Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:40:52Z : No. of bitstreams: 1 conde_sj_dr_botfm.pdf: 1083233 bytes, checksum: a328bfb8396940e543c7e1865edd1942 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Sabe-se que o E2 e o status hormonal da paciente são importantes para a proliferação e o tratamento do câncer de mama, quanto ao T3, apesar dos estudos epidemiológicos serem ainda contraditórios em relação a sua influência no câncer de mama, estudos laboratoriais demonstram sua capacidade de induzir a sua proliferação e induzir genes que são induzidos por estrógeno. Portanto a hipótese formulada foi que os hormônios tireoidianos modulam a expressão dos mesmos genes que o estrógeno em carcinoma de mama. Para materializar a hipótese o objetivo foi comparar a expressão dos genes TGFA, TGFB1 e PGR, resultantes da ação do estrógeno, e dos genes TNFRSF9, BMP6 e THRA, resultantes da ação do hormônio tireoidiano, combinados ou não com a ação do Tamoxifem, em carcinoma de mama colocado em cultura primária. Foram selecionadas 12 pacientes do sexo feminino, menopausadas, com Carcinoma de Mama estádio grau 1 e 2 , do Hospital do Câncer de São Paulo, verificou-se a existência de disfunção tireoidiana concomitante, através das dosagens laboratoriais de T3L, T4L, TSH, TPO-AB, assim como o status hormonal em relação aos níveis estrogênicos. Fragmentos tumorais obtidos cirurgicamente foram colocados em cultura primária. Essas células foram tratadas com E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + TAM (10-6M), T3 (10-8M) + TAM (10-6M), TAM (10-6M), com posterior extração de RNA total. Foi utilizada a metodologia de PCR em Tempo Real para verificar a ação do T3 e do E2 em genes normalmente induzidos pelo E2 (PGR, TGFA e TGFB1), verificada a expressão de genes que aumentam (TNFRSF9 e THRA) e diminuem (BMP6) pela ação do T3 em seu receptor (TR) e a presença de mutações no TR. Não foram encontradas mutações envolvendo o receptor de hormônio... / It is known that E2 and the patient’s hormonal status is important for the proliferation and the treatment of the breast cancer. Despite the contradictory epidemic studies of T3 and its influence in the breast cancer, laboratory studies demonstrate its capacity to induce not only its proliferation but also genes that are induced by estrogen. Therefore the hypothesis was that the thyroid hormones modulate the expression of the same genes as the estrogen in breast carcinoma. The objective was to compare the expression of the genes TGFA, TGFB1 and PGR, resultant of the estrogen action and genes TNFRSF9, BMP6 and THRA, resultant of the thyroid hormone action, combined or not with the Tamoxifen action in breast carcinoma in primary culture. 12 menopausal patients with breast carcinoma stages 1 and 2, of São Paulo Cancer Hospital were selected. The existence of concomitant thyroid dysfunction was verified through laboratory dosages of T3L, T4L, TSH, TPOAB, as well as the hormonal status in relation to the estrogen levels. Tumor fragments surgically obtained were put in primary culture. Those cells were treated with E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + …, with subsequent extraction of total RNA. The methodology of PCR was used in Real Time to verify the action of T3 and E2 in genes usually induced by E2 (PGR, TGFA and TGFB1), verified the expression of genes which increase (TNFRSF9 and THRA) and decrease (BMP6) by the action of T3 in its receptor (TR) and the presence of mutations in TR. Mutations involving the thyroid hormone receptor were not found. Related to the genic expressions, in the ER positive patients, the treatment with T3 increased the expression of TGFA, THRA, TNFRSF9 and PGR genes significantly and reduced the expression of TGFB1 and BMP6. When... (Complete abstract click electronic access below)

ANTECEDENTES DEL TEMA: El estado ganglionar axilar es el factor pronóstico más importante para determinar la supervivencia y la recurrencia en el carcinoma de mama, puesto que es conocido que la afectación axilar en estas pacientes, disminuye la supervivencia a los 5 años del 85-95 % al 55-70 % y conlleva a que presenten metástasis a distancia con más frecuencia . De todos modos, la introducción y amplia utilización del cribado mamográfico está aumentando la detección de tumores incipientes en pacientes con tumores ocultos, localmente invasivos o in situ, situación que ha llevado a una disminución del tamaño medio de las lesiones detectadas, a un aumento en la frecuencia de detección de carcinomas in situ y, finalmente, a una menor afectación ganglionar de la axila. Estas pacientes, que presentan tumores pequeños precozmente detectados, son aquellas que se van a beneficiar de la técnica de la biopsia selectiva del ganglio centinela (BSGC). Si la biopsia es negativa, la linfadenectomía axilar (LDNA) se puede evitar con la consecuente disminución de la morbilidad. HIPÓTESIS: En los casos de BSGC negativa se evita la LDNA sin aumentar las recidivas axilares; en los casos de BSGC positiva existen factores que predicen la afectación del resto de ganglios axilares; la linfogammagrafía indica los territorios linfáticos que hay que abordar en cada paciente. OBJETIVOS: Valorar la consolidación de la técnica; analizar los factores predictores de la extensión ganglionar metastásica de la axila; conocer el drenaje linfático de cada paciente y valorar la necesidad de abordar los GC de la cadena mamaria interna (GC-MI). METODOLOGÍA: Estudio retrospectivo de la base de datos prospectiva, del servicio de Medicina Nuclear del Hospital Universitari de Bellvitge, de GC en pacientes con carcinoma de mama. RESULTADOS: La BSGC es una técnica precisa en la estadificación de los carcinoma de mama T1T2N0 sin aumentar la recidiva axilar; el tamaño de la metástasis en el GC y el número de GC positivos están relacionados con