Orientador: Marcelo Alexandre Prado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-08T04:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Berbel_MileneMartins_M.pdf: 573008 bytes, checksum: d4601d8274ee5f1915d5900d3f96c749 (MD5) Previous issue date: 2007 / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Um método para determinação de praguicidas das classes organofosforados, carbamatos, triazinas e ureias por HPLC-MS/MS em urina de pessoas expostas em decorrência de atividades agrícolas é proposto neste trabalho. O modo de eluição isocrática e gradiente em cromatografia líquida de fase reversa com a coluna Synergi Max RP (150 x 4,6 mm, 4 µm) foram experimentados para a separação dos componentes da amostra. O modo isocrático de eluição nas condições 45:55, 60:40 e 70:30 de ACN/água foram insuficientes para eluição dos componentes da amostra com fatores de retenção aceitáveis entre 0,5 e 20. Em modo gradiente, os efeitos do tempo de gradiente (30 a 100 min), a concentração inicial de ACN (8 a 14%), vazão da fase móvel (0,5 a 1,0 mL min-1) e temperatura (30 a 40 °C) foram verificados para aumento de resolução e diminuição do tempo de análise. Em composições distintas de fase móvel (ACN/água), o logaritmo dos fatores de retenção foi colocado em gráfico em função da acidez (α) e a basicidade (β) da ligação de H, constante dielétrica (ε) e parâmetro de solubilidade de Hildebrand (δH). Dimetoato e metomil tiveram comportamentos diferenciados, ambos explicados pelas ligações de H intramoleculares. Através de um planejamento fatorial completo de dois níveis, usando-se as funções COF e CRS como resposta, variáveis como vazão da fase móvel, tempo de gradiente, concentração inicial de ACN e temperatura foram investigados. A melhor resposta experimental forneceu como condições de análise: 0,5 mL min-1, 40 °C, 75 min e 5% de ACN, para vazão, temperatura, tempo de gradiente e concentração inicial de ACN, respectivamente. Em um sistema LC-MS/MS usando o ion trap como analizador de massas, a infusão direta dos padrões de praguicidas, para conhecimento do pico do íon molecular e das transições MS/MS, foi estudada. Experimentos de quantificação em UPLC-MS/MS foram baseados na separação em fase reversa com a coluna ACQUITY UPLC HSS T3 (50 x 2,1 mm, 1,8 µm), espectrômetro de massas equipado com analizador de massas triplo quadrupolo e modo positivo de ionização. Transições MRM de quantificação e de confirmação foram monitoradas para cada praguicida. O método apresentou respostas lineares no intervalo de 0,25 a 50 µg L-1 para todos os praguicidas com coeficiente de determinação maiores que 0,999. O LD do método variou de 0,192 a 3,19 µg L-1. O LQ do método variou entre 0,582 e 13,6 µg L-1, com coeficiente de variação inferior a 20% CV. As recuperações em amostras fortificadas em 0,75 µg L-1 variaram entre 55,7 e 72,6% e a precisão em termos de %CV entre 1,94 e 19,1%. As recuperações em amostras fortificadas em 10 µg L-1 variaram entre 99,1 a 105% e a precisão entre 0,751 e 8,98% CV. As recuperações em amostras fortificadas em 50 µg L-1 variaram entre 99,5 a 101% e a precisão entre 0,877 e 5,94% CV. Das 25 amostras quantificadas, 13 apresentaram concentrações dos praguicidas na faixa linear da curva de calibração. Estes valores de concentração variaram entre 10 e 50 µg L-1. / In this work a method for determination of different chemical groupes of pesticides (organophosphorus, carbamates, triazines, organochlorine and ureas) is proposed using HPLC-MS/MS in samples from occupational exposed agriculture workers. Isocratic and gradien elution in reversed-phase chromatography using a Synergi Max RP (150 x 4,6 mm, 4 µm) column were investigated for separation proposal. Isocratic elution conditions 45:55, 60:40, 70:30 ACN/water provided unsatisfactory results with retention factor from 0.5 to 20. In gradient elution, effects of gradient time (30 to 100 min), initial concentration of ACN (8 to 14%), flow rate (0.5 to 1 mL min-1) and temperature (30 to 40 °C) were studied for increasing resolution and decreasing analysis time. For different proportion of ACN in the mobile phase, the logarithm of retention factor has been ploted against solvent hydrogen-bond donor (α), solvent hydrogen-bond acceptor (β), dieletric constant (ε) and Hildebrand solubility (δH). Dimethoate and methomyl presented different behaviour in relation to others, explained by H intramolecular bond. Applying a two level experimental design having as response functions COF and CRS, combined factors such as flow rate, gradient time, ACN initial concentration and temperature were investigated. Optimal conditions were obtained in 0.5 mL min-1, 40 °C, 75 min e 5% CAN, for flow rate, temperature, gradient time and ACN initial concentration, respectively. Applying a LC-MS/MS system equipped with an ion trap mass analyzer, direct infusion of standard solutions of pesticides for knowledge of ion molecular peak and their MRM