CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / IntroduÃÃo: Os cimentos resinosos autoadesivos foram introduzidos no mercado a fim de reduzir os passos clÃnicos e, assim, diminuir o tempo e a sensibilidade operatÃria. Apesar de o conceito de aplicaÃÃo Ãnica ser bastante atrativo, alguns estudos mostram limitaÃÃes desses materiais no que se diz respeito ao potencial de desmineralizaÃÃo e interaÃÃo superficial com a dentina. Objetivo: Avaliar o efeito da remoÃÃo de colÃgeno dentinÃro com NaOCl a 5% na resistÃncia de uniÃo da interface formada entre cimentos resinosos e a dentina. Metodologia: Trinta e dois terceiros molares recÃm- -extraÃdos tiveram a dentina coronÃria exposta, as raÃzes removidas e foram divididos aleatoriamente em quatro grupos de acordo com o tipo de cimento (convencional ou autoadesivo) e com a estratÃgia de cimentaÃÃo utilizada (manutenÃÃo ou remoÃÃo de colÃgeno da dentina): RelyX ARC/Single Bond 2 aplicado de acordo com a recomendaÃÃes do fabricante - controle (RAc); RelyX ARC/Single Bond 2 aplicado apÃs a remoÃÃo de colÃgeno (RAd); RelyX U200 aplicado de acordo com a recomendaÃÃes do fabricante - controle (RUc); RelyX U200 aplicado apÃs a remoÃÃo de colÃgeno (RUd). Blocos de resina compostas foram cimentados sobre a superfÃcie dentinÃria e os espÃcimes foram seccionados para o teste de microtraÃÃo. Os palitos de cada grupo foram subdivididos em dois subgrupos: teste imediato e teste apÃs 20.000 ciclos tÃrmicos. Resultado: O teste Anova mostrou que a remoÃÃo de colÃgeno aumentou os valores de resistÃncia de uniÃo para ambos os cimentos, embora, para o grupo RAd, houve um decrÃscimo nos valores de resistÃncia de uniÃo para os palitos termociclados. O teste qui-quadrado mostrou um significante aumento de falhas prematuras para os grupos, exceto para o grupo RUd. ConclusÃo: A remoÃÃo de colÃgeno melhorou a resistÃncia de uniÃo imediata para os materiais testados, mas sà ocorreu preservaÃÃo desta uniÃo, apÃs termociclagem, quando o RelyX U200 foi utilizado. / Introduction: The self-adhesive resin cements have been introduced to the market in order to reduce the clinical steps and, thus, reducing the operative time and sensitivity. Although the concept of one-step applying be very attractive, some studies show limitations of resin cements concerning the potential of demineralization and superficial interaction with the dentin. Objective: To evaluate the effect of removing dentin collagen with 5% NaOCl on the bond strength of resin cements/dentin interface. Methods: Thirty-two freshly extracted third molars were sliced to expose sound dentin, to remove the roots and were randomly divided into four groups according to the type of cement used (conventional or self-adhesive) and strategy of cementing used: RelyX ARC/Single Bond 2 applied following the manufacturerÂs instructions â control (RAc), RelyX ARC/Single Bond 2 applied on deproteinized dentin (RAd); RelyX U200 applied following the manufacturerÂs instructions â control (RUc); RelyX U200 applied on deproteinized dentin (RUd). Blocks of composite resin were cemented on dentin surface and the specimens were prepared for microtensile bond test. The sticks of each group were subdivided into two subgroups: immediate test and test after 20,000 thermal cycles. Results: Three-way Anova showed that collagen removal increased the bond strength values for both cements, although the RAd group showed a decrease in the bond strength values after thermocycling. Chi-square test showed significant increase of premature failures for the groups, except for the group of RUd. Conclusion: The collagen removal improved the immediate bond strength for both cements tested, but, after thermocycling, this union was preserved only in the RelyX U200 group.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / As metaloproteinases sÃo enzimas capazes de degradar o colÃgeno exposto na interface dentina/resina provocando sÃrios danos à manutenÃÃo da integridade da interface adesiva. Este estudo està dividido em trÃs capÃtulos, cujos objetivos foram: 1) Avaliar o efeito da desmineralizaÃÃo atravÃs de diferentes Ãcidos na ativaÃÃo de MMP-2 em dentina humana (CapÃtulo 1); 2) Avaliar o efeito de um sistema adesivo de passo Ãnico na ativaÃÃo de MMP-2 e -9 dentinÃria usando zimografia in situ e teste de atividade enzimÃtica; 3) Avaliar a capacidade do agente de ligaÃÃo cruzada 1-etil-3-(3-dimetilaminopropril) carbodiamida (EDC) na inibiÃÃo da atividade das MMPs em dentina (CapÃtulo 3). Como abordagens metodolÃgicas foram realizados 3 estudos in vitro com avaliaÃÃo enzimÃtica em dentina humana. ProteÃna dentinÃria foi extraÃda