A expressão de diversas proteínas do ciclo celular tem sido estudada em vários tipos de lesões malignas. Entre as principais está a p27, que é codificada pelo gene supressor de tumor de mesmo nome, e que já foi encontrada alterada em carcinomas, inclusive os intra-orais. Outra proteína que atua diretamente no controle do ciclo celular é a c-jun, que é codificada por um protooncogene, e através de outras vias de sinalização acaba agindo como um regulador positivo do ciclo. O presente estudo visou comparar as expressões imunoistoquímicas das proteínas p27 e c-jun, através do método da estreptavidina-biotina em 45 casos de displasia epitelial agrupados em diferentes graus (atipia discreta, moderada e intensa), e 20 casos de carcinoma epidermóide intra-oral, na tentativa de elucidar o papel e a relação existente entre estas proteínas. Foi observado uma diminuição dos níveis de p27 e um aumento significativo da c-jun nos casos com graus elevados de displasia epitelial e carcinoma epidermóide. A análise estatística indicou uma correlação inversa estatísticamente significativa entre as expressões de p27 e c-jun. Os resultados sugerem as alterações destas proteínas como um importante evento no processo de carcinogênese intra-oral. / The expression of many cell cycle proteins has been studied in a number of malignant lesions. Among the main ones is the p27, which is encoded by the same name tumor suppressor gene, and it is altered in carcinomas, including oral cancers. Another protein that plays a role in the cell cycle control is the c-jun, which is encoded by a proto-oncogene, and acts as a positive regulator of the cell cycle, through other signaling pathways. The present study aimed to compare the immunohistochemical expression of p27 and c-jun proteins, using the streptavidinbiotin method, in 45 cases of epithelial dysplasia, classified in different degrees (mild, moderate and intense), and 20 cases of oral squamous cells carcinoma, in an attempt to elucidate the role and the relationship between these proteins. It was observed a decrease of p27 levels and a substantial increase of c-jun in cases with the highest degrees of epithelial dysplasia. The statistical analysis showed a significant inverse correlation between p27 and c-jun expressions. These results suggest these proteins alterations as an important event in the carcinogenic process. p27, c-jun, Immunohistochemistry, Squamous cells carcinoma, Epithelial dysplasia

A expressão de diversas proteínas do ciclo celular tem sido estudada em vários tipos de lesões malignas. Entre as principais está a p27, que é codificada pelo gene supressor de tumor de mesmo nome, e que já foi encontrada alterada em carcinomas, inclusive os intra-orais. Outra proteína que atua diretamente no controle do ciclo celular é a c-jun, que é codificada por um protooncogene, e através de outras vias de sinalização acaba agindo como um regulador positivo do ciclo. O presente estudo visou comparar as expressões imunoistoquímicas das proteínas p27 e c-jun, através do método da estreptavidina-biotina em 45 casos de displasia epitelial agrupados em diferentes graus (atipia discreta, moderada e intensa), e 20 casos de carcinoma epidermóide intra-oral, na tentativa de elucidar o papel e a relação existente entre estas proteínas. Foi observado uma diminuição dos níveis de p27 e um aumento significativo da c-jun nos casos com graus elevados de displasia epitelial e carcinoma epidermóide. A análise estatística indicou uma correlação inversa estatísticamente significativa entre as expressões de p27 e c-jun. Os resultados sugerem as alterações destas proteínas como um importante evento no processo de carcinogênese intra-oral. / The expression of many cell cycle proteins has been studied in a number of malignant lesions. Among the main ones is the p27, which is encoded by the same name tumor suppressor gene, and it is altered in carcinomas, including oral cancers. Another protein that plays a role in the cell cycle control is the c-jun, which is encoded by a proto-oncogene, and acts as a positive regulator of the cell cycle, through other signaling pathways. The present study aimed to compare the immunohistochemical expression of p27 and c-jun