transitions was obtained. Quantitative experiments using UPLC-MS/MS were based in reversed-phase separation with a Acquity UPLC HSS T3 (50 x 2,1 mm, 1,8 µm) column, mass spectrometry instrument equipped with triple quadrupole mass analyzer at positive ion polarity. Quantifying and confirming ion transitions were monitored for each pesticide compound. Linearity in range of 0.25 to 50 µg L-1 was established for all pesticides with high coefficients determination R2 0.999 were obtained. The method LOD varied between 0.192 to 3.19 µg L-1. LOQ varied from 0.582 to 13.6 µg L-1, with coefficient variation below 20% CV. Recoveries for samples spiked at 0.75 µg L-1 concentration level varied from 55.7 to 72.6% and precision in terms of CV between 1.94 and 19.1% CV. Spiked samples at 10 µg L-1 concentration level varied from 99.1 to 105% and precision between 0.751 and 8.98% CV. Recoveries for samples spiked at 50 µg L-1 concentration level varied from 99.5 to 101% and precision from 0.877 to 5.94% CV. From 25 samples quantified, 13 presented concentration values in linear range of the calibration curve. These values varied from 10 to 50 µg L-1.

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-19T15:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pane_DanieladeQueiroz_D.pdf: 2989651 bytes, checksum: 1f92009c2aa35df54d0c45737049c170 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Foi desenvolvido um novo método, eficiente e econômico, para a análise simultânea de cinco edulcorantes em alimentos (acessulfame-k, sacarina, ciclamato, aspartame e neotame) pela técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). O método foi validado e aplicado em diferentes produtos da categoria "light¿, "diet¿ e "zero¿, sendo esses refrigerantes, néctares, pós para preparo de refresco, pudins, cappuccinos, achocolatados, geléias, gelatina, molho tipo "barbecue¿, catchup e adoçantes de mesa. Para tanto, utilizou-se uma coluna C18, fase móvel composta por fase aquosa (5 mM de tampão fosfato de sódio monobásico; pH 7) e fase orgânica (acetonitrila), eluição por gradiente, vazão de 0,4 mL.min-1 e temperatura de 56ºC. Os edulcorante apresentaram adequada linearidade na faixa de trabalho. A repetitividade, a precisão intermediária e os limites de detecção e de quantificação foram adequados para os cinco edulcorantes. As taxas de recuperação variaram entre 85,2% e 101,4%, para as diferentes matrizes avaliadas. O método apresentou uma limitação para as amostras contendo cacau, onde não foi possível determinar o ciclamato em virtude da presença de um interferente. Até três edulcorantes utilizados em combinação foram encontrados nas amostras, sendo acessulfame-k e aspartame os mais comumente empregados. As amostras de pudim sabor chocolate, molho tipo "catchup¿ e molho tipo "barbecue¿ apresentaram concentrações de edulcorantes acima do permitido pela legislação brasileira. As amostras de refrigerante sabor limão, sabor guaraná, tipo cola e de refresco em pó, embora estivessem atendendo a legislação, apresentaram teor de edulcorantes acima do declarado no rótulo. O método desenvolvido por HPLC foi comparado a uma metodologia por cromatografia líquida de ultra eficiência (UPLC) e apresentou maior robustez e menor custo em comparação ao desenvolvimento para UPLC. Já o método por UPLC demonstrou baixo consumo de solventes, tempo curto de análise, menores limites de detecção e de quantificação, no entanto, maior custo devido ao preparo das amostras e à coluna, solventes, reagentes e filtros envolvidos nas análises / Abstract: We developed a new method, efficient and economical, for the simultaneous analysis of five sweeteners in foods (acesulfame K, saccharin, cyclamate, aspartame and neotame) technique for high performance liquid chromatography (HPLC). The method was validated and applied to different products in the "light", "diet" and "zero", and these soft drinks, nectars, powders for preparation of soft drinks, puddings, cappuccino, chocolate, jams, jelly, sauce type "barbecue" , ketchup and tabletop sweeteners. To both, we used a C18 column, mobile phase consisting of aqueous phase (5 mM sodium phosphate buffer monobasic; pH 7) and organic phase (acetonitrile), gradient elution, flow of 0.4 mL.min-1 and temperature of 56 º C. The sweetener showed acceptable linearity in the range of work. The repeatability, intermediate precision and limits of detection and quantification were adequate for the five sweeteners. Recovery rates ranged between 85.2% and 101.4% for the different matrices evaluated. The method has a limitation for samples containing cocoa, which was not possible to determine cyclamate because of the presence of an interferer. Up to three sweeteners used in combination were found in the samples, with aspartame and acesulfame-k the most commonly employed.Samples of chocolate pudding flavored sauce like "ketchup" sauce like "barbecue" sweeteners showed concentrations above those permitted by Brazilian law. Samples of lemon-flavored soda, flavored guarana, cola and powdered drink mixes, although they were given the rules presented above sweeteners content declared on the label. The method developed HPLC method was compared to an ultra performance liquid chromatographic efficiency (UPLC) and showed greater robustness and lower cost compared to developing for UPLC. Have the method by UPLC demonstrated low consumption of solvents, short time of analysis, lower limits of detection and quantification, however, higher cost due to preparation of samples and the column, solvents, reagents and filters involved in the analyzes / Doutorado / Ciência de Alimentos / Doutor em Ciência de Alimentos