apÃs desmineralizaÃÃo com os Ãcidos fosfÃrico a 1% e a 10% e cÃtrico a 10% por 1, 5 e 10 min, e submetida a zimografia gelatinosa e teste de anÃlise enzimÃtica especifica, para a avaliaÃÃo da atividade de MMP-2 (CapÃtulo 1). Dentina em pÃ/blocos foi tratada com o adesivo de passo Ãnico Adper Easy Bond (3M ESPE) e a atividade de MMP-2 e -9 foi avaliada atravÃs de zimografia in situ e quantificada atravÃs do ELISA (CapÃtulo 2). Dentina em pÃ/blocos foi tratada com os sistemas adesivos Optibond FL ou Scotchbond 1XT com ou sem tratamento prÃvio com EDC. A atividade enzimÃtica foi analisada atravÃs de zimografia gelatinosa e in situ (CapÃtulo 3). A atividade de MMP-2 esteve presente em todos os grupos testados e aumentou apÃs desmineralizaÃÃo com Ãcido fosfÃrico 10% e Ãcido cÃtrico 10% (CapÃtulo 1). ApÃs tratamento com o adesivo de passo Ãnico, houve aumento da atividade enzimÃtica dentinÃria. A anÃlise in situ mostrou que a aÃÃo das MMPs està associada ao colÃgeno exposto e nÃo protegido pelos monÃmeros adesivos (CapÃtulo 2). Zimograma revelou um aumento na expressÃo de MMP-2 e -9 apÃs a exposiÃÃo aos sistemas adesivos, enquanto o uso de EDC 0.3M como prÃtratamento, inativou as gelatinases dentinÃrias (CapÃtulo 3). Pode-se concluir que tanto soluÃÃes Ãcidas (CapÃtulo 1), quanto os adesivos autocondicionantes sÃo capazes de ativar as MMPs dentinÃrias (CapÃtulo 2) e que algumas substÃncias, como o agente de ligaÃÃo cruzada EDC, sÃo capazes de inibir a ativaÃÃo destas enzimas (CapÃtulo 3). / MMPs are enzymes that can degrade exposed collagen in dentin/resin interface causing serious damage to maintaining the integrity of the adhesive interface. The present study is divided in three chapters, whose aims: 1) To evaluate the effect of demineralization by different acid solutions in MMP-2 activation on human dentin (Chapter 1); 2) To evaluate the effect of a one-step adhesive system on dentinal MMP-2 and -9 activation using in situ zymography and an enzymatic activity assay (Chapter 2); and 3) To evaluate the ability of MMPs inhibition by 1-ethyl-3-(3- dimethylaminopropryl) carbodiimide (EDC) EDC cross-linker on dentin (Chapter 3). As for the methodology approaches, 3 in vitro studies were performed to evaluate enzymatic expression of human dentin. Dentin protein was extracted after demineralization by 1% phosphoric acid, 10% phosphoric acid and 10% citric acid for 1, 5 and 10 minutes, and subjected to gelatin zymographic and activity assay (Chapter 1). Dentin powder/slabs were treated with one-step adhesive Adper Easy Bond (3M ESPE) and MMP-2 and -9 activities were evaluated using in situ zymography and quantified by means of an specific enzymatic assay (Chapter 2). Dentin powder/slabs were treated with one of those adhesive systems: Optibond FL or Scotchbond 1XT with or without pre-treatment using EDC. The enzymatic activity was analyzed using gelatin zymography and in situ zymography (Chapter 3). MMP-2 activity was present in all tested groups and increased after demineralization by 10% phosphoric acid and 10% citric acid (Chapter 1). After treated with one-step adhesive, enzymatic activity increased. In situ evaluation showed that MMPs action is associated with the exposed and unprotected collagen promoted by adhesive monomers (Chapter 2). Zymograms revealed increased expression of dentin endogenous MMP-2 and -9 after adhesives systems application, while the use of 0.3M EDC as a primer, inactivated dentin gelatinizes (Chapter 3). It can be concluded that both acid solutions (Chapter 1) and self-etch adhesives (Chapter 2) are able to activate dentin MMPs and that solutions like EDC cross-linker can inhibit the activation of those enzymes (Chapter 3).

Orientador: Jaime Amaya-Farfan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-10T13:16:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jackix_ElisadeAlmeida_M.pdf: 5040809 bytes, checksum: 9ccad63464c1464ceb7ded271d23cb5c (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A osteoporose constitui a enfermidade do esqueleto de maior incidência mundial e é caracterizada por redução da massa óssea levando ao aumento da susceptibilidade a fraturas. Nas mulheres, a osteoporose está associada à queda dos níveis de estrogênio, que acompanha a menopausa. O colágeno compreende cerca de 95% das proteínas dos ossos, e é parcialmente responsável pelas propriedades biomecânicas do osso. Os hidrolisados enzimáticos de colágeno (HC) são produtos obtidos a partir da hidrólise da gelatina e têm recebido atenção por suas propriedades no tratamento de doenças osteoarticulares. Objetivo: avaliar o efeito de um HC sobre características