Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-09-19T14:46:51Z No. of bitstreams: 2 Tese - Rangel Magalhães Luzin - 2018.pdf: 3753425 bytes, checksum: 3ac739156d95f6ef2de370e5c5ce093c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-09-20T11:32:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Rangel Magalhães Luzin - 2018.pdf: 3753425 bytes, checksum: 3ac739156d95f6ef2de370e5c5ce093c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-20T11:32:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Rangel Magalhães Luzin - 2018.pdf: 3753425 bytes, checksum: 3ac739156d95f6ef2de370e5c5ce093c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-08-29 / It is known that sun exposure is one of the factors that contribute greatly to the appearance of skin cancer. Cancer cases have arisen annually on the planet and many of these cases have direct correlation with sun exposure. Knowing that both UVA and UVB radiation are harmful to health when the person is overexposed, the need arises for the use of devices to protect the skin and one of these ways and already recognized by the scientific community is through the prophylactic use of protectors solar power. Thus, this work proposes the synthesis, structural characterization, thermal stability verification, molar absorptivity calculation and in vitro UVB protection factor (PFUVB) calculated by the spectrophotometric method described by Mansur of new compounds derived from structures analogous to natural products. The structural planning was based on triazine derivatives (they are already commercially used with relative efficiency) and the use of chalcones, which are structures that besides having double bonds and conjugated aromatic structures that favor the absorption of the ultraviolet radiation, are studied compounds for various purposes and present in various plants, thus constituting a natural structure. In the planning, the choice of such structures was also due to the synthesis of compounds of high molar mass (above 900 daltons), contributing to safe structures, with low toxicity probability, low skin permeation and in compliance with the demands of the current legislation. The data obtained in the work reinforce the success of the same, where we had for the prototypes synthesized, molar absorptions superior to commercial filters. Establishing a​​research with the use of chalcones in safe and efficient sunscreens. / É sabido que a exposição solar é um dos fatores de grande contribuição para o surgimento do câncer. Casos de câncer tem surgido anualmente no planeta e muitos desses casos tem direta correlação com a exposição solar. Sabendo que tanto a radiação UVA quanto a UVB são nocivas à saúde quando o indivíduo é exposto em demasia, surge a necessidade do uso de artifícios para a proteção da pele e uma dessas maneiras e já reconhecida pelo meio científico é através do uso profilático de protetores solares. Assim este trabalho se propôs a síntese, caracterização estrutural, verificação de estabilidade térmica, cálculo de absortividade molar e fator de proteção solar UVB (FPUVB) in vitro calculado pelo método espectrofotométrico descrito por Mansur de novos compostos derivados de estruturas análogas a produtos naturais. O planejamento estrutural foi baseado nos derivados triazínicos (pois já são de uso comercial com relativa eficiência) e o uso de chalconas, que são estruturas que além de possuir duplas ligações e estruturas aromáticas conjugadas que favorecem a absorção da radiação ultravioleta, são compostos bastante estudados para diversos fins e presente em vários vegetais, constituindo assim uma estrutura natural. No planejamento, a escolha de tais estruturas se deu também pela síntese de compostos de alta massa molar (acima de 900 Daltons), contribuindo para estruturas seguras, com probabilidade de baixa toxicidade, baixa permeação cutânea e atendendo aos reclames das legislações vigentes. Os dados obtidos no trabalho reforçam o sucesso do mesmo, onde tivemos para os protótipos sintetizados, absorções molares superiores a filtros comerciais. Estabelecendo assim uma nova linha de pesquisas com a utilização de chalconas em filtros solares seguros e eficientes.

