Orientadores: Sergio Marangoni, Luis Alberto Ponce Soto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T10:22:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Heleno_MauricioAurelioGomes_D.pdf: 8695465 bytes, checksum: 8ac64464abefb901cab1d4e5b6b96336 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Uma grande variedade de toxinas provenientes de venenos animais tem sido largamente utilizada no estudo de mecanismos de ação e processos fisiológicos, sendo consideradas valiosas ferramentas moleculares. As serpentes peçonhentas expressam no veneno diversas proteínas muito estudadas e utilizadas clinicamente, apresentando diferentes graus de variabilidade inter e intraespecífica em suas composições e nos seus efeitos biológicos. O conhecimento obtido com os estudos destas moléculas tem grande importância clínica na compreensão dos processos fisiopatológicos envolvidos nos envenenamentos ofidicos e também acadêmico-tecnológica, devido à possibilidade do desenvolvimento de novos instrumentos moleculares utilizados na pesquisa e também de novos modelos moleculares para princípios ativos de drogas. Neste trabalho pesquisamos as atividades neurotóxica, miotóxica e inflamatória de uma PLA2 básica, D49, purificada do veneno da serpente Bothrops roedingeri após duas etapas cromatográficas, exclusão molecular em Sephadex G-75 e hidrofobicidade em HPLC de fase reversa em coluna 'mi'-Bondapak C-18. A BrTX-I apresentou massa molecular relativa em tomo de ~14 kDa (SDS-PAGE) e confirmada por espectrometria de massas (ESI-MS), em 14.358,69 Da. A análise da composição de aminoácidos da BrTX-I, revelou que esta é constituída aproximadamente por 120 resíduos aminoacídicos, com alto conteúdo de aminoácidos básicos e hidrofóbicos, resultando em um valor calculado de pI de 8,63. A presença de 14 resíduos de cisteína sugere a formação de sete pontes dissulfeto. A análise estrutural da BrTX-I foi realizada por ESI-MS e as regiões analisadas mostraram semelhança com outras PLA2 miotóxicas isoladas de venenos botrópicos. A BrTX-I apresentou alta atividade PLA2 e um comportamento tipo sigmoidal em baixas concentrações do substrato. Atividade PLA2 ótima da BrTX-I foi em pH 8,0 e temperatura de 37°C. A BrTX-I mostrou-se dependente de Ca2+ (mM) e na sua substituição por zn+2, Mn+2, Mg+2 e Cd+2 a atividade foi reduzida. O estudo da homologia sequencial da BrTX-I mostrou posições extremamente conservadas na molécula. Nas posições 1 e 2 há predominância da sequência de aminoácidos (DL), na posição 4 (Q). Uma das regiões altamente conservadas na sequência de aminoácidos das PLA2 é a alça de ligação ao cálcio, segmento ...YGCYCGXGG. Resíduos formando a alça de ligação ao cálcio e a rede catalítica da BrTX-I mostraram um alto grau de conservação, refletindo na manutenção da atividade. A região relacionada à atividade neurotóxica pré-sináptica (80-11 O) apresentou principalmente resíduos hidrofóbicos. Em preparações ex vivo, o veneno e a BrTX-I causaram rápido bloqueio da neurotransmissão na preparação biventer cervicis de pintainho de modo similar a outras Bothrops, sem alterar significativamente as respostas contraturantes à adição de AChe de KCl (5 e 20 'mi'g/mL), indicando atividade neurotóxica pré-sináptica. Em camundongos, a BrTX-I induziu miotoxicidade local, determinada pelo aumento nos níveis plasmáticos de CK e mostrou efeito pró-inflamatório analisado através da formação do edema de pata e liberação das citocinas IL-1 , IL-6 e TNF-'alfa'. Como BrTX-I produz um efeito inflamatório, a hidrólise de fosfolipídios pode ser relevante na fisiopatología do envenenamento / Abstract: A great variety of animal venom toxins has been widely used in the study of action mechanisms and metabolic processes, thus considered valuable molecular tools. Poisonous snakes contains in their venom several well studied and clinically used proteins, showing these venoms different intra or interspecific variability degrees in their composition and biological effects. The knowledge obtained with these molecules study, has a great clinical relevancy understanding pathophysiological process regarding snake envenomations, and also academic technological, due to the possibility to develop new molecular tools and new molecular models to study active principies of some drugs. ln this work, we study neurotoxic, myotoxic and inflammatory activities of BrTX-I, a basic PLA2, purified from Bothrops roendigeri snake venom after two chromatographic steps, using molecular exclusion chromatography (Sephadex G-75) and reverse phase HPLC on 'mi'-Bondapak C-18 column. BrTX-I showed relative molecular mass around 14 kDa (PAGE) and specific molecular mass of 14,358.69 Da was determined by ESl-MS mass spectrometry. The amino acid composition analysis showed that BrTX-I contains 120 aminoacidic residues with high content of basic and hydrophobic amino acids, resulting in a calculated pi value of 8. 