dois artigos científicos sobre este tema. O objetivo do primeiro trabalho foi avaliar os genótipos de ocorrência em lotes de comercialização industrial no país. Para isso, foram obtidas amostras de lotes da Região Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do país. A caracterização foi realizada a partir do sequenciamento parcial do gene S de 49 amostras que foram comparadas com sequências de referência do GenBank e de isolados de campo do país. Onze amostras (22,4%) foram filogeneticamente similares ao genótipo vacinal Mass e 34 amostras (69,4%) agruparam com o genótipo brasileiro, previamente descrito, denominado BR-I. No entanto, quatro amostras (8,2%) formaram um novo grupo, denominado BR-II. Estes resultados demonstram a maior ocorrência do genótipo variante de campo tipicamente brasileiro. O segundo trabalho teve por objetivo determinar a frequência do VBI em diferentes regiões do país, além de determinar a frequência dos genótipos brasileiros em duas categorias de aves (frangos de corte e matrizes), de diferentes idades e nos diferentes sistemas fisiológicos infectados pelo VBI. Para isso, foram obtidos pools de órgãos de 198 lotes de frangos e 234 lotes de matrizes com sinais clínicos de BIG, das regiões Sul, Centro-Oeste e Nordeste do país. A detecção do VBI foi realizada por real time RT-PCR (qRT-PCR) da região 5’ UTR e a determinação dos genótipos por sequenciamento parcial do gene S1. Os resultados demonstraram frequência similar do VBI nas granjas das diferentes regiões do país, com índice maior em frangos de corte (média de 54%) do que em matrizes (média de 30,8%). O VBI foi detectado em aves de todas as idades, no entanto, o genótipo Mass foi mais frequentemente encontrado em frangos de até quatro semanas de idade, em frangos com idade próxima ao abate (> 4semanas) e matrizes houve o predomínio do genótipo BR. O sistema com maior frequência de detecção do VBI, em matrizes, foi o digestório (40%), com diferença significativa. Em frangos, a frequência de detecção nos sistemas digestório (43,5%) e respiratório (37,7%) não apresentou diferença significativa. Estes resultados demonstram a alta frequência dos genótipos brasileiros nos plantéis, sendo encontrados principalmente nos órgãos do sistema digestivo. / Infectious bronchitis (IB) is one of the most important respiratory diseases in the poultry industry. The agent, infectious bronchitis virus (IBV), generates losses in all stages of the poultry production (broilers, breeders and/or layers). Besides respiratory signs, IBV may present other different clinical forms: digestive, reproductive and urinary. IBV presents also a high genetic diversity among strains in different poultry-producing regions of the world. Recent studies demonstrate a large dissemination of local variant strains in Brazil (genotype BR-I), but the vaccine genotype Massachusetts (Mass) is also frequently found in poultry flocks. The present Masters Dissertation has two scientific articles on this topic. The aim of the first study was to evaluate the genotypes occurring in industrial poultry production flocks in Brazil. Samples of poultry flocks were obtained from different regions (South, Southeast, Midwest and Northeast). Molecular characterization was performed by partial sequencing of the S gene and comparison with reference (obtained in Genbank database) and field isolates sequences. Eleven samples (22.4%) were phylogenetically similar to Mass vaccine genotype and 34 samples (69.4%) grouped with the BR-I genotype. However, four samples (8.2%) originated a new group, denominated BR-II. These results demonstrate a high prevalence of the variant genotype BR-I in Brazil and the emergence of the novel BR-II genotype in the Midwest region. The second study aimed to determine the occurrence of IBV in different regions of the country and to evaluate the viral frequency in two poultry production types of birds (broilers and breeders), in different ages and in different physiological systems. Organs pools were collected from 198 broilers and 234 breeder flocks with IB clinical signs and from the three different Brazilian geographic regions: South, Midwest and Northeast. IBV detection was carried out by real time RT-PCR (qRT-PCR) of the 5' untranslated region and genotyping by partial sequencing of the S1 gene. The results showed similar IBV frequency on farms of different regions of the country with a higher rate in broilers (average 54%) than in breeders (mean 30.8%). IBV was detected in birds of all ages. Mass genotype was more often found in chickens up to four weeks of age, while BR genotypes were more frequent in broilers next to slaughter age and in all ages of breeders. The system with highest frequency of IBV was the digestive (40%) in breeders. In broilers, the frequency of detection in the digestive (43.5%) and respiratory (37.7%) systems showed no significant difference. These results demonstrate the high frequency of the Brazilian genotypes in the flocks, being found mainly in the organs of the digestive system.