la presencia de metástasis en otros ganglios de la linfadenectomía axilar; el abordaje de los GC-MI mejora la estadificación y el manejo terapéutico. CONCLUSIONES: La BSGC se consolida como técnica segura en la estadificación axilar de las pacientes con carcinoma de mama, ofreciendo en los casos de negatividad del GC un control axilar del 100% a los 5 años de seguimiento. Dos factores estadísticamente relacionados con la presencia de metástasis en otros ganglios de la LDNA cuando el ganglio centinela axilar es positivo son el tamaño de la metástasis en el GC y el número de GC positivos. La BSGC-MI debería realizarse para obtener resultados que en un futuro permitan determinar si los cambios que conlleva en el tratamiento adyuvante incrementan las tasas de supervivencia o no. No obstante, podría evitarse en situaciones especiales en las que el riesgo es superior al beneficio. / Patients with beast cancer (BC) in early stages benefit from the sentinel lymph node biopsy (SLNB). If SLNB is negative, axillar lymph node dissection (ALND) can be avoided, resulting in a decrease of morbidity. Hypothesis: In cases of negative SLNB, ALND can be avoided without an increase in axillary recurrences; in cases of positive SLNB there are factors that predict the extent of metastatic involvement of the axilla; preoperative lymphoscintigraphy allows visualization of extraaxillary drainage. Aims: To determine: the accuracy of the technique; which preoperative factors could predict the presence of metastases in non-sentinel lymph nodes (non-SLNs), when positive-SLN; the evolution of patients with internal mammary chain (IMC) drainage whether the IMC-SLN was biopsied or not, as well as the clinical implications of the IMC-SLNB in early BC patients in whom the pre-surgical lymphoscintigraphy showed IMC lymphatic drainage. Methods: This is a retrospective analysis of patients with invasive BC included in a prospective SLNB database of the Department of Nuclear Medicine of the University Hospital of Bellvitge, who had conservative surgery and SLNB performed on them. Results: The SLNB is an accurate technique in the axillary stratification of T1T2N0 breast tumours; the probability of finding metastatic involvement of the axilla is statistically related to the size of the SLN metastases and the number of positive SLN; IMC-SLNB improves nodal staging in BC but has little impact on adjuvant treatment. Conclusions: SLNB is an accurate technique in the axillary stratification of patients with BC, offering in the cases of negative SLNB a safe axillary control after a 5-year follow-up. Two factors statistically related to metastatic involvement of the axilla are the size of the SLN metastases and the number of positive SLN. IMC-SLNB should be performed in order to determine in the future whether the changes in the chemotherapeutic regimes will improve the survival rates in this high-risk subgroup of breast cancer patients or not.

Submitted by PPG Medicina e Ci?ncias da Sa?de (medicina-pg@pucrs.br) on 2018-06-22T19:59:08Z No. of bitstreams: 1 CLARICE_MARTINS_FEYH_BIRNFELD.pdf: 3318155 bytes, checksum: aa5476b4fe73fb5e7e0b2678aef02e4b (MD5) / Approved for entry into archive by Sheila Dias (sheila.dias@pucrs.br) on 2018-06-29T12:31:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CLARICE_MARTINS_FEYH_BIRNFELD.pdf: 3318155 bytes, checksum: aa5476b4fe73fb5e7e0b2678aef02e4b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-29T12:38:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CLARICE_MARTINS_FEYH_BIRNFELD.pdf: 3318155 bytes, checksum: aa5476b4fe73fb5e7e0b2678aef02e4b (MD5) Previous issue date: 2014-10-31 / Objectives: To evaluate the expression of Hsp27 by immunohistochemistry in tissue samples of invasive ductal carcinoma in women with and without the presence of metastasis in sentinel axillary lymph node compared to samples from patients diagnosed with fibrocystic changes in breast tissue. In addition, to study the relationship between the rate of cell proliferation and apoptosis by evaluating the expression of Ki-67 protein and caspase-3 by immunohistochemistry. Material and Methods: A cross- sectional study was designed to select patients treated at Hospital S?o Lucas of PUCRS between September 2001 and October 2009. The patients were divided in three groups: 25 patients diagnosed with invasive ductal carcinoma of breast with axillary lymph node metastasis, 25 patients with invasive ductal carcinoma of breast without axillary lymph node metastasis and a control group composed by tissue samples of 25 patients diagnosed with fibrocystic change of the breast. The expression of Hsp27, Ki-67 and caspase 3 expression was evaluated by image analysis and the rate of proliferation (Ki-67) and apoptosis (caspase 3) was calculated for the three groups. Results: The present study showed an increased expression of Hsp27 in the group of invasive ductal carcinomas without metastasis as compared to the control group. There was no significant difference of expression of Hsp27 between the group of ductal carcinoma with axillary metastasis and the control group. The expression of Hsp27 was significantly higher in the group without axillary metastasis as compared to the group with metastasis in both the primary tumor (<0.001) and the respective lymph node tissue samples (=0.003). The expression of Ki-67 and the rate of proliferation (ki-67) and apoptosis (caspase 3) were significantly higher in the groups with invasive ductal carcinoma as compared to the control group. There was no difference in the expression of Ki-67 and the rate of proliferation and apoptosis between the two groups of invasive ductal carcinoma. There was no significant difference in the expression of caspase 3 among the three groups. Conclusion: The quantitative analysis of Hsp27 demonstrated increased expression of this protein in