O câncer de pele se apresenta como um sério problema de saúde pública mundial, sendo incidente nos cinco continentes. As ações relacionadas à prevenção dessa doença envolvem, entre outras coisas, a utilização de protetores solares e a educação em saúde. Em virtude do aumento do número de indivíduos com câncer de pele a cada ano, é de grande valor estudos de entendimento e desenvolvimento de filtros solares melhores e mais seguros. Os produtos utilizados com a finalidade de proteger a pele dos raios solares ultravioletas (UV) possuem em sua composição filtros solares, que podem ter ação física, refletindo e dissipando a radiação UV; ou ação química, absorvendo a radiação UV. Os filtros químicos podem apresentar absorção em UVB (290-320 nm), UVA (320-400 nm) ou em ambas as faixas, sendo considerados de amplo espectro. . Dentre as várias classes de compostos com perfil de filtro solar UVB, os cinamatos destacam-se por apresentarem boa eficácia e excelente custo-benefício. A aplicação de cálculos teóricos tornou-se indispensável no planejamento de fármacos e nos estudos de mecanismo de ação de moléculas bioativas, visto a diminuição de tempo e custos em pesquisa e desenvolvimento. O desenvolvimento de métodos quânticos robustos, como o TD-DFT, permitiu a simulação de propriedades experimentais in silico, tais como espectros de RMN e UV. Diante deste panorama, aplicamos tal método na simulação de espectros UV para os cinamatos com perfil de filtros solares. Realizou-se uma busca do melhor funcional para simulação dos espectros, na qual se determinou que os funcionais B3LYP e B3P86 apresentaram melhores resultados quando comparados ao espectro experimental do composto p-metoxicinamato de etilexila determinado em metanol. Foram simulados os espectros de UV para sete compostos derivados do ácido cinâmico, os quais apresentaram λ máximo próximo a 310 nm, como descrito na literatura. Observou-se que a energia média para que ocorra a principal transição eletrônica, de HOMO para LUMO, é de 3,95 eV. O método mostrou-se adequado para a determinação de espectros UV para a classe dos cinamatos e pode ser utilizado na busca de novos compostos dessa classe a serem empregados como filtros solares. / Skin cancer presents itself as a very serious world public health problem, being incident all over the five continents. Using sunscreen and receiving health education, among other factors, are related to prevent the disease. The number of people with skin cancer increases every year, therefore, studies for better knowledge and development for better and safer sunscreens are crucial. Products used with the intention to protect the skin from ultraviolet sunrays (UV) are partially composed by sunscreen, which may lead to two different reactions, a physical reaction, that reflects and ceases the UV radiation; or a chemical reaction, that absorbs the UV radiation. Chemical filters may present absorption in UVB (290-320 nm), UVA (320 400 nm) or in both, which is considered as broad spectrum. Among the various types of compound forms with sunscreen UVB profile, cinnamates stand out for presenting good efficiency and excellent cost-benefit. The application of theoretical calculations became essential for drug design and bioactive molecules action mechanism studies, considering time saving and costs in research and development. The development of robust quantum method, such as TD-DFT allowed the simulation of experimental properties in silico, like RMN and UV spectra. Given this overview, this method was applied to simulate UV spectra of cinnamates with sunscreen profile. A search was done to define the best functional to simulate all spectrum, where the functionals B3LYP and B3P86 showed the best results when compared to experimental spectra of the compound ethylhexyl methoxycinnamate determined in methanol. An UV spectrum simulation for seven compounds derived from cinnamic acid showed maximum wavelength around to 310 nm, as described in the literature. It was observed that the average energy for the main electronic transition, HOMO to LUMO, is 3,95 eV. The method proved to be adequate for the determination of UV spectra for cinnamate class and it can be used as a tool on the search for new compounds from this class to be used as sunscreen.