proteins, using the streptavidinbiotin method, in 45 cases of epithelial dysplasia, classified in different degrees (mild, moderate and intense), and 20 cases of oral squamous cells carcinoma, in an attempt to elucidate the role and the relationship between these proteins. It was observed a decrease of p27 levels and a substantial increase of c-jun in cases with the highest degrees of epithelial dysplasia. The statistical analysis showed a significant inverse correlation between p27 and c-jun expressions. These results suggest these proteins alterations as an important event in the carcinogenic process. p27, c-jun, Immunohistochemistry, Squamous cells carcinoma, Epithelial dysplasia

La maladie de Charcot-Marie-Tooth (CMT) est une maladie neurologique héréditaire du système nerveux périphérique. A ce jour, près de 80 gènes sont décrits comme étant à l’origine d’une forme de CMT dont tous les modes de transmission sont connus. AR-CMT2A est due à une mutation faux-sens homozygote, c.892C>T, dans l’exon 5 du gène LMNA et conduit à la substitution d’une Arginine par une Cystéine (p.Arg298Cys) au sein d’un motif conservé du domaine central coil des Lamines de type A. L’étude présentée ici fait suite à un certain nombre d’observations ayant démontré la diminution de l’expression du gène dans les cellules de patients, et la perte d’interaction entre les Lamines A/C mutées et le facteur de transcription c-Jun. Or celui-ci participe au complexe régulateur AP-1 pour lequel le promoteur du gène LMNA possède deux éléments de fixation. L’ensemble du travail exposé dans ce manuscrit s’est donc basé sur l’hypothèse selon laquelle les Lamines de type A auraient la capacité de réguler leur propre expression et seraient capables, dans le nerf périphérique, d’établir des interactions avec des partenaires spécifiques du nerf périphérique. / Charcot-Marie-Tooth (CMT) disorders constitute a complex and heterogeneous group of hereditary motor and sensory neuropathies characterized by muscle weakness and wasting, foot and hand deformities and electrophysiological changes. Genetically, CMT is characterized by a great heterogeneity, with all modes of inheritance and more than 50 genes described to date. My PhD work focuses on AR-CMT2A, a rare autosomal recessive axonal form of CMT, due to a unique homozygous missense mutation c.892C>T in LMNA exon 5, which leads to the substitution of an arginine by a cysteine (p.Arg298Cys) within a conserved motif in the central rod domain of A-type Lamins. My work aimed at providing clues toward a better understanding of the physiopathological mechanisms underlying AR-CMT2A and is based on previous results for my research team, showing a decrease in the expression of LMNA in patients’ cells, and a loss of interaction between A-type Lamins and the transcription factor c-Jun in patients’ cells. c-Jun is a member of the AP-1 complex, a well-known dimeric transcription factor, and for which interestingly, the LMNA promoter has two binding sites. All the work outlined in this manuscript is based on the hypothesis that A-type Lamins, have the capacity to regulate their own expression and therefore, are also most probably involved in interactions with partners involved in gene regulation, in particular in the Peripheral Nerve System.

Em diversos casos, o câncer bucal é precedido por lesões pré-malignas, como por exemplo, a leucoplasia, sendo que o tabaco é um fator de risco. No entanto, apesar deste potencial negativo, há estudos limitados em fumantes e não fumantes sobre o desenvolvimento de displasia para carcinoma. Sabe-se que o principal componente do factor de transcrição AP-1, a proteína c-Jun e a sua forma fosforilada (p-c-Jun), participam do ciclo celular e que sua inibição compromete a proliferação celular. A proteína p27 tem sido demonstrada como inibidora de quinase, e sabe-se que tem sua expressão diminuída durante a carcinogênese. A expressão diminuída de p27 tem sido relacionada a um pior prognóstico em carcinoma epidermóide. O objetivo deste estudo foi verificar a expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27, em lesões potencialmente malignas diagnosticadas clinicamente como leucoplasia de pacientes fumantes e não fumantes. Foram selecionados 