carcinomas without axillary metastases, with a significantly higher expression in the primary tumor and lymph node tissue samples of this group as compared to the group without axillary metastasis. Although the methodology employed and the number of cases evaluated in this work do not allow one to conclude that such behavior in metastatic ductal carcinomas of breast is constant, such finding warrants further investigation. / Objetivos: Avaliar a express?o de Hsp27 (HspB1) em amostras teciduais de carcinomas ductais invasores em mulheres com e sem presen?a de met?stase em linfonodo sentinela axilar e estudar a rela??o da taxa de prolifera??o celular e apoptose, atrav?s da avalia??o imunoistoqu?mica da express?o das prote?nas Hsp27, Ki-67 e caspase 3 em carcinomas ductais invasores de mulheres com e sem presen?a de met?stase linfonodal, tratadas em um hospital de ensino, comparado com amostras de pacientes diagnosticadas com altera??o fibroc?stica no tecido mam?rio. Material e M?todos: Foi realizado um estudo do tipo transversal, sendo selecionadas para este trabalho pacientes tratadas no Hospital S?o Lucas da PUCRS no per?odo entre setembro de 2001 e outubro de 2009 cujas bi?psias foram divididas em tr?s grupos: 25 pacientes com diagn?stico de carcinoma ductal invasor de mama com presen?a de met?stase linfonodal; e 25 pacientes com carcinoma ductal invasor de mama sem presen?a de met?stase linfonodal. Para constitui??o do grupo controle foi realizada a sele??o aleat?ria de 25 pacientes com diagn?stico de altera??o fibroc?stica da mama. Atrav?s da t?cnica de imunoistoqu?mica, tamb?m foram avaliadas as express?es de Hsp27, caspase 3 e Ki67 por an?lise de imagem digital e calculada a raz?o entre a taxa de prolifera??o (Ki-67) e apoptose (caspase 3) dos grupos estudados. Resultados: O presente estudo evidenciou a express?o aumentada da Hsp27 em carcinomas ductais invasores sem met?stase axilar, quando comparados ao grupo dos carcinomas ductais invasores com met?tase axilar e grupo controle. A express?o de Hsp 27 foi maior no grupo com carcinoma invasor sem met?stase axilar tanto no tecido da neoplasia prim?ria (p<0,001) quanto no respectivo tecido linfonodal comparado ao grupo com carcinoma com met?stase axilar (=0,003). Houve diferen?a na express?o da prote?na Ki-67 e raz?o entre prolifera??o celular e apoptose entre os grupos de pacientes com carcinoma ductal invasor com e sem met?stases quando comparados ao grupo controle, por?m n?o houve diferen?a significativa da express?o de Ki-67 e da raz?o entre prolifera??o e apoptose entre os grupos com carcinoma invasor com e sem met?stase, ou entre a express?o de caspase 3 nos tr?s grupos quando comparados entre si. Conclus?o: A an?lise quantitativa da Hsp27 demonstrou maior express?o da prote?na nos tecidos da neoplasia prim?ria e nos linfonodos em carcinomas sem met?stase em linfonodo sentinela axilar. Embora a metodologia empregada e o n?mero de casos estudados nesse trabalho n?o permitam concluir que esse comportamento na doen?a metast?tica seja um achado constante, esse resultado justifica a necessidade de avaliar esse achado em estudos futuros.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigocastro_tese.pdf: 1914162 bytes, checksum: b3f5bd6e4ed4e8470c9714a82211ce12 (MD5) Previous issue date: 2013-10-29 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo / Introduction : The growth and progression of tumors depend on angiogenesis , the process of formation of new blood vessels from a pre-existing endothelium . The vascular endothelial growth factor (VEGF or VEGF - A) is a potent mitogen for endothelial cells and increased expression is associated with tumor growth and metastasis . However, the selection of alternative splicing site in the 3 'end of exon 8 of the VEGF gene results in a sister family of isoforms , VEGF- Axxxb , which are anti- angiogenic and downregulated in tumor tissues . Objectives : To assess quantitatively the expression of isoforms pro- angiogenic and anti- angiogenic VEGF gene into 50 samples of breast cancer and normal adjacent tissue and determining the effect of regulatory proteins to control the event splicing of the VEGF gene regulatory proteins and Splicing , SRPK1 , SRp40 , SRp55 and ASF/SF2 . Methods: The expression of VEGF Axxx, VEGF-A165b isoforms and Splicing regulatory proteins were analyzed by PCR quantitative real-time (PCRq ) using samples from 50 patients with breast cancer and 43 adjacent normal tissue used as controls . Values of Relative Quantification (RQ) were used in association with molecular subtypes and metastasis. The data were tested for normality D' Agostino and Pearson normality test using the program GraphPadPrismv.6 . The values of relative mRNA quantification ( RQ ) of the VEGF-A isoforms and splice regulatory proteins in tumors was analyzed by Wilcoxon Signed Rank Test , since the data is not normal distribution . Spearman correlation was used to evaluate the correlation between the levels of mRNA expression between regulatory proteins and VEGF-Axxx and VEGF-A165b isoforms where P values &#8804; 0.05 were considered significant. Results: Expression significantly increased both isoforms of VEGF- Axxx (median RQ = 7.7, P <0.0001) and VEGF- A165b (median RQ = 2.9 , P < 0.0001) was seen in breast tumors compared to adjacent normal tissues . Comparing the values of expression of VEGF- A165b and VEGF - Axxx by the Mann -Whitney test that showed no significant difference in expression of isoforms in tumors ( P = 0.065 ) . The mRNA expression of SRPK1 protein was significantly elevated in breast tumors compared to normal tissue (P < 0.0001). For ASF/SF2, SRp55 and SRp40 mRNA expression also showed significantly elevated in the tumors (P < 0.0001). Proteins ASF/SF2 , SRp55 , SRp40 and SRPK1 showed positive correlation with both isoforms of VEGF -A . We also found