Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronegócios, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-08-24T14:04:12Z No. of bitstreams: 1 2016_MárciaAparecidadeSouza.pdf: 1865097 bytes, checksum: a87dea5cceb6d2ce07441c5a8d88e17a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-10-10T19:09:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_MárciaAparecidadeSouza.pdf: 1865097 bytes, checksum: a87dea5cceb6d2ce07441c5a8d88e17a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T19:09:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_MárciaAparecidadeSouza.pdf: 1865097 bytes, checksum: a87dea5cceb6d2ce07441c5a8d88e17a (MD5) / O cultivo do tomateiro no DF requer tratos culturais intensos, os custos de produção são altos e é uma hortaliça muito susceptível ao ataque de pragas e doenças. Grande parte da produção é comercializada na Ceasa-DF, e o produtor geralmente enfrenta preços instáveis o que afeta o rendimento financeiro da produção. O tomate é uma das hortaliças que tem apresentado maior sazonalidade de preços. O presente trabalho teve por objetivo analisar os sistemas produtivos agrícolas e propor estratégias capazes de promover melhorias de desempenho da produção de tomate de mesa no Distrito Federal. Adicionalmente foram analisados aspectos relacionados à comercialização deste produto. A metodologia utilizada foi a de análise de cadeias e sistemas produtivos, na qual a definição dos fatores críticos foi feita utilizando-se o método de escores e painel de juízes. O estudo se limitou ao Distrito Federal e considerou as três regiões com maior produção, Paranoá, Planaltina e Brazlândia, que juntas são responsáveis por 97,34% de toda a produção do DF. Os resultados indicaram fatores que afetam negativamente a eficiência do sistema produtivo que foram: a) o custo dos insumos em algumas operações durante o ciclo produtivo; b) a incidência de pragas e doenças; c) a disponibilidade de materiais genéticos com maior resistência; d) a disponibilidade de água para irrigação; e) a elevada variação de preços na comercialização do produto; f) as variações nos preços devido à oferta; g) a concorrência com a produção oriunda de outros estados e; h) custos de nutrição dos plantios. O estudo aponta estratégias para os produtores, assistência técnica e pesquisa trabalharem na melhoria da eficiência produtiva e sugere pesquisas mais aprofundadas para maior conhecimento sobre este tema. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato crop in DF (Distrito Federal, Brasília) requires intensive agricultural practices, the production costs are high and it is very susceptible to insects attack and plant diseases. Much of the local production is sold in Ceasa-DF (local agricultural market), which impose limitations to the producers, because the nature of seasonal offer and fluctuating prices. This study was carried out to analyze the tomato productive system performance and propose strategies in order to attain performance improvements on tomato production in the Federal District. Additionally, it was also analyzed some aspects of commercialization of this product. It was applied the methodology for analysis of productive chains and agricultural systems, and based on that, definition of performance critical factors was obtained, using the method of scores and judges panel. The study was limited to the three main productive regions, Paranoá, Planaltina and Brazlândia, which together account for 97.34% of the total DF production Critical factors found with higher impact on the productive efficiency was: a) input costs of some operations during the production cycle; b) increase in pests and diseases incidence; c) lack of genetic materials with greater resistance; d) availability of water resources; e) high price variation in the marketing of the product; f) insecurity in prices due to supply; g) competition with the production coming from other production places and h) the crop nutrition costs. The study proposes strategies for producers, technical assistance and research work on improving production efficiency and suggests further research for more knowledge on this topic.