63. The presence of 14 Cysteine residues, suggests the formation of seven dissulfide bonds. Structural analysis of BrTX-I PLA2, performed by ESI-MS showed high identity values when compared to other myotoxic PLA2, isolated from Bothrops snakes venoms. BrTX-I presented high PLA2 activity and showed a sigmoidal behavior at low substrate concentrations. The BrTX-I reached its maximal PLA2 activity at pH 8.0 and 37 °C. Maximum PLA2 activity required Ca2+ (mM) and substitution of Ca2+ by zn+2, Mn+2, Mg+2 or Cd+2 showed reduced enzymatic activity. Sequence homology studies of BrTX-I showed extremely conserved positions in the molecule. ln positions 1 and 2, there is a predominance of the amino acids sequence (DL), and in position 4 (Q). One of the highly conserved regions in the amino acid sequences of PLA2 is the Ca2+ -binding loop, segment ... YGCYCGXGG. Residues forming the Ca2+-binding loop and the catalytic network of BrTX-I PLA2 showed a high conservation grade, reflecting the non-decreased catalytic activity. The region related to the presynaptic neurotoxic activity (80-110), showed mainly the presence of hydrophobic residues. ln ex vivo studies, the whole venom and BrTX-I caused a fast blockade of the neuromuscular transmission in young chick biventer cervicis preparations m a similar way to other Bothrops species, without alters significantly the contractures induced by ACh and KCL at doses of 5 and 20 'mi'g/mL, respectively, indicating presynaptic neurotoxic activity. ln mice, BrTX-I induced local myotoxicity, determined by increase in CK serum leveis, and showed proinflammatory effects analyzed through edema-forming activity and citokines IL-1 , IL-6, and TNF'alpha' release. Once BrTX-I induces a strong pro-inflammatory effect, the enzymatic phospholipid hydrolysis may be relevant for envenomation pathophysiology / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-20T13:01:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE FINAL keila.pdf: 532756 bytes, checksum: c49aa0e3efc358990d4c25a3cdffcf32 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-20T13:01:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE FINAL keila.pdf: 532756 bytes, checksum: c49aa0e3efc358990d4c25a3cdffcf32 (MD5) Previous issue date: 2015-02-10 / CNPQ / OBJETIVO:este estudo avaliou os efeitos clínicos e metabólicos, além da avaliação polimórfica da Il-1ß, IL-12 e IL-10, de pacientes com periodontite crônica e diabetes tipo 2, comparando a terapia periodontal convencional e a terapia cirúrgica no tratamento de bolsas residuais nos períodos de 0, 3 e 6 meses. MATERIAL E MÉTODOS:este ensaio clínico randomizado controlado foi conduzido em 30 pacientes com bolsas residuais contralaterais, alocados randomicamente em dois grupos: G1 (n=16) - terapia cirúrgica – e G2 (n=14) – terapia convencional. Os parâmetros clínicos periodontaise metabólicos foram avaliados nos meses 0, 3 e 6. Também foi avaliada a distribuição de genótipos polimórficos das interleucinas IL-1, IL-10 e IL-12. RESULTADOS:houve uma melhora significativa nos níveis de Hb1Ac no G1 quando comparada ao G2 nos meses 3 e 6 (p<0,05). As médias da profundidade de sondagem (PS) e do nível de inserção clínica (NIC) foram reduzidas no G1 no tempo (0-6) (p<0,05) sem diferença estatisticamente significante quando comparado ao G2 nos tempo avaliados. Houve uma redução significativa no G2 quanto ao NIC no tempo (3-6) (p<0,05). Não houve diferença significativa quando avaliada e comparada a distribuição dos polimorfismos no G1 e G2 com os parâmetros clínicos avaliados (p>0,05). CONCLUSAO:a terapia cirúrgica periodontal trouxe melhorias no controle da Hb1Ac de pacientes diabéticos tipo 2 embora quando avaliados os parâmetros clínicos periodontais