a positive correlation SRPK1 protein with all other SR proteins , mainly ASF/SF2. Conclusion: The concept of alternative splicing of the VEGF-A gene results in isoforms anti- angiogenic and pro- angiogenic research indicates that the quantitative changes in VEGF-A molecule in cancer and other diseases may be insufficient . As shown, the expression of splicing regulatory protein studied here were all positive as compared to the VEGF-A165b and VEGF- Axxx isoforms . / Introdução: O crescimento e progressão de tumores dependem da angiogênese, processo de formação de novos vasos sanguíneos a partir de um endotélio vascular pré-existente. O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF ou VEGF-A) é um potente mitógeno de células endoteliais e o aumento de sua expressão é associado com crescimento tumoral e metástase. Entretanto, a seleção do sítio alternativo de splicing na extremidade 3 . do éxon 8 do gene VEGF resulta em uma família-irmã de isoformas, VEGF-Axxxb, que são anti-angiogênicas e downregulated em tecidos tumorais. Objetivo: Analisar quantitativamente a expressão de isoformas pró-angiogênicas e anti-angiogênicas do gene VEGF em 50 amostras de carcinoma mamário e tecidos normais adjacentes e determinar o efeito de proteínas reguladoras no controle do evento de splicing do gene VEGF e das proteínas reguladoras de Splicing, SRPK1, SRp40, SRp55 e ASF/SF2. Material e Método: A expressão das isoformas de VEGF-Axxx, VEGF-A165b e das proteínas reguladoras de Splicing foram analisadas em PCR quantitativa em Tempo Real (qPCR) utilizando amostras de 50 pacientes com câncer de mama e 43 amostras de tecido normal adjacente utilizados como controle. Os valores de Relative Quantification (RQ) foram utilizados nas associações com os subtipos moleculares e com metástase. Os dados foram submetidos ao teste da normalidade de D Agostino e Pearson normality test utilizando o programa GraphPadPrismv.6. Os valores de quantificação relativa de RNAm (RQ) das isoformas de VEGF-A e das proteínas reguladoras de splicing em tumores foi analisada por Wilcoxon Signed Rank Test, uma vez que os dados não apresentaram distribuição normal. Correlação de Spearman foi utilizada para avaliar a correlação entre os níveis de expressão de RNAm entre as proteínas reguladoras e as isoformas de VEGF-Axxx e VEGF-A165b, onde valores de P &#8804; 0,05 foram considerados significantes. Resultados: Expressão significativamente elevada de ambas as isoformas VEGF-Axxx (mediana de RQ = 7.7; P < 0,0001) e VEGF-A165b (mediana de RQ = 2.9; P<0,0001) foi observada em tumores de mama em relação aos tecidos normais adjacentes. Quando comparados os valores de expressão de VEGF-Axxx e VEGF-A165b por meio do Mann-Witney Test que não apresentou diferença significativa de expressão das isoformas em tumores (P=0,0.65). A expressão do RNAm da proteína SRPK1 foi significativamente elevada em tumores de mama em relação aos tecidos normais (P<0,0001). Para ASF/SF2, SRp55 e SRp40 o RNAm também apresentou expressão significativamente elevada nos tumores (P<0,0001). As proteínas ASF/SF2, SRp55, SRp40 e SRPK1 apresentaram correlação positiva com ambas as isoformas de VEGF-A. Encontramos também uma correlação positiva da proteína SRPK1 com todas as outras proteínas SR, principalmente com ASF/SF2. Conclusão: O mecanismo de splicing alternativo do gene VEGF-A resultando em isoformas anti-angiogênicas bem como pró-angiogênicas indica que a investigação de mudanças quantitativas da molécula VEGF-A em câncer e outras doenças pode não ser suficiente. Conforme demonstramos, a expressão das proteínas reguladoras de Splicing aqui estudadas, foram todas positivas quando comparadas com as isoformas de VEGF-Axxx e VEGF-A165b.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:36:18Z : No. of bitstreams: 1 bueno_sp_me_botfm.pdf: 539455 bytes, checksum: 0cf36502a3658cc125b5e07c71274053 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foram selecionados 62 casos de carcinoma de mama, diagnosticados por punção aspirativa por agulha fina (PAAF), com confirmação pelo espécime cirúrgico. Citoinclusão e espécime cirúrgico foram submetidos à reação imunoistoquímica (IQ) para receptor de estrógeno (RE), de progesterona (RP) e proteína Her-2/neu. Consideraram-se positivos para RE e RP, casos com 1% ou mais de células coradas. Positividade para Her-2/neu foi avaliada numa escala de 0 a 3+. O índice de concordância entre citoinclusão e espécime cirúrgico variou de 90 a 94%. Sensibilidade, especificidade, valores preditivo positivo (VPP) e negativo (VPN) e acurácia da citoinclusão na pesquisa para os RE e RP e proteína Her-2/neu (3+) foram respectivamente: RE (92,7%; 85,7%; 92,7%; 85,7% e 90,3%), RP (92,7%; 94,7%; 97,4%; 87,0% e 93,5%) e Her-2/neu (70,0%; 100,0%; 100,0%; 94,5% e 95,2%). A citoinclusão apresenta excelente correlação com o espécime cirúrgico na pesquisa por IQ dos receptores hormonais e da proteína Her-2/neu. / It was selected 62 cases of breast carcinoma, diagnosed by fine needle aspiration (FNA), with confirmation by surgical specimen. Cell-block and surgical specimen were submitted to immunohistochemistry (IHC) reaction, for estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and Her-2/neu protein. Cases with 1% or more cells stained were considered positive for ER and PR. Her-2/neu Positivity was evaluated by a score from 0 to 3+. The concordance index between cell-block and surgical specimen had a variation of 90 to 94%. Sensibility, specificity, predictive positive and negative values and accuracy for ER, PR and Her-2/neu protein, was respectively: ER (92,7%; 85,7%; 92,7%; 85,7% and 90,3%), PR (92,7%; 94,7%; 97,4%; 87,0% and 93,5%) and Her- 2/neu (70,0%; 100,0%; 100,0%; 94,5% and 95,2%). Cell-block shows excellent correlation with surgical specimen in assessment of hormonal receptors and Her-2/neu protein, by IHC.