Orientadores: Clarice Weis Arns, Helena Lage Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T04:15:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martini_MatheusCavalheiro_D.pdf: 16763908 bytes, checksum: 65c4aed6451181f383a10560fce87e51 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O vírus da Bronquite Infecciosa (VBI), pertencente à família Coronaviridae, é um importante patógeno à sanidade e fatores econômicos da produção avícola no Brasil e no mundo. O VBI possui múltiplos sorotipos e o frequente surgimento de novas variantes é um dos principais problemas relacionados a este vírus. Este trabalho tem como objetivo a investigação experimental da patogênese de um isolado de pombo (Columba/Brazil/2007/Unicamp/67T), caracterizado molecularmente pelo gene S1 como VBI sorotipo Massachusetts, e seus efeitos in vivo, em galinhas e camundongos. O presente estudo foi dividido em duas partes, na primeira um grupo de aves "specific pathogen free" (SPF) foi inoculado pela via óculo-nasal com a amostra viral proveniente de pombo. Os animais, de um dia de vida, foram sacrificados nos dias 2, 4, 5, 7, 9, 11, 14, 21, 28, 35 e 42 dias pós-inoculação (dpi). Foram coletados suabes de traqueia, seio nasal e cloaca, além de órgãos como pulmão, íleo, pró-ventrículo (coletado entre 7 e 21 dpi), rim, tonsilas cecais (coletada a partir de 4dpi) e testículos (coletado a partir de 5 dpi). Sinais clínicos respiratórios como espirros, estertores, corrimento nasal, além de letargia, diarreia e perda de coordenação foram observados principalmente no 5dpi. A inibição da atividade ciliar ocorreu concomitantemente ao pico de sinais clínicos das aves. Foi analisado tropismo tecidual, através da quantidade de RNA viral detectado, pelo trato digestório. Os maiores títulos de RNA viral foram detectados na tonsila cecal, seguida pelo íleo (ambos no 5dpi) e cloaca (no 2dpi). Além disso, houve detecção de RNA viral no rim e trato respiratório, com maior título de RNA viral na traqueia. Os órgãos que apresentaram maiores danos teciduais através do exame histopatológico foram o rim, íleo e traqueia (todos no 5dpi). Por fim, as aves inoculadas com a amostra do VBI oriundo de pombo produziram anticorpos entre os dias 14 e 21dpi, detectados no soro destes animais através do ELISA. Na segunda parte do trabalho, a capacidade de replicação de diferentes variantes do VBI em camundongos foi avaliada. Para tanto, camundongos das linhagens Balb/C e A/J foram inoculados pela via nasal com duas amostras do sorotipo Massachussets (Mass) e com a variante brasileira (BR-I), e sacrificados no 3, 10 e 14 dpi. Não foram observados sinais clínicos nem lesões macroscópicas graves. O RNA viral foi detectado em todos os órgãos coletados, sendo os principais órgãos de replicação o seio nasal e pulmão (no 3dpi) para os camundongos da linhagem A/J e pulmão e duodeno (ambos no 3dpi) na linhagem de camundongos Balb/C, nos quais os títulos virais detectados foram mais altos. Pneumonia intersticial, edema e infiltrado mononuclear foram as principais alterações histopatológicas observadas no 3dpi em camundongos inoculados com as diferentes variantes. A presença da nucleoproteína viral, pela imunohistoquímica, foi detectada no duodeno, traqueia e pulmão de camundongos no 3dpi nas duas linhagens de camundongos. Os anticorpos contra o coronavírus aviário foram detectados somente no 3dpi. Assim, os resultados do presente estudo demonstraram que a variante Massachussets, com origem de pombo, causa a doença clínica em aves comerciais não vacinadas e pode replicar em modelo mamífero por um curto período de tempo, ressaltando a importância da vacinação e o papel potencial dos roedores como possível reservatório e carreador do vírus / Abstract: Infectious bronchitis virus (IBV) belonging to the family Coronaviridae is an important pathogen to sanity and economics of poultry production in Brazil and worldwide. The VBI