PS , NIC, as duas modalidades terapêuticas comportaram-se de forma semelhante. A presença de polimorfismos não influenciou a resposta ao tratamento periodontal nos dois grupos estudados. / OBJECTIVES: this study evaluated the effects clinical and metabolic moreover evaluated polimorphisms of IL-1ß, IL-12 and IL-10 inpacients with chronic periodontitis and diabetes type 2 comparing surgical and non surgical therapies on residual pockets over at baseline, 3 and 6 months post-therapy. MATERIAL AND METHODS:this randomized controlled trial was conduzed in 30 subjects presents contralateral residual pockets randomicaly allocated in 2 groups: G1 (n=16) – surgical therapy – and G2 (n=14) – non surgical therapy. Metabolics and periodontal clinical parameters were assessed at baseline, 3 and 6 months post-therapy. Distribution of polymorphic genotypes of IL-1, Il-10 and IL-12 was assessed. RESULTS:there was a significant improvement in Hb1Ac levels in G1 compared to G2 in the months 3 and 6 (p<0,05). The mean number, PD and CAL improved significantly after therapy in G1 (0-6) (p<0,05) without differences between groups at any timepoint(p>0,05).CAL was improved significantlyin G2 ate (3-6) (p<0,05). There was no significant difference when evaluated and compared the distribution of polymorphisms of interleukins in the G1 and G2 with clinical parameters evaluated (p>0,05). CONCLUSION: periodontal surgical therapy improves Hb1Ac levels in diabetics type 2 although when evaluated PD and CALboth therapisbehaved similarly.The presence of polymorphisms did not influence the response to periodontal treatment in both groups.

Determinamos o comportamento destes mediadores em pacientes com insuficiência aórtica crônica importante ( IAo ). Materal e métodos:Analisamos 89 portadores de Insuficiência Aórtica crônica importante, média etária de 33,6±11,5 anos, 84,6% sexo masculino, 60% assintomáticos, todos de etiologia reumática . Os pacientes foram submetidos a avaliação clínica e ecocardiográfica. Os valores médios foram: diâmetro diastólico (DD ) do ventrículo esquerdo ( VE ) de 71,9±8,3mm e o diâmetro sistólico ( DS ) do VE de 50,4±9,3mm, e a fração de ejeção ( FE ) do VE de 0,64±0,11. Realizamos a dosagem de Fator de Necrose Tumoral ( TNF ), seus receptores solúveis tipo I e II ( sTNFRI e sTNFR II ) , Interleucina-6 ( IL-6 ), seu receptor ( IL-6R), interleucina 1-beta ( IL-1beta ) , seu antagonista ( IL1-RA ) e endotelina-1 ( ET-1 ). Comparamos com níveis séricos de controles saudáveis. Conjuntamenete analisamos o polimorfismo genético do gene do TNF, localizado a -308 pares de bases do sítio de iniciação. Resultados: Os níveis séricos de TNF forma significativamente maiores em pacientes com IAo do que em controles normais ( 92,65±110,24 pg/ml contra 1,67±1,21 em controles normais, p < 0,001 ). Tiveram comportamentos similares os níveis séricos de sTNFRI ( 894,75±348,87pg/ml vs 521,42±395.13pg/ml em controles, p=0,007 ) e IL-6 ( 7,17±7,78pg/ml vs 0,81±0,38pg/ml, p=0,0001 ). Observamos correlação significativa entre níveis de sTNFRII e DDVE ( r=-0,329, p=0,038 ) e DSVE ( r=-0,352, p=0,027). Não observamos relação de níveis séricos de citocinas com sintomas. As outras citocinas não guardaram relação com parâmetros de gometria e função ventricular. A presença do alelo 2 do polimorfismo genético do TNF associou-se a paciente assintomáticos com IAo. Conclusão: Demonstramos níveis elevados de citocinas proinflamatórias em pacientes com IAo em relação a controles normais. Os níveis de sTNFRII diminuem com o aumento dos diâmetros ventriculares. A presença do alelo 2 do polimorfismo -308 do TNF associa-se a pacientes assintomáticos com IAo / Background - Proinflamatory cytokines are implied in the phisiopatology of heart failure secoundary to ischaemic or idiophatic dilated cardiomiopathy, but there are few studies regarding these mediators in valular heart disease. We determined the behaivour of proinflamatory cytokines and their antagonists in patients with chronic severe aortic regurgitation ( IAo ) Methods - We analised 89 patients with IAo mean age 33.6±11.5 years, 84.6% male, 60% asymptomatic, all of rheumatic etiology. Patients were evaluated clinnicaly and by echocardiography. Mean values were : left ventricular ( LV ) diastolic diameter ( DD ) 71.9±8.3mm, LV systolic diameter ( SD ) 50.4±9.3mm and ejection fraction 0.64±0.11. We made the plasma dosages of tumor necrosis factor-alpha ( TNF ), its soluble receptors type I and II ( sTNFRI and sTNFR II ) , Interleukin 6 ( IL-6 ) and its receptor ( IL-6R ), Interleukin 1-beta ( IL-1beta ) , its antagonist ( IL1-RA ) and endothelin-1 ( ET-1 ). Plasma levels were compared to healthy controls. We also analysed the TNF gene polimorphism, located at - 308 base pairs from the initation site. Results - Plasma TNF levels were significantly increased in IAo patients in telation to normal controls (92.65±110.24 pg/ml vs 1.67±1.21 pg/ml in controls, p < 0.001 ). Similar behaivour was observed with IL-6 (7.17±7.78pg/ml in IAo patients vs 0,81±0,38pg/ml in controls , p=0.0001 ) and sTNFRI (894.75±348.87pg/ml vs 521.42±395.13pg/ml in controls, p=0,007 ). We observed and significant relation between sTNFRII levels and LVDD ( r=-0,329, p=0,038 ) e LVSD ( r=-0,352, p=0,027). Levels of cytokines were similar in asymptomatic and sympromatic patients and the other cytokines had no relation to ventricular diameters or function. Presence of the alele 2 of the -308 TNF polimorphism was associated to asymptomatic patients. Conclusion - We showed increased plasma levels of proinflamatory cytokines in patients with IAo in relation to normal controls. There was an decrease of sTNFRII levels with increase in ventricular diameters. The presence of the alele 2 of the -308 TNF polimorphism was associated to asymtomatic patients

A doença de Chagas é um problema de saúde pública, com dados preocupantes do número de pessoas contaminadas e que ainda irão se contaminar. O objetivo desta investigação é avaliar o efeito da melatonina sobre o sistema imune na infecção chagásica experimental. Produzida pela glândula pineal possui várias ações fisiológicas, entre elas a mais importante, controlar o ritmo circadiano na grande maioria dos seres vivos. A melatonina foi administrada por via oral, tendo seu efeito avaliado através da quantificação dos níveis parasitêmicos, leucograma, histopatologia cardíaca e por ensaios imunológicos como IFN, TNF, IL-2, IL-12. A parasitemia foi drasticamente diminuída nos animais infectados e tratados com melatonina refletindo em uma diminuição ou quase ausência da presença de ninhos de amastigotas nas fibras cardíacas desses animais. A melatonina promoveu uma leucocitose com aumento dos neutrófilos e linfócitos. Não foi observada morte em nenhum dos grupos infectados tratados ou não com melatonina. Os ensaios imunológicos mostraram que as citocinas quantificadas apresentaram uma ação imunoestimuladora aumentada em relação aos grupos infectados que certamente foi responsável pela diminuição da carga parasitária sanguícola e tecidual. Dessa forma conclui-se que a melatonina exerceu um papel imunoestimulador importante, agindo sobre o eixo HHA que se refletiu em uma melhor resposta do hospedeiro durante o curso da infecção experimental. / Chagas disease is still considered a major problem in public health, with an alarming number of bearing parasite people and the risk of future contamination. The aim of this investigation is to evaluate a possible immunostimulatory effect of melatonin during the evolution of the experimental disease in Wistar rats infected with the Y strain of T. cruzi. Produced by pineal gland, it has a wide range of physiological functions, among them to control the circadian rhythm in most of the species. In this work melatonin was orally administrated being its effects evaluated by the number of blood trypomastigotes, leucogram, heart hystopathologyn and immunologic assays such IFN-, TNF-, Il-2, Il-12. Parasitemia was drastically reduced in melatonin treated infected animals consequently leading to a drop in the number of amastiogoter burdens being sacarcely found among heart fibers. Melatonin promoted a leucocytosis with enhanced levels of neutrophils and lymphocites. Absence of death was observed in all groups. Immuno-enhanced effects were observed with assays of IL-2, IL12, IFN- and TNF-. when compared to non treated animals. According to our data we conclude that Melatonin displayed an immunostimatory effect over the HHA axis, reducing blood and tecidual parasite consequently avoiding parasite replication during the evolution of the experimental infection in rats.