Determinar o valor prognóstico e preditivo do VEGF (vascular endothelial growth factor) e do HIF-1? (Hypoxia-inducible factor-1) em relação à sobrevida livre de doença (SLD) e sobrevida global (SG) em pacientes com carcinoma de mama localmente avançado (CMLA) tratadas primariamente pela quimioterapia neoadjuvante. MATERIAIS E METODOS: VEGF e HIF foram quantificados consecutivamente em plasma de 36 pacientes com CMLA pelo método de ELISA (enzyme labeling immunoassay absorbant) para o VEGF165 e o HIF-1?. O tratamento neoadjuvante foi realizado em todas as pacientes com docetaxel e epirrubicina. O tempo médio de seguimento foi de 56 meses. RESULTADOS: Uma análise univariada demonstrou que o HIF-1? está significantemente relacionado à SLD (P =.0238) e à SG (P = .0121) com as pacientes HER-2 positivas. Não houve diferença significante para a SLD ou SG no que diz respeito aos receptores de hormônio, comprometimento axilar ou grau tumoral. Os valores de VEGF foram maiores no grupo de pacientes RE+ do que no grupo RE negativo (P =.01). Inversamente os valores de HIF-1? foram menores no grupo RE+ comparados ao grupo RE - (P =.02). Pacientes com recorrência óssea apresentaram uma tendência a apresentarem valores de VEGF menores (media, 175.7 pg/ml) do que aquelas com recorrência visceral (441 pg/ml). Uma análise multivariada demonstrou o comprometimento axilar (P =.0004), receptores de estrógeno (ER) (P < .0001), e tamanho do tumor (P = .0085) como fatores independentes de SLD. O HIF-1? foi tido como um fator independente preditivo de SG (P =.0180). Não houve diferença estatisticamente significante entre os valores plasmáticos de HIF-1? ou VEGF nos períodos pré e pós quimioterapia. CONCLUSÕES: Os resultados sugerem que o nível plasmático do HIF-1? é preditivo de SLD e SG nas pacientes com CMLA apresentando uma sobreposição as pacientes HER-2 positivas. As dosagens de VEGF podem ser preditivas de resposta e prognóstico no tratamento neoadjuvante, mas são necessários novos estudos prospectivos comparados ao HIF-1? para conclusões mais consistentes. / To determine the predictive and prognostic value of vascular endothelial growth factor (VEGF) and Hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1?) for relapse-free survival (RFS) and overall survival (OS) in locally advanced breast cancer (LABC) primarily submitted to neoadjuvant chemotherapy. MATERIALS AND METHODS: VEGF and HIF were quantitatively measured in plasma sample from 36 consecutive patients with LABC using an enzyme immunoassay for human VEGF165 and HIF-1?. Neoadjuvant treatment was given to all patients as docetaxel and epirrubicin. The follow-up median time was 56 months. RESULTS: Univariate analysis showed that HIF-1? is a significant predictor of RFS ( P = .0238) and OS (P = 0121) in HER-2 positive patients. No significant difference was seen in RFS or OS related to hormonal receptor, axillary status or tumoral grade. The VEGF level was higher in the group of patients who ER was positive than ER negative (P = .01). On the other hand, the HIF-1? level is higher in ER negative patients than ER positive ( P=.02). Patients with bone recurrences tended to have lower VEGF plasma level (median, 175.7 pg/ml) than patients with visceral metastasis (441 pg/ml). Multivariate analysis showed nodal status (P = .0004), estrogen receptor (ER) status (P < .0001), and tumor size (P = .0085) to be independent predictors of RFS. HIF-1? was found to be an independent predictor of OS (P = .0180). No statistically differences were observed related to pre and post chemotherapy period in HIF-1? or VEGF measurements. CONCLUSION: The results suggest that high level of plasma HIF-1? is associated to HER-2 over expression and they are major predictive factors of RFS and OS in LABC. VEGF content might also predict outcome after neoadjuvant treatment, however further studies in a prospective setting with HIF-1? homologous treatments are required.

Determinar o valor prognóstico e preditivo do VEGF (vascular endothelial growth factor) e do HIF-1? (Hypoxia-inducible factor-1) em relação à sobrevida livre de doença (SLD) e sobrevida global (SG) em pacientes com carcinoma de mama localmente avançado (CMLA) tratadas primariamente pela quimioterapia neoadjuvante. MATERIAIS E METODOS: VEGF e HIF foram quantificados consecutivamente em plasma de 36 pacientes com CMLA pelo método de ELISA (enzyme labeling immunoassay absorbant) para o VEGF165 e o HIF-1?. O tratamento neoadjuvante foi realizado em todas as pacientes com docetaxel e epirrubicina. O tempo médio de seguimento foi de 56 meses. RESULTADOS: Uma análise univariada demonstrou que o HIF-1? está significantemente relacionado à SLD (P =.0238) e à SG (P = .0121) com as pacientes HER-2 positivas. Não houve diferença significante para a SLD ou SG no que diz respeito aos receptores de hormônio, comprometimento axilar ou grau tumoral. Os valores de VEGF foram maiores no grupo de pacientes RE+ do que no grupo RE negativo (P =.01). Inversamente os valores de HIF-1? foram menores no grupo RE+ comparados ao grupo RE - (P =.02). Pacientes com recorrência óssea apresentaram uma tendência a apresentarem valores de VEGF menores (media, 175.7 pg/ml) do que aquelas com recorrência visceral (441 pg/ml). Uma análise multivariada demonstrou o comprometimento axilar (P =.0004), receptores de estrógeno (ER) (P < .0001), e tamanho do tumor (P = .0085) como fatores independentes de SLD. O HIF-1? foi tido como um fator independente preditivo de SG (P =.0180). Não houve diferença estatisticamente significante entre os valores plasmáticos de HIF-1? ou VEGF nos períodos pré e pós quimioterapia. CONCLUSÕES: Os resultados sugerem que o nível plasmático do HIF-1? é preditivo de SLD e SG nas pacientes com CMLA apresentando uma sobreposição as pacientes HER-2 positivas. As dosagens de VEGF podem ser preditivas de resposta e prognóstico no tratamento neoadjuvante, mas são necessários novos estudos prospectivos comparados ao HIF-1? para conclusões mais consistentes. / To determine the predictive and prognostic value of vascular endothelial growth factor (VEGF) and Hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1?) for relapse-free survival (RFS) and overall survival (OS) in locally advanced breast cancer (LABC) primarily submitted to neoadjuvant chemotherapy. MATERIALS AND METHODS: VEGF and HIF were quantitatively measured in plasma sample from 36 consecutive patients with LABC using an enzyme immunoassay for human VEGF165 and HIF-1?. Neoadjuvant treatment was given to all patients as docetaxel and epirrubicin. The follow-up median time was 56 months. RESULTS: Univariate analysis showed that HIF-1? is a significant predictor of RFS ( P = .0238) and OS (P = 0121) in HER-2 positive patients. No significant difference was seen in RFS or OS related to hormonal receptor, axillary status or tumoral grade. The VEGF level was higher in the group of patients who ER was positive than ER negative (P = .01). On the other hand, the HIF-1? level is higher in ER negative patients than ER positive ( P=.02). Patients with bone recurrences tended to have lower VEGF plasma level (median, 175.7 pg/ml) than patients with visceral metastasis (441 pg/ml). Multivariate analysis showed nodal status (P = .0004), estrogen receptor (ER) status (P < .0001), and tumor size (P = .0085) to be independent predictors of RFS. HIF-1? was found to be an independent predictor of OS (P = .0180). No statistically differences were observed related to pre and post chemotherapy period in HIF-1? or VEGF measurements. CONCLUSION: The results suggest that high level of plasma HIF-1? is associated to HER-2 over expression and they are major predictive factors of RFS and OS in LABC. VEGF content might also predict outcome after neoadjuvant treatment, however further studies in a prospective setting with HIF-1? homologous treatments are required.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-06-19T18:25:16Z No. of bitstreams: 1 DANIEL RODRIGUES DE BASTOS.pdf: 1922893 bytes, checksum: 51e3aa82ceb630f944c3c65627dcffaa (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-19T18:25:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DANIEL RODRIGUES DE BASTOS.pdf: 1922893 bytes, checksum: 51e3aa82ceb630f944c3c65627dcffaa (MD5) Previous issue date: 2017-05-04 / Introduction: Breast cancer is the most frequent neoplasm among women worldwide and represents the leading cause of death in this population. Important biomarkers have been studied in order to better define the prognosis of patients affected by this cancer. MicroRNAs are small molecules of non-coding RNAs composed of 21 to 25 nucleotides that play an important role in the post-transcriptional regulation of several genes. Objective: The objective of this study was to evaluate the expression of microRNAs (miRNAs: hsa-miR-7 and hsa-miR-10b) and BRCA1 protein in breast cancer samples, as well as the possible associations between expression of these markers with clinicopathological and prognostic aspects. Method: The study included 92 cases of breast carcinoma from Hospital Araújo Jorge, Associação de Combate ao Câncer em Goiás. Formalin fixed paraphin embedded samples were used for the analisis. MicroRNA was extracted from the samples and used for cDNA synthesis. The cDNA samples were adjusted to the same concentration and submitted to quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Samples were further evaluated by immunohistochemistry for BRCA1 expression. Results: From a group of 234 immunohistochemical records, 56 cases of non-triple-negative and 36 triple-negative breast carcinomas were selected. Five-year overall survival was significantly associated to triple negative phenotype (p = 0.044), advanced stages (p = 0.005), lymph node involvement (p = 0.038), presence of distant metastasis (p = 0, 0008) and absence of BRCA1 expression (p = 0.039). Significant associations were demonstrated between the absence of BRCA1 and the triple-negative phenotype (p = 0.0346), as well as the absence of estrogen receptor expression (p = 0.006) and absence of progesterone receptor expression (p = 0.0163). The analysis by qRTPCR demonstrated different levels of miR-10b and miR-7 expression in the tumors, with significant associations with triple-negative phenotype (p = 0.021, p = 0.042) and the absence of BRCA1 (p = 0.039, p = 0.006). The comparison between absence and presence of human epidermal growth factor receptor expression showed a significant difference for miR-7 (p = 0.031), and the expression of miR-10b in these cases was not statistically different (p = 0.926). Conclusion: Significant associations were demonstrated between the absence of BRCA1 and the triple-negative phenotype. Five-year overall survival was reduced for the triple-negative phenotype patients, clinical stages III and IV, the presence of lymph node metastasis, the presence of distant metastasis and the absence of BRCA1 expression. This study also demonstrated that hsa-miR-7 and hsa-miR-10b are significantly associated with the absence of BRCA1 expression and triple-negative phenotype, with poorer survival in these patient profiles. Studies with more cases and with cell lines should be performed in order to confirm the role of hsa-miR-7 and hsa-miR-10b in the modulation of BRCA1 expression. / Introdução: O câncer de mama é a neoplasia mais frequente entre as mulheres de todo o mundo e representa a principal causa de morte nesta população. Importantes biomarcadores têm sido estudados, a fim de definir melhor o prognóstico de pacientes acometidas por esta doença. Os microRNAs são pequenas moléculas de RNAs não codificantes, compostos por 21 a 25 nucleotídeos e desempenham importante papel na regulação pós-transcricional de diversos genes. Objetivo: O objetivo do estudo foi avaliar a expressão de microRNAs (miRNAs: hsa-miR-7 e hsamiR- 10b) e da proteína BRCA1 em amostras de câncer de mama, bem como as possíveis associações entre a expressão desses marcadores e os aspectos clinicopatológicos e prognósticos. Método: O estudo foi composto por 92 casos de carcinoma de mama, provenientes do Hospital Araújo Jorge, da Associação de Combate ao Câncer em Goiás. Foram utilizados fragmentos de