The diclofenac potassium (DPt) is a derivate of phenylacetic acid, with proprietary anti-inflammatory, analgesic and antipyretic, thus indicated for the relief of low back pain, rheumatoid arthritis and postoperative pain. The DPt is in the market for oral suspension dosage forms, dragee, suppository, injectable solution, dispersible tablet and tablet. However not been found in literature analytical method for determination of DPt in oral suspension. There are also no reports of methods for evaluating the in vitro dissolution of oral suspension containing the drug. Thus, in the present work were developed and validated methods by liquid chromatography high efficiency for the quantification and assessment of drug dissolution in oral suspension. Quantification of DPt was performed using column C8, mobile phase consisting of methanol and phosphate buffer pH 2.5 with a flow rate of 1.0 mL/min. The quantitative method was shown to be specific, even in the presence of possible degradation products, good linearity (r = 1.0), precise (RSD < 2.0%) and having adequate accuracy and robustness. The drug demonstrated to be stable under alkaline conditions and high temperature, but showed instability when exposed to conditions acid, oxidative and in the presence of ultraviolet radiation. To develop the method of dissolving the best conditions were 900 mL of aqueous solution containing 0.3% of sodium laurylsulfate, maintained at 37.0 ± 0.5 ºC, using paddle apparatus with rotation speed of 50 rpm. Thus, the release of DPt was greater than 85.0% at 30 minutes for both batches evaluated. The validated method proved to be specific, linear (r > 0.99), and showed precision and accuracy satisfactory. We also evaluated the stability of the drug in the dissolution medium selected, and the possible adsorption of the drug on the paper filter used. For both the test results were satisfactory. Thus, the methods developed and validated may be used as routine methods in quality control for the quantification and evaluation of the dissolution profile of DPt oral suspension. / O diclofenaco potássico (DPt), fármaco derivado do ácido fenilacético, apresenta propriedade anti-inflamatória, analgésica e antitérmica, sendo assim indicado para o alívio da dor na região lombar, artrite reumatoide e dor pós-operatória. O DPt encontra-se no mercado nas formas farmacêuticas de suspensão oral, drágea, supositório, solução injetável, comprimido dispersível e comprimido, no entanto não foram encontrados na literatura métodos analíticos para determinação de DPt em suspensão oral. Também não há relatos de métodos para avaliação da dissolução in vitro de suspensão oral contendo este fármaco. Desta forma, no presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por cromatografia a líquido de alta eficiência para quantificação e avaliação da porcentagem dissolvida do fármaco. A determinação quantitativa foi realizada utilizando coluna C8, fase móvel composta de metanol e tampão fosfato pH 2,5 e fluxo de 1,0 mL/min. O método quantitativo apresentou ser especifico, mesmo na presença de possíveis produtos de degradação, boa linearidade (r = 1,0), preciso (DPR < 2,0%) ser exato e robusto. O fármaco demonstrou ser estável em condições alcalinas e a alta temperatura, porém demonstrou instabilidade quando exposto a condições ácidas, oxidativas e na presença da radiação ultravioleta. Para o desenvolvimento do método de dissolução utilizou-se como meio 900 mL de solução aquosa contendo 0,3% de laurilsulfato de sódio, mantida a 37,0 ± 0,5 ºC, utilizando aparato pá com velocidade de rotação de 50 rpm. Nestas condições, a liberação de DPt foi superior a 85,0% em 30 minutos para ambos os lotes avaliados. O método validado demonstrou ser específico, linear (r > 0,99), e apresentou precisão e exatidão satisfatórias. Também se avaliou a estabilidade do fármaco no meio de dissolução, assim como a possível adsorção do fármaco no papel de filtração utilizado. Para ambos os ensaios os resultados encontrados foram satisfatórios. Desta forma, os métodos desenvolvidos e validados podem ser utilizados como métodos de rotina no controle de qualidade para quantificação e avaliação do perfil de dissolução de DPt suspensão oral.