ósseas em modelo osteopênico com ratas. Métodos: 48 ratas adultas foram divididas em 6 grupos: 3 ovariectomizados, 1 sham-operated e 2 intactos, tratados com dieta AIN-93 M, suplementada com HC ou gelatina (controle), em dois níveis: (1) quantidade equivalente a 5X ao recomendado para humanos (10g/D), e outro (2) com nível 10X maior. Após 8 semanas, os ossos do fêmur e da coluna vertebral foram extirpados, e o sangue coletado; determinaram-se osteocalcina e fosfatase alcalina sérica, e no osso, determinou-se peso, teor protéico, conteúdo mineral (Ca, Na, Zn, Fe, K, P, Mg, Mn, Pb e Cu). Realizou-se também a análise de cortes histológicos dos diferentes grupos. Avaliou-se a resistência biomecânica por meio dos testes de flexão em três pontos nos fêmures e compressão nas vértebras. Resultados: As vértebras do grupo que recebeu a maior dosagem de HC suportaram uma carga 4X maior, e tiveram percentuais de proteína óssea e valores de osteocalcina maiores, do que aquelas que não tiveram suplementação ou receberam gelatina (p<0,05). A análise histológica mostrou maior espessura das trabéculas ósseas nos fêmures e vértebras das ratas que receberam HC. Conclusão: O HC contribuiu para uma maior conservação, composição e resistência óssea, quando comparado à gelatina / Abstract: Osteoporosis, the skeletal disease of highest incidence in the world is characterized by the reduction of bone mass and commonly leads to increased susceptibility of fractures. In women, osteoporosis is associated to the cessation of estrogen secretion and menopause. Collagen accounts for approximately 95% of the bone proteins and is to a large extent responsible for its biomechanical properties. Collagen hydrolyzates (CH) consist of mixtures of peptides obtained by a partial hydrolysis of gelatins, which have received considerable scientific attention as potential repositories of osteoraticular tissues. Objective: to evaluate the effect of supplementing the diets of ovariectomized rats with a commercial CH upon the compositional, biomechanical and histological characteristics of the bone. Methods: 48 adult female rats were divided into 6 groups: 3 of them ovariectomized, 1 sham-operated and 2 intact, fed the AIN 93-M diet, supplemented with either CH or gelatin (Control), in two levels: (1) a dose equivalent to 5x the amount suggested for humans (10g/D) and (2) a dose 10x greater. After eight weeks of treatment, the bones of femurs and vertebrae were excised the blood collected and serum osteocalcin and serum alkaline phosphatase determined. For the bone, gross weight, protein and mineral content (Ca, Na, Zn, Fe, K, P, Mg, Mn, Pb and Cu) were determined. Histological analysis of bone tissue sections was also performed to compare the different treatments. Biomechanical strength was assessed by means of 3-point flexion and compression tests of the femurs and vertebrae, respectively. Results: the vertebrae of the ovariectomized group that received the higher dosage of CH withstood a load 4x greater and exhibited higher levels of protein and osteocalcin content than those that received the gelatin or no supplementation at all. Histological analysis of the femurs and vertebrae of castrated rats that received the CH showed greater thickness than those receiving the gelatin supplementation. Conclusion: CH consumption as a diet supplement by the ovariectomized rat had an unequivocal contribution in the conservation or preservation of bone mass not seen when gelatin was used as a supplement / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-08-08T15:39:48Z No. of bitstreams: 1 Maria Carolina de Albuquerque Wanderley.pdf: 2883739 bytes, checksum: 94e90bdc40c402108ba400821ee8a88d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-08T15:39:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Carolina de Albuquerque Wanderley.pdf: 2883739 bytes, checksum: 94e90bdc40c402108ba400821ee8a88d (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Collagen specific enzymes are capable of degrading triple helix of the native or denatured collagen. The search for new microbial collagenases has greatly increased over the years. A new strain of Penicillium sp. (UCP 1286) isolated from soil of Caatinga, an exclusively Brazilian biome, was selected for the production of collagenase. The culture medium used had only gelatin as a source of carbon and nitrogen. The collagenolytic activity achieved was about 2.7 times higher than the values reported in the literature, both for volumetric activity (379.79 U/mL) and specific activity (1460.77 U/mg) in a time interval of 126 hours of production. With factorial design application, enzyme