En el presente trabajo se analiza, desde el punto de vista teórico a través de cálculos mecanocuánticos, el comportamiento dador del ferroceno, de potencial utilidad en procesos de reconocimiento de cationes metálicos, así como la estabilización de deficiencias electrónicas en  a grupos ferrocenilo. Esto permite el estudio del fenómeno de transferencia electrónica intramolecular en diferentes tríadas ferroceno-puente-aceptor, así como el efecto de la naturaleza y longitud de espaciadores -conjugados, por medio de parámetros geométricos (alternancia de enlace) y electrónicos (grado de transferencia electrónica, gap, momento dipolar,..) de la molécula. Por otra parte, es importante conocer el mecanismo intrínseco por el cual se produce la variación de la capacidad conductora mono o bidireccional de un hilo o conductor molecular, al objeto de poder así optimizar el diseño del cable según el tipo de propiedades (conductor bidireccional, diodo o semiconductor, interruptor, etc.) que se desee obtener. Para tal fin, el estudio teórico se centra tanto en las características geométricas como en la estructura electrónica de diferentes cables moleculares con estructura ferroceno-puente-aceptor, y en cómo la variación de estas características estructurales están relacionadas con el fenómeno de la conducción electrónica a lo largo de dicho cable molecular. El cálculo de las geometrías de los compuestos objeto de estudio se ha llevado a cabo a nivel DFT, utilizando o bien el paquete Gaussian09 o el paquete ORCA v. 2.9. El funcional empleado ha sido el B3LYP y las “basis set” utilizadas para optimizaciones han sido funciones de Pople 6-31G* durante la primera etapa cronológica del presente trabajo, o la def2-TZVP162,163 de Ahlrichs en el resto. En las optimizaciones con ORCA se incluye la corrección semiempírica de Grimme, que tiene en consideración la mayor parte de fuerzas dispersivas que contribuyen a la energía. El estudio computacional deja claro que el ferroceno actúa como especie dadora de electrones frente a una serie de electrófilos externos mediante cesión de un par electrónico no enlazante del átomo de hierro o bien a través de electrones localizados en los ligandos Cp. Por otro lado, el estudio de la distorsión del enlace exocíclico en la unidad ferrocénica, con respecto a su desviación de la coplanaridad con el anillo Cp, muestra, en general, que existe una buena relación entre la estabilización de la carga positiva o deficiencia electrónica del átomo exocíclico directamente unido al ferroceno, con la variación de algunos parámetros geométricos y electrónicos. Y por último, el estudio de un conjunto de compuestos push-pull (Dador-puente-Aceptor) y bismetalocénicos unidos a través de diferentes puentes -conjugados, muestra que es posible la transferencia electrónica intramolecular entre los dos centros electroactivos o interacción entre los centros metálicos. Además, en algunos casos concretos es posible detectar la funcionalidad del puente como interruptor o amplificador cuando son sometidos a un proceso reversible de protonación-desprotonación. Así, los puentes tipo imina (-CH=N-) y 2-aza-1,3-butadieno (AZD) presentan comportamiento direccional por protonación, actuando como interruptor en el caso de las iminas ("12") y los azadienos D-AZD-A ("14"), en tanto que los isómeros D-CH=N-A ("12") y A-AZD-D ("14") muestran comportamiento amplificador. / The aim of the present work is to analyze, from the theoretical point of view through quantum chemical calculations, the potentially useful donor behaviour of ferrocene in recognition processes of metal cations, as well as the stabilization of electronic deficiencies  to ferrocenyl groups. This allows the study of intramolecular electron transfer phenomenon in a variety of ferrocene-bridge-acceptor triads, as well as the effect of the nature and length of -conjugated spacers by means of geometric (bond alternation) and electronic (degree of electronic transfer, gap, dipole moment, ...) parameters of the molecule. On the other hand, it is important to know the inherent mechanism by which the variation of the mono or bi-directional conductive capacity of a molecular cable occurs, in order to optimize its design according to the type of properties (bi-directional driver, or semiconductor diode, switch, etc.) to be obtained. For this purpose, the theoretical study is focused on both the geometrical features and the electronic structure of different molecular cables with ferrocene-bridge-acceptor structure and how the variation of these structural characteristics are related to the phenomenon of electron transfer along the molecular cable. Calculated geometries of the compounds under study were fully optimized at the DFT level with the Gaussian 09 or ORCA v. 2.9 packages, using the B3LYP functional. As "basis sets", Pople 6-31G* functions for the first chronological stage of this work or Ahlrichs def2-TZVP in the rest, were used. In all optimizations with ORCA, Grimme's semi-empirical correction taking into account most dispersive forces that contribute to energy was employed. The computational study shows that ferrocene acts as electron donor species towards a variety of external electrophiles through either a nonbonding electron pair at the iron atom or through electrons located at the Cp ligands. On the other hand, the study of exocyclic bond distortion in the ferrocene unit, in a wide range of monofunctionalized ferrocenes, with respect to their deviation from coplanarity to the Cp moiety, shows that there is a good relationship between the stabilization of positive charges or electron deficiencies at the exocyclic atom directly bound to ferrocene, with some geometric and electronic parameters. Finally, the study of a set of push-pull compounds with donor-bridge-acceptor structure and bismetallocenes linked through different -conjugated bridges shows that intramolecular electron transfer between the two electroactive (or metal) centres is indeed possible. In addition, in some particular cases it is possible to detect a switch or amplifier functionality when a reversible protonation-deprotonation process takes place. Thus, imine (-CH=N-) and 2-aza-1,3-butadiene (AZD) bridges exhibit directional behaviour on protonation, as they act as a switch in case of imines A-CH=N-D (12) and azadienes D-AZD-A (14) systems, whereas their D-CH=N-A (12) and A-AZD-D (14) isomers behave as amplifiers.