has multiple serotypes and the frequent emergence of new variants is one of the main problems related to this virus. This work aims to experimentally investigate the pathogenesis of pigeon sample (Columba/Brazil/2007/Unicamp/67T), molecularly characterized by S1 gene as IBV Massachusetts serotype, and its effects in vivo in chickens and mice. This study was divided into two parts. In the first part, a group of birds "specific pathogen free" (SPF) was inoculated by oculo-nasal route with the viral sample from pigeon. The animals with one-day-old, were sacrificed on 2, 4, 5, 7, 9, 11, 14, 21, 28, 35 and 42 days post-inoculation (dpi). Tracheal swabs, nasal sinus and cloaca were collected, and organs such as lung, ileum, pro-ventricular (collected between 7 and 21dpi), kidney, caecal tonsils (collected from 4dpi) and testes (collected from 5 dpi). Clinical signs such as sneezing, rales, nasal discharge, lethargy, diarrhea, and loss of coordination were observed mainly in the 5dpi. Inhibition of ciliary activity occurred concomitantly with the peak of clinical signs of birds. Tissue tropism was analyzed by the amount of viral RNA detected by the gastrointestinal tract. The higher titers of viral RNA were detected in the cecal tonsil, followed by the ileum (both in 5dpi) and cloaca (in 2dpi). In addition, viral RNA was detected in the kidney and respiratory tract, with highest titer of viral RNA in the trachea. The organs that showed severe tissue damage by histopathology were the kidney, ileum and trachea (all in 5dpi). Finally, the birds inoculated with the sample originated from IBV Pigeon produced antibodies between 14 and 21dpi, detected in the serum of these animals by ELISA. In the second part, the replication capacity of different variants of IBV in mice was evaluated. For this, mice of strains BALB/C and A/J were inoculated intranasally with two strains of Massachusetts (Mass) serotype and the Brazilian variant (BR-I), and sacrificed at 3, 10 and 14 dpi. No clinical signs or severe macroscopic lesions were observed. The viral RNA was detected in all organs collected, higher tittles were detected on sinus and lung (in 3dpi) for mice of strain A/J and on lung and duodenum (both in 3dpi) in the line of Balb/C; in this line the viral titles were higher than the strain A/J. Interstitial pneumonia, edema and mononuclear cell infiltration were the main histopathological changes observed in 3dpi in inoculated mice with different variants. The presence of viral nucleoprotein, immunohistochemistry was detected in the duodenum, trachea and lungs of mice in 3dpi in both mice strains. Antibodies against avian coronaviruses have been detected only in 3dpi. Thus, the results of this study demonstrate that the Massachusetts variant, originating from pigeon, cause clinical disease in commercial poultry unvaccinated and can replicate in mammalian model for a short period of time, emphasizing the importance of vaccination and the potential role of rodents as possible reservoir and the carrier virus / Doutorado / Microbiologia / Doutora em Genética e Biologia Molecular

As doenças respiratórias são bastante comuns na avicultura industrial, entre as quais a bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença de importância econômica. A doença é causada pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI) e gera grandes perdas em todas as etapas do processo de produção de aves, seja em frangos de corte, reprodutores e/ou poedeiras. Além do quadro respiratório, o VBI pode se apresentar de outras formas clínicas. As diferentes cepas do vírus possuem tropismo diferenciado pelos sistemas digestório, reprodutivo e urinário. Diversos dados recentes de caracterização genética do vírus no país demonstram a ocorrência de um único genótipo variante no Brasil (BR-I), além do genótipo vacinal Massachusetts (Mass). No entanto, pouco se sabe sobre a frequência e distribuição