production increased 65% compared to the preliminary results, equivalent to 632.70 U/mL of collagenolytic activity. The characterization of the enzyme showed that the optimum pH and temperature were, respectively, 9.0 and 37 °C. Due to the total inhibition by phenylmethylsulfonyl fluoride, the enzyme seems to be classified in the family of serinocollagenases. With regard to specificity, collagenase produced by Penicillium sp. UCP 1286 showed higher activity when used as a substrate azocoll, showing no activity when tested against the azocasein. Comparing the enzyme degradation capacity produced by Penicillium SP. With commercial enzyme produced by Clostridium histolyticum, the first presented more specific to type V collagen and gelatin. The major band observed in electrophoresis corresponded to the molecular weight of 37 kDa, and zimogram confirmed collagenolytic activity. The purification technique via aqueous two-phase system (ATPS) was effective for collagenase produced by Penicillium sp. UCP 1286. The run with better values of yield and partition coefficient were at runs on center point, using PEG 3350 g/mol at 15.0% (w/w) concentration, and phosphate at pH 7.0 and concentration 12.5% (w/w). Results indicate that the enzyme is a promising biotechnological product. / Colagenases são enzimas específicas capazes de degradar a tripla hélice do colágeno nativo ou desnaturado. A busca por novas colagenases microbianas têm aumentado bastante ao longo dos anos. Uma nova cepa de Penicillium sp. (UCP 1286) isolada do solo da Caatinga, um bioma exclusivamente brasileiro, foi selecionada para produção de colagenase. O meio de cultura utilizado foi constituído apenas de gelatina como fonte de carbono e nitrogênio. A atividade colagenolítica obtida foi cerca de 2,7 vezes maior que os valores descritos na literatura, tanto para a atividade volumétrica (379,79 U/mL) quanto específica (1.460,77 U/mg), no intervalo de tempo de 126 h de produção. A partir da aplicação de planejamento fatorial, produção da enzima aumentou 65% em comparação aos resultados preliminares obtidos, sendo equivalente a 632,70 U/mL de atividade colagenolítica. A caracterização da enzima mostrou que o pH ótimo foi 9,0 e a temperatura ótima, 37 °C. Considerando a inibição total pelo fenilmetilsulfonil fluoreto, a enzima parece estar classificada na família das serinocolagenases. Com relação à especificidade, a colagenase produzida por Penicillium sp. UCP 1286 apresentou maior atividade quando utilizado o azocoll como substrato, não apresentando atividade relevante quando testada frente à azocaseína. Comparando a capacidade de degradação da enzima produzida por Penicillium sp. com a enzima comercial de Clostridium histolyticum, observou-se que apresentou maior especificidade para o colágeno tipo V e gelatina, e a principal banda observada através de eletroforese correspondeu ao peso molecular de 37 kDa e o zimograma confirmou atividade colagenolítica. A purificação por Sistema Duas Fases Aquosas (SDFA) foi eficiente para a colagenase produzida por Penicillium sp. UCP 1286. Sendo os maiores valores de rendimento e coeficiente de partição obtidos no planejamento fatorial [PEG 3350 g/mol a 15% (m/m) de concentração, e fosfato com pH 7 e concentração 12,5% (m/m)]. Os resultados sugerem que a enzima produzida apresenta-se como um produto biotecnológico promissor com aplicabilidade na área da saúde.

Orientador: Luiz Andre Freire Pimenta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-28T00:22:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saboia_VicentedePauloAragao_D.pdf: 2377804 bytes, checksum: b83955fe9c76b5de6e7f36a75db01b3f (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da remoção do colágeno na infiltração marginal de corante na interface adesiva de restaurações de resina composta utilizando dois sistemas adesivos de frasco único, envelhecidas através de ciclagem térmica e estocagem em água durante 1 ano. Foram usadas 40 raízes de terceiros molares humanos recém-extraídos e armazenados em formol a 10%. A câmara pulpar e o ápice radicular foram vedados com resina composta. Cada raiz recebeu dois preparos cavitários cilíndricos com dimensões de 2 mm de diâmetro por 2 mm de profundidade. Após sorteio, foram criados dois conjuntos de 20 raízes cujas cavidades foram restauradas utilizando-se os adesivos Prime & Bond 2.1 (PB-Dentsply) ou Single Bond (SB-3M). Cada porção radicular recebeu uma restauração pela técnica da hibridização (controle) e outra após o tratamento da dentina com NaOCI (hipoclorito de sódio) a 10% por 60 s para remoção de colágeno (teste). Ficaram estabelecidos 4 grupos de 