OBJETIVOS: Estudiar el efecto de dos bisfosfonatos sobre el hueso mandibular de ratas Sprague-Dawley. MATERIAL Y MÉTODO: 70 ratas, divididas en 7 grupos: grupo control, 3 grupos que recibieron de forma sistémica pamidronato disódico a dosis de 3 mg/kg/día durante 1, 2 y 3 semanas respectivamente, y 3 grupos que recibieron ácido zoledrónico a dosis de 0’80 mg/kg/semana durante 1, 2 y 3 semanas. Realizamos exodoncias del molar inferior derecho, y se sacrificaron a los 14 días. Se realizó la medición de: área de neoformación ósea, mediante radiología; densidad vascular y ósea, mediante esterología; y microanálisis de elementos (Ca y P), mediante EDX. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: La administración tanto de pamidronato disódico como de ácido zoledrónico aumentó la neoformación ósea en el alveolo post-extracción, así como la densidad ósea mandibular. La administración de ácido zoledrónico además causó disminución de la densidad vascular y aumento del Ca y P en el hueso post-extracción en ratas. / OBJECTIVES: Study the effect of two bisphosphonates on mandibular bone in Sprague-Dawley rats. MATERIAL AND METHODS: 70 rats, divided into 7 groups: group control, 3 groups receiving systemic dose of disodium pamidronate (3 mg/kg/day) during 1, 2 and 3 weeks respectively, and 3 groups receiving zoledronic acid at doses of 0'80 mg/kg/week for 1, 2 and 3 weeks. We did the extraction of the right lower molar, and then sacrificed the animals 14 days after the surgery. We measured in our study: new bone formation, through radiology; vascular and bone density, using esteorology; and microanalysis of elements (Ca and P) by EDX. RESULTS AND CONCLUSIONS: The administration of disodium pamidronate and zoledronic acid increased the new bone formation in the post-extraction socket, as well as higher mandibular bone density. The administration of zoledronic acid also caused decrease of vascular density and an increase of Ca and P in rats post-extraction bone.

1. OBJETIVOS Esta Tesis se enmarca dentro de una línea de investigación consistente en la síntesis de complejos de Pd(II) con ligandos arilo sustituidos en orto, y la investigación de su reactividad frente a moléculas orgánicas insaturadas. Con frecuencia, se produce la inserción de dichas moléculas en el enlace aril-Pd, acompañada en ocasiones por su interacción con el sustituyente en orto, formando nuevos complejos (frecuentemente ciclopaladiados) o, tras reacciones de despaladación, moléculas orgánicas de interés. Nuestro grupo de investigación está intentando extender esta reactividad a arenos di- o tripaladiados, con sustituyentes en orto a cada átomo de Pd, con el objetivo de obtener novedosos complejos polinucleares o compuestos orgánicos policíclicos. De acuerdo con estos antecedentes, nos propusimos los siguientes objetivos: 1. Investigar la posibilidad de preparar nuevos arenos mono-, di- o tripaladiados con grupos R en orto, con especial énfasis en compuestos con R = CH2OH, que no habían sido investigados con anterioridad, y cuya reactividad se quería comparar con la encontrada para complejos en los que R = OH. 2. Preparar complejos dinucleares de Pd(II) con un ligando 2,5-diestirilbenceno y estudiar su reactividad frente a alquinos, con el objetivo de obtener indacenodiil complejos dinucleares. Investigar también su reactividad frente a otras moléculas insaturadas, como isocianuros. 3. Preparar complejos dipaladiados derivados del tereftaldehído y estudiar su reactividad frente a moléculas insaturadas. 2. METODOLOGÍA Por adición oxidante de mono-, di- o trihaluros de arilo sustituidos sobre [Pd(dba)2] y en presencia de ligandos auxiliares como bpy, tbbpy, tmeda o fosfinas, se prepararon arenos mono-, di- o tripaladiados sustituidos en orto. En el caso de los trihaluros se investigó la influencia de la naturaleza del areno, los ligandos auxiliares y las condiciones de reacción en el número de átomos de Pd que se coordinan al areno. Se investigó la reactividad de los complejos preparados frente a moléculas orgánicas insaturadas, tales como alquinos, isocianuros, monóxido de carbono o carbodiimidas, obteniéndose nuevos complejos, normalmente resultado de la inserción de estas moléculas en los enlaces aril-Pd. En ocasiones se produjeron reacciones de despaladación formándose compuestos orgánicos de interés. Los nuevos productos se caracterizaron mediante espectroscopia de IR y de RMN, así como por análisis elemental o espectroscopia de masas y, en algunos casos, mediante estudios de difracción de rayos X. 3. RESULTADOS 1) Se han preparado nuevos arilcomplejos de Pd(II) mononucleares derivados del alcohol bencílico y se ha investigado su reactividad frente a distintas moléculas orgánicas insaturadas, obteniéndose nuevos complejos derivados de reacciones de inserción en el enlace aril-Pd y O-Pd (esto último en un derivado ciclopaladiado, que a su vez actúa como nucleófilo frente a haluros de arilo). La adición de Ag+ es necesaria en algunas de estas reacciones de inserción, habiéndose obtenido incluso un derivado heterometálico del tipo Pd2Ag. 2) Se han preparado complejos mono- y dinucleares de Pd(II) con el ligando 2,5-diestirilbenceno y se ha investigado su reactividad frente a alquinos e isocianuros, obteniéndose nuevos complejos dinucleares, entre ellos novedosos indacenodiilcomplejos de Pd(II). 