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Modulação androgênica da proliferação celular : expressão do receptor de androgênios, co-reguladores e genes-alvo em células ipiteliais prostáticas humanasPozzobon, Adriane January 2006 (has links)
Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) é uma condição patológica que acomete os homens na senescência e está presente em 50% da população masculina, com cerca de 85 anos de idade. Os hormônios androgênicos atuam na próstata provendo sua diferenciação, crescimento e funcionalidade, sendo este efeito mediado pela ligação do hormônio com o receptor de androgênios (AR) e pela a ativação de genesalvo. O equilíbrio entre apoptose e proliferação celular é mantido por uma série de genes modulados pelos androgênios que estão implicados no controle do ciclo celular. Este trabalho teve como objetivo investigar os mecanismos moleculares mediados por androgênio que possam estar envolvidos no descontrole proliferativo do epitélio prostático que ocorre durante a senescência. As células epiteliais prostáticas humanas não- transformadas derivadas de HPB (HNTEP) foram cultivadas e incubadas com diferentes concentrações de diidrotestosterona (DHT) e com o antiandrogênio hidroxiflutamida (OH-FLU). Uma baixa concentração de DHT (10-13M) provocou um aumento significativo na proliferação destas células em relação ao controle e às doses mais altas de androgênio (10-10 e 10-8 M ). Este efeito foi abolido pela adição de OHFLU. A expressão do gene do AR foi avaliada por RT-PCR em tempo real com diferentes tempos e condições de tratamento, sendo que os níveis de RNAm do AR permaneceram inalterados bem como sua proteína. Buscando compreender fatores que possam interferir na ativação transcricional do AR, avaliou-se a expressão dos coreguladores FHL-2 e shp-1. No grupo tratado com DHT.10-13 M houve um aumento significativo na expressão do co-ativador FHL-2 em relação aos outros grupos tratados (C5%, OH-FLU, DHT.10-8, DHT.10-8 + OH-FLU e DHT.10-13 +OH-FLU) enquanto que a expressão do co-repressor shp-1 foi diminuída com esta dose, mas aumentada com a dose de DHT.10-8. Genes envolvidos na proliferação celular e que podem ser modulados pela ação androgênica, também foram avaliados em células HNTEP por RT-PCR em tempo real. O gene anti-apoptótico bcl-2 teve sua expressão aumentada sob o tratamento com DHT.10-13 M em relação ao tratamento com DHT.10-8 . Entretanto, o gene supressor de tumor p53 apresentou um aumento na sua expressão mediante o tratamento com a alta dose de androgênio (DHT.10-8M) em relação ao grupo controle, OH-FLU, DHT.10-13M e DHT.10-8 + OH-FLU. A análise da expressão do gene p21, alvo direto do gene p53, apresentou resultados semelhantes, com uma maior expressão com DHT.10-8M. Para averiguar alterações pós-transcrionais avaliou-se também os níveis protéicos do AR que não apresentaram alteração siginificativa e do p21, que apresentou uma maior marcação da proteína quando tratado com DHT10-8 M. Os dados obtidos neste trabalho indicam que pode ocorrer uma modulação da expressão destes genes mediante o tratamento com diidrotestosterona. Baixas doses de androgênio desencadeiam uma via estimulatória da proliferação enquanto que altas doses promovem a ativação de uma via inibitória nas células HNTEP. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is a pathologic condition that affects older men and is present in 50% of the male population at 85 years of age. The androgenic hormones act on the prostate gland promoting its differentiation, growth and function, this effect being mediated by the hormone's binding to the androgen receptor (AR) and the activation of target genes. The balance between apoptosis and cell proliferation is maintained by a series of genes modulated by the androgens that are implicated in the cell cycle control. This research aimed to investigate the androgen-mediated molecular mechanisms that may be involved in the proliferative imbalance of the prostatic epithelium in older men. Human non-transformed epithelial prostate (HNTEP) cells derived from BPH were incubated in different concentrations of dihydrotestosterone (DHT) and of antiandrogen hydroxylutamide (OH-FLU). A low concentration of DHT (10- 13M) led to a significant increase in the proliferation of these cells as compared to the control condition and to higher concentrations (10-10 and 10-8 M). This effect was abolished by the addition of OH-FLU. AR gene expression was evaluated by real-time RT-PCR in different times and conditions of treatment, and no differences in the AR mRNA and its protein were found. In an attempt to understand the factors that can change the AR transcriptional activation, the expression of co-regulators FHL-2 and shp 1 were also evaluated. There was a significantly increased expression of co-activator FHL-2 in the group treated with DHT.10-13 M as compared to all other groups (C5%, OHFLU, DHT.10-8, DHT.10-8 + OH-FLU and DHT.10-13 +OH-FLU). On the other hand shp-1 expression was low at this concentration but high when cells were treated with DHT.10-8 M. Genes participating in cell proliferation and that can be modulated by androgens were also evaluated in HNTEP cells by real-time RT-PCR. The anti-apoptotic bcl-2 gene had its expression increased by the treatment with DHT.10-13 M as compared to the treatment with DHT.10-8 M. However, the expression of tumor-suppressing p53 gene showed an increase in its expression by the treatment with a high level of androgen (DHT.10-8 M) as compared to control, OH-FLU, DHT.10-13M and DHT.10-8 + OH-FLU. The analysis of gene p21 expression, direct target of p53 gene, presented similar results (higher expression with DHT.10-8M). Post-transcriptional alterations were studied by evaluating the proteins levels of AR and p21; there were no significant differences, but the latter showed greater protein labeling when treated with DHT.10-8 M. The data obtained here indicate that the expression of these genes may be modulated by dihydrotestosterone (DHT). Low concentrations of androgens trigger a stimulatory pathway of proliferation, while high concentrations promote the activation of an inhibitory pathway in HNTEP cells.