73 casos diagnosticados clinicamente como leucoplasias, os quais foram divididos nos seguintes grupos: leucoplasia com e sem displasia epitelial, e entre fumantes e não fumantes (perfazendo 4 grupos). Cortes histológicos das lesões foram classificados segundo o sistema de graduação binário, e subsequentemente submetidos à técnica imunohistoquímica da estreptoavidina-biotina. Avaliou-se também a associação da proliferação celular pela c-Jun, p-c-Jun e p27 com o tabagismo, presença e ausência de displasia, localização e gênero. O presente estudo verificou que ocorrência de displasia epitelial em baixo e alto risco não teve associação com o hábito de fumar do paciente (p= 0,5430). Avaliando apenas a imunorreatividade das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 individualmente observouse que a expressão destas não teve associação com a condição fumante do paciente (p> 0,05). Porém, ao compararmos a imunomarcação de c-Jun e p-c-Jun entre si, no total da amostra (p=0,0448) e somente para displasia em fumantes (p=0,0165), nota-se significativamente menor expressão de p-c-Jun. Comparando c-Jun e p27 nas displasias em não fumantes, houve significativamente maior expressão de c-Jun e menor expressão de p27 (p=0,0079). A análise do Teste binomial de duas proporções revelou que as regiões de língua e assoalho bucal estavam associadas à ocorrência de lesões displásicas quando comparadas a lesões não displásicas (p<0,0001). Concluiu-se que não houve correlação entre fumo e grau de displasia. A expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 foi independente da condição fumante do paciente. / In Several cases, the oral cancer is preceded by-malignant lesions potentially, such as leukoplakia, and that tobacco is a risk factor. However, despite this negative potential, there are limited studies in smokers and nonsmokers on the development of dysplasia to carcinoma. It is known that the main component of the transcription factor AP-1, c-Jun protein and its phosphorylated form (pc-Jun), participate in cell cycle inhibition and their committed cell proliferation. The p27 protein has been shown to inhibit kinase, and it is known that their expression is decreased during carcinogenesis. The decreased expression of p27 has been linked to poor prognosis in squamous cell carcinoma. The aim of this study was to evaluate the expression of proteins c-Jun, pc-Jun and p27 in potentially malignant lesions from smokers and non-smokers, diagnosed clinically as leukoplakiaa in smokers and nonsmokers. We selected 73 cases diagnosed clinically as leukoplakia, which were divided into the following groups: leukoplakia with and without dysplasia, and between smokers and nonsmokers (totaling 4 groups). Histological lesions were classified according to the binary grading system, and subsequently subjected to immunohistochemistry technique streptavidin-biotin. We also evaluated the association of cell proliferation of c-Jun, pc-Jun and p27 with smoking, presence and absence of dysplasia, location and gender. This study found that the occurrence of epithelial dysplasia in low-and high-risk had no association with the patient\'s smoking habit (p = 0,5430). When evaluating the immunoreactivity of the proteins c-Jun, p27 and pc-Jun alone it was observed that the expression of them was also independent of the condition of the patient smoking (p> 0,05). However, when comparing the immunostaining of c-Jun and pc-Jun together, for the total sample (p = 0,0448) and only for dysplasia in smokers (p = 0,0165), there was significantly lower expression of pc-Jun. Comparing p27 and c-Jun in dysplasias in nonsmokers, there was significantly higher expression of c-Jun and reduced expression of p27 (p = 0,0079). The analysis of two binomial proportions test revealed that the lesions in the tongue and floor of the mouth were more prone to be dysplastic (p <0.0001). It was concluded that there was no correlation between smoking and degree of dysplasia. The expression of c-Jun, p27 and pc-Jun proteins was independent of smoking habit of the patient. The anatomoclinical aspects combined with the expressions of c-Jun and p27 may assist the pathologist in directing the histopathological diagnosis.