3) Se han preparado complejos dinucleares de Pd(II) derivados del tereftaldehído, en los que se han llevado a cabo por primera vez reacciones de inserción de monóxido de carbono y de xiliisocianuro en dos enlaces aril-Pd en el mismo anillo aromático. 4) Se han preparado nuevos arilcomplejos de Pd(II) trinucleares, y se ha conseguido la inserción de xililisocianuro en tres enlaces aril-Pd en el mismo anillo aromático. 5) Se ha realizado una estancia de tres meses en la Universidad de Lisboa, durante la cual se han preparado e investigado nuevos complejos bis(tetrazolato) de Pd(II). / 1. OBJECTIVES This Thesis follows a research line focused on the synthesis of ortho-substituted arylpalladium(II) complexes and the investigation of their reactivity towards unsaturated molecules. These reactions often result in the insertion of these molecules into the aryl-Pd bond, sometimes followed by their interaction with the substituent in ortho position, forming new complexes (often cyclopalladated) or, after depalladation reactions, interesting organic molecules. Our research group is trying to extend this reactivity to di- or tripalladated arenes, with substituents in ortho position to each Pd atom, with the aim of obtaining new polynuclear complexes or polycyclic organic compounds. According to these antecedents, we aimed at the following goals: 1. Investigate the possibility of preparing new mono-, di-, or tripalladated arenes with R substituents in ortho position, with special emphasis on compounds with R = CH2OH, which had not been investigated before. Their reactivity would be compared with that of related complexes with R = OH 2. Prepare dinuclear Pd(II) complexes with a 2,5-distyrylbencene ligand and investigate their reactivity toward alkynes, with the aim of obtaining dinuclear indacenediyl complexes. Investigate also their reactivity towards other unsaturated molecules, such as isocyanides. 3. Prepare dinuclear Pd(II) complexes derived from terephthalaldehyde and investigate their reactivity toward unsaturated molecules. 2. METHODOLOGY ortho-Substituted mono-, di-, or tripalladated arenes were prepared by oxidative addition of aryl mono-, di-, or trihalides to [Pd(dba)2] in the presence of auxiliary ligands, such as bpy, tbbpy, tmeda, or phosphines. In the reactions with trihalides the influence of the arene, the auxiliary ligands, and the reaction conditions on the number of Pd atoms coordinated to the arene was investigated. The reactivity of the new complexes towards unsaturated organic molecules, such as alkynes, isocyanides, carbon monoxide or carbodiimides was investigated, resulting in the formation of new complexes, usually derived from the insertion of these molecules into the aryl-Pd bonds. In a few occasions, depalladation reactions took place, resulting in interesting organic compounds. The new products were characterized by IR and NMR spectroscopy, as well as by elemental analysis or mass spectroscopy. X-ray diffraction studies were conducted on some of them. 3. RESULTS 1) New mononuclear arylpalladium(II) complexes derived from benzyl alcohol have been prepared, and their reactivity towards unsaturated organic molecules has been investigated, resulting in new complexes derived from insertion reactions into the aryl-Pd or O-Pd bond (the latter in a cyclopalladated derivative, which also reacts as a nucleophile towards aryl halides). The presence of Ag+ is a requirement in some of these insertion reactions, and a heterometallic Pd2Ag derivative has been obtained as well. 2) New mono- and dinuclear Pd(II) complexes with a 2,5-distyrylbenzene ligand have been prepared, and their reactivity towards alkynes and isocyanides has been investigated, resulting in new dinuclear complexes, among them some novel indacenediyl Pd(II) complexes. 3) Dinuclear Pd(II) complexes derived from terephthalaldehyde have been prepared, and in their reactions with carbon monoxide and xylylisocyanide, the insertion of these molecules into two aryl-Pd bonds on the same aryl ring has been achieved for the first time. 4) New trinuclear arylpalladium(II) complexes have been prepared, and the insertion of xylylisocyanide into three aryl-Pd bonds on the same aryl ring has been achieved. 5) During a 3-month research stay at the University of Lisbon the synthesis and reactivity of new Pd(II) bis(tetrazolato) complexes was investigated.