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Membrana do biopolímero da cana-de-açúcar no tratamento de feridas cutâneas induzidas, em ratosLUCENA, Maurilio Toscano de 27 March 2012 (has links)
Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-05T12:26:26Z
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Previous issue date: 2012-03-27 / A pele é frequentemente exposta a traumatismos que podem provocar soluções de continuidade. Quando a perda cutânea é extensa, ocorre um retardo na cicatrização decorrente do processo de organização da ferida e da lenta atividade de reparação das células epiteliais. A utilização de um curativo com função de impermeabilizar a ferida e servir de guia na migração das células epiteliais poderia resultar em proteção, maior velocidade de epitelização e conforto para o paciente. O biopolímero da cana-de-açúcar é um polissacarídeo atóxico e biocompatível, obtido pela síntese de bactérias Gram negativas do gênero Zoogloea pertencentes à família Pseudomonadaceae, a partir do melaço da cana-de-açúcar, que pode exercer função transitória de protetor da ferida e guia para migração de células. Objetivo: Avaliar a eficácia da membrana do biopolímero da cana-de-açúcar no tratamento de feridas cutâneas excisionais induzidas, em ratos. Material e Métodos: Foram utilizados 40 ratos da raça Wistar, de ambos os gêneros, nos quais foram confeccionadas feridas cutâneas pela excisão de dois retalhos de espessura total da pele, na região dorsal. Por sorteio, em uma das feridas, foi aplicada membrana do biopolímero da cana-de-açúcar (grupo experimental) e, na outra, foi realizado curativo convencional, com lavagem com soro fisiológico (grupo controle). Os animais foram submetidos a eutanásia no 7º, 14º, 21º e 40º dias de pós-operatório, para a coleta de material das feridas e cicatrizes para estudo histopatológico e imunoistoquímica. Avaliaram-se a intensidade dos infiltrados inflamatórios polimorfonuclear e linfomononuclear, da fibrose, da fibroplasia e da crosta. Obtiveram-se fotografias digitais das preparações histológicas para determinação da espessura epitelial e contagem do número de vasos neoformados. Resultados: O tempo de cicatrização completa, observado clinicamente, não diferiu entre as feridas que receberam a membrana (21dias) e aquelas que não receberam (20 dias), permanecendo a membrana aderida ao leito cruento por um período médio de seis dias. Na comparação das imagens digitalizadas não foram evidenciadas diferenças estatisticamente significantes no que se refere à área e ao diâmetro médio das áreas cicatriciais, nos momentos avaliados (2o, 7o e 14o dias de pós-operatório), assim como não houve diferença do ponto de vista estatístico, em relação aos parâmetros histopatológicos avaliados nos grupos experimental e controle, apesar de ter sido observado uma menor intensidade do infiltrado inflamatório polimorfonuclear e da fibroplasia, além de uma menor contagem do número de vasos nas áreas cicatriciais das feridas que receberam a membrana. Conclusão: Conclui-se que as feridas onde foi aplicada a membrana do biopolímero da cana-de-açúcar apresentaram, ao estudo histopatológico e morfométrico, características de um processo cicatricial completo e estável, em comparação com aquelas que não receberam a membrana
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Investigation of the influence of red and infrared illumination on mechanical properties of cells: Photobiomodulation / Investigação da influência da iluminação (com luz vermelha e infravermelha) em propriedades mecânicas de células: fotobiomodulaçãoMagalhães, Ana Carolina de 22 November 2016 (has links)
The photobiomodulation therapy (PBMT) has many demonstrated applications in the health area including anti-inflammatory and wound healing effects. The main objective of this work is to verify if the PBMT causes measurable changes in the mechanical properties of cells, specifically in red blood cells, epithelial cells and fibroblasts. In addition, to contribute to the knowledge of the action mechanisms of the PBMT, this study intends to support applications of the PBMT during invasive procedures, such as the direct photo-treatment of the blood in surgical procedures with cardiopulmonary bypass, regarding security of the cellular integrity. For this analysis, three experimental techniques were used: optical magnetic twisting cytometry (OMTC), defocusing microscopy and confocal laser-scanning microscopy. Human bronchial epithelial cells were evaluated with OMTC. The epithelial cell culture was either photo-treated or not, with red laser (lambda=660 nm), and fixed power and time (power density of 153 mW/cm2, time 300 s). It was not possible to observe significant differences between photo-treated and control epithelial cells, for the hysteresivity (ratio between the cell loss and elastic shear moduli). The defocusing microscopy, similar to a phase contrast microscopy, was used to study human red blood cells from fresh blood. The red blood cells were either photo-treated or not, with red laser (lambda=660 nm), and different powers and times (power densities from 0 to 510 mW/cm2, times from 0 to 180 s). Some morphological and mechanical characteristics of individual red blood cells were evaluated, such as volume, radial profile of cell thickness, lateral and vertical membrane fluctuations, for the photo-treated and control red blood cells. It was not possible to detect differences between the two groups, for any of the parameters analyzed. For both techniques, the absence of detectable differences might be due to several factors, such as the non-action of the PBMT, with the parameters used, in the epithelial cells and red blood cells or to the small sensitivity of each technique. Confocal laser-scanning microscopy was used to evaluate the actin filaments of mouse fibroblasts. The fibroblast cell culture was either photo-treated or not, with red (lambda=625 nm) or infrared (lambda=808 nm) light and fixed power and time (power density from 113 to 158 mW/cm2, time 300 s). The nucleus and cell areas increased slightly when comparing photo-treated and control cells. On the other hand, the total actin, total actin density and the number of filaments decreased. These changes were detected for a short time after treatment, however, after 24 h they are not anymore detectable. The total branch length does not seem to suffer any modifications. In summary, with the data acquired with the three techniques, it was found that the PBMT, in the red range, with the parameters used, could not cause noticeable changes in red blood cells