Due to high global energy demand and a concern for environmental preservation, a renewable energy source is becoming a very important strategy. In this sense, a cellulose is one of the most abundant and promising renewable resources, as its treatment by hydrolysis reaction are obtained biofuels and inputs of great industrial interest, such as: hydroxymethylfurfural (HMF), dihydroxyacetone (DHA), pyruvatedehyde, glyceraldehyde Acetic, formic, lactic and levulic acids. Therefore, the present work proposes an optimization and validation of an analytical methodology in the technique of high performance liquid chromatography (HPLC) for the determination of cellulose conversion products. The optimization of the proposed method was evaluated in a univariate and multivariate fashion. In the HPLC-optimized method, a cation exchange column, a solution of H 2 SO 4, was used as mobile phase with pH = 1.41, column temperature and detector of 42 ° C and 30 ° C respectively, flow of 0.9 mL / Min and total analysis time of 25.40 minutes. 10 analytical standards (glucose, fructose, glyceraldehyde, pyruvate, lactic acid, dihydroxyacetone, formic acid, acetic acid, levulinic acid and HMF) were used for this study. The HPLC method was validated by parameter selection, selectivity, linearity, limit of detection and limit of quantification, precision (repeatability, intermediate precision, instrumental accuracy), accuracy and robustness. These have been taken into consideration both the area and the height of the peaks. Analytical curves showed correlation coefficient ≥ 0.9972. The proposed methodology proved to be sensitive and accurate for a range of 5 to 500 μg / mL. In the instrumental precision, intermediate accuracy and repeatability values of CV ≤ 6,33% were obtained. Accuracy offers assessment methods from 90.58 to 106.87%, the proposed method is robust only for small variations of pH (± 1) and temperature (± 5) for dihydroxyacetone, glucose and pyruvate, which can be explained by the high temperature and pH values. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Devido à grande demanda energética global e a preocupação com a preservação ambiental, a utilização de fontes de energia renovável está se tornando uma estratégia muito importante. Neste sentido, a celulose é atualmente um dos recursos renováveis mais abundantes e promissores, pois através do seu processamento pela reação de hidrólise são obtidos biocombustíves e insumos de grande interesse industrial, como: hidroximetilfurfural (HMF), dihidroxiacetona (DHA), piruvaldeído, gliceraldeído e os ácidos acético, fórmico, lático e levulínico. Diante disso, o presente trabalho propõe a otimização e a validação de uma metodologia analítica baseada na técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinação dos produtos da conversão da celulose. A otimização do método proposto foi avaliada de forma univariada e de forma multivariada. No método otimizado por HPLC utiliza uma coluna de troca catiônica, uma solução de H2SO4, como fase móvel com pH=1,41, temperatura da coluna e do detector de 42˚C e 30˚C, respectivamente, fluxo de 0,9 mL/min e tempo total de análise de 25,40 minutos. Para este estudo foram utilizados 10 padrões analíticos (glicose, frutose, gliceraldeído, piruvaldeído, ácido lático, dihidroxiacetona, ácido fórmico, ácido acético, ácido levulínico e HMF). O método de HPLC foi validado através da verificação de parâmetros como, seletividade, linearidade, limite de detecção e limite de quantificação, precisão (repetitividade, precisão intermediária, precisão instrumental), exatidão e robustez. Estes parâmetros foram avaliados levando-se em consideração tanto a área quanto à altura dos picos. As curvas analíticas apresentaram coeficiente de correlação ≥ 0,9972. A metodologia proposta mostrou-se sensível e precisa para a faixa de concentração adotada de 5 a 500 μg/mL. Na precisão instrumental, precisão intermediária e repetitividade foram obtidos valores de CV ≤ 6,33%. A exatidão do método apresentou valores de recuperação de 90,58 a 106,87%, o método proposto é robusto apenas para pequenas variações de pH (±1) e temperatura (±5) para dihidroxiacetona, glicose e piruvaldeído, fato que pode ser explicado pelo alto valor de temperatura e pH, ficando esta variação para estudos futuros.