La osteoporosis y la artrosis son enfermedades cada vez más prevalentes en nuestro medio debido al aumento de la esperanza de vida, estando muy influenciadas por factores ambientales y genéticos. El objetivo de este estudio fue determinar la implicación de algunos mecanismos epigenéticos en estas enfermedades, mediante el análisis de expresión de microRNAs. Hemos analizado los microARNs en muestras de hueso de sujetos con osteoporosis (n=8) y artrosis (n=8), determinando las diferencias de expresión en los microRNAs mediante arrays. Encontramos diferencias significativas entre los grupos en 9 de los microARNs analizados. Estos resultados fueron validados en un segundo análisis en el que incluimos muestras de hueso de sujetos con osteoporosis (n=19), artrosis (n=19) y controles (n=6). Analizamos la expresión de aquellos microARNs más destacados en los arrays, que fueron miR-187, miR-193a-3p, miR-210, miR-214 y miR-518f. Había una mayor expresión de miR-518f en pacientes con osteoporosis frente a controles y artrosis, mientras que miR-187 mostraba una mayor expresión en artrosis que en controles y pacientes con osteoporosis. Aunque no hemos podido confirmar en cultivos celulares la funcionalidad de estos microARNs, estos resultados sugieren que miR-518f y miR-187 pueden estar implicados en la patogenia de algunas alteraciones esqueléticas como la osteoporosis y la artrosis / The prevalence of osteoporosis and osteoarthritis is increasing in parallel with the increased life expectancy. They are determined by the interplay of environmental and genetic factors. The aim of this study was to determine how epigenetic mechanisms are involved in these diseases, and specifically the analysis of expression of microRNAs. We measured microRNAs in bone samples of patients with osteoporosis (n=8) and osteoarthritis (n=8), using mini-arrays. Significant between group differences were found in 9 of the microRNAs analyzed. These findings were replicated in a second analysis that included bone samples from subjects with osteoporosis (n=19), osteoarthritis (n=19) and controls (n=6). In the replication stage we analyzed the expression of the microRNAs showing the most significant differences in arrays: miR-187, miR-193a-3p, miR-210, miR-214 and miR-518f. We found that miR-518f displayed a significantly higher expression in patients with osteoporosis. On the other hand, miR-187 displayed a signifciantly higher expression in patients with osteoarthritis. Although we could not confirm the functional effects of these microARNs in vitro, our data suggest that miR-518f and miR-187 may participate in the pathogenesis of skeletal disorders, such as osteoporosis and osteoarthritis.

"En este trabajo se presenta una metodología de adquisición de conocimiento que ayudará a los expertos en la toma de decisiones mostrando la información realmente relevante. Para ello, como punto de partida se ha utilizado el sistema MCRDR, evaluando sus limitaciones y proponiendo un conjunto de extensiones que lo hacen más potente. En ciertos entornos críticos como UCIs, plantas nucleares, empresas… los expertos no necesitan tanto ayuda para la realización de un diagnóstico completo como para detectar situaciones de riesgo (de hecho, en ocasiones ya existe un diagnóstico previo). En estos casos, su objetivo suele estar dirigido a mantener determinadas variables en un estado estable. En estos casos, cuando los expertos analizan los datos, deben decidir si existe o no una situación de riesgo para tomar decisiones en consecuencia. Un sistema inteligente que analice la información y extraiga conclusiones sobre las situaciones de riesgo, formateando y ordenando conveniente sus causas puede facilitar el proceso de toma de decisiones. " / "In this work a methodology for knowledge based systems is defined that helps experts to take decisions by showing them the really important information. To do that, as an starting point MCRDR has been used, evaluating its limitations and proposing some extensions. In some situations, corporations or systems, like in Intensive Care Units (ICUs), nuclear plants..., risk management situations or emergency ones, experts do not need to do a diagnosis about the situation (in fact, in some cases, it is already done). The objective in those cases is to keep the system variables at a stable state. On the other hand, when the experts analyze the state of the system, they have to decide if it is in a risk situation and decide what actions could resolve the problem. So, an intelligent system which could analyze the information, extracting conclusions, formating and ordering their causes, would be a good help for an expert, so making it easier the decision process. "

