Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-14Bitstream added on 2014-06-13T19:40:29Z : No. of bitstreams: 1 gruber_sl_dr_rcla_parcial.pdf: 155184 bytes, checksum: df5017c0c5ab7c0586283ad815f95539 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-02T12:36:06Z: gruber_sl_dr_rcla_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-02T12:37:30Z : No. of bitstreams: 1 000713629_20180214.pdf: 142653 bytes, checksum: 303de0bbf7c0cc98840a1feafcac3291 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-02-16T12:28:24Z: 000713629_20180214.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-02-16T12:29:08Z : No. of bitstreams: 1 000713629.pdf: 1305461 bytes, checksum: fc93fa24bfaab78fbbbdb8eb677acfba (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A classe Amphibia, especialmente a família Hylidae, passou por extensas modificações na taxonomia e sistemática, realizadas com base, principalmente, em dados moleculares, mas quase nenhuma contribuição das informações citogenéticas. Os hilídeos são os anuros mais abundantes em número de espécies, porém, a maioria delas foi sequer cariotipada e grande parte das informações disponíveis na literatura está restrita apenas ao número e morfologia dos cromossomos. No presente trabalho, foram cariotipadas 28 espécies da subfamília Hylinae, sendo da tribo Cophomantini Aplastodiscus arildae, A. callipygius, A. eugenioi, A. leucopygius, A. perviridis, Hypsiboas aff. polytaenius, Hypsiboas sp. aff. albopunctatus, H. albomarginatus, H. albopunctatus, H. bakeri, H. caingua, H. caipora, H. crepitans, H. faber, H. latistriatus, H. lundii, H. pardalis, H. polytaenius, H. prasinus, H. raniceps e H. semilineatus; da tribo Lophiohylini, as espécies Aparasphenodon bokermanni, Itapotihyla langsdorffii, Phyllodytes edelmoi, P. luteolus, Trachycephalus sp., T. mesophaeus e T. typhonius; e da subfamília Phyllomedusinae, duas espécies, Phyllomedusa distincta e P. tetraploidea, bem como seus híbridos triploides. A maioria das espécies da subfamília Hylinae compartilha cariótipo 2n=24, FN=48, bandas C majoritariamente centroméricas e RON em cromossomos pequenos do par 11 em Cophomantini e do par 10 em Lophiohylini. As exceções são as do gênero Phyllodytes, da tribo Lophyohylini, cujas espécies têm 2n=22, FN=44 e RON no par 2, e as do gênero Aplastodiscus, da tribo Cophomantini, cujas espécies têm diferentes números cromossômicos de 2n=24, 2n=22, 2n=20 e 2n=18, mas compartilham o mesmo padrão de bandamento C e o mesmo par marcador de RON. As bandas de replicação por incorporação de BrdU... / The Amphibia class, especially the family Hylidae, went through extensive changes in taxonomy and systematics, based mainly on molecular data, but with almost no contribution of cytogenetic information. This family is the most speciose among the anurans, however, the great majority of the species was never karyotyped, and most of the cytogenetic information on hylids available in the literature is restricted to the number and morphology of the chromosomes. In the present work we karyotyped 28 representatives of the subfamily Hylinae, belonging to the tribe Cophomantini the species Aplastodiscus arildae, A. callipygius, A. eugenioi, A. leucopygius, A. perviridis, Hypsiboas aff. polytaenius, Hypsiboas sp. aff. albopunctatus, H. albomarginatus, H. albopunctatus, H. bakeri, H. caingua, H. caipora, H. crepitans, H. faber, H. latistriatus, H. lundii, H. pardalis, H. polytaenius, H. prasinus, H. raniceps e H. semilineatus; to the tribe Lophiohylini the species Aparasphenodon bokermanni, Itapotihyla langsdorffii, Phyllodytes edelmoi, P. luteolus, Trachycephalus sp., T. mesophaeus e T. typhonius; and two species of the subfamily Phyllomedusinae, Phyllomedusa distincta and P. tetraploidea, as well as their triploid hybrids. Most species of the subfamily Hylinae share the same karyotype with 2n=24, FN=48, C bands with predominantly centromeric distribution, and NOR located on small chromosomes belonging to the pair 11 in Cophomantini and to the pair 10 in Lophiohylini. The exceptions are the genus Phyllodytes, from the tribe Lophyohylini, whose species have 2n=22, FN=44 and NOR in the pair 2, and the genus Aplastodiscus, from the tribe Cophomantini, whose species have different chromosome numbers of 2n=24, 2n=22, 2n=20, Abstract and 2n=18, but sharing the same C-banding pattern and the same pair of NOR marker... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Silvia Regina Rogatto / Banca: Lígia Niéro-Melo / Banca: Enilze Maria de Souza Fonseca Ribeiro / Resumo: A Síndrome Mielodisplásica (SMD) consiste em um grupo heterogêneo de doenças hematológicas de origem monoclonal e potencialmente maligna. É caracterizada por uma hematopoese ineficaz das células-tronco pluripotentes e morfologia displásica nas três linhagens celulares não-linfóides, evoluindo freqüentemente para leucemia mielóide aguda. A SMD é rara em crianças e adolescentes e apresentam características clínicas e laboratoriais distintas. Este estudo teve como principal objetivo a pesquisa de anormalidades cromossômicas em 23 pacientes pediátricos (0 a 18 anos) com SMD utilizando as metodologias de citogenética clássica (banda GTG) e molecular (Hibridação in situ Fluorescente - FISH). A análise após bandamento GTG revelou a presença de alterações cromossômicas envolvendo, principalmente, deleções nos cromossomos 12 e 17 e monossomia 20. Pela FISH, uma média 150 núcleos interfásicos foi analisada com as sondas RP11-275J11 (3p25) (19 casos), RP11-46J20 (7q22.3) (17 casos), D17Z1 e RP11-89D11 (17p13.1 - TP53) (5 e 19 casos, respectivamente) e RP11-62N23 (17q21) (16 casos). As perdas homozigotas e heterozigotas significativas em 3p25.1 foram observadas em 17/19 casos (acima de 30% das células). Os genes MKRN2, TSEN2, e PPARG estão mapeados em 3p25.1 e são compatíveis de função. Quinze em dezessete casos