Analisamos a expressão de IL-10, IFN-<font face=\"symbol\">g e, seus receptores pelas células trofoblásticas de camundongos, citocinas anti e pró-inflamatórias. Cones ectoplacentários aos 7,5 dias de gestação foram cultivados por 48 h e em seguida tratados com 100 U/mL IFN-<font face=\"symbol\">g ou 10 <font face=\"symbol\">hg/mL IL-10. Após 6 h e 14 h, as amostras foram processadas para análise da expressão gênica por RT-PCR e protéica por imunohistoquímica, respectivamente. Grupos controle não receberam tratamento. IFN-<font face=\"symbol\">g aumentou a expressão de IL-10R1 mas não a de IL-10 nas células trofoblásticas. IL-10, ao contrário, aumentou a expressão de IFN-<font face=\"symbol\">g, mas diminuiu IFN-<font face=\"symbol\">gR<font face=\"symbol\">a e não alterou IFN-<font face=\"symbol\">gR<font face=\"symbol\">b. Reações imunohistoquímicas confirmaram os resultados de expressão gênica. Isto sugere que o trofoblasto pode participar da imunidade da interface materno-placentária aumentando a expressão de IFN-<font face=\"symbol\">g em situações em que no meio há aumento de citocinas anti-inflamatórias, o que deve ser o reflexo da necessidade e importância desta citocina para o sucesso da gestação. / Key cytokines such as IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g, essential for immune response regulation, have also been found locally at maternal-placental interface during mouse pregnancy. Particularly, levels of IL-10 characterize an anti-inflammatory environment associated to the inhibition of T helper-1 lymphocytes (Th1) development and the proliferative stimulation of the B lymphocytes (humoral response). On the other hand, increases in IFN-<font face=\"symbol\">g profile prevent T helper-2 lymphocytes (Th2) activation leading to an inflammatory response that favors a Th1 response. The local production of these cytokines by NK uterine cells and T gd lymphocytes are relevant, but not exclusive. Thus, this study analyzed the potential contribution of the trophoblast in the maintenance of Th1/Th2 balance in the maternal-placental interface, represented, respectively by the expression of IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g cytokines. The expression of the anti-inflammatory cytokine IL-10 and its receptor was evaluated in the presence of an inflammatory environment mimetized by IFN-<font face=\"symbol\">g addition to the culture medium. On contrary, the expression of the IFN-<font face=\"symbol\">g (and its receptor) was evaluated in the presence of IL-10 characterizing an anti-inflammatory condition. Mouse trophoblast cells were isolated from implantation sites at gestational day 7.5 and cultured in standard conditions. Gene and protein expression were determined by immunohistochemistry and RT-PCR. IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g and their receptors were expressed in cultured trophoblast cells in the absence or presence of IFN-<font face=\"symbol\">g and IL-10, respectively. IFN-<font face=\"symbol\">g treatment increased IL-10R1 expression but do not alter IL-10 expression. On contrary, in the presence of IL-10 the IFN-<font face=\"symbol\">g expression increased significantly while the expression of its receptor decreased. These results suggest that a proinflammatory environment increases trophoblast responsiveness to IL-10 whereas an anti-inflammatory condition seems to reinforce the importance of IFN-<font face=\"symbol\">g expression at the maternal-placental interface, on the initial periods of gestation.