Esta tesis justifica, desde un marco teórico, la necesidad de adaptar, para la población infantil y adolescente española, un cuestionario sobre la emoción de la alegría, como es el Stait-Trait Cheerfulness Inventory for Kids (STCI for Kids de Hösli, Sommers& Ruch, 2006). Se especifica una definición de alegría, intentando salvar las dificultades existentes, dentro de la comunidad investigadora. Se parten de los siguientes objetivos generales: en primer lugar el objetivo es traducir, retrotraducir y adaptar el Inventario Estado Rasgo de Alegría (STCI, Hösli & Sommers, 2006) al castellano y comprobar si resulta un instrumento psicométricamente adecuado que permita la medida de esta capacidad humana y en segundo lugar el objetivo es comprobar la relación existente entre los factores Alegría, Seriedad y Mal humor, y el factor Ansiedad, tanto estado como rasgo. OBJETIVOS GENERALES: 1. El primer y principal objetivo de esta investigación es traducir, retrotraducir y adaptar el Inventario Estado Rasgo de Alegría (STCI, Hösli & Sommers, 2006) al castellano y comprobar si resulta un instrumento psicométricamente adecuado que permita la medida de esta capacidad humana. 2. Un segundo objetivo es comprobar la relación existente entre los factores Alegría, Seriedad y Mal humor, y el factor Ansiedad, tanto estado como rasgo. Para la traducción del cuestionario se siguió el método de traducción-retrotraducción con panel de profesionales, la ayuda de dos personas bilingües, con el fin de determinar las posibles modificaciones, según marcan las directrices del Comité Internacional de Tests (ITC). Se han utilizado las dos versiones, estado y rasgo, traducidas al español a partir de la versión en inglés, del Inventario de Alegría Estado-Rasgo, así como los cuestionarios de ansiedad STAIC y STAI. Los resultados fueron obtenidos a partir de diferentes técnicas estadísticas, y todos los análisis estadísticos se han realizado con el paquete estadístico SPSS 19.0. • Como resultado podemos decir que: las partes que evalúan Alegría y Mal humor en el STCI-T<30>, se muestra más fiable y valida que en los estudios originales. La Seriedad en el STCI-T<30>, se muestra menos fiable y válida. • Los factores en el STCI-S<20>, son fiables y válidos. • Los niños están más predispuestos para la Alegría, más que para la Seriedad y el Mal humor. • La Alegría como rasgo es lo que hace que nos recuperemos antes de una situación de Mal humor o de Seriedad. • Los factores, estado y rasgo, tienen una fuerte relación entre sí. No existe relación entre los estados de Alegría y la prevalencia de estados serios. Alegría estado y rasgo se relaciona negativamente con ansiedad estado y rasgo.La Alegría puede hacer que la ansiedad disminuya. La Seriedad y el Mal humor, estado-rasgo, se relacionan positivamente con ansiedad estado-rasgo. Seriedad y Mal humor pueden influir positivamente en la activación de la ansiedad. / This thesis justifies, from a theoretical framework, the need to adapt, for the Spanish child and adolescent population, a questionnaire on the emotion of cheerfulness, as it is the State-trait Cheerfulness Inventory for Kids (STCI for Kids of Hösli, Sommers & Ruch, 2006). Specifies a definition of cheerfulness, trying to save the existing difficulties, within the research community. Depart from the following general objectives: first of all, the objective is to translate, retrotraducir and adapt the inventory feature state of cheerfulness (STCI, Hösli & Sommers, 2006) Spanish and check if an instrument adequate psychometrically that allows measurement of this human capacity and secondly is the objective is to check the relationship between factors, Serious and moodiness, and the anxiety factor, both State as a feature. GENERAL OBJECTIVES: 1. The first and main goal of this research is to translate and adapt the inventory feature state of cheerfulness (STCI, Hösli & Sommers, 2006) Spanish and check if it is an instrument adequate psychometrically that allows the measurement of this human capacity. 2. A second objective is to check the relationship between cheerfulness, seriousness and bad mood factors, and both State and trait anxiety factor. For the translation of the questionnaire was followed the method of translation-retrotranslation with panel of professionals, the help of two bilingual people, in order to determine any modifications, as they mark the guidelines of the international testing Committee (ITC). Both versions, State and trait, translated into the Spanish from the English version, of the cheerfulness State-trait inventory, as well as anxiety questionnaires STAIC and STAI have been used. The results were obtained from different statistical techniques, and all the statistical analysis was performed using the statistical package SPSS 19.0. • As results we can say that: Parties assessing cheerfulness and bad mood the STCI-T < 30 >, it shows more reliable and valid than in the original studies. The seriousness of the STCI-T<30>, shown less reliable and valid. • Factors in the STCI-S < 20 >, are reliable and valid. • Children are more predisposed to cheerfulness, more than for the seriousness and the bad mood. • Cheerfulness as a feature is what makes us recover before a situation in a bad mood or seriousness. • Factors, State and trait, have a strong relationship between them. There is no relationship between the States of cheerfulness and the prevalence of serious States. cheerfulness State and trait is negatively related to anxiety State and trait. cheerfulness can do that the anxiety decreases. The seriousness and the bad mood, state-trait, are positively related to anxiety state-trait. Serious and moodiness can positively influence the activation of anxiety.