apresentaram perdas homozigotas e heterozigotas no cromossomo 7. Em 7q22.3 estão mapeados os genes candidatos a perdas DUS4L, BCAP29, SLC26A3, SLC26A4, LAMB1 e HBP1. Em 18/19 casos foram confirmadas a perda significativa do gene supressor tumoral TP53. Apenas um caso de SMD relacionada à terapia não apresentou perda deste gene. Este gene codifica uma fosfoproteína nuclear responsável pela regulação da duplicação do DNA, proliferação celular e apoptose. Assim, mutações ou deleções neste gene podem promover sua inativação gerando instabilidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Myelodysplasic Syndrome (MDS) is a heterogeneous and potentially malign group of hematological diseases with monoclonal origin. Inefficient hematopoesis of pluripotent stem cells, dysplasic morphology in the three non-lymphoid lineages, and progression to acute myeloid leukemia are features of the disease. MDS is rare in children and adolescents showing distinct clinical and laboratorial features. In this study we investigated chromosomal abnormalities in 23 MDS patients (age ranging from 0 to 18 years) using GTG banding and FISH (Fluorescent in situ Hybridization). The most common chromosomal alterations detected by G-banding were deletions at 12p and 17p and monosomy 20. Using FISH, a mean of 150 interphasic nuclei were evaluated with the probes RP11-275J11 (3p25) (19 cases), RP11-46J20 (7q22.3) (17 cases), D17Z1 and RP11-89D11 (17p13.1 - TP53) (5 and 19 cases, respectively), and RP11-62N23 (17q21) (16 cases). Homozygous and hemizygous losses at 3p25 were observed in 17/19 cases (over 30% of the cells). The potential candidate genes to losses MKRN2, TSEN2, and PPARG are mapped at 3p25.1. Fifteen out of 17 cases showed homozygous and hemizygous losses at chromosome 7. In 7q22.3 are mapped the putative candidates to losses: DUS4L, BCAP29, SLC26A3, SLC26A4, LAMB1, HBP1. In 18 out of 19 cases it was detected significant losses of the tumor suppressor gene TP53. Only one case of MDS therapy-related presented absence of TP53 losses. The TP53 gene codes a nuclear phosphoprotein responsible for DNA replication regulation, cell proliferation and apoptosis. Mutations or deletions on TP53 may promote its inactivation leading to genomic instability and contributing to tumor progression. According to our study, the TP53 gene may be considered a molecular marker in pediatric primary MDS. The ERBB2/HER-2 sequence... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Comportamento meiótico e fertilidade do pólen foram estudados em um total de 49 acessos de 14 taxa do gênero Leucaena, leguminosas arbóreas fixadoras de nitrogênio nativas da América Centrai. As dipióides L. macrophytia, L. pulverulenta, L. retusa, L. salvadorensis, L. shannonii e L. trichandra apresentaram pareamento cromossõmico regular, preferencialmente em bivalentes, mas quadrivaientes e outras anormalidades foram observados em freqüências variadas. Nas tetrapióides L. confertiflora, L. diversifoiia, L. invoiucrata, L. feucocephaia, L. paiiida e no híbrido L. x spontanea a associação cromossomica mais comum também foram bivalentes, mas quadrivalentes e outras anormalidades foram observadas em freqüências variadas. O acesso L. ? hybrid apresentou predominantemente várias irregularidades, como univaientes, muitivalentes e aderências cromossõmicas. Nas espécies dipióides a ocorrência de quadrivalentes pode apoiar sua origem paleopoliplóide. A presença de quadrivalentes nas espécies polipioides apóia urna origem aiotetrapióide "segmentar', mas a autopoiipioidia com subseqüente diploidização não pode ser totalmente descartada. O índice meiótico foi superior a 80% na maioria dos acessos, refletindo a regularidade meiótica. A fertilidade do pólen variou de 71 a 98%, com algumas exceções. A presença de até 19% de díades e tríades e de macropóiens em espécies dipióides e tetrapioides (até de 7% em L. trichandra) demonstram que gametas não reduzidos não são raros em Leucaena. Estes resultados apresentam peia primeira vez uma análise meiótica detalhada e abrangente para Leucaena e demonstram como a citogenética clássica pode fornecer dados importantes para estudos taxonõmicos, evolutivos e no melhoramento de plantas. / Meiotic behavior and poiien tertffity were studied in a total of 49 accessions of 14 taxa of the Central American nitrogen fixing muitipurpose tree genus Leucaena. The dipioid L. macrophylla, L. pulverulenta, L. recusa, L. saivadorensis, L. shannonii and L. trichandra presented regular chromosome pairing, mostiy in bivalents, but quadrivaients and other abnormaiities were observed in varying frequencies. In tetrapioid L. confertitiora, L. diversifolia, L. involucraã, L ieucocephaia, L. pallida and the hybrid L. x spontanea bivalents were also the most common chromosome associations, but quadrivaients and others abnormaiities were observed in varying frequencies. The L. ? hybrid accession presented a predominance of severa! irreguiarities, such as univalents, muitivalents and chromosome stickiness. In dipioid species the commom occurrence of quadrivalents couid support their paleopoiypioid origin. The presence of quadrivaients in poiypioid species supports a segmentai aiiotetrapioid origin, but autopolypioidy with subsequent diplodization cannot be ruled out. Meiotic indexes were mostiy over 80% refiecting the rather regular meiotic behavior. Poilen fertility ranged from 71 to 98%, with some exceptions. The presence of up to 19% dyads and triads and of "giant" poiien grains in dipioid and tetraploid species (up to 7% in L. trichandra) shows that unreduced gametes are not uncommon in Leucaena. These resuits present for the first time a detaiied and comprehensive meiotic analysis for these Leucaena species and show how ciassicai cytogenetics may generate important data to be used in taxonomy, evolutionary studies and plant breeding.