and epithelial cells, in vitro. On the other hand, the PBMT in the red and near-infrared range, with the power and times used, cause changes in actin filaments of fibroblasts, in vitro, in particular the decrease of the total actin density. / A terapia por fotobiomodulação tem muitas aplicações na área de Saúde devido a sua ação anti-inflamatória e de reparação tecidual. O objetivo geral desse trabalho é verificar se a terapia por fotobiomodulação provoca mudanças nas propriedades mecânicas de células, em particular em hemácias, células epiteliais e fibroblastos. Além de contribuir com o conhecimento dos mecanismos de ação da terapia por fotobiomodulação, este estudo pretende subsidiar aplicações da terapia por fotobiomodulação durante procedimentos mais invasivos, como a iluminação direta do sangue em procedimentos cirúrgicos com circulação extracorpórea, sob o ponto de vista da segurança quanto à integridade celular. Para essa análise foram utilizadas três técnicas experimentais: citometria óptica magnética de oscilação (OMTC), microscopia de desfocalização e microscopia confocal. Com a técnica de OMTC foram avaliadas células epiteliais brônquicas humanas em cultura, foto-tratadas com laser vermelho (lambda=660 nm), com potência e tempo fixos (densidade de potência de 153 mW/cm2, tempo 300 s). Não foi possível constatar diferenças significativas entre as células epiteliais foto-tratadas e as células controle, para a histerisividade (razão entre os módulos viscoso e elástico das células). Com a técnica de microscopia de desfocalização, semelhante a uma microscopia de contraste de fase, foram estudadas hemácias humanas de sangue recém coletado. As hemácias foram tratadas com laser vermelho (lambda=660 nm), com potências e tempos variados (densidade de potência de 0 a 510 mW/cm2, tempo de 0 a 180 s). Foram avaliadas algumas características morfológicas e mecânicas das hemácias individualmente, como o volume, perfil radial de espessura, flutuações lateral e vertical da membrana, tanto para hemácias foto-tratadas quanto para hemácias controle. Não foi possível detectar diferenças entre as hemácias foto-tratadas e controle para nenhum dos parâmetros avaliados. Para ambas as técnicas, a falta de mudanças observáveis poderia ser devida a diversos fatores, como a não ação da terapia por fotobiomodulação nas células epiteliais e nas hemácias, com os parâmetros aqui empregados, ou à falta de sensibilidade de cada uma das técnicas usadas. A microscopia confocal foi utilizada para avaliar os filamentos de actina de fibroblastos de camundongo em cultura, os quais foram foto-tratados com luz vermelha (lambda=625 nm) ou infravermelha (lambda=808 nm) e potência e tempo fixos (densidade de potência de 113 a 158 mW/cm2, tempo 300 s). Foi possível constatar ligeiro aumento nas áreas nuclear e celular das células foto-tratadas em relação aos fibroblastos controle. Também foi possível verificar a diminuição da quantidade total de actina, densidade de actina e do número de filamentos de actina nos fibroblastos foto-tratados. Essas mudanças são detectadas para tempos curtos após o tratamento, sendo que depois de 24 h elas desaparecem. O tamanho total dos filamentos parece não sofrer alterações. A partir dos dados coletados com as três técnicas, foi possível constatar que a terapia por fotobiomodulação, com os parâmetros utilizados, não consegue provocar mudanças perceptíveis em hemácias e em células epiteliais, in vitro. Porém, causa mudanças nos filamentos de actina de fibroblastos, in vitro, em particular a diminuição da densidade de actina total.
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Cistogênese e estágios esquizontes em células epiteliais de felinos infectadas pelo Toxoplasma gondii, in vitroMuno, Renata Morley de January 2011 (has links)
Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-02-08T13:30:15Z
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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Toxoplasma gondiié um protozoário parasito intracelular, agente causador
da toxoplasmose que é uma das zoonoses mais endêmicas do mundo. O T. gondii
possui dois tipos de reprodução: assexuada, que origina dois estágios evolutivos
infectivos, os bradizoítos e taquizoítos e a sexuada que ocorre no tecido epitelial
intestinal, exclusivamente de felídeos, hospedeirosdefinitivos, resultando na
formação de oocistos imaturos que são eliminados nas suas fezes. A disseminação
de oocistos no ambiente é o principal fator que explica a distribuição mundial do
parasito, associada à formação de cistos teciduais que aumentam a capacidade de
transmissão do parasito, através do consumo de carne crua ou mal cozida. Dada a
especificidade de o ciclo sexuado ocorrer no tecidoepitelial, o principal objetivo do
presente trabalho foi investigar, in vitro,a interação do T. gondiicom células
epiteliais oriundas do intestino de ratos e de rim de felídeos, a fim de estabelecer
possíveis correlações entre a origem do tecido (epitelial) e a fonte (rato e felídeos)
que possam determinar o destino intracelular do parasito. Assim, culturas de
linhagens celulares CRFK e IEC-6 foram infectadas com bradizoítos e taquizoítos de
T. gondiicom diferentes cargas infectivas. Após os desenhosexperimentais as
culturas foram processadas como de rotina para microscopia óptica de luz e
fluorescência e para microscopia eletrônica de transmissão e varredura. As análises
quantitativas mostraram que a linhagem CRFK foi mais susceptível à infecção frente
aos dois estágios infectivos do que a linhagem IEC-6 e que essa diferença foi
independente da carga parasitária e do estágio infectivo utilizados. As análises
qualitativas mostraram que a linhagem CRFK foi maissusceptível à infecção do que
a linhagem IEC-6 e esse evento foi independente da carga infectiva utilizada. As
análises qualitativas mostraram que a cistogênese se estabeleceu de forma
espontânea na CRFK quando infectada com bradizoítosda cepa ME49 ao se utilizar
a carga infectiva de 1:10 (parasito-célula hospedeira). Além disso, esta linhagem
celular apontou estágios infectivos morfologicamente distintos de taquizoítos e
bradizoítos, similares aos estágios esquizontes de T. gondii. O presente estudo
mostrou que existem diferenças no destino intracelular do parasito de acordo com o
tipo celular utilizado. O emprego de células epiteliais de felinos como modelo celular
da toxoplasmose experimental mostrou que pode contribuir com novos subsídios
para o estudo da biologia celular do parasito, assim como contribuir como
metodologia alternativa para o melhor entendimento do ciclo enteroepitelial doT.