La luz induce una amplia variedad de respuestas relacionadas con la fisiología celular y el comportamiento de muchos organismos. El conocimiento de los mecanismos moleculares implicados en la regulación de esas respuestas es, sin duda, uno de los grandes retos de la biología molecular. Hongos filamentosos, como Neurospora crassa, han contribuido al conocimiento de algunos de los mecanismos moleculares implicados en las respuestas a la luz. La caracterización de los genes white collar-1 y white collar-2 (wc-1 y wc-2), dos genes claves en todas las respuestas a la luz de este hongo, ha sido crucial en el desarrollo de esos conocimientos. Por otra parte, la biosíntesis de carotenos en hongos, como el propio N. crassa o el cigomiceto Phycomyces blakesleeanus, es una de las respuestas a la luz que más atención ha merecido por parte de un número importante de investigadores. El hongo Mucor circinelloides, otro cigomiceto, responde a la luz azul incrementando notablemente la síntesis de carotenos. La carotenogénesis en M. circinelloides está controlada por crgA, un gen que cifra una proteína RING-finger represora de la carotenogenesis. Este gen está evolutivamente conservado desde hongos hasta humanos y, por tanto, no es un gen exclusivo de la carotenogénesis. De hecho, en el propio M. circinelloides regula también procesos de desarrollo, como la formación de hifas aéreas y producción de esporas asexuales. Este gen está presente en prácticamente todos los eucariotas, pero sólo se ha estudiado en los hongos fundamentalmente en M. circinelloides. El gen crgA regula la carotenogénesis a través del control de la expresión del gen mcwc-1b. En concreto, la proteína CrgA está implicada directa o indirectamente en la adición de una o dos ubiquitinas a la proteína Mcwc-1b, lo que supone su inactivación, pero no su degradación. Esta tesis ha caracterizado en detalle las bases moleculares de dicho mecanismo, que ha includo objetivos específicos como la caracterización de la oligoubiquitilación de Mcwc-1b, la identificación y caracterización de genes regulados por crgA de forma dependiente e independiente de mcwc-1b así como genes exclusivamente regulados por mcwc-1b. Mediante mutagénesis dirigida se ha identificado la lisina de Mcwc-1b que es diana de la ubiquitilación mediada por CrgA. Mediante análisis transcriptómico se ha determinado que la expresión de al menos 350 genes, que representan cerca del 3% de los genes identificados en M. circinelloides, depende de crgA, revelando el importante papel de crgA en la regulación de la expresión génica. La regulación ejercida por crgA es principalmente a través de mcwc-1b, sin embargo, ambos son capaces de regular la expresión de algunos genes de forma independiente. Se ha encontrado un enriquecimiento de genes implicados en el metabolismo de aminoácidos y de metabolitos secundarios regulados por crgA. La regulación de un aspecto tan básico como la síntesis de aminoácidos podría significar que este gen también pueda ejercer esta función en eucariotas superiores. Esta tesis también ha caracterizado a nivel transcriptómico la respuesta a la luz en M. circinelloides. M. circinelloides presenta tres genes homólogos al gen wc-1 (mcwc-1a, mcwc-1b y mcwc-1c). En esta tesis se han planteado el objetivo de caracterizar a nivel molecular las respuestas a la luz de M. circinelloides y la implicación de los tres genes wc-1. El análisis transcriptómico realizado en esta tesis ha identificado 146 genes (1,24 % del genoma) regulados por luz, muchos de ellos a través de mcwc-1a, indicando que es elemento principal de control de las respuestas a la luz. La existencia de genes que se inducen en los mutantes en los tres genes mcwc-1 de M. circinelloides, sugiere que existen otros fotorreceptores que podrán ser caracterizados en futuras investigaciones. / Light induces a wide variety of responses related to cell physiology and behavior of many organisms. Knowledge of the molecular mechanisms involved in the regulation of these responses is undoubtedly one of the great challenges of molecular biology. Filamentous fungi, such as Neurospora crassa, have contributed to the knowledge of some of the molecular mechanisms involved in responses to light. The characterization of the white collar-1 and white collar-2 (wc-1 and wc-2), two key genes in all responses in the light of this fungus, has been crucial in the development of such knowledge. Moreover, the carotenoid biosynthesis in fungi such as itself N. crassa or cigomiceto Phycomyces blakesleeanus, is one of the responsess to light that more attention has been received by a large number of researchers. The fungus Mucor circinelloides, another cigomiceto, responds to blue light significantly increasing the synthesis of carotenoids. In M. circinelloides carotenogenesis is controlled by a crgA, gene that codes a RING-finger repressor protein of the carotenogenesis. This gene is evolutionarily conserved from yeast to humans and, therefore, it is not an exclusive gene carotenogenesis. In fact, itself M. circinelloides also regulates development processes such as the formation of aerial hyphae and production of asexual spores. This gene is present in almost all eukaryotes, but has only been studied in fungi mainly in M. circinelloides. The gene crgA regulates carotenogenesis through expression control of mcwc-1b gene. Specifically, CrgA protein is directly or indirectly involved in the addition of one or two ubiquitin to mcwc-1b protein, resulting in its inactivation, but not degradation. This thesis has been characterized in detail the molecular basis of this mechanism, which has included when specific goals as characterization of oligoubiquitilación of mcwc-1b, identification and characterization genes regulated by crgA dependent or independent of mcwc-1b and genes exclusively regulated by mcwc-1b. By mutagenesis has been identified lysine is the target crgA mediated ubiquitylation. By transcriptomic analysis has determined that the expression of at least 350 genes, representing about 3% of the genes identified in M. circinelloides, it depends crgA, revealing the important role of crgA in regulation of gene expression. The regulation is mainly exerted by crgA through mcwc-1b, however, both are capable of regulating the expression of some genes independently. It found an enrichment of genes involved in amino acid metabolism and secondary metabolites regulated by crgA. The regulation of such a basic amino acid synthesis as aspect could mean that this gene can also perform this function in higher eukaryotes. This thesis has characterized response to light of M. circinelloides at the transcriptome level. M. circinelloides presents three genes homologous to gene wc-1 (mcwc-1a, mcwc-b and mcwc-1c). In This thesis has been raised the characterization at the molecular level responses to light in M. circinelloides and the involvement of three genes wc-1. Transcriptome analysis in this thesis has identified 146 genes (1.24% of the genome) regulated by light, many of them through mcwc-1a, indicating that it is the main control element of responses to light. The existence of genes induced by light in mutants mcwc-1aΔ, suggests that other photoreceptors that may be characterized in future research.