This thesis deals with the content of adaptogens in vegetable Schizandra chinensis. The theoretical part deals with the plant Schisandra chinensis, its occurrence, characteristics, uses and cultivation. Location of plants Schisandra chinensis are classified according to Köppen climate classification and compared with the climate in the Czech Republic, due to possible prediction of growing plants in the country. Further are described adaptogens (bioactive substances) contained in this plant and to methods for their extraction and analysis. The experimental part of the thesis deals with the identification of schisandrin in the plant Schisandra chinensis grown in our conditions. The assessment was performed by ultra-performance liquid chromatography (UPLC), high-performance liquid chromatography (HPLC) and direct injection into tha mass spectrometry (MS). Schisandrin was successfully identified in all the samples.

No description available.

The study of pharmaceutical preformulation includes the evaluation of pharmacokinetic, pharmacodynamic and physicochemical properties of the drug molecules that aid the formulation. However, it has a limited role in determining drug dosage optimisation in the formulation. The study of drug-Plasma Protein Binding (PPB), and the lipophilicity, solubility, and ionic behaviours of the desired drug molecules addresses the gap and enhances our undertraining related to the behaviour of the drug molecules in the body. The High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) technique was used in the current study to assess drug-PPB interaction. Using Michael Abraham’s ‘Linear Free Energy Relationship’ (LFER) method, two major plasma proteins namely, Human Serum Albumin as HSA and α-1-Acid Glycoprotein as AGP, were used and the structural properties governing drug-plasma protein binding was determined. This is the first time that the effect of ionised species on PPB has been quantitatively evaluated. In addition, the molecular interactions also play a key role in the supramolecular complexes of co-crystals. The project also evaluated the co-crystallisation process and its effect on physicochemical properties of the drug. In the current study, amino acids (AAs) have been observed to be a prominent source of coformers. The AAs showed co-crystals formation with carboxylic acids, nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID) and citric acid which overcome the hygroscopicity problems and improved the physical stability issues during storage. This study has also identified a new formulation which is helpful for improvement in the stability of effervescent tablets at various relative humidity (RH) conditions which will reduce the manufacturing cost associated with the production of effervescent tablets.

Pharmaceuticals with suitable therapeutic properties often found to encounter challenges with dosage form development due to their poor physicochemical properties. Aim of thesis is to evaluate potential of crystal engineering directed cocrystallisation of active ingredients in modulating their physical attributes. The model compounds considered are isoniazid, caffeine, nifedipine, glyburide, chlorpropamide and riboflavin. Co-formers selected are based on the suitability of functional groups for hydrogen bond formation. Co-crystal screening and preparation methods used include neat grinding (NG), liquid assisted grinding (LAG) and solution crystallisation. Antituberculosis drug, isoniazid, upon cocrystallisation with melamine, solubility has reduced as per high performance liquid chromatography assay, however, antimicrobial properties determined using REMA assay confirms that cocrystal anti-mycobacterial activity is not compromised. Next, caffeine-glutaric acid cocrystal polymorphic forms (Forms I and II) subjected to mechanical property evaluations in multiple faces using nanoindentation and correlated relationship between crystal structure and mechanical property. The results suggest that metastable form, Form I, could display suitable tablet properties to that of thermodynamically stable form, Form II. Subsequently, photosensitive drug, nifedipine, cocrystallised with theophylline and caffeine. Notably, photochemical stability along with solubility and drug release of cocrystals is found to be superior to that of nifedipine. Lastly, crystal engineering principles utilised in preparation of multicomponent crystals of antidiabetic model drugs, glyburide and chlorpropamide with various coformers. Interestingly, during the preparation of chlorpropamide-2-nitrobenzyl alcohol, high Z prime crystal (Z’=3) of 2- nitrobenzyl alcohol is serendipitously identified. In conclusion, crystal engineering based cocrystallisation is a viable technology for modulating physicochemical properties of pharma and nutraceuticals.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.