gondii. Este modelo celular abre um novo campo de investigação para aspectos
moleculares desta interação que possam contribuir, por exemplo, para introdução de
estratégias que venham a interferir em umas das principais vias de disseminação da
toxoplasmose. Além disso, a CRFK se mostrou um modelo celular em potencial para
a produção de cistos de T. gondii in vitroem larga escala abrindo perspectivas na
redução do uso de animais experimentais para isolamento de cistos e inserção na
área de inovação e desenvolvimento tecnológico. / Toxoplasma gondiiis an intracellular protozoan parasite, the causative agent of
toxoplasmosis which is one of the most endemic zoonoses in the world. T. gondiihas
two types of reproduction: the asexual, which leadstwo evolutive infective stages,
the bradyzoites and tachyzoites and the sexual thatoccurs in the intestinal epithelial
tissue, exclusively in cats, the definitive hosts, resulting in the formation of immature
oocysts that are shed in their feces. The spread ofoocysts in the environment is the
main factor that explains the global distribution and dissemination of toxoplasmosis,
leading to the formation of tissue cysts increasingthe parasite capacity of
transmission, through ingestion of raw or undercooked meat. Once the specificity of
the sexual cycle occurs in epithelial tissue, the main objective of this study was to
investigate the in vitrointeraction of T. gondii epithelial cells derived from the
intestine of rats and kidney of cats, in order to establish possible correlations
between the origin of tissue (epithelial) and the source (rats and cats) that may
determine the intracellular fate of the parasite. Thus CRFK and IEC-6 cell lines were
infected with T. gondiibradyzoites and tachyzoites with different infective loads. The
kinetic study of the infective capacity of both stages of the parasites was performed
by fixing cell cultures at different times of interaction, aiming the quantitative analysis
of infection of both cell types fronts of two strains and two infective stages of the
parasite. After the experimental designs cultures were processed as routine for light
microscopy and fluorescence and transmission and scanning electron microscopy.
Quantitative analysis showed that CRFK line was more susceptible to infection than
the IEC-6 line, and that this event was independentof the infective stage or the
infective load used. The qualitative analysis showed that cystogenesis occurred
spontaneously in the CRFK line when infected with the ME49 strain bradyzoites, by
using the load of 1:10. In addition, this cell linepointed to morphologically distinct
stages of tachyzoites and bradyzoites, similar to schizonts stages of T. gondii. The
present study showed that there are differences in the intracellular fate of the
parasite according to the cell type used. The use of feline epithelial cells as cellular
model of experimental toxoplasmosis showed that it can contribute with new insights
for studying the cell biology of the parasite as well as contribute as an alternative
methodology for better understanding T. gondiienteroepithelial cycle. This cellular
model opens a new field of investigation for molecular aspects of this interaction that
can contribute, for example, to introduce strategies that will interfere in one of the
main routes of toxoplasmosis spread. In addition, the CRFK line presented itself as a
potential cellular model for cysts production in vitro in large scale opening
perspectives on reduction in the use of animals forcysts isolation and insertion in
inovation an technological development area.
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Envolvimento do receptor TLR-9 na resposta imune do hospedeiro durante o curso da infecção pelo Mycobacterium lepraeDias, André Alves January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Mycobacterium leprae, agente etiológico da hanseníase, expressa em abundância uma proteína catiônica semelhante às histonas, denominada Hlp, presente tanto no envelope como no nucleóide bacteriano. O reconhecimento do DNA bacteriano, rico em motivos CpG não metilados, pelo receptor TLR-9 representa uma importante via para a ativação da resposta imune inata, a qual pode levar à eliminação do agente infeccioso ou mediar manifestações patológicas. Foi mostrado ainda que complexos DNA-histona são mais potentes agonistas de TLR-9 que DNA sozinho. Assim, o presente trabalho teve como objetivo investigar o envolvimento do receptor TLR-9 na ativação da resposta imune do hospedeiro durante o curso da infecção pelo M. leprae. Inicialmente foi analisada a participação do TLR-9 na ativação da resposta imune inata em células epiteliais alveolares da linhagem A549 após estímulo com M. leprae. M. leprae foi capaz de induzir aumento das quimiocinas IL-8 e MCP-1 e a transcrição gênica do peptídeo antimicrobiano H\F062D-2 nas células epiteliais. O aumento da expressão de CD80 na superfície celular também foi observada após estímulo com o bacilo. O complexo CpG-Hlp micobacteriano solúvel também induziu aumento na produção de IL-8 nas células A549. Foi observado que o aumento de IL-8 induzido pelo M. leprae ocorre de forma dependente da translocação nuclear do NF-\F06BB e que o antagonista sintético de TLR-9 afetou a secreção de IL-8 induzida pelo M. leprae. A adição de CpG ao M. smegmatis selvagem, mas não mutante para o gene hlp, aumentou a produção de IL-8 pelas células epiteliais
Em conjunto, esses dados sugerem que as células epiteliais respiratórias podem reconhecer M. leprae via TLR-9 e, assim, participar da resposta imune inata no sítio inicial da infecção. Uma vez que o aparecimento do eritema nodoso hansênico (ENH) está associado a liberação massiva de antígenos micobacterianos, foi investigado o envolvimento do TLR-9 na patogênese do ENH. Neste sentido, foi verificado o aumento da expressão de TLR-9, tanto em lesões de pele como em células mononucleares periféricas de pacientes reacionais, quando comparados com pacientes não reacionais. Posteriormente foram quantificados os níveis de ligantes de TLR-9 na circulação dos pacientes. Além de DNA de M. leprae, altos níveis de Hlp foram detectados no soro de pacientes reacionais. Como o TLR-9 também reconhece DNA endógeno, os níveis circulantes do complexo DNA-histona humano foram quantificados e observou-se um aumento destes complexos no soro de pacientes reacionais. Demonstramos que PBMCs de pacientes reacionais secretam níveis aumentados das citocinas TNF-\F061, IL-6 e IL-1\F062 em resposta ao complexo CpG-Hlp em comparação a pacientes não reacionais e indivíduos sadios. Finalmente, o antagonista sintético de TLR-9 inibiu a secreção das citocinas pelas PBMCs em resposta ao lisado de M. leprae. Em conjunto, esses resultados sugerem um importante envolvimento do receptor TLR-9 no processo inflamatório desencadeado no ENH abrindo perspectivas para novas abordagens imunoprofiláticas e terapêuticas / Mycobacterium leprae
,
etiological
agent of leprosy, expresses
in abundance a
cationic protein similar to histones, called
histone
-
like protein (
Hlp
)
, present
in
the envelope as
well as
in bacterial nucleoid.
The r
ecognitio
n of bacterial DNA
rich in unmethylated CpG motifs by
TLR
-
9
is an important pathway for activation
of the innate immune response, which can lead to the elimination of the
infectious agent or mediate pathological manifestations. Moreover,
studies
showed tha
t DNA
-
histone complexes are mor
e potent agonists of TLR
-
9
than
DNA alone
.
This study aimed to investigate th
e involvement of TLR
-
9
in the
activation of the host immune response d
urin
g the course of
M. leprae
infection.