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-04-08T17:22:43Z No. of bitstreams: 1 2016_MarcelaLoboTokatjian.pdf: 881798 bytes, checksum: 5e3b111f231a5c90615b8c7ea9fbaa69 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-12T21:43:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_MarcelaLoboTokatjian.pdf: 881798 bytes, checksum: 5e3b111f231a5c90615b8c7ea9fbaa69 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-12T21:43:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_MarcelaLoboTokatjian.pdf: 881798 bytes, checksum: 5e3b111f231a5c90615b8c7ea9fbaa69 (MD5) / O presente trabalho teve como objetivo detectar através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a presença do fragmento do gene lipL32 em fragmentos coletados de rins de suínos abatidos em frigoríficos localizados no Distrito Federal com o intuito de estudar a ocorrência da Leptospira spp., assim como identificar suínos portadores renais do agente. Foram coletadas amostras renais de 50 carcaças provenientes de animais oriundos de três propriedades diferentes. A PCR foi baseada na detecção do fragmento do gene lipL32, o qual é extremamente conservado em todas as cepas patogênicas da Leptospira spp. O resultado encontrado em todas as amostras do estudo foi negativo para a bactéria Leptospira spp. Em granjas com boas condições sanitárias, apesar de o risco de transmissão ser baixo, a leptospirose suína permanece como um assunto preocupante tanto para a Saúde Animal quanto para a Saúde Pública. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study aimed to detect through the Polymerase Chain Reaction (PCR) the presence of lipL32 gene in fragments collected from pig kidneys in slaughterhouses located in Distrito Federal in order to study the occurrence of the Leptospira spp. as well as identify renal carriers of the agent. Kidney samples from 50 animals from three different properties were collected. The PCR method was based on the detection of lipL32 gene which is highly conserved in all strains of pathogenic Leptospira spp. The PCR was negative in all the surveyed kidney samples. In farms with good sanitary conditions, despite the low risk of transmission, swine leptospirosis remains a matter of concern both for Animal Health and for Public Health.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronegócios, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-13T18:21:23Z No. of bitstreams: 1 2018_JoãoBoscoPereira.pdf: 1470410 bytes, checksum: 807ae99d38d80508623962925f2aa704 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-14T19:46:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_JoãoBoscoPereira.pdf: 1470410 bytes, checksum: 807ae99d38d80508623962925f2aa704 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-14T19:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_JoãoBoscoPereira.pdf: 1470410 bytes, checksum: 807ae99d38d80508623962925f2aa704 (MD5) Previous issue date: 2018-07-13 / A produção de carne de frango no Brasil tem crescido de forma significativa nos últimos anos, influenciada pelas exportações e pelo consumo interno. A produção brasileira está concentrada nas Regiões Sul, Sudeste e Centro-Oeste. Apesar deste forte crescimento nacional, alguns Estados têm apresentado comportamentos distintos ao longo dos últimos anos. O Estado de Goiás apresentou uma taxa de crescimento positiva entre o ano 2006 e 2013, com posterior estabilização. O Estado de São Paulo, por outro lado, mostrou evolução entre os anos 2006 e 2011, porém registrou quedas sucessivas após este período. Este trabalho realiza uma análise comparada de desempenho da cadeia produtiva da carne de frango nos Estados de São Paulo e Goiás. Para execução da pesquisa foi realizado levantamento de dados secundários em diversas fontes e levantamento de dados primários, aplicando a técnica com Diagnóstico Rural Rápido (DRR) por meio de entrevistas com especialistas no tema. Na pesquisa foi identificado que o crescimento da produção no Estado de Goiás foi influenciado pelos incentivos governamentais na implantação de novas agroindústrias, além do fator custo dos principais insumos como milho e soja. Também apresentou forte influência no Estado de Goiás a disponibilidade de crédito para os avicultores, com recursos oriundos do FCO. No Estado de São Paulo, por sua vez, a pesquisa detectou que a queda na produção está associada a problemas de gestão nas empresas, baixa disponibilidade de recursos