As espécies Lactuca sativa L. e Allium cepa L. estão entre as mais utilizadas como organismo-teste em bioensaios vegetais. O conhecimento dos cultivares acerca dos aspectos fisiológicos e genéticos é um passo fundamental para a padronização e seleção dos melhores genótipos para bioensaios. O objetivo desse trabalho foi caracterizar, ranquear e, posteriormente, validar com Sulfato de Cádmio (CdSO4) as cultivares de Alface (Lactuca sativa L.) e Cebola (Allium cepa L.) quanto aos parâmetros germinativos, de crescimento inicial e citogenéticos. Para essa finalidade, sementes de 14 cultivares de Alface e 13 de Cebola obtidos comercialmente foram germinadas em placas de Petri (70 mm) com 3 mL de água destilada. As Placas foram montadas em B.O.D (24 °C) com fotoperíodo de 12 horas. Os parâmetros avaliados consistiram em: percentual de germinação, índice de velocidade de germinação, número de plântulas normais, comprimento de raiz e de parte aérea, biomassa fresca e seca, índice mitótico, anormalidades cromossômicas e conteúdo de DNA. Os dados foram submetidos à análise de variância, sendo as médias comparadas por meio do teste Scott-Knott (p<0,05), e à análise multicritérios, utilizando Technique for Order Preference by Similarity (TOPSIS) para a obtenção de um ranking dessas cultivares. De acordo com a análise estatística dos dados, as cultivares de Lactuca sativa L. mais adequadas aos bioensaios vegetais, foram Babá de Verão, Grandes Lagos e Grand Rapids enquanto que para Allium cepa L. se destacaram Baia Periforme, Vale Ouro, White Creole. Do ranking obtido pelo TOPSIS, Babá de Verão e Baia Periforme foram as melhores cultivares para Alface e Cebola, respectivamente. Ambas apresentaram maior frequência de anormalidades cromossômicas, sendo cromossomo perdido e stickiness as anomalias predominantes em L. sativa L. e A. cepa L. respectivamente nos controles. No teste de toxicidade com a presença do metal Cádmio, as cultivares de ambas as espécies se mostraram sensíveis, visto que o metal interferiu no alongamento de raiz e parte aérea, na biomassa fresca e no índice mitótico e aumentou a frequência de anormalidades cromossômicas, exceto para Crioula, uma vez que o Cádmio estimulou o IM. / The species Lactuca sativa L. and Allium cepa L. are among the most used as test organisms in plant bioassays. The knowledge of the cultivars about the physiological and genetic aspects is a fundamental step for the standardization and selection of the best genotypes for bioassays. The objective of this work was to characterize, classify and later validate with CdSO4 the cultivars of Lettuce (Lactuca sativa L.) and Cebola (Allium cepa L.) on germination, initial growth and cytogenetic parameters. For this purpose, seeds of 14 cultivars of Lettuce and 13 of commercially obtained Onion were germinated in Petri dishes (70 mm) with 3 mL of distilled water. Plates were mounted in B.O.D (24 ° C) with photoperiod of 12 hours. The evaluated parameters consisted of: percentage of germination, rate of germination, number of normal seedlings, root and shoot length, fresh and dry biomass, mitotic index, chromosomal abnormalities and DNA content. The data were submitted to analysis of variance, the averages being compared by means of the Scott-Knott test (p <0.05), and to the multi-criteria analysis, using Technique for Order Preference by Similarity (TOPSIS) to obtain a ranking of these Cultivars. According to the statistical analysis of the data, the cultivars of Lactuca sativa L. more suitable to the plant bioassays were Summer Babysitter, Great Lakes and Grand Rapids, while for Allium cepa L. Periform Bay, Gold Valley and White Creole were highlighted. From the ranking obtained by TOPSIS, Summer Babysitter and Periform Bay were the best cultivars for Lettuce and Onion, respectively. Both presented higher frequency of chromosomal abnormalities, being chromosome lost and stickiness the predominant anomalies in L. sativa L. and A. cepa L. respectively in the controls. In the toxicity test with the presence of Cadmium metal, the cultivars of both species were sensitive, since the metal interfered in the root and shoot extension, fresh biomass and mitotic index, and increased the frequency of chromosomal abnormalities except For Creole, since Cadmium stimulated the IM. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Resumo: Os répteis sofreram redução do número de espécies desde a época em que dominavam a Terra até os dias atuais. Os quelônios são pouco estudados, principalmente quanto à sua caracterização citogenética e morfológica. O presente projeto teve por objetivo estabelecer a análise das características morfológicas e citogenéticas, efetivas para a diferenciação das espécies Chelonoidis carbonaria e Chelonoidis denticulata, quelônios terrestres representativos de dois biomas brasileiros (Cerrado e Amazônia); avaliar a existência de um morfotipo de Chelonoidis carbonaria, além de descrever o cariótipo das espécies em estudo. Os animais foram coletados no criatório "Reginaldo Uvo Leone", localizado na cidade de Tabapuã- SP. O presente trabalho possui licença do IBAMA/RAN e aprovação da Comissão de Ética em Experimentação Animal (CEEA) UNESP/IBILCE. Foram realizadas aferições da morfologia externa, avaliando-se as características morfológicas efetivas para a diferenciação das duas espécies de jabutis brasileiras, Chelonoidis carbonaria e Chelonoidis denticulata, dando ênfase à comparação com um grupo de Chelonoidis carbonaria*, que apresenta tamanho e coloração diferenciada do padrão estabelecido para a espécie. As características morfológicas foram avaliadas no intuito de caracterizar as diferenças entre as espécies, além de verificar quais são as características sexualmente dimórficas entre os grupos avaliados. Os dados obtidos permitiram o reconhecimento de um morfotipo de C. carbonaria, que apresentou características morfológicas intermediárias entre as duas espécies clássicas. Os estudos citogenéticos permitiram o reconhecimento do número cromossômico 2n= 52 para os três grupos avaliados. O bandamento G não mostrou boa reprodutibilidade e constância... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The reptiles were reduced in number of species since the time that they ruled the earth until nowadays. The tortoises are poorly studied, particularly regarding its morphological and cytogenetics features. This project aimed to establish the analysis of morphology and cytogenetics, effective to differentiate the species Chelonoidis carbonaria and Chelonoidis denticulata, terrestrial tortoises representative of two biomes (Cerrado and Amazonia), to evaluate the existence of a possible Chelonoidis carbonaria morphotype, and describe the karyotype of the studied species. The animals were collected in the "Reginaldo Uvo Leone" breeding farm, located in Tabapuã-SP. This work is licensed by IBAMA/RAN and approval by the Ethics Committee on Animal Experiments (ECAE) UNESP/IBILCE. We conducted measurements of external morphology, in order to evaluate the morphological characteristics effective for the differentiation of two species of Brazilian tortoises Chelonoidis carbonaria and Chelonoidis denticulata, emphasizing the comparison with a Chelonoidis carbonaria* group, which differ in color and size patterns established for the species. The morphological characteristics were evaluated in order to characterize differences between species, and check which characteristics are sexually dimorphic between the groups. The data obtained allowed the recognition of a C. carbonaria morphotype, which showed morphological characteristics intermediate between the two classic species. Cytogenetic studies led to the recognition of the chromosome number 2n= 52 for all three groups. The G-banding did not show good reproducibility and consistency in the banding patterns. In Chelonoidis carbonaria males, the C banding technique revealed the presence of constitutive heterochromatin in two microchromosomes and in two centromeric region of macrochromosomes, in females only two microchromosomes showed... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Coorientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Fabiano Gazzi Taddei / Banca: Luiz Henrique Florindo / Mestre

O gênero Oligoryzomys é um dos mais complexos e diversos da subfamília Sigmodontinae e da tribo Oryzomyini. Dentre os mamíferos destaca-se por apresentar notável incongruência taxonômica, já que o número de espécies não é consenso entre os autores. Esta tese tem a finalidade de esclarecer alguns pontos conflitantes da taxonomia deste grupo e fornecer mapas atualizados da distribuição das espécies do gênero. Espero que os dados coligidos e analisados aqui possam contribuir significativamente para qualquer tentativa de revisão sistemática do Gênero no futuro. Para tanto, foram feitas comparações utilizando dados cariotípicos (2n e NFa), morfológicos e sequências do gene mitocondrial citocromo b e do íntron 7 do beta fibrinogênio. O presente trabalho está estruturado em 5 capítulos. O primeiro capítulo apresenta uma breve história da diversificação dos sigmodontíneos, uma introdução sobre o nível atual de conhecimento do gênero Oligoryzomys e por fim traz uma explanação dos aspectos filosóficos envolvidos no reconhecimento de espécie. O segundo capítulo trata dos métodos utilizados na aquisição dos espécimes em trabalhos de campo, na obtenção do material para análises citogenéticas, da extração de DNA e subsequente sequenciamento do gene mitocondrial citocromo b e do íntron 7 do beta fibrinogênio. Descreve ainda as estimativas de relacionamento filogenético, a metodologia de análise da estrutura e história populacional e como foram exploradas a variação morfológica e delimitação taxonômica. O terceiro capítulo discorre sobre aspectos citogenéticos e moleculares das espécies da Bolívia, cuja amostra foi gentilmente cedida pelo Prof. Dr. Jorge Salazar-Bravo no intuito de preencher com tais informações a lacuna existente nesta fauna. As lâminas deste material boliviano foram analisadas por mim para obter os dados brutos de cariótipo assim como todo o sequenciamento do material e posterior análises. Dentro dessa abordagem foram documentadas a variação cariotípica de algumas populações e discutidas questões taxonômicas visando responder quem são e onde estão as espécies reconhecidas para a Bolívia. O quarto capítulo visa reconhecer as espécies válidas de Oligoryzomys e estabelecer as relações filogenéticas entre elas. Neste capítulo foram testadas as hipóteses dos grupos de espécies de acordo com as propostas de Carleton e Musser (1989) e Miranda et al. (2009). A partir dos resultados obtidos foram realizadas comparações entre as espécies dos grupos, as quais, permitiram fornecer dados qualitativos capazes de auxiliar na diagnose das espécies e da sua distribuição. O quinto capítulo apresenta hipóteses dos processos e eventos envolvidos na diversificação do gênero na região Neotropical e encerra a monografia apresentando uma cronologia de diversificação das espécies estudadas. / O gênero Oligoryzomys é um dos mais complexos e diversos da subfamília Sigmodontinae e da tribo Oryzomyini. Dentre os mamíferos destaca-se por apresentar notável incongruência taxonômica, já que o número de espécies não é consenso entre os autores. Esta tese tem a finalidade de esclarecer alguns pontos conflitantes da taxonomia deste grupo e fornecer mapas atualizados da distribuição das espécies do gênero. Espero que os dados coligidos e analisados aqui possam contribuir significativamente para qualquer tentativa de revisão sistemática do Gênero no futuro. Para tanto, foram feitas comparações utilizando dados cariotípicos (2n e NFa), morfológicos e sequências do gene mitocondrial citocromo b e do íntron 7 do beta fibrinogênio. O presente trabalho está estruturado em 5 capítulos. O primeiro capítulo apresenta uma breve história da diversificação dos sigmodontíneos, uma introdução sobre o nível atual de conhecimento do gênero Oligoryzomys e por fim traz uma explanação dos aspectos filosóficos envolvidos no reconhecimento de espécie. O segundo capítulo trata dos métodos utilizados na aquisição dos espécimes em trabalhos de campo, na obtenção do material para análises citogenéticas, da extração de DNA e subsequente sequenciamento do gene mitocondrial citocromo b e do íntron 7 do beta fibrinogênio. Descreve ainda as estimativas de relacionamento filogenético, a metodologia de análise da estrutura e história populacional e como foram exploradas a variação morfológica e delimitação taxonômica. O terceiro capítulo discorre sobre aspectos citogenéticos e moleculares das espécies da Bolívia, cuja amostra foi gentilmente cedida pelo Prof. Dr. Jorge Salazar-Bravo no intuito de preencher com tais informações a lacuna existente nesta fauna. As lâminas deste material boliviano foram analisadas por mim para obter os dados brutos de cariótipo assim como todo o sequenciamento do material e posterior análises. Dentro dessa abordagem foram documentadas a variação cariotípica de algumas populações e discutidas questões taxonômicas visando responder quem são e onde estão as espécies reconhecidas para a Bolívia. O quarto capítulo visa reconhecer as espécies válidas de Oligoryzomys e estabelecer as relações filogenéticas entre elas. Neste capítulo foram testadas as hipóteses dos grupos de espécies de acordo com as propostas de Carleton e Musser (1989) e Miranda et al. (2009). A partir dos resultados obtidos foram realizadas comparações entre as espécies dos grupos, as quais, permitiram fornecer dados qualitativos capazes de auxiliar na diagnose das espécies e da sua distribuição. O quinto capítulo apresenta hipóteses dos processos e eventos envolvidos na diversificação do gênero na região Neotropical e encerra a monografia apresentando uma cronologia de diversificação das espécies estudadas.