tecidual destas variantes nos plantéis brasileiros. A presente dissertação é composta por dois artigos científicos sobre este tema. O objetivo do primeiro trabalho foi avaliar os genótipos de ocorrência em lotes de comercialização industrial no país. Para isso, foram obtidas amostras de lotes da Região Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do país. A caracterização foi realizada a partir do sequenciamento parcial do gene S de 49 amostras que foram comparadas com sequências de referência do GenBank e de isolados de campo do país. Onze amostras (22,4%) foram filogeneticamente similares ao genótipo vacinal Mass e 34 amostras (69,4%) agruparam com o genótipo brasileiro, previamente descrito, denominado BR-I. No entanto, quatro amostras (8,2%) formaram um novo grupo, denominado BR-II. Estes resultados demonstram a maior ocorrência do genótipo variante de campo tipicamente brasileiro. O segundo trabalho teve por objetivo determinar a frequência do VBI em diferentes regiões do país, além de determinar a frequência dos genótipos brasileiros em duas categorias de aves (frangos de corte e matrizes), de diferentes idades e nos diferentes sistemas fisiológicos infectados pelo VBI. Para isso, foram obtidos pools de órgãos de 198 lotes de frangos e 234 lotes de matrizes com sinais clínicos de BIG, das regiões Sul, Centro-Oeste e Nordeste do país. A detecção do VBI foi realizada por real time RT-PCR (qRT-PCR) da região 5’ UTR e a determinação dos genótipos por sequenciamento parcial do gene S1. Os resultados demonstraram frequência similar do VBI nas granjas das diferentes regiões do país, com índice maior em frangos de corte (média de 54%) do que em matrizes (média de 30,8%). O VBI foi detectado em aves de todas as idades, no entanto, o genótipo Mass foi mais frequentemente encontrado em frangos de até quatro semanas de idade, em frangos com idade próxima ao abate (> 4semanas) e matrizes houve o predomínio do genótipo BR. O sistema com maior frequência de detecção do VBI, em matrizes, foi o digestório (40%), com diferença significativa. Em frangos, a frequência de detecção nos sistemas digestório (43,5%) e respiratório (37,7%) não apresentou diferença significativa. Estes resultados demonstram a alta frequência dos genótipos brasileiros nos plantéis, sendo encontrados principalmente nos órgãos do sistema digestivo. / Infectious bronchitis (IB) is one of the most important respiratory diseases in the poultry industry. The agent, infectious bronchitis virus (IBV), generates losses in all stages of the poultry production (broilers, breeders and/or layers). Besides respiratory signs, IBV may present other different clinical forms: digestive, reproductive and urinary. IBV presents also a high genetic diversity among strains in different poultry-producing regions of the world. Recent studies demonstrate a large dissemination of local variant strains in Brazil (genotype BR-I), but the vaccine genotype Massachusetts (Mass) is also frequently found in poultry flocks. The present Masters Dissertation has two scientific articles on this topic. The aim of the first study was to evaluate the genotypes occurring in industrial poultry production flocks in Brazil. Samples of poultry flocks were obtained from different regions (South, Southeast, Midwest and Northeast). Molecular characterization was performed by partial sequencing of the S gene and comparison with reference (obtained in Genbank database) and field isolates sequences. Eleven samples (22.4%) were phylogenetically similar to Mass vaccine genotype and 34 samples (69.4%) grouped with the BR-I genotype. However, four samples (8.2%) originated a new group, denominated BR-II. These results demonstrate a high prevalence of the variant genotype BR-I in Brazil and the emergence of the novel BR-II genotype in the Midwest region. The second study aimed to determine the occurrence of IBV in different regions of the country