20 cavidades assim distribuídas: G1(PBSH)-PB sem NaOCI; G2(PBCH)-PB com NaOCI; G3(SBSH)- SB sem NaOCI e G4(SBCH)-SB com NaOCI. Todas as cavidades foram restauradas com resina composta Z 100 (3M) de acordo com as instruções do fabricante. Os espécimes foram submetidos a 5000 ciclos térmicos (5-55 °C) e armazenados em água à 37°C. Após 1 ano, os remanescentes radiculares foram vedados e imersos em solução de azul de metileno a 2% por 4 horas. As restaurações, foram seccionadas no sentido longitudinal da raiz e observadas em lupa estereoscópica com 45 vezes de aumento. De acordo com a penetração do corante nas margens da restauração foram atribuídos escores de 0 a 4, os quais foram tabulados e submetidos ao teste Exato de Fisher. A remoção do colágeno reduziu significativamente os índices de microinfiltração para o adesivo à base de acetona (Prime & Bond 2.1) enquanto que para o adesivo à base de água (Single Bond) este tratamento não influenciou os índices de microinfiltração / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of collagen removaI on the microleakage of two single-bottle adhesive systems. Forty human third molars were selected and each of them received two preparations on its roots. The roots were randomly assigned to be restored using Prime & Bond 2.1(PB-Dentsply) or Single Bond (SB-3M). One of the cavities in each root was treated with 'H IND. 3¿¿PO IND. 4¿ and the other received an additional treatment with 10% sodium hypochlorite (NaOCI) for 60 s before adhesive application for removaI of collagen layer. Four groups were created: G1(PBSH)-PB without NaOCI; G2(PBCH)-PB with NaOCI; G3(SBSH)-SB without NaOCI and G4(SBCH)-SB with NaOCI. All the cavities were restored with Z 100 restorative resin (3M). The specimens were submitted to 5,000 thermal cycles (5-55 °C) and stored in 37°C water for 1 year. After this time the specimens were coated with a varnish except for 1 mm of tooth structure surrounding the restoration and immersed in 2% blue methylene for 4 hours. After rinsing, the restorations were sectioned and two independent observers, using a light microscopy at x45 magnification, scored (0 - 4) the microleakage at the interface between restorative material and tooth. The scores were submitted to Fisher's Exact Test and the results showed that collagen removal reduced significantly the microleakage for Prime & Bond 2.1 and had not effect on microleakage for Single Bond / Doutorado / Dentística / Doutor em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:58:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O colágeno é a forma funcional de um oligômero biológico, cujos monômeros são aminoácidos quirais. Tecidos ricos em colágeno são estruturas opticamente anisotrópicas, birrefringentes e não-lineares. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o colágeno tipo I não irradiado e após irradiação com laser de He-Ne polarizado, utilizando a microscopia de polarização para investigação da birrefringência, e a geração de segundo harmônico (GSH) para análise da susceptibilidade não-linear. Doze ratos Wistar foram divididos em quatro grupos, de acordo com as idades: 34, 48, 62 e 76 dias. Os grupos receberam, respectivamente, 1; 5; 9 e 13 irradiações de D= 1J/cm2, durante 46s, no tendão de Aquiles que, aleatoriamente, foi escolhido ser o direito ou esquerdo. Os animais foram então sacrificados e os tendões extraídos para a preparação das amostras. Para a microscopia de polarização foram obtidos cortes com 8&mu;m de espessura, e as birrefringências de forma e intrínseca foram avaliadas. Para a GSH foi utilizado um laser de Ti:Safira (150fs) com 76MHz de taxa de repetição, diâmetro do feixe &phi;= 40&mu;m, comprimento de onda central &lambda;= 800nm e &Delta;&lambda;= 10nm e Pp= 110mW. Um polarizador linear foi posicionado no caminho do feixe. Duas objetivas foram utilizadas para focalizar e coletar a radiação incidente e emergente da amostra, respectivamente. Um analisador, também linear, foi introduzido logo após a objetiva coletora. Um filtro absorvedor na faixa infravermelha do espectro eletromagnético, mas transmissor na faixa azul, foi utilizado para garantir que apenas &lambda;= 400nm era medido. A razão, &rho;, entre dois tensores de hiperpolarizabilidade independentes foi estudada. As amostras irradiadas apresentaram maior birrefringência (&Delta;n) e maior susceptibilidade não-linear (&rho;), em comparação com as não irradiadas. Estes resultados indicam que o laser de He-Ne polarizado alinha as fibrilas de colágeno ao longo eixo do tendão. / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:48:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 