El objetivo de la presente tesis fue investigar el efecto de la luz de diferente longitud de onda y el fotoperiodo durante el desarrollo temprano, el ritmo de eclosión y la actividad locomotora de larvas de pez cebra. Además, el estudio de un sincronizador adicional (alimento) con diferente periodo permitió evaluar los ritmos de alimentación en dos especies. Finalmente, se describió en el pez cebra adulto los ritmos diarios de genes implicados en la diferenciación sexual. Objetivos Específicos 1 Determinar la ontogenia de la expresión de genes reloj (clock1, bmal1, per1b, per2, dbp) larvas de zebrafish sometidos a ciclos de luz-oscuridad de 12:12 horas, y diferente espectro (LDW, LDB, LDR, DD). 2 Investigar la influencia de varias condiciones de iluminación de diferente longitud de onda, sobre la ontogenia de la actividad locomotora de larvas de pez cebra. 3 Determinar el efecto de los cambios de iluminación de diferente espectro de luz (LDW, LDB, LDR) sobre la actividad locomotora de larvas de zebrafish y la presencia de foto receptores capaces de mediar la respuesta a la luz. 4 Describir la existencia de ritmo de eclosión y la sincronización de embriones a diferentes ciclos de luz (LD, DL1, DL2, LL, DD). 5 Evaluar la existencia de actividad anticipatoria a la comida cuando proporcionada de manera periódica en el pez cebra y el pez hipogeo bajo condiciones oscuridad continua y la capacidad de re-sincronización y la presencia de desplazamientos progresivos de la fase. 6 Describir la variación diaria en la expresión de genes involucrados en la diferenciación sexual en macho y hembra de pez cebra adultos. Metodología 1 Los embriones se mantuvieron en condiciones de LD 12:12 horas LDW (blanco), LDB (azul) and LDR (rojo). Las larvas se muestrearon el 0,3,7 dpf a ZT3,9,15,21,3. Se extrajo el ARN y se medio la expresión de los genes con qPCR. 2 Embriones fueron mantenidos en LDW, LDB, LDR. Las larvas se grabaron con una cámara y los videos analizados con un software de seguimiento. 3 Larvas mantenidas bajo LDW, LDB, LDR fueron grabada hasta el 11 dpf con una cámara. El 3 dpf se muestrearon y se analizó la existencia de expresión de los genes con PCR. 4 Embriones bajo LD,DL1,DL2,LL y DD a 28°C. Fueron visualizado cada dos horas para calcular la tasa de eclosión 5 Pez cebra y pez de cueva en DD fueron alimentados en manera periódica con comederos automáticos. Se utilizaron fotocélulas de rayo infrarrojo para la grabación de la actividad locomotora y el software “el Temps” para la representación de los datos. 6 Machos y hembras en ciclo LD 12:12, y 28 ºC, fueron muestreados durante un día ZT2,6,10,14,18,22. cerebro y gónadas, Se midieron lo genes de interés en cerebro y gónadas con qPCR. Conclusiones. 1 La ontogenia de la expresión de los genes reloj se desarrolla de manera diferente dependiendo de los ciclos de luz y también de la longitud de onda. Los genes del bucle negativo (per1b and per2) parecen desarrollar antes la ritmicidad, durante el desarrollo, respeto a aquellos del bucle positivo (clock and bmal) que no resulta dependiente de la luz. 2 La actividad locomotora está influenciada por los ciclos de luz, no mostrando ninguna ritmicidad bajo oscuridad continua. El diferente espectro de la luz influye en el inicio de la ritmicidad de las larvas a diferentes momentos. 3 El incremento de la actividad locomotora debido al cambio de iluminación de los ciclos de luz y del diferente espectro está relacionado con la presencia de varios fotorreceptores no visuales presentes desde el día 3 dpf. 4 La eclosión del pez cebra tiene un ritmo diario y está sincronizada a los ciclos de luz-oscuridad. La fase de este ritmo depende del tipo de ciclo de iluminación. 5 La actividad de anticipación al alimento es de origen endógeno en las dos especies. El pez cebra tiene una elevada plasticidad en el encarrilamiento de su ritmo a ciclos de comida de periodo diferente de 24 horas y presenta resincronización gradual tras retrasar la hora de alimentación. 6 La expresión de genes involucrados en la diferenciación sexual en adultos varia durante el día y la fase depende del ciclo de luz y del sexo. / Summary of Doctoral Thesis entitled “Impact of lighting conditions and feeding cycles on rhythms of early development, behaviour and sexual differentiation in zebrafish Danio rerio”. The aim of the present thesis was to investigate the effect of light of different wavelength and photoperiod on early development, hatching rhythms and locomotor activity of zebrafish larvae. Morover, the study of an additional zeitgeber (food) permitted to evaluate the feeding rhythms synchronized to different feeding period in adult zebrafish and cavefish blind specie. Finally we aims to describe in adult zebrafish, the daily rhythms of genes involved on sexual differentiation. In the present Doctoral thesis the specific objectives were established: 1 To determine the ontogeny of zebrafish larvae clock genes expression (clock1, bmal1, per1b, per2 dbp) under light-dark cycle of 12:12 hours and different spectrum (LDW, LDB, LDR, DD). 