O desencadeamento da asma está sob influência do sistema imunológico onde a sensibilização ao antígeno, seu processamento e geração de anticorpos norteiam o desenvolvimento da resposta alérgica. Nesse contexto, as moléculas do complexo principal de histocompatibilidade e as moléculas co-estimuladoras da superfície de células apresentadoras de antígeno ocupam lugar de destaque. Estudos dos hormônios sexuais femininos (HSF) sobre a qualidade/ função das células dendríticas (DCs) no processo de sensibilização ainda não foram explorados. Neste estudo, analisamos, em modelo murino de asma, a participação dos HSF na maturação das DCs. Avaliamos a expressão de moléculas co-estimuladoras (CD40, CD80, CD86) em DCs (CD11c+) de camundongos fêmeas alérgicas, nas quais os ovários foram removidos 7 dias antes da sensibilização. Os dados obtidos indicaram que os HSF podem mediar a apresentação de antígeno ao modular a população de células dendríticas bem como suas moléculas co-estimuladoras, podendo interferir no desenvolvimento da resposta imune adquirida. / The trigger and the maintenance of asthma are influenced by immune system and its sensibilization. Antigen processing and antibody generation implicate on the allergic response development observed in asthmatic subjects. Results obtained in our laboratory showed that the female sex hormones oscillation during sexual cycle influences on the worsening of asthma. In this study, we analysed the participation of female sex hormones (FSH) on dendritic cells (DCs) maturation and consequently antigen presentation and lymphocyte activation during pulmonary inflammation. Furthmore, we studied immunorregulatory aspects and co-stimulatory molecules expression in allergic mice DCs (DC11c+), in wich ovaries were removed 7 days before allergen sensitization. The results obtained indicate that the FSH can modulate the antigen presentation by reducing DCs expression of costimulatory molecules. Altogether, our data contributes to a better understanding of the mechanisms envolving the regulation of immune response through interaction with FSH.

A exposição a eventos traumáticos durante a infância está associada a um prejuízo na cognição, neurobiologia e morfologia cerebral. No entanto, não se sabe se o trauma está relacionado a essas mudanças em amostras que não apresentam potenciais fatores de confusão como idade avançada, cronicidade do transtorno psiquiátrico e múltiplos episódios de humor. O impacto do trauma na infância foi avaliado em duas amostras diferentes nesta tese: 1) crianças com e sem história de trauma; 2) pacientes com diagnóstico de THB logo após a recuperação do primeiro episódio de mania com e sem história de trauma na infância e controles saudáveis com e sem história de trauma na infância. Os resultados sugerem que o trauma está associado a mudanças na neurobiologia, cognição e morfologia cerebral. Crianças com trauma apresentaram aumento nos níveis de BDNF, TNF-α, IL-6 e IL-10 comparadas com crianças sem trauma. No entanto, após a exclusão de crianças com história de doença inflamatória, apenas os níveis de BDNF e TNF-α permaneceram aumentados em crianças com trauma. Na população com transtorno bipolar, a história de trauma na infância foi associada a uma diminuição no QI, atenção auditiva e memória verbal e memória de trabalho enquanto um padrão diferente foi observado nos controles saudáveis com história de abuso infantil. Pacientes com THB e trauma também apresentaram menor volume total do CC em comparação aos pacientes com THB e sem trauma, com diferenças significativas também na região anterior do CC. Por outro lado, não encontramos diferenças significativas entre o volume do CC nos pacientes com ou sem trauma em comparação aos controles saudáveis. Estes achados reforçam a extensão e gravidade do impacto negativo do trauma na infância, em diferentes etapas do desenvolvimento, afetando tanto aspectos cognitivos, como neurobiológicos e de morfologia cerebral. / Exposure to traumatic events during childhood is associated with impairment in cognition, neurobiology and brain morphology. However, it is unknown if trauma is related to these changes in samples that do not show the potential confounds of advancing age, chronicity of psychiatry disorder and multiple mood episodes. We evaluated the impact of childhood trauma in two different samples: 1) children with and without childhood trauma; 2) pacients with a BD diagnosis recently recovered from a first manic episode with and without childhood trauma and healthy controls with and without childhood trauma. The results suggest that childhood trauma is associated to changes in neurobiology, cognition and brain morphology. Children with trauma showed higher levels of BDNF, TNF-α, IL-6 e IL-10 compared to children without trauma. However, after excluding children with history of inflammatory disease, only BDNF and TNF-α levels remained increased in children with trauma. In BD patients, the childhood trauma was associated to a decreased IQ, auditory attention, verbal memory, and working memory and a different pattern was observed in healthy subjects with a history of childhood abuse. The total CC volume was found to be smaller in BD patients with trauma compared to BD patients without trauma and differences were more pronounced also in the anterior region of the CC. On the other hand, we did not find significant differences in the CC volume of patients with/without trauma compared to the healthy subjects. These findings reinforce the extent and severity of the negative impact of childhood trauma in different stages of development, affecting cognitive aspects, as well as neurobiological and brain morphology.