para financiar a modernização dos aviários e para expansão das agroindústrias, baixo nível tecnológico dos aviários, redução da presença das agroindústrias e custo mais elevado de milho e soja frente a Goiás e Paraná. Como oportunidades, foram mapeados principalmente o grande mercado consumidor e a estrutura logística do Estado de São Paulo. O trabalho propõe intervenções estratégicas que podem contribuir para a melhoria do desempenho da cadeia produtiva no Estado de São Paulo. / Chicken meat production in Brazil has grown significantly in recent years, influenced by exports and domestic consumption. Brazilian production is concentrated in the South, Southeast and Midwest Regions. Despite this strong national growth, some states have exhibited distinct behavior over the last few years. The State of Goiás presented a positive growth rate between 2006 and 2013, with subsequent stabilization. The State of São Paulo, on the other hand, showed evolution between the years 2006 and 2011, but registered successive falls after this period. This work performs a comparative analysis of the performance of the chicken meat production chain in the States of São Paulo and Goiás. To carry out the research, it was carried out a survey of secondary data in several sources and primary data collection, applying the technique with Rapid Rural Diagnosis (DRR) through interviews with experts on the subject. In the research it was identified that the production growth in the State of Goiás was influenced by the governmental incentives in the implantation of new agroindustries, besides the cost factor of the main inputs like corn and soybean. The availability of credit to poultry farmers with funds from the FCO also had a strong influence in the State of Goiás. In the State of São Paulo, in turn, the research detected that the fall in production is associated with management problems in companies, low availability of resources to finance the modernization of aviaries and expansion of agroindustries, low technological level of aviaries, reduction the presence of agroindustries and the higher cost of corn and soybeans compared to Goiás and Paraná. As opportunities, the major consumer market and logistic structure of the State of São Paulo were mapped. The work proposes strategic interventions that can contribute to the improvement of the performance of the productive chain in the State of São Paulo.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / Estudos sugerem que o transtorno bipolar (TB) está associado à disfunção mitocondrial e aumento do estresse oxidativo. O presente estudo tem como objetivo investigar os parâmetros de estresse oxidativo em mitocôndrias isoladas e atividade dos complexos mitocondriais em linfócitos de pacientes com TB durante episódios depressivos ou eutímicos. Este estudo avaliou os níveis de atividades dos complexos mitocondriais (I, II, II-III e IV) em linfócitos de pacientes com TB. Além disso, o presente estudo avaliou os seguintes parâmetros de estresse oxidativo: ânion radical superóxido, superóxido dismutase, espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e níveis de carbonila em partículas submitocondriais de linfócitos de pacientes bipolares. Nesse estudo foram incluídos 51 pacientes bipolares: 34 na fase eutímica e 17 na fase depressiva. As fases do transtorno bipolar foram definidas com base na Escala Young para Mania (YMRS) e Escala de Hamilton para Depressão (HDRS). Os resultados indicaram que os pacientes durante a fase depressiva apresentaram um aumento nos níveis submitocondriais de radical superóxido, de superóxido dismutase, de carbonila e de TBARS. Essas alterações nos parâmetros de estresse oxidativo foram companhados pela diminuição da atividade do complexo II. Além disso, observou-se uma correlação negativa entre HDRS e complexo II nos linfócitos de pacientes depressivos bipolares. Houve uma correlação negativa entre a atividade do complexo II e parâmetros de estresse oxidativo. Ainda, foi observado uma correlação positiva entre HDRS e níveis de radical superóxido, superóxido dismutase, TBARS e carbonila. Os resultados do presente estudo sugerem que o estresse oxidativo mitocondrial e a disfunção do complexo mitocondrial II podem desempenhar papéis importantes na fase depressiva do TB.