Initially, we analyzed the participat
ion of TLR
-
9 activation
on
the innate immune
response in
A549
alveolar epithelial cells after stimulation with
M. leprae
.
It was
shown
that
M. leprae
was able to induce
the chemokines
I
L
-
8 and MCP
-
1
, and
gene transcription of
antimicrobial peptide H
D
-
2
in
epithelial cells.
T
he
increase of CD80
expression on the cell surface
was also observed after
stimulation with bacillus.
Soluble mycobacterial
CpG
-
Hlp complex also induced
an increase in IL
-
8 in A549 cells. It was observed that the increase of IL
-
8
,
induc
ed by
M. leprae
,
occurs dependently
nuclear
translocation of NF
-
B and
synthetic TLR
-
9 antagonist affected IL
-
8 secretion induced by
M. leprae
.
T
he
addition of CpG to
wild
type
M. smegmatis
, but not to the mutant gene hlp
,
increased IL
-
8 production by epit
helial cells.
A
s a whole
, t
he
se
results
suggest
that respiratory epithelial cells can recognize
M. leprae
via TLR
-
9 and thus
participate in the innate immune response in the initial infection site.
Since the
appearance of erythema nodosum leprosum (ENL) is
associated with the
massive release of mycobacterial antigens
, it
was investigated the involvement
of TLR
-
9 in the pathogenesis of ENL.
In this sense, we observed an increase
in
expression of TLR
-
9, both
in
skin lesions
and
peripher
al mononuclear cells of
ENL
patients,
when compa
red with non
reactional
patients. Subsequently, we
measured the levels of TLR
-
9 ligands in the circulation of patients.
In addition
to
M. leprae
DNA
, high levels of Hlp were detected i
n the seru
m of
ENL
patients
.
As
TLR
-
9 also recog
nize
s
endogenous DNA, circulating levels of the human
DNA
-
histone complex were quantified
,
and we also observed an increase of
these complexes in
the
serum
of
ENL
patients. Furthermor
e, PBMCs from
ENL
pa
tients
secreted elevated levels of TNF
-
, IL
-
6 and IL
-
1
cytokines
in
response to CpG
-
Hlp complex
, when
compared to nonreactional
patients and
healthy individuals. F
inally, synthetic antagonist
of
TLR
-
9 inhibited the secretion
of cytokines by P
BMCs in respo
nse to
M. leprae
lysates
. The results described
in t
he second part of the study suggest a major involvement of TLR
-
9 receptor
in the inflammatory process triggered in ENL
,
opening up prospects for new
immunoprophylactic and therapeutic approaches.
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Expressão gênica das adesinas e fatores de virulência da fase miceliar e leveduriforme do complexo paracoccidioides e de sua interação com células epiteliais e fagócitos /Braz, Jaqueline Derissi. January 2013 (has links)
Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Janaina de Cassia Orlandi Sardi / Banca: Gil Benard / Resumo: A interação fungo-hospedeiro resulta em um processo complexo cujo conhecimento permite melhor entendimento da patogênese das micoses sistêmicas. Espécies de Paracoccidioides são agentes causadores da paracoccidioidomicose (PCM), doença progressiva, crônica e sistêmica, geograficamente confinada na América Latina. O fungo é termodimórfico e a infecção ocorre após a inalação de conídios ou fragmentos de hifas, que ao entrarem em contato com o hospedeiro podem ser transformadas em formas leveduriformes. Esse evento é importante para o estabelecimento da PCM, associado a fatores ligados ao fungo bem como ao hospedeiro. A virulência fúngica é descrita como um evento altamente complexo onde em diferentes estágios da infecção ocorre a expressão de múltiplos genes, podendo estar fortemente associados ao estabelecimento da doença. A adesão e a sobrevivência no interior do hospedeiro são extremamente importantes para o estabelecimento da patogênese. Alguns genes de Paracoccidioides spp se apresentam diferencialmente expressos durante a transição dimórfica do fungo, apresentando baixos níveis de expressão na forma miceliar quando comparadas com a forma leveduriforme, sugerindo que estes possivelmente seriam fatores na composição de estratégias moleculares que P. brasiliensis utiliza para morfo-adaptação e sobrevivência no hospedeiro. O objetivo deste trabalho foi estudar a expressão de genes relacionados a alguns dos fatores de virulência de P. brasiliensis e P. lutzii na fase miceliar e leveduriforme, visando verificar o nível de expressão no fungo bem como na interação com células fagocíticas e epiteliais. Para tanto foram realizados ensaios de infecção com P.brasiliensis (Pb18) e P. lutzii (P01), nas fases miceliar e leveduriforme em células epiteliais pulmonares (MRC-5) e macrófagos alveolares (AMJ2-C11) utilizando a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR). Os genes eleitos para este estudo foram os ... / Abstract: The fungus - host interaction results in a complex process whose knowledge allows a better understanding of the pathogenesis of systemic mycoses. Paracoccidioides species are causative agents of paracoccidioidomycosis (PCM), a progressive, chronic and systemic disease , geographically confined to Latin America. The fungus is thermally and infection occurs after inhalation of conidia or hyphal fragments, which on contact with the host can be transformed into yeast forms. This event is important for the establishment of PCM besides other factors related to the host-fungus interaction. The fungal virulence is described as a highly complex event that enables the expression of multiple genes of the fungus in different stages of infection and can be strongly associated with the development of the disease. Adherence and survival within the host are extremely important for the establishment of pathogenesis. Paracoccidioides spp differentially expressed some genes during the dimorphic fungus transition, having low expression levels in the mycelial form compared with yeast-form, suggesting that these factors were likely to be in the composition of molecular strategies of P. brasiliensis that uses to morpho- adaptation and survival in the host. The aim of this study was to compare the gene expression of the some virulence factors of Paracoccidioides species by real-time PCR. For the assays, the infection was performed with the yeast and mycelial phase of P. brasiliensis (Pb18) and P. lutzii (P01) in pulmonary epithelial cells (MRC-5) and alveolar macrophages (AMJ2 -C11) using RT- PCR. The genes chosen for this study were those which express the 43 kDa glycoprotein (gp43), enolase, glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase (GAPDH), 14-3-3 (30kDa), phospholipase, protease and hemolysin (Duf gene). The results showed a significant increase in the levels expression of enolase, gp43 and GAPDH in the yeast phase of P. brasiliensis. Enolase was more ... / Mestre