BERTOLINI, WAGNER L. H. M. A influência do D-limoneno como promotor de absorção do ácido 5-aminolevulínico para Terapia Fotodinâmica do câncer de pele: avaliação in vitro e in vivo da permeação e retenção cutâneas. 2009 118f. Tese (Doutorado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. O câncer é a segunda doença principal do planeta, muito próximo de se tornar a mais incidente. Os tratamentos tradicionais do câncer, tais como cirurgia, radioterapia e quimioterapia apresentam severos efeitos colaterais ao paciente devido à citotoxicidade que podem causar às células normais, além das cancerosas. Objetivando minimizar estes efeitos indesejáveis pesquisadores de diversas áreas afins vislumbram novas técnicas, novos tipos e formas de tratamentos que apresentem um melhor perfil terapêutico; que possam agir de forma mais seletiva contra as células cancerosas, minorando os efeitos indesejáveis em relação às células saudáveis. Dentre as técnicas pesquisadas destaca-se a Terapia Fotodinâmica (TFD). Esta é uma técnica de tratamento nova e promissora. A técnica do tratamento consiste em aplicar, no tecido alvo, substâncias fotossensibilizantes, posteriormente ativadas com luz de comprimentos de onda específicos, com a finalidade de produzir destruição celular, por meio da ação de produtos citotóxicos fotoativados. Destaca-se a seletividade apresentada pela técnica, que deve ser reconhecida como uma das vantagens entre as técnicas empregadas no tratamento do câncer. O presente trabalho objetiva verificar a influência do D-limoneno como promotor de permeação do ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) em aplicação tópica. Isto visa aumentar a permeação do 5-ALA quando aplicado topicamente. O 5-ALA é convertido a protoporfirina-IX (PpIX) pela via do ciclo Heme. Esta é um potente agente fotossensibilizador endógeno. O interesse no uso deste promotor foi aumentar a taxa de penetração do 5-ALA, possibilitando a permeação de maiores quantidades do fármaco em questão. Para isto foram realizados estudos de permeação in vitro do 5-ALA, em concentração de 1% (p/p) utilizando-se formulações (emulsões O/A) com diferentes concentrações do promotor D-limoneno (0, 5, 10, 20 e 30%), (p/p). Observou-se que o fluxo in vitro do 5-ALA através da pele de orelha de porco aumentou para todas as formulações empregadas quando comparado ao controle, sem D-limoneno, para um período de estudo de 12h. A retenção no estrato córneo e na [epiderme + derme] apresentou aumento significativo, evidenciando, assim, um efeito eficiente do D-limoneno como promotor. Experimentos in vivo foram conduzidos em camundongos objetivando a análise do efeito da formulação na produção e acúmulo de PpIX na pele. Observou-se que o D-limoneno aumentou significantemente a quantidade de PpIX extraída da pele. Os resultados in vitro e in vivo mostraram o potencial do D-limoneno como promotor de absorção cutânea para o 5-ALA para a TFD tópica do cancer de pele. / BERTOLINI, WAGNER L. H. M. D-limonene influence in the cutaneous penetration enhancer for 5-aminolevulinic acid in photodynamic therapy of skin cancer: in vitro and in vivo skin permeation and retention studies. 2009 118f. Thesis (Doctoral). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. The topical administration of 5-ALA has been distinguished on skin cancer photodynamic therapy (PDT) because of its efficiency in the treatment of tumors and the reduced phototoxic collateral effects. However, this effectiveness is limited by its low penetration in the skin. A proposal to optimize the 5-ALA penetration in the skin is the use of cutaneous penetration enhancers, which seek to alter the cutaneous barrier for many bioactive molecules. The aim of this work was the pharmaceutical development of formulations containing D-limonene as a cutaneous penetration enhancer, seeking the increase of the cutaneous penetration of 5-ALA for skin cancer PDT. The in vitro flux of 5-ALA present in 1% (w/w) from different formulations containing D-limonene (20 e 30% w/w) was significantly increased after 12 hours of experiment, in comparison with formulations without D-limonene, mainly for the formulations containing 20% and 30% of D-limonene with 1% of 5-ALA (1,45 and 2,01 times, respectively). The stratum corneum (SC) and [epidermis + dermis] without SC retention were also significantly increased, showing an enhancer effect of the promoter. In addition, in vivo experiments were accomplished in mice, with the purpose of analyzing the formulation effect on the PpIX production and accumulation in the skin. It was observed that the penetration enhancer\'s presence significantly increased the amount of PpIX extracted from the skin. Both in vitro and in vivo results showed the potentiality of the formulations containing D-limonene as a cutaneous penetration enhancer for 5-ALA delivery on the skin cancer PDT.