Em diversos casos, o câncer bucal é precedido por lesões pré-malignas, como por exemplo, a leucoplasia, sendo que o tabaco é um fator de risco. No entanto, apesar deste potencial negativo, há estudos limitados em fumantes e não fumantes sobre o desenvolvimento de displasia para carcinoma. Sabe-se que o principal componente do factor de transcrição AP-1, a proteína c-Jun e a sua forma fosforilada (p-c-Jun), participam do ciclo celular e que sua inibição compromete a proliferação celular. A proteína p27 tem sido demonstrada como inibidora de quinase, e sabe-se que tem sua expressão diminuída durante a carcinogênese. A expressão diminuída de p27 tem sido relacionada a um pior prognóstico em carcinoma epidermóide. O objetivo deste estudo foi verificar a expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27, em lesões potencialmente malignas diagnosticadas clinicamente como leucoplasia de pacientes fumantes e não fumantes. Foram selecionados 73 casos diagnosticados clinicamente como leucoplasias, os quais foram divididos nos seguintes grupos: leucoplasia com e sem displasia epitelial, e entre fumantes e não fumantes (perfazendo 4 grupos). Cortes histológicos das lesões foram classificados segundo o sistema de graduação binário, e subsequentemente submetidos à técnica imunohistoquímica da estreptoavidina-biotina. Avaliou-se também a associação da proliferação celular pela c-Jun, p-c-Jun e p27 com o tabagismo, presença e ausência de displasia, localização e gênero. O presente estudo verificou que ocorrência de displasia epitelial em baixo e alto risco não teve associação com o hábito de fumar do paciente (p= 0,5430). Avaliando apenas a imunorreatividade das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 individualmente observouse que a expressão destas não teve associação com a condição fumante do paciente (p> 0,05). Porém, ao compararmos a imunomarcação de c-Jun e p-c-Jun entre si, no total da amostra (p=0,0448) e somente para displasia em fumantes (p=0,0165), nota-se significativamente menor expressão de p-c-Jun. Comparando c-Jun e p27 nas displasias em não fumantes, houve significativamente maior expressão de c-Jun e menor expressão de p27 (p=0,0079). A análise do Teste binomial de duas proporções revelou que as regiões de língua e assoalho bucal estavam associadas à ocorrência de lesões displásicas quando comparadas a lesões não displásicas (p<0,0001). Concluiu-se que não houve correlação entre fumo e grau de displasia. A expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 foi independente da condição fumante do paciente. / In Several cases, the oral cancer is preceded by-malignant lesions potentially, such as leukoplakia, and that tobacco is a risk factor. However, despite this negative potential, there are limited studies in smokers and nonsmokers on the development of dysplasia to carcinoma. It is known that the main component of the transcription factor AP-1, c-Jun protein and its phosphorylated form (pc-Jun), participate in cell cycle inhibition and their committed cell proliferation. The p27 protein has been shown to inhibit kinase, and it is known that their expression is decreased during carcinogenesis. The decreased expression of p27 has been linked to poor prognosis in squamous cell carcinoma. The aim of this study was to evaluate the expression of proteins c-Jun, pc-Jun and p27 in potentially malignant lesions from smokers and non-smokers, diagnosed clinically as leukoplakiaa in smokers and nonsmokers. We selected 73 cases diagnosed clinically as leukoplakia, which were divided into the following groups: leukoplakia with and without dysplasia, and between smokers and nonsmokers (totaling 4 groups). Histological lesions were classified according to the binary grading system, and subsequently subjected to immunohistochemistry technique streptavidin-biotin. We also evaluated the association of cell proliferation of c-Jun, pc-Jun and p27 with smoking, presence and absence of dysplasia, location and gender. This study found that the occurrence of epithelial dysplasia in low-and high-risk had no association with the patient\'s smoking habit (p = 0,5430). When evaluating the immunoreactivity of the proteins c-Jun, p27 and pc-Jun alone it was observed that the expression of them was also independent of the condition of the patient smoking (p> 0,05). However, when comparing the immunostaining of c-Jun and pc-Jun together, for the total sample (p = 0,0448) and only for dysplasia in smokers (p = 0,0165), there was significantly lower expression of pc-Jun. Comparing p27 and c-Jun in dysplasias in nonsmokers, there was significantly higher expression of c-Jun and reduced expression of p27 (p = 0,0079). The analysis of two binomial proportions test revealed that the lesions in the tongue and floor of the mouth were more prone to be dysplastic (p <0.0001). It was concluded that there was no correlation between smoking and degree of dysplasia. The expression of c-Jun, p27 and pc-Jun proteins was independent of smoking habit of the patient. The anatomoclinical aspects combined with the expressions of c-Jun and p27 may assist the pathologist in directing the histopathological diagnosis.

名古屋大学博士学位論文 学位の種類 : 医学博士(論文) 学位授与年月日:平成4年9月22日 大野元嗣氏の博士論文として提出された

Thesis (Ph. D.)--University of Alabama at Birmingham, 2007. / Title from first page of PDF file (viewed Feb. 7, 2008). Includes bibliographical references (p. 50-57).