Orientador: Agnes Cristina Fett Conte / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Társis Antonio Vieira / Banca: Flávio Augusto Naoum / Banca: Carlos Fábian Mendiburu / Resumo: Síndromes Mielodisplásicas (SMD) ou mielodisplasias compreendem um conjunto heterogêneo de doenças hematopoéticas caracterizadas por hematopoese ineficaz, que geralmente apresentam citopenias no sangue periférico, diferenciação celular displásica e propensão ao desenvolvimento de leucemia mielóide aguda. São classificadas em vários tipos e a incidência anual é estimada entre quatro casos por 100.000 pessoas da população em geral, e em até 50 casos por 100.000 indivíduos com idades avançadas. A análise cromossômica das células da medula óssea (MO) ao diagnóstico detecta alterações relacionadas com diagnóstico e prognóstico, mas alguns genes também já foram relacionados à etiologia das mielodisplasias, por apresentarem mutações e alterações epigenéticas que podem resultar em alterações na hematopoese. O gene FOXO3, um supressor de tumor, é um dos genes que mais se expressa no tecido hematopoético normal, o que faz dele um possível candidato ao envolvimento na etiopatogenia das doenças da MO. Entretanto, não foram encontrados estudos sobre FOXO3 em SMD. Alterações neste gene poderiam resultar em hematopoese anormal. O objetivo deste trabalho foi estudar células da MO de 100 indivíduos com SMD de qualquer tipo, ao diagnóstico, para investigar mutações no éxon 1 e o padrão de metilação da região promotora do FOXO3, além da presença de alterações cromossômicas. Para a análise molecular foi extraído o DNA, realizada à amplificação gênica por PCR e realizado o sequenciamento direto do éxon 1; para o estudo epigenético, foi feita a conversão do DNA por bissulfito e a MSP-PCR, e a análise citogenética foi realizada em metáfases submetidas ao bandamento GTG. No éxon 1 foi observado o polimorfismo 159C>T em 26% pacientes e em 16% controles, o que não diferiu estatisticamente (p>0,05). O estudo do padrão de metilação da ilha CpG estudada da... / Abstract: Myelodysplastic syndromes (MDS) or myelodysplasia constitute a heterogeneous group of hematopoietic diseases characterized by ineffective hematopoiesis usually withperipheral bloodcytopenias, dysplastic cell differentiationanda tendency to evolve toacute myeloid leukemia. They are classified invarious typesand the annual incidence is estimated at between four cases per 100,000 individualsin the general population and up to 50 cases per 100,000 with advanced ages. A chromosomal analysis of bone marrow cells at diagnosis identifie schanges related with diagnosis and prognosis, but some genes are also associated to the etiology of myelodysplasia, for presenting mutations and epigenetic changes that may result in alteration in hematopoiesis. The FOXO3 gene, tumor suppressor, isone of the most commonly expressed genesin normal hematopoietic tissue, which makes it a possible candidate for involvement in the pathogenesis of diseases of the bone marrow. However, no studies were found on FOXO3in MDS. The changesin this genecould there for eresultina b normalhe matopoiesis. The aim of this work was to study bone marrow cells from 100 patients diagnosed with anytypeof MDS, to investigate mutations in exon 1 and the methylation pattern of FOXO3 promoter region, and the presence of chromosomal alterations. For molecular analysis, DNA was extracted, gene amplification was achieved bypolymerase chain reaction and direct sequencing of exon 1 was performed, for epigenetic study, the bisulfite conversion of DNA, and subsequently carrying out the MSP -PCR was performed, and cytogenetic analysis was performed on metaphases submitted to GTG banding. Inexon 1 was observed the 159C > Tpolymorphismin 26% patients andin 16% healthy controls, wich not statistically significant (p>0,05)... / Doutor

El propósito de este trabajo es estudiar una serie de pacientes afectos de enfermedades hematológicas, en edad pediátrica, sometidos a un trasplante de progenitores hemopoyéticos (TPH). Para ello se ha realizado el seguimiento del trasplante en pacientes que han recibido un trasplante alogénico deun donante de diferente sexo mediante el estudio del QUIMERISMO y se ha relacionado con diferentes parámetros clínico-biológicos; el seguimiento en pacientes que presentaban una alteración cromosómica al diagnóstico, tanto si recibían un TPH autólogo o un TPH alogénico, mediante el estudio de la ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR); y se ha evaluado la Influencia del cariotipo observado y del pronóstico de las alteraciones cromosómicas detectadas en el diagnóstico de la enfermedad, en la recaída y en la supervivencia post-trasplante.Se han obtenido los siguientes resultados:En el estudio del quimerismo se ha establecido un valor umbral del 1%, para considerar detección de células del paciente. Se han detectado células del paciente en el 42% de los casos mediante la técnica de FISH y en el 16% mediante citogenética. 