O trabalho apresentado foi realizado em duas etapas independentes e baseou-se no estudo de diferentes sistemas nanométricos para viabilizar a aplicação da ftalocianina de cloro alumínio (ClAlPc) na terapia fotodinâmica (TFD) para o tratamento do câncer de pele do tipo melanoma. O fármaco fotossensibilizante (FS) utilizado apresenta propriedades físico-químicas que lhe permitem exercer sua atividade fotodinâmica com excelência, sem a interferência do cromóforo endógeno melanina existente nas células melanocíticas. Para driblar sua elevada hidrofobicidade, ClAlPc foi encapsulada em sistemas nanométricos para administração em meio fisiológico. Inicialmente nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) foram desenvolvidas por emulsificação direta, após um estudo de elaboração do diagrama de fases. O compritol foi o lipídio sólido escolhido para compor as NLS, com diferentes concentrações de ClAlPc. Todas as formulações desenvolvidas foram devidamente caracterizadas, com tamanho médio entre 100 e 200 nm, baixa polidispersão, potencial zeta adequadamente negativo (~|30| mV), drug loading de ClAlPc entre 76-94% (com pequena redução após 24 meses) e alta eficiência de encapsulação (E.E.). A morfologia arredondada das nanopartículas foi confirmada por microscopia eletrônica de transmissão e de força atômica. A estabilidade das NLS foi de 24 meses. A avaliação da cristalinidade do lipídio revelou a integração da ClAlPc à matriz lipídica da NLS, presença de estruturas polimórficas e grau de cristalinidade adequado, sem alterações após 24 meses. Nos estudos de difusão in vitro, observou-se que ftalocianina encapsulada nas NLS acumulam-se preferencialmente na epiderme e derme do que no estrato córneo, sem traços de permeação do ativo. Foi confirmado o caráter biocompatível das NLS sobre fibroblastos NIH-3T3. A ftalocianina encapsulada nas NLS não foi tóxica na linhagem de melanoma B16-F10 na ausência de luz, porém, apresentou excelente efeito fototóxico (0,75 ?g mL-1 de ClAlPc nanoencapsulada e irradiação entre 0,5 e 2,0 J cm-2), com redução da viabilidade celular de 87%. O segundo sistema de veiculação estudado foram as vesículas cataniônicas (VesCat), que se formam espontaneamente em água com o tensoativo TriCat 12. A obtenção das vesículas contendo ClAlPc envolve uma etapa adicional, para remoção de solvente orgânico, que foi aprimorada, reduzindo o tempo de produção em 55%. As VesCat/ClAlPc obtidas mantiveram suas propriedades físico-químicas e morfologia arredondada (confirmada por microscopia eletrônica de varredura), drug loading de 47% e alta E.E. Os resultados comprovaram que a aplicação desses dois sistemas nanométricos é altamente eficiente para aplicação da TFD no tratamento do câncer de pele do tipo melanoma ou outras doenças cutâneas, apresentando características favoráveis para avanços nos estudos de fase clínica e pré-clínica. / The present work was conducted in two independent steps, which were based on the study of different nanometric systems that make feasible the application of aluminum phthalocyanine chloride (ClAlPc) in the photodynamic therapy (PDT) to the melanoma skin cancer treatment. The photosensitizer (PS) used has physical-chemical properties that allow it to perform its photodynamic activity with excellence, without the interference of the melanin, an endogenous chromophore found in melanotic cells. In order to circumvent the high PS hydrophobicity, ClAlPc was encapsulated into nanosystems to administration in physiological environment. At first, solid lipid nanoparticles (SLN) were developed by direct emulsification process after drawing up phase diagram study. The solid lipid compritol was chosen to make the SLN, produced with different ClAlPc concentrations. The developed samples were properly characterized with mean size between 100-200 nm, low polydispersity, negative zeta potential (~|30| mV), ClAlPc drug loading around 76-94% (with slight decrease after 24 months) and high encapsulation efficiency (EE). The round shape of SLN was confirmed by transmission electron microscopy and atomic force microscopy. The nanoparticles were stable for at least 24 months. The evaluation of lipid crystallinity has proved the ClAlPc integration to SLN lipid matrix, the presence of polymorphic structures and a suitable crystalline degree, without large variations after 24 months. In the in vitro diffusion studies were observed that phthalocyanine conveyed in the nanoparticles accumulates preferably in the epidermis and dermis than in the stratum corneum, without any drug permeation traits. The NLS biocompatibility was confirmed on NIH-3T3 fibroblasts. ClAlPc-loaded NLS did not exhibit toxicity on B16-F10 melanoma cell line in the dark, but it was shown their outstanding phototoxicity effect (0.75 ?g mL-1 of encapsulated ClAlPc and irradiation between 0.5 and 2.0 J cm-2) with cell viability reduction of 87%. The second drug delivery system studied were the catanionic vesicles (VesCat) that are spontaneously obtained by mixing the self-assembly surfactant TriCat 12 in water. The production of ClAlPc-loaded vesicles comprises an additional step (to remove the organic solvent) that was optimized, saving 55% of the production time. The final VesCat/ClAlPc kept their physical-chemical properties and round shape (confirmed by scanning electron microscopy), drug loading of 47% and high EE. Hence, the results have proved the great efficiency of these two nanometric systems applied in the PDT to the treatment of melanoma skin cancer and other cutaneous disease, useful features for further progress towards preclinical and clinical trials.