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 diogo_garcia_ioc_dout_2013.pdf: 2400404 bytes, checksum: 3c6058d8febab6bfb34c0c271a72a2b0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Na+, K+ ATPase (NKA) atua na manutenção do potencial de membrana das células e em mecanismos de transdução de sinal. Alterações na atividade da NKA são importantes em muitos processos biológicos e patológicos. A NKA pode ser inibida pelo álcool perílico (POH), um monoterpeno utilizado no tratamento de tumores, incluindo cerebrais. Neste trabalho, determinamos que o POH também atua sobre cascatas de sinalização, moduladas via NKA, que controlam a proliferação e/ou morte celular. Foi avaliado o efeito do POH e do PA seu principal metabólito, sobre a atividade da NKA em duas linhagens de células de glioblastoma (GBM) humano (U87 e U251), células não tumorais de astrócitos de camundongo e da linhagem (VERO). Nossos resultados, baseados na avaliação da atividade da NKA por incorporação do Rb+, o qual mimetiza o K+, mostraram uma sensibilidade à inibição pelo POH semelhante entre os quatro tipos de células (IC50 U87 2 mM; U251 1,8 mM; VERO 2,4 mM e astrócitos de camundongo 1,4 mM), enquanto o PA não apresentou efeito. Sabe-se que nos GBMs existe uma superexpressão da subunidade \03B11 da NKA, situada na estrutura das cavéolas que é provavelmente responsável pelo papel sinalizador atribuído a essa enzima, especialmente em relação aos mecanismos apoptóticos. Comparamos a viabilidade celular, determinando a atividade da enzima lactato desidrogenase presente no sobrenadante das células tratadas por 24 h com POH e PA O PA não alcançou efeito citotóxico igual ou superior a 30% nas células mesmo na concentração elevada de 4 mM. Já o POH reduziu, de maneira dependente da concentração, a viabilidade das células (IC50 U87 1,1 mM; U251 1,4 mM; VERO 0,9 mM e astrócitos de camundongo 1,4 mM). Na análise por western blot, 1,5 mM de POH ativou a proteína c-Jun N-terminal quinase (JNK), nas células U87, U251 e nos astrócitos de camundongo (incubação de 30 min). O uso do inibidor Src quinase (dasatinibe) e a depleção colesterol da membrana celular com metil \03B2-ciclodextrina reduziram a ativação da JNK1/2 induzida pelo POH nas células U87, indicando a possível participação do complexo NKA-Src (presente nas cavéolas), nesta via de sinalização. POH (1,5 mM) aumentou a liberação da interleucina IL-8, detectada por ELISA, no sobrenadante das células U251 (24 h incubação), indicando possível estratégia destas células para evitar o efeito citotóxico do POH. Resultados obtidos com citometria de fluxo mostram que a inibição da JNK1/2 (pelo inibidor JNK V) reduz a apoptose ocasionada pelo POH nas células de GBM, indicando o envolvimento desta proteína na morte celular programada. Os resultados obtidos mostram que o mecanismo de sinalização celular mediado pela NKA pode ter um importante papel no mecanismo de ação antitumoral do POH em células de GBM / The Na + , K + ATPase (NKA) acts in keeping the cell membrane potential and in signal transduction mechanisms . Modifications in the activity of this enzyme are important in physiological and patholog ical processes. The NKA is inhibited by perillyl a lco h ol (POH), a monotherpene used in the treatment of tumors, including brain tumors. In this work , we also show that POH act s in signal ing cascades associated to NKA, controlling cell proliferation and/or cellular death. We evaluated the effect of POH and o f its main metabolite (peri l lic acid - PA) on the NKA a ctivity in cultured glioblastoma cells ( GBM) U87 and U251 and on non - tumor cells (mouse astrocytes and VERO cells) . N AK activity was measured by non - radioactive Rb + incorporation by cells (Rb + is a K + substitute). Our results showed a similar sensitivity for the four cells types tested (IC 50 U87 – 2 mM; U251 - 1,8 mM; VERO - 2,4 mM and mouse astrocy tes - 1,4 mM). Peri l lic acid did no t show any effect i n any cell type. In GBMs , it is known that NKA α 1 subunit is super expressed. Thi s isoform is embedded in caveolar structures and is probably responsible by the signaling properties of this enzyme in apoptosis mechanisms. Cell viability was measured by lactate dehydr o genase in cell supernatants of POH treated cells. The maximum PA cy totoxic effect obtained was 30% even at 4 mm. However, POH reduced dose dependently cell viability , (IC 50 U87 - 1,1 mM; U251 - 1,4 mM ; VERO - 0,9 mM and mouse astrocyte - 1,4 mM). Considering the western blot analysis, 