10 de ellos, han presentado un QM estable, de los cuales seis mostraron un aumento de células del paciente que provocó la recaída clínica en tres; en uno de ellos se detectó el aumento de las células residuales antes de la recaída clínica. Se ha observado una relación estadísticamente significativa entre la presencia de QM y el seso del paciente (el 80% con QM eran niñas, y el 69% con QC eran niños) y el régimen de acondicionamiento (el 60% con QM habían recibido únicamente quimioterapia mientras que el 80% con QC habían recibido quimioterapia e ICT). La SG ha sido la misma para los pacientes con QM o con QC (65%) y la SLE ha sido menor para el grupo con QM (51% vs 75%).En el estudio de la EMR se ha establecido un valor umbral del 6% de núcleos con la fusión para considerar presencia de la reorganización BCR/ABL mediante FISH. Se ha detectado el cariotipo observado al diagnóstico en el 26% (10/38) de los pacientes. De los 10 pacientes que han presentado la EMR, en ocho la detección coincidió con la recaída clínica y en dos la detección se realizó antes de la recaída.EN EL estudio del CARIOTIPO Y su Influencia en la EVOLUCION POSTTRASPLANTE se ha observado que las alteraciones cromosómicas detectadas al diagnóstico de la enfermedad, han mantenido su valor pronóstico después del TPH. Se ha observado la evidencia de una peor evolución de las alteraciones en 11q23 en las LLA (han fallecido 2/4), y una evolución no tan desfavorable en las LMA (no ha fallecido ninguno de 4). En la presente serie, la presencia de un cariotipo alterado ha constituido un factor de mal pronóstico, teniendo en cuenta que la SG, la SLE ha sido menor y la PR mayor en el grupo de pacientes con cariotipo alterado. El valor pronóstico del cariotipo se ha mantenido post-TPH, teniendo en cuenta que la SG, la SLE ha sido menor y la PR mayor en el grupo de pacientes con cariotipo de pronóstico desfavorable. En la presente serie, la indicación de un TPH autólogo en le grupo de pacientes con cariotipo de mal pronóstico, no ha resultado en una mejora en la supervivencia de estos, que quizás podrían beneficiarse de un TPH alogénico no emparentado; ya que la SG y la PR ha sido del 51,8% y del 31%, respectivamente para los pacientes que recibieron un TPH alogénico y del 33% y del 75% respectivamente, para los pacientes que recibieron un TPH autólogo, siendo estas diferencias estadísticamente significativas. / In this work we have performed the follow-up of children with haematological diseases who received a progenitor cells transplantation (PCT). We have studied of chimerism in a sex-mismatched allogeneic PCT, the minimal residual disease (MRD) when the patient showed a chromosome aberration at diagnosis of the malignant disease, and we have analyzed the correlation between the karyotype at diagnosis and the outcome after of the PCT.- In the chimerism analysis we have observed a mixed chimerism (MC) we have detected more than 1% of host cells. The 42% patients showed host cells by FISH, and only the 16% by cytogenetics. Ten of them showed MC, and six of them showed a increase of the host cells, in one patient before of the clinical relapse a progressive increase of host cells was detected. The results indicate that female patients and a less intensive conditioning regimen are significantly associated with the MC status. The overall survival (OS) was similar for the patients with MC or donor chimerism (DC), and leukaemia-free survival was higher in DC than in the MC groups.- In the follow-up of MRD, BCR/ABL reorganization has been considered to exist when more than 6% of fusion nuclei was observed. The karyotype observed at diagnosis was detected 26% of patients. In two of them the karyotype showed at diagnosis was observed before of the clinical relapse.- The prognosis of the karyotype observed at diagnosis has been similar as prognostic factor in the outcome after PCT. The prognosis of 11~23 chromosome aberration in LLA was worse in LMA. To detect an abnormal karyotype at diagnosis of the disease are predictors of a poor outcome after PCT. To detect a karyotype of the worst prognosis at diagnosis of the disease are predictors of a poor outcome after PCT. The outcome of patient who showed a karyotype of worst prognosis at diagnosis of the disease and received an autologous PCT was worse the group of patients with karyotype of worst prognosis and who received an allogenic PCT.