The skin cancer is the abnormal and uncontrolled growth of the cells that compose the skin, disposing in formats different from borders, colors, sizes and symmetry creating different types. In general lines, the forms of the stains are geometrically irregular. As many forms in the nature cannot be explained in the molds of the conventional geometry, scientists developed the geometry fractal to classify certain objects that don't possess dimension whole, but fractional. The dimension fractal can characterize group or object, for the first it is the number that informs us how densely the group it occupies the metric space where he meets and for the second, the irregularity of your contour. The illustrations can be also differentiated through the index of compactness, in the index of variation of colors and your way through the first idiosyncrasy of the ellipse. This group of parameters was applied for the differentiation of skin stains. In this work grew a software to esteem the dimension fractal of skin stains (benign and malignant) using the called method Box Counting for the estimate of the dimension fractal, the index of variation of colors to quantify the number of colors of the stain, the index of compactness to evaluate the existent relationship between the area of the illustration and the area of the circle with same perimeter of the illustration and the first idiosyncrasy of the ellipse for comparison with a circumference. The parameter that allowed to differentiate the skin stains was the dimension fractal. / O câncer de pele é o crescimento anormal e descontrolado das células que compõem a pele. Dispõe-se em formatos diferentes de bordas, cores, tamanhos e simetria, dando origem a diferentes tipos. As formas das manchas de pele são geometricamente irregulares. Como muitas formas na natureza não podem ser explicadas nos moldes da geometria convencional, cientistas desenvolveram a geometria fractal para classificar certos objetos intrincados que não possuem dimensão inteira, mas sim fracionária. A dimensão fractal pode caracterizar conjunto ou objeto, para o conjunto é o número que nos informa o quão densamente o conjunto ocupa o espaço métrico onde ele se encontra e, para o segundo objeto, a irregularidade do seu contorno. As figuras podem ser também diferenciadas por meio do índice de compacidade, do índice de variação de cores e sua forma por meio da primeira excentricidade da elipse. Este conjunto de parâmetros aplicou-se para a diferenciação de manchas de pele. Neste trabalho desenvolveu-se um software para estimar a dimensão fractal de manchas de pele (benignas e malignas), estruturado na aplicação do método chamado Box Counting para a estimativa da dimensão fractal, o índice de variação de cores para quantificar o número de cores da mancha, o índice de compacidade para avaliar a relação existente entre a área da figura e a área do círculo com mesmo perímetro da figura e a primeira excentricidade da elipse para comparação com uma circunferência. O parâmetro que permitiu diferenciar quantitativamente as manchas de pele foi a dimensão fractal.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Skin cancer is the malign tumor most common worldwide and nonmelanoma is the kind of cancer most treatable. However, nowadays there is not a ideal treatment of the skin cancer and the surgery is the therapeutic standard for treatment of malign lesion in the skin. Photodynamic therapy (PDT) consists of the administration and accumulation of photosensitizers in target cells, followed by exposure to a light source with appropriate wavelength, resulting in the formation of oxygen reactive species, responsibles for causing damage to cancerous cells. Lipid nanoparticles (LN) offer an attractive system for delivery of lipophilic drugs such as Chloroaluminium Phthalocyanine (ClAlPc) for use in PDT of skin cancer. The objective of this work was develop and characterize LN containing ClAlPc for subsequent application to the treatment of skin cancer by PDT. Solid Lipid Nanoparticles (SLN) and Nanostructured Lipid Carriers (NLC) were prepared with 20 and 40% of Oleic Acid (OA) by the method of diffusion in aqueous solvent, using Stearic Acid (SA) as solid lipid and OA as liquid lipid. The characterization was performed by Transmission Electronic Microscopy (TEM), particle size, zeta potential, entrapment efficiency (EE), drug loading and thermal analysis by Differential Scanning Calorimetry (DSC). The in vitro penetration studies were performed in modified Franz diffusion cells using pig ear skin as membrane model. The distribuition of ClAlPc in the skin layers was visualized by fluorescence microscopy using mice hairless in the in vivo studies. The LN presented nanometric size with high values of zeta potential and relatively spherical shape and the incorporation of OA promoted the increase of EE and drug loading reaching values of 95.8% and 4%, respectively. The thermal analysis showed the presence of polymorphism, due to the process of melting and recrystallization of the lipid. In vitro penetration studies, ClAlPl was not detected in receptor medium, being retained in