and to evaluate the viral frequency in two poultry production types of birds (broilers and breeders), in different ages and in different physiological systems. Organs pools were collected from 198 broilers and 234 breeder flocks with IB clinical signs and from the three different Brazilian geographic regions: South, Midwest and Northeast. IBV detection was carried out by real time RT-PCR (qRT-PCR) of the 5' untranslated region and genotyping by partial sequencing of the S1 gene. The results showed similar IBV frequency on farms of different regions of the country with a higher rate in broilers (average 54%) than in breeders (mean 30.8%). IBV was detected in birds of all ages. Mass genotype was more often found in chickens up to four weeks of age, while BR genotypes were more frequent in broilers next to slaughter age and in all ages of breeders. The system with highest frequency of IBV was the digestive (40%) in breeders. In broilers, the frequency of detection in the digestive (43.5%) and respiratory (37.7%) systems showed no significant difference. These results demonstrate the high frequency of the Brazilian genotypes in the flocks, being found mainly in the organs of the digestive system.

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-17T10:43:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dantas_VeraMaria_D.pdf: 1342581 bytes, checksum: a72aa3733072bbc22a204026925bf7d0 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: O objetivo deste estudo foi determinar a associação entre "Bebês Chiadores" (crianças que apresentaram sibilância recorrente durante os 2 primeiros anos de vida) e o grau de Hiperreatividade Brônquica (HB) avaliada entre aos 4 e 6 anos de idade. Comparou-se o grau de HB de 44 BC com 20 crianças sadias, pareadas por idade, sexo e antecedente de atopia. Todas receberam inalação de metacolina com màscara facial durante 2 minutos, em respiração normal, utilizando concentrações crescentes de 0,03 mg/ml à dose máxima de 12 mg/ml ou, até que se detectasse sibilos pulmonares por meio de ausculta pulmonar com estetoscópio (PCW). Encontrou-se uma diferença significativa quanto ao grau de HB entre os dois grupos. Houve relação significativa entre o grau de HB e a gravidade clinica da síndrome. Não observou-se associação entre o grau de HB e a atopia. Atopia foi definida em função da presença de pelos menos 2 dos seguintes critérios: nível sérico de IgE total elevado, antecedente de atopia e positividade ao teste cutâneo para antígenos da poeira doméstica. Estes dados demonstram clara evidência de HB à metacolina em BC entre 4 e 6 anos de idade e de que a HB e a atopia são fenômenos independentes. / Abstract: The aim of this study was to determine the association between Wheezy Babies (children with recurrent wheezing in the first two years of life) and the degree of Bronchial Hyperreactivity (BH) when they were between 4 and 6 years old. The degree of BH of 44 wheezy babies was compared with 20 healthy children of age, sex, atopy antecedent matched. All 64 children receibed methacoline inhalation with a face mask during 2 minutes of quiet tidal breathing in concentracions from 0.03 mg/ml to a maximum of 12 mg/ml or until detecting wheezing with a stethoscope over the lung (PCW). Significant difference was found in the PCW between the two groups. There was significant relationship between the degree of BH and the clinical severity of wheezy baby syndrome. It wasn't observed association between the degree of BH and atopy. Atopy was defined in function of at least two of the following criteria: hyperproduction serum IgE, atopy antecedent, and skin test to house dust mite antigens. The study provides clear evidence of BH to methacoline in wheezy babies, when they were between 4 and 6 years old, and that the BH and atopy are independent phenomenons. / Doutorado / Doutor em Pediatria

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