El presente trabajo gira alrededor de los registros de gemelos, y del “Registro de Gemelos de Murcia” (RGM) en particular, como recurso fundamental de investigación, a la hora de profundizar en el conocimiento de la contribución relativa de factores genéticos y ambientales al comportamiento. Los diseños genéticamente informativos y, en particular los estudios de gemelos, constituyen un importante recurso para llegar al conocimiento de las causas de variación fenotípica en humanos. Estos diseños constituyen la metodología más utilizada para separar las causas genéticas de las ambientales en el parecido familiar. Este tipo de estudios tiene, actualmente, una importante implantación y conlleva un alto grado de especialización, acorde con su enorme potencial investigador. Para su desarrollo se basan en la existencia de registros de nacimientos múltiples. Los registros de gemelos que existen actualmente, y que se distribuyen por todo el mundo, surgen como una respuesta metodológica a los diferentes estudios específicos con gemelos que inicia la comunidad científica. La determinación de la cigosidad, la evaluación del supuesto de ambientes idénticos, y la comprobación de la representatividad de la muestra, son cuestiones básicas sobre las que se apoya el método de los estudios de gemelos. Estos tres elementos son claves para asegurar la utilidad de la comparación efectuada y la validez de los resultados obtenidos. Por tanto, parece evidente que la comprobación de estas tres cuestiones es un principio primordial en el establecimiento de la utilidad científica de un registro de gemelos. Esta tesis tiene tres objetivos principales: validar el cuestionario de cigosidad utilizado hasta el momento en el RGM, comparando la clasificación efectuada por el instrumento con los resultados de cigosidad obtenidos a partir de marcadores génicos; analizar la veracidad del supuesto de ambientes idénticos entre los participantes del RGM, comparando los datos disponibles sobre residencia compartida entre gemelos MZ y DZ; y estimar hasta qué punto la muestra de sujetos participantes en el RGM es representativa de la población de referencia, de acuerdo a marco geográfico, sexo y grupo de edad. El diseño para el desarrollo general del RGM consiste en una cohorte de base poblacional, formada por individuos nacidos de partos múltiples residentes en la comunidad autónoma de Murcia, que se incluye en un registro de parejas con participación voluntaria. Este trabajo en particular utiliza tanto la muestra completa de participantes como sub-muestras seleccionadas, en función de los objetivos específicos de cada una de las investigaciones que lo componen. De la misma forma, los procedimientos utilizados, varían y se adaptan a los objetivos concretos de análisis. Finalizado este trabajo se puede concluir que se han cumplido razonablemente los principales objetivos marcados para el mismo. Así, se puede aceptar la validez de la adaptación española del cuestionario de cigosidad utilizado. Se ha comprobado que existe una discordancia importante entre la impresión subjetiva de los gemelos y la clasificación mediante cuestionario y análisis de marcadores genéticos, existiendo una llamativa sobreestimación de la dicigosidad. La proporción de gemelas que viven en el mismo o diferente municipio, a lo largo de su vida, no está influido por el tipo de cigosidad, cumpliéndose en general, y a priori, el supuesto de ambientes idénticos. De la misma forma, el tipo de cigosidad tampoco se relaciona con la proporción de pares que han vivido en el mismo municipio durante los primeros 16 años de vida. Para terminar, tras la estimación de la representatividad de la muestra del RGM respecto a las poblaciones de referencia de Murcia y España, se encuentran resultados que avalan la extrapolación de los datos a la población general. / This doctoral dissertation deals with twin registries and the "Murcia Twin Registry" (MTR) in particular, as a fundamental research resource for in depth understanding of the relative contribution of genetic and environmental factors to behavior. Genetically informative designs, specifically twin studies, are an important resource for the analysis of the causes of human phenotypic variation. These designs are the methodology of choice in order to separate genetic from environmental causes in family resemblance. Currently, such studies are widely implemented and entail a high degree of specialization, in accordance with its enormous research potential. Their development is based on the existence of multiple births records. Nowadays, twin registries are distributed worldwide, and their implantation represent a methodological response to specific twin studies initiated by the scientific community. Zygosity determination, assessment of the equal environment assumption (EEA), and verification of the representativeness of the sample, are core issues of the twin studies methodology. These three elements are the key to ensure the usefulness of the comparisons, and the validity of the results obtained. It therefore seems clear that testing these three questions is an essential principle in establishing the scientific utility of any twin registry. This dissertation has three main objectives: to validate the zygosity questionnaire used so far in the MTR, by means of comparing the classification by this instrument and the zygosity results obtained by genetic markers; to analyze the accuracy of the equal environments assumption among participants of the MTR, comparing the data about periods of shared residence between MZ and DZ twins; and to investigate to what extent the sample of subjects participating in the MTR is representative of the reference population, according to geographical context, sex and age group. The design for the overall development of the MTR is a population-based cohort, consisting of individuals born from multiple births and living in the Region of Murcia. These subjects are included in a twin registry with voluntary participation. This particular work uses the full sample of MTR participants, as well as some selected sub-samples, depending on the specific objectives of each of the investigations that compose it. In the same way, the procedures used vary and adapt to the specific objectives of analysis. The main conclusion of this dissertation is that the general objective of validating the MTR as a research resource has been reasonably achieved. Some of the main findings that contribute to that objective can be highlighted. The validity of the Spanish adaptation of the zygosity questionnaire has been proved. There is a major discrepancy between the subjective zygosity classification of the twins, and the classification by questionnaire and analysis of genetic markers, showing a striking overestimation of dizygosity. The proportion of twins living in the same or different municipality throughout their lives is not influenced by the type of zygosity, fulfilling in general, and a priori, the equal environment assumption. What is more, zygosity is not related to the proportion of pairs who have lived in the same town during the first 16 years of life. Finally, the representativeness of the sample of the MTR in relation to the reference populations of Murcia and Spain has been estimated and the results support the generalizability of the data to the general population.