A exposição a eventos traumáticos durante a infância está associada a um prejuízo na cognição, neurobiologia e morfologia cerebral. No entanto, não se sabe se o trauma está relacionado a essas mudanças em amostras que não apresentam potenciais fatores de confusão como idade avançada, cronicidade do transtorno psiquiátrico e múltiplos episódios de humor. O impacto do trauma na infância foi avaliado em duas amostras diferentes nesta tese: 1) crianças com e sem história de trauma; 2) pacientes com diagnóstico de THB logo após a recuperação do primeiro episódio de mania com e sem história de trauma na infância e controles saudáveis com e sem história de trauma na infância. Os resultados sugerem que o trauma está associado a mudanças na neurobiologia, cognição e morfologia cerebral. Crianças com trauma apresentaram aumento nos níveis de BDNF, TNF-α, IL-6 e IL-10 comparadas com crianças sem trauma. No entanto, após a exclusão de crianças com história de doença inflamatória, apenas os níveis de BDNF e TNF-α permaneceram aumentados em crianças com trauma. Na população com transtorno bipolar, a história de trauma na infância foi associada a uma diminuição no QI, atenção auditiva e memória verbal e memória de trabalho enquanto um padrão diferente foi observado nos controles saudáveis com história de abuso infantil. Pacientes com THB e trauma também apresentaram menor volume total do CC em comparação aos pacientes com THB e sem trauma, com diferenças significativas também na região anterior do CC. Por outro lado, não encontramos diferenças significativas entre o volume do CC nos pacientes com ou sem trauma em comparação aos controles saudáveis. Estes achados reforçam a extensão e gravidade do impacto negativo do trauma na infância, em diferentes etapas do desenvolvimento, afetando tanto aspectos cognitivos, como neurobiológicos e de morfologia cerebral. / Exposure to traumatic events during childhood is associated with impairment in cognition, neurobiology and brain morphology. However, it is unknown if trauma is related to these changes in samples that do not show the potential confounds of advancing age, chronicity of psychiatry disorder and multiple mood episodes. We evaluated the impact of childhood trauma in two different samples: 1) children with and without childhood trauma; 2) pacients with a BD diagnosis recently recovered from a first manic episode with and without childhood trauma and healthy controls with and without childhood trauma. The results suggest that childhood trauma is associated to changes in neurobiology, cognition and brain morphology. Children with trauma showed higher levels of BDNF, TNF-α, IL-6 e IL-10 compared to children without trauma. However, after excluding children with history of inflammatory disease, only BDNF and TNF-α levels remained increased in children with trauma. In BD patients, the childhood trauma was associated to a decreased IQ, auditory attention, verbal memory, and working memory and a different pattern was observed in healthy subjects with a history of childhood abuse. The total CC volume was found to be smaller in BD patients with trauma compared to BD patients without trauma and differences were more pronounced also in the anterior region of the CC. On the other hand, we did not find significant differences in the CC volume of patients with/without trauma compared to the healthy subjects. These findings reinforce the extent and severity of the negative impact of childhood trauma in different stages of development, affecting cognitive aspects, as well as neurobiological and brain morphology.