09151.pdf: 3898995 bytes, checksum: c6107a524057a95f300eee8a635c6f1e (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:54:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Endostatina, um fragmento do colágeno XVIII de 20 kDa, é um potente inibidor de angiogênese e crescimento tumoral. Foi previamente demonstrado que a administração contínua de endostatina em modelos animais melhorou a eficácia e potência da terapia antitumoral, comparada com a administração subcutânea diária por injeções de endostatina. A liberação contínua da proteína antiangiogênica endostatina para a circulação sistêmica poderia ser um tratamento antiangiogênico ideal. O sistema Theracyte é um sistema de membranas de politetrafluoretileno semi-permeáveis para macro-encapsulamento e implante de células geneticamente modificadas para liberação de proteínas terapêuticas in vivo e que não requer a imunossupressão do hospedeiro. Com a finalidade de demonstrar a utilidade deste sistema, células CHO expressando (his)6-met-endostatina foram injetadas em dispositivos de imunoisolamento Theracyte, que foram imediatamente implantados em camundongos imunodeficientes (SCID). Em outro modelo de implante de dispositivos de imunoisolamento, os dispositivos Theracyte foram implantados em animais e depois do tempo de cicatrização (17 dias), as células expressando endostatina foram injetadas dentro dos dispositivos. Níveis altos e constantes de endostatina de até 3,7 g/ml foram detectados no plasma durante os dois meses de duração do estudo em ambos os modelos de implante dos dispositivos de imunoisolamento. Níveis mais altos de endostatina (até 6,7 g/ml) foram detectados no plasma de animais implantados com o mesmo número de células livres. Análise histológica de cortes corados por hematoxilina/eosina dos dispositivos retirados dos animais mostraram que haviam células aparentemente viáveis dentro dos dispositivos. A análise imuno-histoquímica utilizando anticorpo anti-endostatina mostrou a existência de reação nas células dentro do dispositivo e também do lado de fora, demonstrando que a endostatina, secretada pelas células recombinantes confinadas, extravasou da membrana, atingindo os tecidos ao redor. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Orientadores: Benedicto de Campos Vidal, Sergio Rocha Piedade / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T11:12:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paoli_Flaviade_D.pdf: 810753 bytes, checksum: 47e246e2b853e83471c2956a0fbadee2 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A relação estrutura-função tem sido abordada em diversos estudos de tecidos colagenosos, como o tendão. É conhecido, que dependendo do tipo de força aplicada, uma composição e organização molecular específica, com características morfológicas peculiares podem ser observadas. Tendões comportam-se viscoelasticamente, sendo esta propriedade estudada através de análise biomecânica, na qual está diretamente relacionada com a organização dos componentes teciduais. Com isso, os objetivos do presente trabalho foram descrever a importância dos componentes não-colagênicos na propriedade viscoelástica de tendões e verificar possíveis alterações na organização e no arranjo dos componentes da matriz extracelular nos tendões após os ensaios de tensão. Tendões de frangos foram escolhidos como modelo experimental já que apresentam um comprimento viável para ensaios de tensão, além de possuírem peculiaridades em sua composição e organização molecular. Tendões flexores digitais superficiais foram dissecados e distribuídos em: grupo I (não-tratados), grupo II (tendões tratados com hialuronidase testicular) e grupo III (tendões tratados com papaína). Parâmetros dimensionais como peso, espessura, largura e área seccional transversa foram mensurados. Os tendões foram preservados em solução fisiológica até sua utilização nos ensaios. Após os ensaios, eles foram fixados, incluídos em parafina e encaminhados para análises morfológicas, histoquímicas e microespectrofotométricas. Os ensaios do grupo I mostraram maiores valores de tensão, energia elástica e módulo de elasticidade do que os dos grupos II e III. Ao contrário, valores de deformação foram maiores para o grupo II, indicando que, após o tratamento enzimático, os tendões perderam sua capacidade de resistir a forças tensionais e sugere a participação de componentes não-colagênicos nesta função. Análises histoquímicas confirmaram a remoção dos componentes não-colagênicos nos grupos II e III. Ainda, curvas de absorção espectral foram obtidas em cortes de tendões não submetidos a ensaios e do grupo I (não-tratado