2 To investigate the influence of several lighting conditions of different wavelength on the ontogeny of locomotor activity of zebrafish larvae. 3 To determine the effect of illumination changes of different light spectrum (LDW, LDB, LDR) on locomotor activity of zebrafish larvae and the presence of photo receptors capable to mediate the response to light. 4 To describe the existence of hatching rhythms and embryo synchronization to different light cycle (LD, DL 1, DL2, LL, DD). 5 To evaluate the existence of feeding anticipatory activity when food is periodically provided in zebrafish and cavefish under continuous dark conditions. Evaluate the ability of the fish to re-synchronize when feeding time is delayed. 6 To describe the daily variation in the expression of genes involved in sexual differentiation into male and female zebrafish adults. Methodology 1. Embryos were maintained under LD 12:12 LDW (white), LDB (blue) and LDR (red). Larvae were sampled at 0,3,7 dpf and different time point ZT3,9,15,21. RNA was extracted and the gene expression analyzed with qPCR. 2. Embryos were kept in LDW, LDB, LDR. The larvae were recorded with a video camera and analyzed with specialized tracking software. 3. The larvae kept under LDW, LDB, LDR were recorded until 11 dpf with a camera. At 3 dpf were sampled and the presence of gene expression analyzed by PCR. 4. Embryos under LD, DL, DL, LL and DD at 28 ° C. They were visually analyzed every two hours to calculate hatching rate. 5. Zebrafish and cavefish were fed periodically with automatic feeder. Photocell with infrared beam were used to record the locomotor activity and a software "El Temps" used for data representation. 6 Zebrafish males and females maintained under cycle LD 12:12, and 28 degrees, were sampled during a day at different time point ZT2,6,10,14,18,22. The expression genes were measured in gonads and brain of both sexes with qPCR. Conclusions. 1. The ontogeny of clock genes expression develops differently depending on the light cycles and the wavelength of the light. The genes of the negative loop (per1b and per2) develop rhythmicity before, during development, respect those positive loop (clock and bmal). 2. The locomotor activity is strongly influenced by light cycles, showing no rhythmicity under continuous darkness. The different spectrum of light induces the asynchronous start of locomotor rhythmicity in larvae. 3. The locomotor activity increment as response of illumination change of different spectrum of the light cycles is related to the presence of several non visual photoreceptors already at 3 dpf. 4. Zebrafish hatch rhythmically during the light phase, appearing strongly synchronized to light-dark cycles. The phase of this rhythm at constant temperature depends on the lighting cycle. 5. The feeding anticipatory activity has endogenous origin in both species. The oscillator appears to posses: high plasticity in the synchronization of its rhythm to feeding cycle different of 24-hour and ability to re-synchronize when feeding time is delayed. 6. The expression of genes involved in sexual differentiation in adults varies during the day and the phase depends on the light cycle and sex.

Esta monografía analiza las características de las aplicaciones dinámicas de Internet y presenta un nuevo enfoque para su desarrollo. Este tipo de aplicaciones, más conocidas como RIA, por sus siglas en inglés (Rich Internet Applications) presenta un mayor nivel de expresividad y de interactividad con los contenidos, lo que las hace particularmente atractivas para su aplicación en ámbitos educativos. Este nuevo enfoque está basado en Seaside, un entorno de desarrollo para construir aplicaciones dinámicas de Internet, que posean una lógica interna relativamente compleja. Seaside provee una arquitectura basada en componentes, cuya característica distintiva es, que permite modelar múltiples ujos de información independientes, lo que simpli ca notablemente la implementación de modelos complejos en Internet.

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