stratum corneum and skin layers and showed the penetration ability of the formulations developed, since the amount of ClAlPc retained on the skin was significantly higher (p < 0,01) compared the control formulation. The formulation with 40% AO (NLC 40) showed amount of drug retained in the skin significantly higher (p<0,01) compared to other formulations, demonstrating the enhancer effect of penetration of the OA, besides favoring the transport of ClAlPc to deeper layers of the skin, due to the smaller particle size of this formulation. According to the results obtained, the systems developed may be promising for the incorporation of AlClPc in the treatment of skin cancer by PDT. / O câncer de pele é o tumor maligno mais comum em todo o mundo e o não melanoma é um dos tipos de câncer mais tratáveis. Contudo, atualmente não existe um tratamento ideal do câncer de pele, e a cirurgia ainda é defendida como primeira opção no procedimento para tratar as lesões cancerígenas na pele. A Terapia Fotodinâmica (TFD) consiste na administração e acúmulo de um fármaco fotossensibilizador no tecido-alvo, seguido da exposição a uma fonte de luz de comprimento de onda apropriado, resultando na formação de espécies reativas de oxigênio responsáveis por causar danos às células cancerígenas. As Nanopartículas Lipídicas (NL) oferecem um atrativo sistema para liberação de fármacos lipofílicos como a Alumínio-Cloro Ftalocianina (AlClPc) para a utilização na TFD do câncer de pele. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar Nanopartículas Lipídicas AlClPc para posterior aplicação no tratamento de câncer de pele através da Terapia Fotodinâmica. Foram preparadas Nanopartículas Lipídicas Sólidas (NLS) e Carreadrores Lipídicos Nanoestruturados (CLN) com 20 e 40% de Ácido Oléico (AO) através do método da difusão de solvente em fase aquosa, utilizando Ácido Esteárico (AE) como lipídio sólido e AO como lipídio líquido. A caracterização foi realizada por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), diâmetro médio de partícula, potencial zeta, eficiência de encapsulação (EE), teor de fármaco e análise térmica, através da Calorimetris Exploratória Diferencial (DSC). Os estudos de penetração in vitro foram realizados em células de difusão do tipo Franz utilizando pele de orelha de porco como membrana. A distribuição da AlClPc nas camadas da pele foi visualizada através de microscopia de fluorescência nos estudos in vivo utilizando camundongos Hairless. As NL desenvolvidas apresentaram tamanho nanométrico com altos valores de potencial zeta e forma relativamente esférica e a incorporação de AO promoveu o aumento da EE e teor atingindo valores de 95,8% e 4%, respectivamente. Na análise térmica foi evidenciada a presença de polimorfismo do AE, decorrente do processo de fusão e recristalização do lipídio. Nos estudos de penetração in vitro, a AlClPc não foi detectada no meio receptor, ficando retida no EC e nas camadas da pele e foi evidenciada a capacidade de penetração das formulações desenvolvidas, já que a quantidade de AlClPc retida na pele foi significantemente maior (p < 0,01) em relação á formulação controle. A formulação com 40% de AO (CLN 40) apresentou quantidade de fármaco retida nas camadas da pele significantemente maior (p<0,01) em relação às demais formulações, sugerindo o efeito promotor do AO, além do favorecimento do transporte da AlClPc para camadas mais profundas da pele, devido ao menor tamanho de partícula desta formulação. De acordo com os resultados obtidos os sistemas desenvolvidos podem ser promissores para a veiculação da AlClPc no tratamento do câncer de pele através da TFD.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mestrado Paula.pdf: 2508093 bytes, checksum: eaf6dc0cbce3c8dd66202b6bce9a4939 (MD5) Previous issue date: 2008-05-21 / The thiosemicarbazones are chemical compounds of considerable scientific interest due to their important biological properties, such as antitumoral, antibacterial, antiviral, and antiprotozoal, among others. The studied compounds have the natural monoterpene camphene in the R4 position and the benzaldehyde in R2, with the substitution in the ring for different (R) groups, making this work unique. In this way, thirteen different compounds were derived from the benzaldehyde camphene thiosemicarbazone: camphene isotyiocyanate, camphene thiosemicarbazide, benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-metyl benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-methoxy benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, o-chloro benzaldehyde camphene thiosecarbazone, m-chloro benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-chloro-benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, o-nitrobenzaldehyde camphene thiosemicarbazone, m-nitro- benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-nitrobenzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-dimetylamino benzaldehyde camphene thiosemicarbazone and p-hydroxy benzaldehyde camphene thiosemicarbazone. The experiments were conducted in vitro using human melanoma cells (SK-Mel-37), because the melanoma is the most serious type of