com enzimas, porém estirado) corados com azul de toluidina e ponceau SS. Em cortes de tendões do grupo I corados com azul de toluidina, dois picos de absorção foram observados, enquanto em cortes de tendões não submetidos a ensaios foi observado apenas um pico. Com isso, pode-se considerar que o grupo negativo dos glicosaminoglicanos disponíveis quando o tendão encontrava-se não-tensionado tornaram-se menos disponíveis quando o tendão foi estirado. Cortes de tendões corados com ponceau SS demonstraram um pico de absorção e cortes do grupo I apresentaram altos valores de absorbâncias. A deformação de materiais envolve diversos mecanismos, como o desaparecimento de crimps. Essa alteração morfológica explicaria tanto a não disponibilidade dos grupos negativos de glicosaminoglicanos quanto o alto valor de absorbância detectado em cortes do grupo I corados com ponceau SS. Em conclusão, os componentes dos tendões são estruturas dinâmicas, altamente organizadas e orientadas, que são capazes de se rearranjarem quando tensionados. Mais ainda, esses componentes não-colagênicos são fundamentais para a integridade funcional dos tendões / Abstract: The structure-function relationship has been shown in several works regarding collagenous tissues, such as tendon. It is known that different loads can alter composition, molecular organization and morphological characteristics. Tendons present viscoelastic behavior and this characteristic is studied by biomechanical analyses and is directly related to tissue component organization. The aim of this work was to describe the importance of noncollagenous components on tendon viscoelasticity by analyzing changes in the organization and arrangement of extracellular matrix constituents and, consequently, changes in tendon morphology after mechanical tests. Chicken tendons were chosen due to their organization and composition; besides presenting a good length for mechanical tests. Superficial digital flexor chicken tendons were dissected and distributed into 3 groups: group I, non-treated; group II, tendons treated with testicular hyaluronidase; and group III, tendons treated with papain. Then, dimensional parameters, such as weight, width, thickness and cross-sectional area, were measured. The tendons were preserved in physiological solution until use in the mechanical tests. During the mechanical tests, they were tensioned and immediately afterwards were fixed and processed for morphological and histochemical analyses. The mechanical test results of groups II and III showed decreased ultimate tensile strength, elastic energy and elasticity modulus values, when compared with group I. In contrast, the ultimate strain values were highest for group II, indicating that after enzymatic treatment the tendons lost their capacity to resist tensile forces. Groups II and III presented different deformations in comparison with group I. Histochemical analysis confirmed the removal of the noncollagenous components in groups II and III. Spectral absorption curves were obtained for the non-stretched and group I tendon sections (non-treated to enzyme, but stretched) stained with toluidine blue and Ponceau SS. In group I sections stained with toluidine blue, two absorption peaks was observed, while in the non-stretched sections only one absorption peak was observed. Negative groups of GAGs available in non-stretched tendon sections most likely became unavailable in stretched tendons sections. Sections stained with Ponceau SS showed one absorption peak and group I sections showed the highest absorbancy values. Deformation of tendinous materials could involve a number of mechanisms, like collagen uncrimping. Collagen uncrimping could be involved in the unavailable of negative GAG groups and the highest absorbancy values in group I sections stained with Ponceau SS. In conclusion, tendon component constituents are dynamic, highly organized and oriented structures capable of rearranging during stretching. Moreover, the noncollagenous components are fundamental to tendon functions / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Celso Aparecido Bertran / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-14T19:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Allegretti_LauterJoseMarques_M.pdf: 3340752 bytes, checksum: d69d7cbf5f72a9807eba7be1c23088b6 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A matriz óssea é um nanocompósito formado basicamente de fosfato de cálcio (70% m) e colágeno (30% m), responsável pela resistência mecânica dos ossos, e, portanto, pela função mais importante do esqueleto. A perda de qualidade de vida que pode ser