1,5 m M POH activated the c - Jun N - terminal K inase (JNK), on U87, U251 and in mouse astrocy tes after 30min incubation . D a satinib (an inhibitor of Src K inase) and methyl β - ci clodextrin (which promotes cholesterol depletion in cell membrane s ) reduced JNK 1/2 activation induced by POH in U87 cells, indicating the participation of NKA - Src comp lex seen in caveolar structure in this mechan ism. 1,5mM POH a fter 24h incubation incr ease interleuk in IL - 8 in U251 cell supernatant, and this may indicate a possible strategy to avoid the cy totoxic effect of POH. Results obtained by flux cy tometry showed that the inhibition of JNK1/2 (by the inhibitor JNK V) reduced apoptosis consequent to POH administration in GBM cells, indicating the involv e ment of this protein in programmed cellular death. Our results seem to indicate that a signaling mechanism mediate d by NKA may have an important role in ant i - tumor al action of POH in GBM cells. / GARCIA, D. G. Sinalização de morte celular via NA+, K+-ATPase como alvo de drogas anticâncer: estudos com o álcool perílico. 2013. 86f. Tese (Doutorado em Biologia Celular e Molecular) - Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de janeiro, RJ, 2013

Pour étudier le rôle de c-Jun dans les macrophages, nous avons développé deux modèles murins présentant une délétion spécifique de Jun dans la lignée de cellules myéloïdes. Le 1er modèle (JunΔCsf1r) a une délétion de c-Jun dans les cellules myéloïdes et leurs progéniteurs. Le 2nd modèle (JunΔLyz2) a une perte de c-Jun dans les cellules myéloïdes matures. L'analyse de ces modèles a montré que l'expression de c-Jun n'est pas nécessaire à l'homéostasie des macrophages tissulaires, mais est essentiel à l'expansion des macrophages de la MO et des progéniteurs de la rate. De plus, l'absence d'expression de c-Jun dans les macrophages inhibe leur prolifération induite par le facteur de croissance Csf1 in vitro. Et nous avons montré que ce défaut de prolifération était indépendant de JNK. Par ailleurs, mes travaux ont révélé que c-Jun est nécessaire pour inhiber l'expression basale des inhibiteurs du cycle cellulaire dans les macrophages, en particulier p16 qui joue un rôle important dans la sénescence cellulaire et dans la perte de la capacité de prolifération.Enfin, l'absence de c-Jun induit l'accumulation de cellules souches hématopoïétiques (HSC) dans la MO des souris JunΔCsf1r, mais aussi une diminution des progéniteurs myéloïdes (GMP/CMP). Des expériences effectuées sur des souris chimériques reconstituées avec un mélange de cellules précurseurs de MO de souris JunΔCsf1r et de souris contrôles en proportions égales ont montré que les HSCs n'exprimant pas c-Jun présentent un défaut de reconstitution de toutes les lignées hématopoïétiques, suggérant ainsi un rôle important de c-Jun dans l'homéostasie et dans la fonction des cellules souches hématopoïétiques. / To study the role of c-Jun in macrophages we have generated mice with a targeted deletion of Jun in the myeloid lineage. We used two transgenic mice: (JunΔCsf1r) where c-Jun is deleted in all myeloid cells and their progenitors, or the (JunΔLyz2) mice where c-Jun is deleted in mature myeloid cells. My analysis showed that c-Jun expression is not required for the maintenance of tissue macrophages, however it is critical for macrophage expansion from BM and splenic progenitors. There was a strong reduction in accumulation of monocyte-derived macrophages in mice where c-Jun expression was deleted in myeloid progenitors (JunΔCsf1r), compared to littermate control mice or the deletion of c-Jun in mature myeloid cells (JunΔLyz2). My further experiments showed that the deletion of c-Jun in macrophages inhibited Csf1-mediated proliferation in vitro. Activation of c-Jun is regulated by Jun N-terminal kinase (JNK), I showed in my experiments that the role of c-Jun in macrophage proliferation was JNK-independent. I show that c-Jun in macrophages is required to repress basal expression of cell cycle inhibitors, as p16, which is linked to cell senescence and loss of proliferative capacity.Finally, we observed that loss of c-Jun results in accumulation of hematopoietic stem cells (HSC) in the BM of JunΔCsf1r mice, but associated with a decrease in myeloid progenitors (GMP and CMP). Furthermore, competitive radiation-chimera experiments showed c-Jun deficient HSC are defective in their ability to repopulate all haematopoietic lineages, suggesting c-Jun has an important role in HSC homeostasis and function.