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Migração e invasão celular in vitro de células humanas expressando variantes da oncoproteína LMP1 do vírus de Epstein-Barr (EBV) /Laszkiewicz, Nathalia Suiti. January 2015 (has links)
Orientador: Deilson Elgui de Oliveira / Coorientador: Ramon Kaneno / Banca: Flávia Karina Delella / Banca: Bryan Eric Strauss / Resumo: O vírus de Epstein-Barr (Epstein-Barr virus - EBV) infecta latentemente mais de 90% da população humana. A infecção viral está associada ao desenvolvimento de alguns cânceres, incluindo o carcinoma de nasofaringe. Alguns estudos sugerem a contribuição na evasão imune e progressão dos cânceres causados pelo EBV. Diferentes variantes da proteína latente de membrana 1 (LMP1), principal produto do EBV, são discriminadas, principalmente, por variações nos domínios transmembrana e carboxi-terminais da proteína. O domínio C-terminal de LMP1 é capaz de ativar vias de sinalização intracelular que regulam os fenômenos de migração e invasão celular. Adicionalmente, induz síntese de produtos que degradam a matriz extracelular e favorecem a angiogênese. Até o momento, não se sabe se diferentes variantes de LMP1 apresentam propriedades distintas no que se refere a esses fenômenos do escape imune e progressão tumoral. Assim sendo, no presente estudo avaliamos a influência das variantes de LMP1 sobre a capacidade de migração e invasão celular in vitro e a imunomodulação de HLA-ABC e HLA-DR, CD80, CD83, CD54, CD40 e PD-L1 nas linhagens celulares HEK293T e NP69. Observamos que as variantes Alaskan, Med+, China 1 e China 2 induziram a migração celular da linhagem NP69 de maneira distinta quando comparadas entre si e com a célula sem LMP1. Observamos, também, maior capacidade de invasão celular das células HEK293T-China 2 em comparação à HEK293T. Com relação à expressão de moléculas envolvidas na modulação da resposta imune, observamos que a transfecção de LMP1 aumentou a expressão de CD80 e CD83 apenas nas células NP69-Alaskan, e de CD54 e PD-L1 de maneira similar nas células NP69-LMP1. Conclui-se, portanto, que LMP1 promove migração distinta das células NP69-LMP1 e invasão de células HEK293T-China 2, e modula a expressão de moléculas envolvidas no escape imunológico / Abstract: The Epstein-Barr virus (EBV) latently infects more than 90% of human adults. Viral infection is associated to the development of some cancers, including nasopharyngeal carcinoma. Oncogenic potential of the virus is usually studied in terms of its capacity to transform the infected cells nevertheless some studies suggest that the EBV infection may also contribute to immune evasion, and cancer progression. Several latent membrane protein 1 (LMP1) variants are described, discriminated mainly by variations in its C-terminal and the transmembrane domains of the protein. LMP1 C-terminal domain activate intracellular signaling pathways that regulated cell migration; moreover, LMP1 upregulate the expression of cell proteins with roles in extracellular matrix remodeling and angiogenesis. Currently it is unknown whether different LMP1 variants possess distinct properties regarding biological phenomena relevant to immune evasion, and cancer progression. Thus, in the present study we evaluated the in vitro migration and invasiveness, and immunomodulation of HLA-ABC, HLA-DR, CD80, CD83, CD54, CD40, and PD-L1 of HEK293T cells, and NP69 cells. We observed that Alaskan, Med+, China 1, and China 2 stimulates distinctly migration of NP69 when compared to cell without LMP1. We also saw that HEK293T-China 2 had a pronounced cellular invasion when compared to HEK293T. In regard of expression of molecules involved in immune response modulation, we observed that LMP1 enhanced expression of CD80, and CD83 in NP69-Alaskan cells; and CD54, and PD-L1 in a similar level in NP69-LMP1 cells. In summary, LMP1 promote distinct cellular migration in NP69LMP1 cells, and HEK293T-China 2 invasion, and is capable of modulate molecules involved in immune evasion / Mestre
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Avaliação de moléculas de adesão e da via endocítica na interação Paracoccidioides brasiliensis-células do hospedeiro /Voltan, Aline Raquel. January 2008 (has links)
Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Henrique Leonel Lenzi / Banca: Christiane Pienna Soares / Banca: Maria José Soares Mendes Giannini / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico, agente de doença granulomatosa crônica denominada de paracoccidioidomicose (PCM), com grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até disseminadas evoluindo para letalidade. O fungo tem capacidade de aderir, extravasar e invadir barreiras impostas pelos tecidos do hospedeiro. Em ensaios in vitro verificou-se que P. brasiliensis pode aderir e invadir células epiteliais, aparecendo algumas vezes internalizado dentro de um vacúolo. A identificação do mecanismo pelo qual este fungo adere, invade e sobrevive no interior da célula hospedeira é campo fértil para a descoberta de sua patogênese. Para tanto, a análise de proteínas presentes no microrganismo e nas células do hospedeiro e também os marcadores da via endocítica para co-localizar os microrganismos no interior das mesmas é o objetivo deste estudo. Assim, foi realizada a infecção de células epiteliais A549 e macrófagos AMJ2-C11com P. brasiliensis (Pb18) nos períodos de 3, 5, 8, 24 e 3, 5, 10 e 24h, respectivamente e feitas análises por técnicas de imunofluorescência para as proteínas de junções compactas, junções aderentes, junções tipo fenda e proteínas de ancoramento intracelular, bem como as proteínas da via endocítica. Entres estas, foram ensaiadas a expressão de clatrina, Rab7 e LAMP-1 por imunofluorescência e EEA1, Rab7 e LAMP-1 por imunoblot. As proteínas de junções foram expressas nas células, bem como na parede do fungo. A clatrina foi evidente na célula e aparentemente mais expressa na parede do fungo. Nas células A549 não houve alteração na expressão de Rab7 e LAMP-1, tanto na imunofluorescência quanto no imunoblot, sendo que para EEA1 e Rab5 não foi evidenciada alteração na expressão pela técnica de imunoblot. Rab7 foi expressa nos macrófagos, localizada na periferia das células e também no... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is a thermally dimorphic fungus, the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM). PCM is a polymorphic disease manifested by an array of diverse clinical manifestations and varying organ involvement. P. brasiliensis may actively penetrate the mucocutaneous surface and parasitize epithelial cells, thus evading the host defenses and reaching deeper tissues. The ability of this fungus to adhere to and invade non-professional phagocyte cells has been observed. In vitro assays verify that P. brasiliensis can adhere and could appear internalized within vacuole. The identification of the mechanism by which this fungus adheres, invades and survivor inside the host cell is a fertile area for discover their pathogenesis. The aim of this study was analyzed the junctions proteins in the fungus and the host cells, as well as the endocytic markers to colocate the microorganisms inside the cells. Thus, the infection was performed in A549 epithelial cells and macrophages AMJ2-C11 with P. brasiliensis (PB18) for periods of 3, 5, 8, 24 and 3, 5, 10 and 24 h, respectively, and the immunofluorescence analysis was developed for the proteins claudin-1, claudin-4, E-cadherin, conexin 43, talin e vinculin, and the endocytic proteins. The macrophages and the cells A549 have been blemish along anti-clatrin, anti-Rab7 and anti-LAMP-1. The junctions' proteins have been expressed at the cells, as well as on the wall from the fungus. The clathrin was present at the cells and apparently more expressed on the fungus wall. Rab7 and LAMP-1 were not expressed in the cells A549 as demonstrated by the imunofluorescence and the imunoblot. On the contrary Rab7 was expressed in macrophages located at the periphery of the cells and also in the own fungus. The expression of LAMP-1 apparently not presented alteration both at the imunofluorescence and at the imunoblot. The expression of EEA1 was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Efeito da insulina sobre a cinetica de morte de celulas epiteliais prostaticas apos castração / Insulin influences tissues changes and the kinetics of epithelial cell death in the rat ventral prostate after castrationDamas-Souza, Danilo Marchete, 1982- 03 December 2009 (has links)
Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T16:23:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: Na próstata, o crescimento e a fisiologia epitelial dependem da expressão dos receptores
de hormônios esteróides por alguns tipos celulares e das interações parácrinas que se
estabelecem a partir da resposta inicial a estes hormônios, associados a uma complexa
interação com hormônios somatotróficos como insulina, prolactina e hormônio de crescimento.
Este estudo investigou a ação da insulina sobre a sobrevivência das células epiteliais
prostáticas frente à privação androgênica, e sua possível contribuição para a defasagem entre a
queda dos níveis de andrógeno (até 12 horas após castração) e o pico de morte das células
epiteliais (72 horas após castração), monitorando a cinética de morte celular em animais
castrados em comparação com aquelas de animais diabéticos induzidos com aloxana. A
indução do diabetes causou uma redução da densidade de volume e do volume do epitélio.
Esta redução foi maior com a aplicação de insulina. O mesmo foi observado para as células
musculares lisas, mas não para o compartimento luminal e estromal. A castração tem um efeito
tardio sobre o epitélio, com reduções tanto da densidade de volume como do volume somente
96 horas após castração. Já nos animais diabéticos o efeito é observado já às 24h após
castração. Relação inversa se dá com o lúmen. Embora tenham sido observados aumentos na
densidade de volume do estroma, não houve efeito significativo no volume final após 120 horas.
No caso das células musuclares lisas, não foi observado efeito da castração, no período
analisado. Já no caso dos animais diabéticos, há uma redução significativa dentro do período
analisado. A reação de Feulgen permitiu analisar a morfologia nuclear e a observar uma
antecipação do pico de apoptose para 48 horas após a castração na ausência de insulina. A
aplicação de insulina restaura a posição do pico para as 72h e diminui a taxa de morte celular
em todos os pontos experimentais analisados, antes e após castração. Os mecanismos
moleculares envolvidos nestas respostas estão relacionados à privação androgênica associada
a um elemento de sobrevivência celular promovido pela insulina. Na ausência desta, ocorre
uma antecipação da morte das células epiteliais. Esta hipótese é reforçada pela observação de
que a insulina exógena não somente restaura o pico às 72 horas, como reduz a taxa de
apoptose, inclusive nos animais não castrados. / Abstract: Prostate growth and physiology depend on the expression of steroid receptors in some cell types and on paracrine interactions established after the initial response to these hormones in
association with somatotrophic hormones such as insulin, prolactin and growth hormone. This
study investigates the action of insulin on the survival of prostate epithelial cells in response to
androgen deprivation, and its possible contribution to the lag between the drop in androgen
levels (within 12 hours after castration) and the peak of the epithelial cell death (at 72 hours after
castration), by monitoring the kinetic of cell death in castrated animals as compared to that in
alloxan-induced diabetic animals. Diabetes induction caused a reduction in epithelial volume
density and volume. This reduction was higher with the administration of insulin. The same was
observed for the smooth muscle cells, but not for the luminal and stromal compartments.
Castration has a later effect on the epithelium of non-diabetic animals, with reduction in the
volume density and volume only 96 hours after castration. In the diabetic animals, the effect is
already observed 24 hours after castration. The opposite behavior was observed for the lumen.