O desencadeamento da asma está sob influência do sistema imunológico onde a sensibilização ao antígeno, seu processamento e geração de anticorpos norteiam o desenvolvimento da resposta alérgica. Nesse contexto, as moléculas do complexo principal de histocompatibilidade e as moléculas co-estimuladoras da superfície de células apresentadoras de antígeno ocupam lugar de destaque. Estudos dos hormônios sexuais femininos (HSF) sobre a qualidade/ função das células dendríticas (DCs) no processo de sensibilização ainda não foram explorados. Neste estudo, analisamos, em modelo murino de asma, a participação dos HSF na maturação das DCs. Avaliamos a expressão de moléculas co-estimuladoras (CD40, CD80, CD86) em DCs (CD11c+) de camundongos fêmeas alérgicas, nas quais os ovários foram removidos 7 dias antes da sensibilização. Os dados obtidos indicaram que os HSF podem mediar a apresentação de antígeno ao modular a população de células dendríticas bem como suas moléculas co-estimuladoras, podendo interferir no desenvolvimento da resposta imune adquirida. / The trigger and the maintenance of asthma are influenced by immune system and its sensibilization. Antigen processing and antibody generation implicate on the allergic response development observed in asthmatic subjects. Results obtained in our laboratory showed that the female sex hormones oscillation during sexual cycle influences on the worsening of asthma. In this study, we analysed the participation of female sex hormones (FSH) on dendritic cells (DCs) maturation and consequently antigen presentation and lymphocyte activation during pulmonary inflammation. Furthmore, we studied immunorregulatory aspects and co-stimulatory molecules expression in allergic mice DCs (DC11c+), in wich ovaries were removed 7 days before allergen sensitization. The results obtained indicate that the FSH can modulate the antigen presentation by reducing DCs expression of costimulatory molecules. Altogether, our data contributes to a better understanding of the mechanisms envolving the regulation of immune response through interaction with FSH.

Analisamos a expressão de IL-10, IFN-<font face=\"symbol\">g e, seus receptores pelas células trofoblásticas de camundongos, citocinas anti e pró-inflamatórias. Cones ectoplacentários aos 7,5 dias de gestação foram cultivados por 48 h e em seguida tratados com 100 U/mL IFN-<font face=\"symbol\">g ou 10 <font face=\"symbol\">hg/mL IL-10. Após 6 h e 14 h, as amostras foram processadas para análise da expressão gênica por RT-PCR e protéica por imunohistoquímica, respectivamente. Grupos controle não receberam tratamento. IFN-<font face=\"symbol\">g aumentou a expressão de IL-10R1 mas não a de IL-10 nas células trofoblásticas. IL-10, ao contrário, aumentou a expressão de IFN-<font face=\"symbol\">g, mas diminuiu IFN-<font face=\"symbol\">gR<font face=\"symbol\">a e não alterou IFN-<font face=\"symbol\">gR<font face=\"symbol\">b. Reações imunohistoquímicas confirmaram os resultados de expressão gênica. Isto sugere que o trofoblasto pode participar da imunidade da interface materno-placentária aumentando a expressão de IFN-<font face=\"symbol\">g em situações em que no meio há aumento de citocinas anti-inflamatórias, o que deve ser o reflexo da necessidade e importância desta citocina para o sucesso da gestação. / Key cytokines such as IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g, essential for immune response regulation, have also been found locally at maternal-placental interface during mouse pregnancy. Particularly, levels of IL-10 characterize an anti-inflammatory environment associated to the inhibition of T helper-1 lymphocytes (Th1) development and the proliferative stimulation of the B lymphocytes (humoral response). On the other hand, increases in IFN-<font face=\"symbol\">g profile prevent T helper-2 lymphocytes (Th2) activation leading to an inflammatory response that favors a Th1 response. The local production of these cytokines by NK uterine cells and T gd lymphocytes are relevant, but not exclusive. Thus, this study analyzed the potential contribution of the trophoblast in the maintenance of Th1/Th2 balance in the maternal-placental interface, represented, respectively by the expression of IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g cytokines. The expression of the anti-inflammatory cytokine IL-10 and its receptor was evaluated in the presence of an inflammatory environment mimetized by IFN-<font face=\"symbol\">g addition to the culture medium. On contrary, the expression of the IFN-<font face=\"symbol\">g (and its receptor) was evaluated in the presence of IL-10 characterizing an anti-inflammatory condition. Mouse trophoblast cells were isolated from implantation sites at gestational day 7.5 and cultured in standard conditions. Gene and protein expression were determined by immunohistochemistry and RT-PCR. IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g and their receptors were expressed in cultured trophoblast cells in the absence or presence of IFN-<font face=\"symbol\">g and IL-10, respectively. IFN-<font face=\"symbol\">g treatment increased IL-10R1 expression but do not alter IL-10 expression. On contrary, in the presence of IL-10 the IFN-<font face=\"symbol\">g expression increased significantly while the expression of its receptor decreased. These results suggest that a proinflammatory environment increases trophoblast responsiveness to IL-10 whereas an anti-inflammatory condition seems to reinforce the importance of IFN-<font face=\"symbol\">g expression at the maternal-placental interface, on the initial periods of gestation.