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Maria Inês Tiraboshi Ferro / Banca: Maria José Tavares Ranzani de Paiva / Resumo: Dentre as enfermidades de importância na piscicultura, destaca-se a columnariose, cujo agente etiológico é a Flavobacterium columnare, bactéria de ampla distribuição geográfica, responsável por um elevado número de mortalidade em peixes de várias espécies, principalmente em condições intensivas de criação. Visando o melhor conhecimento desta bactéria para desenvolvimento de métodos de diagnóstico e controle da doença, os objetivos deste estudo foram isolar, caracterizar bioquímica e molecularmente por PCR-RFLP do gene 16S rDNA de F. columnare, detectar fenotipicamente a formação de cápsulas destes isolados pelo teste Agar vermelho congo, e avaliar a composição do EPS quando produzidos por meio de cromatografia líquida de alta eficiência. Ao todo foram obtidos 37 isolados e a caracterização bioquímica indica que os isolamentos são classificados como F. columnare. O filograma gerado pela técnica de PCR-RFLP mostrou três principais ramificações entre os isolados de F. columnare. Os testes comprovaram que a presença de cápsula na célula bacteriana não está diretamente relacionada à formação de biofilme, e o monossacarídeo preponderante em F. columnare é a glicose.Portanto, a utilização da PCR-RFLP para a identificação da bactéria apresentou-se como ferramenta mais rápida que as técnicas bioquímicas atuais e os dados referentes a produção de biofilme são relevantes para futuros estudos que busquem métodos enzimáticos para impedimento da aderência e formação de biofilmes destes patógenos aquáticos em sistemas de aqüicultura e consequentemente a prevenção da columnariose / Abstract: Columnaris disease stands out among the illnesses of importance in fish breeding, its etiological agent is Flavobacterium columnare, which has been recognized as a worldwide pathogen, responsible for high degree of mortality in many fish species, especially in conditions of intensive breed. Looking for a better knowledge of this bacteria and aiming to develop diagnosis methods and disease control, the objectives of this study were to isolate, to biochemistry and molecularly characterize by 16S rDNA gene PCR-RFLP of F. columnare, to detect phenotipically the formation of capsules by the agar Congo red method, and to evaluate the EPS composition by high-performance liquid chromatography. There were obtained 37 isolates and the biochemistry characterization indicated that the isolates were classified as F. columnare. The phylogenetic tree generated by PCR-RFLP technique showed three main branches among the F. columnare isolates. The presence of capsule on the bacterial cells has not a direct relationship to biofilm formation, and considering its composition it was observed that the preponderant monosaccharide is glucose. Therefore, the PCR-RFLP alternative to identify this bacteria presented itself as a faster tool than actual biochemical techniques and the results regarding to biofilm production are relevant to future studies that search for enzymatic methods to abolish the adherence and biofilm formation by this aquatic pathogen in aquaculture systems, and, consequently, columnaris disease prevention / Mestre

Resumo: tentativa de compreender a resposta imune de gatos com leishmaniose visceral, o presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica das interleucinas IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ por reação em cadeia da polimerase em tempo real em amostras de baço de felinos naturalmente acometidos pela doença. Para tanto foram avaliados três grupos de animais; o primeiro e o segundo grupos compostos por seis gatos infectados por Leishmania cada, sintomáticos e assintomáticos, respectivamente; e o terceiro por seis gatos clinicamente hígidos e não infectados. Nos gatos sintomáticos, as expressões de mRNA das citocinas IL-4, IL-10, IL-12 e IFN-γ estavam reduzidas em 2,52; 2,4; 2,3 e 0,57 vezes em relação ao grupo controle, respectivamente. Nos animais assintomáticos, as expressões de IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ foram, respectivamente, de 2,22; 2,15; 2,52 e 1,15 vezes menores quando comparadas ao grupo controle. Ainda, uma forte correlação foi observada entre as expressões de IL-4 e de IL-10 nos gatos sintomáticos, e entre IFN-γ e IL-10, IL-12 e IL-4 e entre IL-12 e IL-10 nos gatos assintomáticos. A redução na expressão das quatro citocinas analisadas evidencia pequena participação dos linfócitos Th1 e Th2 na resposta frente à infecção por Leishmania spp. em gatos, independente do estado clínico dos animais / Abstract: TIn an attempt to understand the immune response of cats with visceral leishmaniasis, the present study aimed to evaluate the gene expression of interleukins IL- 4, IL-10, IL-12 and IFN-γ by real-time polymerase chain reaction in samples of spleen from cats naturally affected by the disease. For this, three groups of cats were evaluated; the first and second groups composed of six Leishmania-infected cats each, symptomatic and asymptomatic, respectively; and the third composed of six clinically healthy and uninfected cats. In symptomatic cats the mRNA expressions of IL- 4, IL -10, IL - 12 and IFN- γ were respectively supressed 2.52, 2.4, 2.3 and 0.57 times compared to the control group. In asymptomatic animals the expression of IL- 4, IL -10, IL -12 and IFN- γ were, respectively, 2.22, 2.15, 2.52 and 1.15 times lower when compared to the control group. Also, a strong correlation was observed between the expressions of IL4 and IL-10 in symptomatic cats; between IFN-γ and IL-10, IL-12 and IL-4 and between IL-12 and IL-10 in asymptomatic cats. The reducion of expression the four cytokines analyzed evidences a small involvement of Th1 and Th2 lymphocytes in the response to infection by Leishmania spp. in cats, regardless of the clinical status of animals / Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Maria cecília Rui Luvizotto / Banca: Márcia Dalastra Laurenti / Banca: Raimundo Souza Lopes / Doutor

Orientador: Ciniro Costa / Resumo: A cadeia produtiva da ovinocultura de corte requer estruturação para atender as demandas dos mercados internos e externos. A segurança alimentar é uma necessidade prioritária de produtores primários, processadores e distribuidores de alimentos, além dos próprios consumidores e organismos governamentais. Estas questões se tornam ainda mais importantes considerando que o segmento é composto de pequenos e médios produtores rurais e pequenas empresas que necessitam eliminar os fatores de insegurança jurídica no campo, melhorar a infraestrutura logística e reduzir custos, dentre outros fatores. Este trabalho teve por objetivo geral estudar a relação entre os agentes da cadeia da ovinocultura de corte. Para tanto, primeiramente foi realizada uma pesquisa bibliográfica baseada na teoria da segurança alimentar, produção de ovinos de corte, cooperativismo, gestão da qualidade, custos de transação, de gestão da cadeia de suprimentos, com o propósito de reunir elementos para guiar o estudo de caso único. A pesquisa de campo teve como objeto de estudo uma cooperativa na cidade de Guarapuava, Paraná, e reuniu ao todo unidades de análises compostas por: produtores rurais, gestores da cooperativa, processador e distribuidores (mercados varejista e institucional). Foram realizadas entrevistas com os agentes para identificação da gestão pelos atributos da qualidade exigidos pelos clientes em diferentes formatos: por meio dos seus desdobramentos ao longo da cadeia; das estruturas de governança... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Sílvia Maria Rodrigues Querido / Resumo: Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR multiplex é um método preciso, fácil, econômico e rápido... / Abstract: Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR methods is an accurate, easy, economical and quick to.... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-08Bitstream added on 2014-06-13T20:55:59Z : No. of bitstreams: 1 homem_cg_me_araca.pdf: 468363 bytes, checksum: b293bfbeab84c1a641ead5f90bd65ab2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A infecção por Cryptosporidium parvum em bovinos se manifesta como enfermidade subclínica ou com presença de morbidade e mortalidade, particularmente quando há associação com outros agentes infecciosos. Cryptosporidium parvum apresenta ainda grande importância em saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros e sua comparação com a reação em cadeia da polimerase (nested PCR), rotineiramente utilizada para diagnóstico de Cryptosporidium spp.. Duzentas e nove amostras fecais de bezerros entre um dia e seis meses de idade foram examinadas pela qPCR para amplificação de fragmentos do gene da actina e pela nested PCR para o gene da subunidade 18S do rRNA. A qPCR apresentou positividade para C. parvum em 73,21% (153/209) das amostras, enquanto a nested PCR apresentou amplificação positiva para Cryptosporidium spp. em 56,5% (118/209) das amostras. A sensibilidade analítica da qPCR foi de aproximadamente um oocisto de C. parvum. Não se observou amplificação inespecífica de DNA Cryptosporidium bovis, Cryptosporidium andersoni, Cryptosporidium ryanae, Cryptosporidium canis, Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium galli, Cryptosporidium baileyi e Cryptosporidium genótipo II de aves. Desta forma, conclui-se que a qPCR para o gene da actina é uma técnica sensível e específica para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros / The infection with Cryptosporidium parvum in cattle results in subclinical disease or in the presence of morbidity and mortality, particularly when associated with other infectious agents. This species is also an important public health problem. The aim of this research was to develop a real time polymerase chain reaction (qPCR) for detection of C. parvum DNA in fecal samples of calves, in comparison to a nested PCR routinely used for Cryptosporidium spp. diagnosis. Two hundred and nine fecal samples from calves aged between one day and six weeks were screened by qPCR specific for the actin gene of C. parvum and using nested PCR targeting the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp.. The qPCR showed positivity for C. parvum in 73,21% (153/209) of the samples, and nested PCR was positive for Cryptosporidium spp. in 56.5% (118/209) of the samples. The analytical sensitivity of qPCR foi de aproximadamente one oocyst C. parvum per reaction tube. Evaluation of analytical specificity did not reveal inespecific amplification for DNA of the following Cryptosporidium species and genotypes: C. bovis, C. andersoni, C. ryanae, C. canis, C. serpentis, C. galli, C. baileyi and avian genotype II. These results allowed the conclusion that qPCR for actin gene is a sensitive and specific technique for detection of C. parvum in fecal samples from calves

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-29Bitstream added on 2014-06-13T20:08:22Z : No. of bitstreams: 1 costa_lf_me_botfmvz.pdf: 594547 bytes, checksum: 7d609573704d70bd41e6633e86629767 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O diagnóstico da infecção por Brucella ovis em ovinos usualmente é realizado por meio de exame clínico, testes sorológicos e bacteriologia. Devido às limitações apresentadas pelas técnicas, o diagnóstico é geralmente obtido mediante aplicação de duas ou mais técnicas para obtenção de um resultado conclusivo. A Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) tem sido utilizada como ferramenta diagnóstica aplicável, pois é sensível, pouco dispendiosa, rápida, simples de ser realizada e permite o diagnóstico específico do agente infectante. Neste trabalho foram realizados dois experimentos. No primeiro compararam-se os percentuais de positividade em duas técnicas de PCR padronizadas, sendo a primeira gênero-específica e a seguinte espécie-específica, em 191 amostras de sêmen e 214 de urina provenientes de ovinos inoculados experimentalmente com a cepa de B. ovis REO 198. Posteriormente, desenvolveu-se a nested PCR a partir do produto amplificado da reação espécie-específica, e o percentual de positividade obtido pela nested PCR foi comparado aos obtidos pelas PCRs gênero-específica e espécie-específica. Foi observada diferença significativa no percentual de positividade (P<0,05) entre PCR gênero-específica e PCR espécie-específica (24,08% e 15,18%, respectivamente) para amostras de sêmen de ovinos e concordância moderada entre os resultados destas técnicas (kappa de 0,623); para amostras de urina, não houve diferença significativa entre as positividades obtidas pela PCR gênero-específica e a espécie-específica (10,28% e 7,011%, respectivamente), e a concordância entre os resultados foi moderada (kappa de 0,6167). A nested PCR espécie-específica apresentou percentual de positividade significativamente maior (P<0,001) quando comparada às PCRs gênero-específica e espécie-específica em amostras de sêmen (53,93%) e de urina (49,07%)... / Diagnosis of Brucella ovis infection in rams is routinely performed by clinical examination, serology and bacteriology. Due to limitations presented by each technique, the diagnosis is usually made by two or more techniques to obtain a conclusive result. The Polymerase Chain Reaction (PCR) has been used as a diagnostic tool applicable because it is sensitive, inexpensive, rapid, simple to perform and allows the specific diagnosis of infectious agents. In this study, the positivity percentages of two techniques of PCR previous described, one genus-specific and other species-specific, were measured in 191 semen and 214 urine samples from sheep experimentally infected with strain of B. ovis REO 198. Then, a species-specific nested PCR was developed from amplified products of the species-specific PCR, and the percentage of positivity obtained by nested PCR was compared to those obtained by genus and species-specific PCRs. Significant difference was observed when comparing the percentage of positivity (P <0.05) between genus-specific and species-specific PCR (24.08% and 15.18%, respectively) in semen samples from sheep, and there was moderate agreement between the results of these techniques ( kappa 0.623). In urine, no significant difference between the percentages of positives samples obtained by genus and species-specific PCR was observed (10.28% and 7.011% respectively) and the concordance between the results was moderate (kappa 0.6167). The species-specific nested PCR showed significantly higher percentage of positivity (P <0.001) when compared to genus-specific and species-specific PCRs in semen (53.93%) and urine (49.07%). Thus, according to the results obtained in this experiment, the species-specific PCR showed the lower percentage of positivity when compared to genus-specific PCR, but the implementation of the species-specific nested PCR showed highly significant increase... (Complete abstract click electronic access below)