There were increases in the volume density of the stoma, but no effect on its volume 120 hours
after castration. Feulgen reaction allowed the examination of the nuclear morphology and the
observation of an anticipation of the peak of apoptosis to 48 hours after castration in the
absence of insulin. Insulin administration restores the peak to 72 hours and reduces the rate of
cell death in all experimental points. It is suggested that an element of cell survival promoted by
insulin acts in concert with the response to androgen deprivation. This idea is strengthened by
the observation that insulin not only restores the apoptosis peak at 72 hours, but also reduces
the percentual of apoptosis cells. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural
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Arrabidaea chica Verlot : avaliação in vitro de toxicidade, atividades antimicrobiana e citoprotetora do extrato bruto livre padronizado combinado ao ácido zoledrônico, e estudos de microencapsulação / Arrabidaea chica Verlot : in vitro evaluation of toxicity, antimicrobial and cytoprotective activities from standardized free crude extract combined with zoledronic acid, and microencapsulation studiesZago, Patrícia Maria Wiziack 1982- 24 August 2018 (has links)
Orientadores: Mary Ann Foglio, Ana Lúcia Tasca Gois Ruiz, João Ernesto de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T18:38:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2014 / Resumo: A Osteonecrose Maxilar Induzida por Bisfosfonatos (OMIB) está associada à terapia com bisfosfonatos como o ácido zoledrônico (ZA), que são medicamentos importantes para o manejo de patologias ósseas. Estudos in vitro demostraram que os bisfosfonatos podem alterar a viabilidade e proliferação de células epiteliais, o que justificaria situações de deficiente cicatrização em feridas de OMIB. Arrabidaea chica (H&B.) Verlot é uma Bignoniaceae com propriedades cicatrizantes, e que apresenta as antocianidinas como principais compostos identificados. Este estudo avaliou a atividade antimicrobiana, citotóxica e citoprotetora, in vitro, do extrato hidroalcoólico de A. chica (AC) na presença de ZA. Foi realizado estudo de estabilidade nas condições de 40 °C e 75% umidade, do extrato microencapsulado em mistura de goma arábica com maltodextrina (1:1) e do extrato livre correspondente. Queratinócitos (HaCaT), fibroblastos (PT64-04HF) e osteoblastos (MC3T3-E1) foram submetidos a 2 protocolos de tratamento: a exposição a ZA 10 µM por 24h e posteriormente AC por 48h e vice-versa; ou o co-tratamento de ambos. Os parâmetros estudados foram viabilidade, ocorrência de apoptose e ativação de caspases 3/7. A viabilidade de células de câncer de próstata (C4-2B) foi avaliada após tratamento com AC. Streptococcus mutans foram submetidos ao co-tratamento ZA e AC. Microcápsulas contendo AC foram produzidas por processamento em spray dryer, aliquotadas e armazenadas em câmara climática para o estudo de estabilidade acelerada, segundo protocolo da ANVISA (RE 01/2005). Os resultados foram submetidos à análise estatística (ANOVA e Teste T de Student, a=0,05). Após 48 h, ZA reduziu a viabilidade de queratinócitos, fibroblastos e osteoblastos em, respectivamente, 34%, 47% e 51%. O co-tratamento ZA e AC 5 µg mL-1 aumentou a viabilidade celular (82%, 83% e 55%), o mesmo ocorrendo para ZA e AC 10 µg mL-1 (69%, 70% e 64%). Após 48 h de tratamento com ZA, não houve apoptose celular ou ativação de caspases em fibroblastos, mas verificou-se a ativação de caspase 3/7 em osteoblastos. As concentrações de 5 e 10 µg mL-1 de AC não alteraram a viabilidade de células C4-2B, porém observou-se uma redução de mais de 40% em concentrações maiores que 10 µg mL-1. O crescimento de S. mutans foi aparentemente aumentado após o tratamento com ZA em concentrações maiores que 50 µM, sem que AC ocasionasse qualquer efeito. Finalmente, o material formador de parede (mistura de goma arábica com maltodextrina 1:1) empregado para microencapsular AC, foi incapaz de inibir a degradação das antocinidinas, cujas concentrações relativas foram reduzidas após 15 dias de incubação. Assim, baixas concentrações de AC (5 e 10 µg mL-1) demostraram promissora atividade citoprotetora contra os efeitos prejudiciais de ZA, em células epiteliais e osteoblastos, sem estimularem o crescimento das células cancerígenas (C4-2B) e de S. mutans. Outros materiais formadores de parede serão avaliados, buscando-se aumentar a estabilidade química de AC. Mais estudos são necessários para a comprovação dos efeitos benéficos de AC como um auxiliar no tratamento de OMIB / Abstract: The bisphosphonate related osteonecrosis of the jaw (BRONJ) is a condition associated to bisphosphonates, medicines used to treat bone disorders, as zoledronic acid. In vitro studies showed epithelial cells viability and growth can be altered by bisphosphonates, and may cause a deficient wound healing in BRONJ. Arrabidaea chica (H&B.) Verlot is a Bignoniaceae with wound healing properties, however, anthocyanidins, the main compounds of the plant extract, can be easily degraded under environmental conditions. This in vitro study aimed to evaluate the antimicrobial, citotoxic and citoprotective actions of A. chica hydroalcoholic extract (AC) in the presence of ZA therapy. Stability studies at 40 °C and 75% humidity conditions, from microencapsulated into arabic gum plus maltodextrin (1:1) and free crude extract samples were conducted. Keratinocytes (HaCaT), fibroblasts (PT64-04HF) and osteoblasts (MC3T3-E1) were submitted to 2 treatment protocols: zoledronic acid 10 µM (ZA) therapy during 24 h and then AC during 48 h and vice-versa; or co-treatment with both. Parameters as viability, apoptosis and caspase 3/7 activation were evaluated. Cancer cells (C4-2B) viability was determined after AC treatment. Streptococcus mutans were submitted to co-treatment with ZA and AC. Microcapsules containing AC were obtained after spray dryer processing, aliquoted and stored into climatic chamber for stability study according to ANVISA protocol (RE 01/2005). ANOVA and T Student test, ?a=0,05, were applied for statistical analysis. After 48 h, ZA treatment decreased viability of keratinocytes, fibroblasts and osteoblasts repectively by 34%, 47% and 51%. Co-treatments ZA and AC 5 µg mL-1 (82%, 83% and 55%), and ZA and AC 10 µg mL-1 (69%, 70% and 64%) increased cell viability. No apoptosis or caspase activation were detected on fibroblasts, however, caspase 3/7 was active on osteoblasts after ZA 48 h treatment. Concentrations higher than 10 µg mL-1 of AC were toxic to cancer cells and showed a decrease by 40% in cell viability, while no effect was seen with AC 5 or 10 µg mL-1. Higher ZA concentrations (50 µM) seemed to induce S. mutans growth, while AC showed no effect on bacteria. Finally, the studied core matherial (arabic gum plus matodextrin 1:1) was ineffective on protecting AC extract against degradation, since anthocyanidins concentration was reduced after 15 days incubation. Therefore, lower AC concentrations (5 and 10 µg mL-1) were promising on treating BRONJ wounds, as they were effective in protect epithelial cells against harmfull effects of ZA, without affecting cancer cells or S. mutans growth. Different types of core matherials must be evaluated for improving AC chemical stability. More studies are required to prove AC beneficial effects on treating BRONJ / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutora em Odontologia
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