Las inmunodeficiencias primarias constituyen un grupo de enfermedades de etiología diversa que tienen en común un defecto cualitativo o cuantitativo del sistema inmunitario a consecuencia del cual se alteran sus funciones, comprometiendo la defensa contra las agresiones externas. En el presente trabajo se describen las características clínicas e inmunológicas de pacientes con sospecha de inmunodeficiencia primaria o síndromes linfoproliferativos en los que se llevó a cabo el diagnóstico molecular. Se evaluó la capacidad oxidativa de granulocitos en una paciente que había sufrido infecciones de repetición por bacterias catalasa positiva, observándose la falta de producción de superóxido. El estudio genético de la subunidad p47-phox de la NADPH-oxidasa mostró una deleción del dinucleótido GT al inicio del exón 2 del gen NCF1, siendo diagnosticada de Enfermedad Granulomatosa Crónica. Se estudió el caso de un paciente con infecciones de repetición durante el periodo neonatal y una severa linfopenia T y B. Se realizó el diagnóstico de Déficit de ADA a través de un ensayo de actividad enzimática. Posteriormente, se realizó un trasplante alogénico de donante emparentado haploidéntico, con exitosa recuperación del sistema inmunológico. Analizamos un paciente varón con sospecha clínica de inmunodeficiencia humoral, con un número disminuido de células B e hipogammaglobulinemia. Por métodos bioquímicos se puso de manifiesto la falta de expresión de la proteína Btk. El análisis genético del gen BTK, mostró una nueva mutación (Q103X) que afectaba al dominio PH de la Btk, siendo diagnosticado de XLA con una correlación completa entre el genotipo, expresión proteica y fenotipo clínico. En los casos estudiados con Síndrome de Hiper IgM se descartó que fuesen formas debidas a alteraciones en las moléculas principales del eje CD40-CD40L. Encontramos ausente la población de células B memoria, analizando la expresión de IgM y CD27 en células B CD20+. Se realizó el estudio genético del gen AID, así como de las regiones constantes de las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas, sin encontrar alteraciones. Estas características nos indican que el defecto en el cambio de isotipo podría encontrarse en este proceso tras la rotura del DNA y nos permite caracterizarlos dentro del grupo HIGM4.Se analizan los rasgos clínicos, inmunológicos y genéticos de once pacientes con sospecha de ALPS. Hemos descrito dos familias con mutaciones que afectan al residuo 234 de la proteína FAS, las cuales se correlacionan con una apoptosis vía Fas disminuida, con la presencia de células DNT y con una penetrancia clínica variable, lo que nos permite definirlas como ALPS tipo Ia. El resto de los pacientes, sin mutaciones en Fas, con alteraciones funcionales en la apoptosis vía Fas se clasifican en el grupo de ALPS III.Por último, se ha estudiado una población doble positiva (DP) en un paciente con patología respiratoria. Las características de la población indican que fenotípicamente se trata de una población T CD3+CD4+CD8+&#945;&#946;, que funcionalmente pertenece a la estirpe de células T colaboradoras CD4. La expresión de CD103 y de CCR6 en la población DP, y su presencia en el órgano diana de la enfermedad, justifican su tropismo a mucosa pulmonar y relacionan dicha población con la patología respiratoria. Aunque el paciente no presentó rasgos de malignidad, el análisis del repertorio V&#946; mostró reordenamientos clonales, que junto a las alteraciones cromosómicas sugerirían un estado preleucémico, que requeriría alteraciones adicionales para desarrollar un proceso neoplásico franco. Los resultados de esta Tesis muestran que la complejidad de las patologías que afectan al sistema inmunológico, requiere técnicas cada vez más específicas para determinar los defectos responsables de un fenotipo concreto. El estudio genético, molecular y funcional sistemático de estas enfermedades permite diagnosticar y clasificar entidades ya descritas, así como abordar el diagnóstico de nuevas patologías. / Although primary immunodeficiency disorders are relatively rare, intensive investigation of these disorders has yielded great understanding of basic immunologic mechanisms in host defense, inflammation, and autoimmunity. In this thesis we described the clinical and immunological features of patients with suspected of primary immunodeficiency disorders or lymphoproliferative syndromes. We assessed the NADPH oxidase activity in a patient with catalase-positive microbial infections, the results showed a deficiency in superoxide production. The mutation analysis of the structural component p47-phox revealed a GT deletion in a GTGT repeat sequence at the beginning of exon 2 of NCF1, with the subsequent diagnosis of Chronic granulomatous disease.We studied a patient with overwhelming infections within the first year of life and severely reduced counts of peripheral T and B cells. The patient had no detectable ADA activity associated with severe metabolic disturbances. He was treated with histocompatible bone marrow transplantation from haploidentical related donor, with successful recovery of the immunological system.We analyzed a patient with recurrent pneumonia characterized by low to undetectable levels of B cells and serum immunoglobulins. The expression of BTK protein was completely abolished in this patient evaluated by Western-blot. We described a novel mutation (Q103X) resulting in a premature stop codon, which encodes a deleterious truncated protein. We found a complete phenotype/genotype correlation in our XLA patient.We studied two patients characterized by very low IgG and IgA levels and normal or increased IgM diagnostic of Hyper-IgM syndrome. The CD154/CD40 pathway was analyzed discarding alterations. Mature class-switched CD27+IgM- memory B cells were profoundly diminished. The molecular analysis of AID and immunoglobulin heavy chains revealed no mutations. Although the molecular basis of these cases is still unknown, their clinical and immunologic findings have been well characterized.Several patients with clinical and immunological features of ALPS were analyzed. The molecular analysis of Fas gene showed two families with heterozygous mutations affecting different positions of 234 codon associated with increased &#945;&#946;-DNT cells and defective in vitro receptor-mediated lymphocyte apoptosis. Other patients in this study with a clinical syndrome of ALPS have been found to have a normal FAS gene with impaired in vitro apoptosis and were diagnosed of ALPS IIII.We report an adult male who had recurrent episodes of pulmonary infiltrates with severe acute respiratory failure over a period of ten years. Clinical and pathological characteristics revealed BOOP that responded dramatically to Prednisone and other immunosuppressor treatments. A high proportion of circulating double positive T (DP-T) cells was detected in peripheral blood and in bronchoalveolar lavage, the entire DP-T cell subset were to TCR&#945;&#946; CD3+CD4+CD8&#945;&#946;+ lymphocytes. The CD103 and CCR6 expression in DP-T cells could explain their tropism to lung tissue. The TCRV-&#946; chain analysis indicated clonal rearrangement and cytogenetic studies displayed chromosomic alterations that were similar to clonal proliferation observed in ataxia-telangiectasia and T-prolymphocytic leukemia. These findings suggest a smouldering form, in which the first sign is an organizing pneumonia that needs a constant corticoid treatment. Our results show that the complexity of pathologies that affect the immune system demand more specific techniques to determine the defects of a specific phenotype. The genetic, molecular and functional systematic analysis of these diseases allows a proper diagnosis and classification of known entities, and screen for undescribed pathologies.