skin cancer due to its high possibility to metastasize and its resistance to the induction of apoptosis by antineoplastic drugs. We first performed a visual screening to observe if there was detachment of more than 85% of the total number of cells, after treatment with the sole concentration of 100 &#956;M. Thus, six compounds were selected: benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, m-chloro benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, m-nitro-benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-dimetylamino benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-hydroxy benzaldehyde camphene thiosemicarbazone e p-methoxy benzaldehyde camphene thiosemicarbazone. The morphological analysis of the treated cells, by inverted phase contrast microscope and Giemsa stain, showed intense cellular vacuolization and nuclear fragmentation. In the cellular viability test, through the MTT colorimetric assay, the compounds showed IC50 (inhibitory concentration for 50% of the cells) values between 12, 84 &#956;M and 32, 18 &#956;M, which are bellow of those described in the literature for compounds with antineoplastic action. The analysis of nuclear fragmentation by fluorescence microscopy was performed by the incorporation of propidium iodide, and it was observed, at different time points, a progressive increase of cellular damage and a pronounced nuclear fragmentation after the cellular detachment. The analysis of the DNA fragmentation by agarose gel electrophoresis revealed that the unequivocal cytotoxic action of the compounds occurred by apoptosis. Our results showed that six compounds derived from the benzaldehyde camphene thiosemicarbazones had cytotoxic activity in human melanoma cells (SK-Mel-37) in vitro, and constitute potential candidates for future analysis aiming its therapeutic application. / As tiossemicarbazonas são compostos de considerável interesse científico devido às suas importantes propriedades biológicas, tais como antitumoral, antimicrobiana, antiviral, antiprotozoária, dentre outras. Os compostos estudados apresentam o monoterpeno natural canfeno na posição R4 e o benzaldeído em R2, com substituição no anel por diferentes grupos (R), o que confere ao presente trabalho um caráter inédito. Dessa forma, foram apresentados para este estudo onze diferentes compostos derivados de benzaldeído canfeno tiossemicarbazona: benzaldeído canfeno tiossecarbazona, p-metil benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-metóxi benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, o-cloro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, m-cloro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-cloro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, onitro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, m-nitro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-nitro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-dimetilamino benzaldeído canfeno tiossemicarbazona e p-hidróxi benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, além de isotiocianato canfeno e canfeno tiossemicarbazida. Os experimentos foram realizados in vitro utilizando-se células de melanoma humano (SKMel- 37), visto que o melanoma é o tipo mais grave de câncer de pele devido à sua alta possibilidade de metástase e resistência à indução de apoptose por drogas antineoplásicas. Inicialmente, realizamos um screening visual observando-se o desprendimento de mais de 85% do total das células, após tratamento com a concentração única de 100 &#956;M. Dessa análise, foram selecionados seis compostos: benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, mcloro- benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, m-nitro-benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-dimetilamino-benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-hidróxibenzaldeído canfeno tiossemicarbazona e p-metóxi benzaldeído canfeno tiossemicarbazona. A análise morfológica das células tratadas e coradas com Giemsa e observadas através de microscópio óptico invertido em contraste de fase demonstrou intensa vacuolização celular e fragmentação nuclear. Na análise da viabilidade celular, através do ensaio colorimétrico do MTT, os compostos apresentaram valores de IC50 (Concentração Inibitória para 50% das células) entre 12,84 &#956;M e 32,18 &#956;M, valores que se encontram abaixo do descrito na literatura para compostos com ação antineoplásica. A análise da fragmentação nuclear através de microscopia de fluorescência foi realizada pela incorporação de iodeto de propídio. Observamos, em diferentes tempos, o aumento progressivo dos danos celulares e a fragmentação nuclear pronunciada após o desprendimento das células. A análise de fragmentação de DNA por eletroforese em gel de agarose revelou de maneira inequívoca que a ação citotóxica observada ocorre por apoptose. Os resultados obtidos demonstraram que seis compostos derivados do benzaldeído canfeno tiossemicarbazonas apresentaram atividade citotóxica em células de melanoma humano (SK-Mel-37) in vitro, e são candidatos promissores para as análises futuras visando à sua aplicação terapêutica.