O carcinoma adenóide cístico e o adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade são neoplasmas de glândulas salivares. O carcinoma adenóide cístico pode apresentar-se em glândulas salivares maiores e menores, porém o adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade acomete principalmente as glândulas salivares menores distribuidas na cavidade oral. Ambos os tumores compartilham muitas características comuns, como a alta propensão de invasão perineural e o padrão de infiltracão: sólido, tubular e cribriforme. Mas o carcinoma adenoide cístico e o adenocarcinoma polimorfo de baixo grau são tipos distintos de adenocarcinomas com prognóstico diferente, que ocasionalmente podem resultar em um diágnóstico errado. As proteínas c-jun e junB são membros da familia JUN, capazes de homodimerizar ou heterodimerizar com c-fos ou com outras proteinas bzip. Evidências das funcões específicas das subunidades do AP-1 foram mostradas por cjun e junB, que atúam antagónicamente no controle da transformação celular, diferenciação e expressão do AP-1 dependente do gene alvo. Mas a função de ambos é complexa e pode depender do tipo celular. O objetivo deste estudo foi determinar a expressão imunoistoquímica das proteínas c-jun e junB em 13 casos de carcinoma adenoide cístico e 12 de adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade de glándulas salivares. Espécimes de mucosa normal foram incluídos e evidenciaram forte marcação nuclear e citoplasmática para junB e c-jun respectivamente. No presente estudo, independente da arquitetura histológica, ambos tumores mostraram muitas células tumorais com marcação nuclear e citoplasmática para a proteína c-jun e ausente para a proteína junB. As lesões do adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade expressaram um maior número de células com marcação nuclear quando comparados ao do carcinoma adenoide císticode de mais baixo grau. De acordo com este estudo e com alguns estudos publicados na literatura, a c-jun é expressa em tumores de baixo grau e parece estar mais relacionada à diferenciação celular do que à proliferação celular. / Adenoid cystic carcinoma and polymorphous low grade are salivary gland neoplasms. ACC can arise in both, major or minor salivary glands. However, Polymorphous lowgrade adenocarcinoma, occurs specifically in minor salivary glands dispersed in the oral cavity. They share many common histologic features, as infiltrating solid, tubular and cribiform patterns and also high propensity for perineural invasion. Nevertheless, adenoid cystic carcinoma and polymorphous low grade are distinct types of adenocarcinomas with different prognosis, which occasionally may result in a diagnostic pitfall. C-jun and junB are family JUN members that may form homodimerizes or heterodimerizes with c-fos or other bzip proteins. Evidence for specific functions of AP-1 subunits was shown for c-jun and junB, which act antagonistically to control cell transformation, differentiation and expression of AP-1 depending on the target genes. However, the role of both of them is complex and it depends on cell type. The aim of this study was to determine immunohistochemistry of c -jun and junB expression in 13 cases of adenoid cystic carcinoma and 12 cases of polymorphous carcinoma low-grade adenocarcinoma of salivary glands. Moreover slides of normal mucosa were included and there were strong nuclei and cytoplasmic for junB and c-jun respectly. In the present study, independent of the histologic architecture, in both tumors shown many tumoral cells presented nuclear and cytoplasmic staining of c-jun and were absent to the protein junB. In polymorphous low-grade adenocarcinoma lesions expressed in a greater number cells staining than in the adenoid cystic carcinoma of the most lowgrade. According with this study and with some studies of the literature, the c-jun is expressed in low-grade tumors and seems to be related to cell differentiation more than with cell proliferation.