tumores incluídos em parafina. A extração de microRNA das amostras foi realizada e o produto gerado foi utilizado para a síntese de cDNA. As amostras de cDNA foram ajustadas para igual concentração e submetidas à PCR quantitativa em tempo real (qRT-PCR). As amostras foram avaliadas ainda por meio de imuno-histoquímica para expressão de BRCA1. Resultados: Um total de 234 registros de imuno-histoquímica foi avaliado, resultando em 56 casos de carcinomas de mama apresentando fenótipo não triplonegativo e 36 com fenótipo triplo-negativo. A sobrevida das pacientes em função das características clinicopatológicas demonstrou associações com os casos triplonegativos (p=0,044), estádios mais avançados (p=0,005), acometimento linfonodal (p=0,038), presença de metástase à distância (p=0,0008) e ausência da expressão de BRCA1 (p=0,039). Associações significativas foram demonstradas entre a ausência de BRCA1 e o fenótipo triplo-negativo (p=0,0346), entre a ausência da expressão do receptor de estrógeno e ausência da expressão de BRCA1 (p=0,006), e entre o receptor de progesterona e a ausência da expressão de BRCA1 (p=0,0163). A análise por qRT-PCR demonstrou diferentes níveis de expressão de miR-10b e de miR-7, com associações significativas ao fenótipo triplo-negativo (p=0,021; p=0,042) e à ausência de BRCA1 (p=0,039; p=0,006). A comparação entre ausência e presença da expressão do receptor do fator de crescimento epidérmico humano demonstrou diferença significativa para miR-7 (p=0,031), sendo que a expressão de miR-10b nestes casos não foi estatisticamente diferente (p=0,926). Conclusão: Associações significativas foram demonstradas entre a ausência de BRCA1 e o fenótipo triplo-negativo. A sobrevida em cinco anos foi inversamente associada ao fenótipo triplo-negativo, aos estádios clínicos III e IV, à presença de metástase linfonodal, à presença de metástase à distância e à ausência da expressão de BRCA1. Este estudo demonstrou ainda que hsa-miR-7 e hsa-miR- 10b estão significativamente associados à ausência da expressão de BRCA1 e ao fenótipo triplo-negativo, sendo observada pior sobrevida nestes perfis de pacientes. Estudos com maior número de casos e com linhagens celulares devem ser realizados para constatar o papel de hsa-miR-7 e hsa-miR-10b na modulação da expressão de BRCA1.

Submitted by Rafael Bispo Paschoalini (rbpaschoalini@gmail.com) on 2016-03-08T04:00:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Rafael Bispo Paschoalini.pdf: 2764983 bytes, checksum: 576265167e590acb2641a540cda6283a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-09T16:26:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paschoalini_rb_me_bot.pdf: 2764983 bytes, checksum: 576265167e590acb2641a540cda6283a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-09T16:26:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paschoalini_rb_me_bot.pdf: 2764983 bytes, checksum: 576265167e590acb2641a540cda6283a (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / O carcinoma de mama é uma doença heterogênea. Pode ser classificado em fenótipos, com diferentes prognósticos, com base na expressão de determinadas proteínas. O fenótipo luminal é o mais frequente, correspondendo a cerca de 70% dos casos, sendo que tratamentos específicos para este fenótipo de carcinoma de mama já estão em estudo, com melhora promissora do prognóstico das pacientes acometidas. Entretanto, ainda não foram definidos critérios citológicos que pudessem predizer este fenótipo no material obtido pela punção aspirativa por agulha fina (PAAF). OBJETIVO: Investigar critérios citológicos individuais presentes na PAAF que possam se associar com o diagnóstico do fenótipo luminal do carcinoma de mama. MÉTODOS: Trata-se de estudo tipo corte-transversal, com componente descritivo e comparativo. As lâminas de PAAF e espécimes de carcinomas de mama invasivos ductais e lobulares, do período de 2000 a 2005, foram selecionados do arquivo do Laboratório de Patologia do Hospital Amaral Carvalho de Jaú/São Paulo, totalizando 297 casos. Dos blocos doadores foram extraídos cilindros de 2mm de diâmetro e depositados nos blocos de parafina receptores, usando Tissue Microarrays (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland). Nestes cortes, foi feita a pesquisa imunoistoquímica para diferenciação dos fenótipos do carcinoma de mama, segundo a Classificação Molecular. As lâminas obtidas por PAAF, foram revisadas em microscópio de multiobservação (BX50 Olympus®, Japan), por dois médicos patologistas (RMD e FMN), sendo estudados individualmente os cinco critérios citológicos: celularidade, coesão celular, necrose, nucléolo e atipia nuclear. Utilizou-se o teste exato de Fisher para testar a associação entre os critérios citológicos e os fenótipos do carcinoma de mama. RESULTADOS: Dos 297 casos selecionados, 169 foram incluídos, resultando nos seguintes fenótipos - luminal A: 107 (63.3%), luminal B: 39 (23.1%), superexpressão de HER2: 8 (4.7%), e triplo negativo: 15 (8.9%). Os critérios citológicos que se associaram ao fenótipo luminal foram: celularidade baixa ou moderada (40.4%) (OR = 7.12, IC95%: 1.61 - 31.52), nucléolo inconspícuo ou presente (55.5%) (OR = 8.31, IC95%: 2.36 - 29.19) e atipia nuclear discreta ou moderada (44.5%) (OR = 8.42, IC95%: 1.90 - 37.25). Os critérios citológicos associados ao fenótipo luminal A foram: nucléolo inconspícuo ou presente (62.6%) (OR = 2.99, IC95%: 1.39 – 6.41), menor perda de coesão celular (OR = 0.46, IC95%: 0.24 - 0.88), mostrando grupamentos com coesão celular moderada a intensa, e ausência de necrose (40.2%) (OR = 0.32, IC95%: 0.15 – 0.68). CONCLUSÃO: Os critérios citológicos presentes nas lâminas obtidas por PAAF, e que mais se associaram ao fenótipo luminal do carcinoma de mama foram celularidade baixa e moderada, nucléolos inconspícuos ou pequenos e atipia nuclear leve a moderada. Cabe destacar, que para o fenótipo luminal A, os critérios citológicos que mais se associaram foram: nucléolos inconspícuos ou pequenos, coesão celular moderada a intensa e ausência de necrose. A distinção do fenótipo luminal é de relevância clínica, por