causada por enfermidades e traumas dos ossos aumenta a importância em estudar e compreender este material fantástico. O crescimento da expectativa de vida da população torna mais comum os problemas com os ossos. Desta forma, entendermos as características e propriedades dos ossos, ou seja, conhecê-las melhor, pode contribuir para a solução destes problemas. Neste trabalho nos propusemos a estudar a influência de matrizes de colágeno tipo I no processo de mineralização de fosfato de cálcio no interior delas. Pela permeação de vapor de amônia em soluções de colágeno em pH 2 contendo íons Ca e H2PO4, foram obtidos géis de colágeno que foram estruturados, simultaneamente com a formação de fosfato de cálcio em seu interior. Além do colágeno estruturado, sob condições especiais, foram obtidas fibras (fibrilogênese) de colágeno, mineralizadas pela precipitação de fosfato de cálcio. Para avaliar a influência de uma matriz de colágeno anisotrópica sobre a organização das partículas de fosfato de cálcio, fibras in natura de colágeno foram parcialmente intumescidas em solução de íons Ca e H2PO4 em pH 4,8 e mineralizadas pela permeação de amônia gasosa. Os resultados deste trabalho mostraram que: matrizes de colágeno que sofrem estruturação simultaneamente com a formação de partículas de fosfato de cálcio alteram a morfologia destas partículas nucleadas e crescidas no seu interior. Quando a estruturação resulta em fibrilogênese, além da morfologia, observa-se um efeito de orientação sobre as partículas formadas. O colágeno interage tanto com os íons cálcio dispersos no gel, antes da estruturação, como com as partículas de fosfato de cálcio, estabilizando o gel. A morfologia, cristalinidade e tamanho de cristalitos das partículas formadas nos géis estruturados são semelhantes às observadas para as partículas de fosfato de cálcio que constituem a matriz inorgânica dos ossos. O método proposto para precipitação de fosfato de cálcio em meio à matriz de colágeno é inovador e tem potencial para produção de biomaterial sintético de boa qualidade em condições de assepsia, que apresenta similaridades com diversas propriedades observadas para a matriz óssea. / Abstract: Bone matrix is a nanocomposite basically formed by calcium phosphate (70% wt) and collagen (30% wt), which is responsible for bone mechanical resistance, and therefore, for the most important function of the skeleton. The life quality loss that can be caused by diseases and injuries of bones increases the importance of studing and understanding this amazing material. With the growth of the population life expectancy the problems with bones become more common. Thus, to understand these diseases and to learn more about bone¿s characteristics may contribute to solving these problems. In this work we have studied the influences of collagen matrices of type I in the mineralization of calcium phosphate within the collagen. Through permeation of gaseous ammonia in the collagen solutions containing Ca and H2PO4 ions in pH 2, structured collagen gels were obtained, while the precipitation of calcium phosphate occured inside the gels. Besides the collagen structured, under special conditions, collagen fibers (fibrilogenese) were obtained while (simultaneously) calcium phosphate precipitation mineralized these fibers. To assess the influence of an anisotropic collagen matrix on the organization of particles of calcium phosphate, collagen fibers in natura were partially solubilized after soaked in a solution with Ca and H2PO4 ions, in pH 4.8 and mineralization was carried out by adsorption of gaseous ammonia. The results of this study showed that the collagen matrix that undergoes structure organization while (simultaneously) calcium phosphate particles are formed changes the morphology of the particles nucleated and grown inside the matrix. When the structure results in fibrilogenese, besides the morphology, there is an orientation effect on the formed particles. The collagen interacts with both calcium ions dispersed in the gel, before the structuring, and the particles of calcium phosphate, stabilizing the gel. The morphology, crystallinity and particle size of crystallites formed in structured gels are similar to the calcium phosphate particles observed, which are present in the inorganic matrix of bone. The proposed method for precipitation of calcium phosphate in the middle / within of the collagen matrix is innovative and has the potential to produce good quality synthetic biomaterial in conditions of asepsis, which has similarities with several properties observed for the bone matrix. / Mestrado / Físico-Química / Mestre em Química