apresentar melhor prognóstico, relacionado a menor mortalidade e menores taxas de metástase. / Breast carcinoma is a heterogeneous disease. It can be classified into phenotypes based on the expression of certain proteins, with differences in prognosis. The luminal phenotype is the most common, accounting for about 70% of cases. Some specific treatments for this phenotype of breast carcinoma are already being studied, which could improve prognosis of affected patients. However, there is currently no consensus on which cytological criteria could predict the luminal phenotype. OBJECTIVE: To evaluate which cytological criteria in fine-needle aspiration (FNA) biopsy are related with the luminal phenotype of breast carcinoma. METHODS: This was a cross-sectional study with descriptive and comparative component from cases of breast carcinomas, from the Laboratory of Pathology, Hospital Amaral Carvalho de Jaú / São Paulo. FNA biopsy specimens and tissue sections (mastectomy specimens) of invasive ductal and lobular carcinomas of the breast, retrieved from 2000 to 2005, were selected and classified into phenotypes by immunohistochemistry, using tissue microarray technology (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland): luminal A and B, HER2 overexpression and triple negative. The cytological criteria for all cases were reviewed blindly by two pathologists using a multiobserver microscope (BX50 Olympus®, Japan), according to five cytological criteria: cellularity, cell cohesion, necrosis, nucleoli and nuclear atypia. Exact Fisher test was used to test the association between cytological criteria and phenotypes of breast carcinoma. RESULTS: From 297 selected patients, 169 were included, resulting in the following phenotypes - luminal A: 107 (63.3%), luminal B: 39 (23.1%), HER2 overexpression: 8 (4.7%), and triple negative: 15 (8.9%). The luminal phenotype showed mild or moderate cellularity (40.4%) (OR = 7.12, 95% CI: 1.61 - 31.52), inconspicuous or present nucleoli (55.5%) (OR = 8.31, 95% CI: 2.36 - 29.19) and mild or moderate nuclear atypia (44.5%) (OR = 8.42, 95% CI: 1.90 - 37.25). Inconspicuous or present nucleoli (62.6%) (OR = 2.99, 95% CI: 1.39 - 6.41), less dishesive cells (OR = 0.46, 95% CI: 0.24 - 0.88), showing clusters with moderate to intense cell cohesion (54.2%), and absence of necrosis (40.2%) (OR = 0.32, 95% CI: 0.15 - 0.68) were associated with luminal A phenotype. CONCLUSION: The individual FNA cytological criteria that might indicate the luminal phenotype of breast cancer were mild to moderate cellularity, inconspicuous or little nucleoli and mild to moderate nuclear atypia. Inconspicuous or little nucleoli, moderate to intense cell cohesion and absence of necrosis were associated with luminal A phenotype. The distinction of luminal phenotype of breast carcinoma is clinically relevant, since it has better prognosis, related to lower mortality and lower metastases rate.

Orientador: Rozany Mucha Dufloth / Resumo: O carcinoma de mama é uma doença heterogênea. Pode ser classificado em fenótipos, com diferentes prognósticos, com base na expressão de determinadas proteínas. O fenótipo luminal é o mais frequente, correspondendo a cerca de 70% dos casos, sendo que tratamentos específicos para este fenótipo de carcinoma de mama já estão em estudo, com melhora promissora do prognóstico das pacientes acometidas. Entretanto, ainda não foram definidos critérios citológicos que pudessem predizer este fenótipo no material obtido pela punção aspirativa por agulha fina (PAAF). OBJETIVO: Investigar critérios citológicos individuais presentes na PAAF que possam se associar com o diagnóstico do fenótipo luminal do carcinoma de mama. MÉTODOS: Trata-se de estudo tipo corte-transversal, com componente descritivo e comparativo. As lâminas de PAAF e espécimes de carcinomas de mama invasivos ductais e lobulares, do período de 2000 a 2005, foram selecionados do arquivo do Laboratório de Patologia do Hospital Amaral Carvalho de Jaú/São Paulo, totalizando 297 casos. Dos blocos doadores foram extraídos cilindros de 2mm de diâmetro e depositados nos blocos de parafina receptores, usando Tissue Microarrays (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland). Nestes cortes, foi feita a pesquisa imunoistoquímica para diferenciação dos fenótipos do carcinoma de mama, segundo a Classificação Molecular. As lâminas obtidas por PAAF, foram revisadas em microscópio de multiobservação (BX50 Olympus®, Japan), por dois médicos p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Breast carcinoma is a heterogeneous disease. It can be classified into phenotypes based on the expression of certain proteins, with differences in prognosis. The luminal phenotype is the most common, accounting for about 70% of cases. Some specific treatments for this phenotype of breast carcinoma are already being studied, which could improve prognosis of affected patients. However, there is currently no consensus on which cytological criteria could predict the luminal phenotype. OBJECTIVE: To evaluate which cytological criteria in fine-needle aspiration (FNA) biopsy are related with the luminal phenotype of breast carcinoma. METHODS: This was a cross-sectional study with descriptive and comparative component from cases of breast carcinomas, from the Laboratory of Pathology, Hospital Amaral Carvalho de Jaú / São Paulo. FNA biopsy specimens and tissue sections (mastectomy specimens) of invasive ductal and lobular carcinomas of the breast, retrieved from 2000 to 2005, were selected and classified into phenotypes by immunohistochemistry, using tissue microarray technology (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland): luminal A and B, HER2 overexpression and triple negative. The cytological criteria for all cases were reviewed blindly by two pathologists using a multiobserver microscope (BX50 Olympus®, Japan), according to five cytological criteria: cellularity, cell cohesion, necrosis, nucleoli and nuclear atypia. Exact Fisher test was used to test the association between cy... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre