O objetivo deste estudo foi comparar, in vitro, os sistemas de implante cone Morse, frente ao vedamento contra a penetração bacteriana entre o implante e o componente protético, em função de alterações estruturais e uso de selantes industriais. Foram utilizados 126 implantes Titamax CM EX distribuídos em três tipos de componentes protéticos: Munhão Universal CM, Munhão Universal CM com Parafuso Passante e Munhão Universal CM Exact, todos da empresa Neodent (Curitiba, Paraná, Brasil). Estes implantes foram divididos em 3 grupos de 42 implantes componentes protéticos, sendo os grupos devidamente denominados: Grupo 1 (G1) - Controle, Grupo 2 (G2) - Jateamento e Grupo 3 (G3) - Adesivo. Estes implantes, devidamente distribuídos entre os componentes protéticos e seus grupos, foram avaliados quanto à contaminação bacteriana em um período de 28 dias após o término da experimentação inicial em que foi realizado o efeito de ciclagem sobre as amostras (sem e com carga). Os implantes foram perfurados em sua porção apical com uma fresa de 1mm de diâmetro, até o encontro de sua câmara interna. Foram instalados os componentes protéticos de titânio em cada grupo com torque recomendado pelo fabricante (32 e 15 N.cm). Antes os componentes dos grupos G2 e G3 passaram por alterações estruturais (jateamento e adesivo Dermabond® respectivamente). As peças foram anexadas a tampas de tubo de ensaio, com a porção do componente voltada para o interior do tubo. Os tubos de ensaio foram preenchidos com meio de cultura líquido LB, utilizando-se seringa estéril. Todos os conjuntos receberam esterilização por radiação Gama (Embrarad, Campinas, Brasil). Após a confirmação da efetividade da esterilização por meio de amostras controle, os orifícios apicais foram cuidadosamente desobstruídos e inoculados com cultura de E. coli. O controle de turvamento das amostras foi realizado diariamente, os resultados apontaram que três das amostras do G1, sete do G2 e duas do G3, que não foram submetidas a ciclagem, sofreram contaminação num período de até 28 dias, e que três amostras do G1, dez do G2 e nenhuma do G3, quando submetidas ao efeito da ciclagem, foram contaminaram. Todos os grupos apresentaram infiltração bacteriana, independentemente do componente protético e da ciclagem. Ficou evidenciado que o grupo jateamento apresentou os piores resultados e que o adesivo apenas reduziu, mas não impediu a infiltração bacteriana para o interior dos implantes cone Morse. / The aim of this study was to compare, in vitro, Morse taper implant systems sealing against bacterial penetration between implant and prosthetic component after modifying the abutment structure or using industrial strength sealants. 126 Titamax CM EX implants and three different types of prosthetic components were used: Universal Post CM, CM Universal Post with passing screw and Universal Post CM Exact (Neodent implants, Curitiba, Parana, Brazil). These samples were divided into three groups: Group 1 Control group (G1); Group 2 Sandblasting (G2); and Group 3 Adhesive (G3). The implant / prosthetic component bacterial leakage from each group was evaluated after 28 days with or without cyclic loading. A hole at the apical portion of the implant was done with a 1 mm bur to access the implant internal threads. The abutments were inserted and torqued according to the manufacturer recommendation (15 or 32 N.cm). G2 abutments were sandblasted before insertion. G3 abutments were sealed with Dermabond® adhesive. The samples were sterilized by Gamma irradiation (Embrarad, Campinas, Brazil) and attached to the test tube lid and placed in the test tube filled with bacterial growth media (LB). Control samples from each group were used to assess bacterial contamination before starting the experiment. The access holes at the apical part of the implants were accessed and an E. coli culture was inoculated inside the implant internal threads and then sealed again. Changes in the media color (turbidity), indicative of bacterial leakage from inside the implant to the media were evaluated daily. Three samples from G1, seven from G2 and two from G3 without cyclic loading showed bacterial leakage after 28 days. Three samples from G1, ten from G2 and none of the samples from G3 showed bacterial leakage in the cyclic loading condition. All groups demonstrated bacterial leakage disregard of the type of abutment and loading conditions. It was demonstrated that G2 (sandblasted surface) had the worst results. Use of industrial sealant reduced but did not completely prevented bacterial leakage in Morse taper implants.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-18T19:22:50Z No. of bitstreams: 1 2018_PriscilaPeresDuarteNogueira.pdf: 2026785 bytes, checksum: 7642632a0be351dfb8af86af1fba45b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-29T16:41:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_PriscilaPeresDuarteNogueira.pdf: 2026785 bytes, checksum: 7642632a0be351dfb8af86af1fba45b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-29T16:41:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_PriscilaPeresDuarteNogueira.pdf: 2026785 bytes, checksum: 7642632a0be351dfb8af86af1fba45b7 (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / O Brasil é o segundo maior produtor mundial de etanol, utilizando cana-deaçúcar como matéria-prima. A levedura Saccharomyces cerevisiae é o principal microrganismo utilizado em escala industrial tanto para produção de bioetanol quanto para produção de bebidas fermentáveis, como a cerveja. Tipicamente, nas dornas de fermentação, a levedura hidrolisa açúcares produzindo etanol, dióxido de carbono e biomassa. Como essas fermentações não são mantidas estéreis, contaminantes bacterianos são originados de diversas fontes e proliferam nos tanques de fermentação, causando diversos prejuízos como a redução da produtividade e do rendimento de etanol. Bactérias do gênero Lactobacillus são as mais frequentes dentro das dornas industriais. Essas competem pelo substrato e produzem ácidos orgânicos que limitam o crescimento das leveduras e reduzem o rendimento de etanol. Dessa forma, estratégias de controle microbiano de baixo custo são requeridas, uma vez que as tecnologias existentes afetam o metabolismo das leveduras, não são economicamente viáveis ou representam uma ameaça ao meio ambiente. Nesse contexto, o presente trabalho propõe o uso de peptídeos antimicrobianos (PAMs) para o controle de contaminações bacterianas em processos fermentativos. Para isso, os peptídeos antimicrobianos PR-39, PMAP-23 e Cecropin P1 foram adicionados em cultivos de diferentes cepas de leveduras industriais para avaliar qualquer interferência nos seus perfis de crescimento. Dos PAMs testados, PR-39 apresentou a menor interação, sendo escolhido para produção heteróloga em cepa recombinante de S. cerevisiae, porém nenhuma atividade antimicrobiana foi detectada no sobrenadante do cultivo dessa cepa. Dessa forma, outros dois PAMs, X e Y, foram selecionados pela sua alta atividade antimicrobiana contra bactérias gram-positivas. Assim, esses foram utilizados em cocultivos de espécies de Lactobacillus e cepas industriais de S. cerevisiae. Observou-se total inibição do crescimento das bactérias com 5 µg/mL desses peptídeos no meio de cultivo, além de terem apresentado pouca interferência no crescimento das leveduras. Dessa forma, eles são potenciais candidatos para serem aplicados contra contaminações bacterianas, sendo o presente trabalho a etapa inicial para o estabelecimento de uma nova tecnologia de controle bacteriano em dornas industriais de fermentação alcóolica. / Brazil is the world's second largest producer of ethanol, using sugarcane as its raw material. The Saccharomyces cerevisiae yeast is the main microorganism used on industrial scale for bioethanol and fermentable beverages production, such as beer. Typically, in industrial fermenters, yeast hydrolyses sugars producing ethanol, carbon dioxide, and biomass. As these fermentations are not kept sterile, bacterial contaminants come from a variety of sources and proliferate in the fermentation tank, causing several losses, like the ethanol yield and productivity reduction. Bacteria of the genus Lactobacillus are the most common in industrial fermenters. They compete for the substrate and produce organic acids that limit the yeast growth and reduce the ethanol yield. Thus, low-cost microbial control strategies are required, since existing technologies affect yeast metabolism, are not economically feasible or pose a threat to the environment. In this context, the present work proposes the use of antimicrobial peptides (AMPs) for the control of bacterial contaminations in fermentative processes. For this, the antimicrobial peptides PR-39, PMAP-23 and Cecropin P1 were added in cultures of different industrial strains of yeasts to evaluate any interference in their growth profiles. From the AMPs tested, PR-39 presented the lowest interaction, being chosen for heterologous production in a recombinant strain of S. cerevisiae, however no antimicrobial activity was detected in the supernatant of the culture of this strain. In this way, two other AMPs, X e Y, were selected for their high antimicrobial activity against gram-positive bacteria. Thus, they were used in cocultures of Lactobacillus species and industrial strains of S. cerevisiae. Complete inhibition of bacterial growth was observed with 5 μg/ml of these peptides in the culture medium, presenting little interference in the yeast growth. In this way, they are potential candidates against bacterial contaminations and the present work is the initial stage for the establishment of a new bacterial control technology in industrial alcoholic fermentation.

O objetivo deste estudo foi comparar, in vitro, os sistemas de implante cone Morse, frente ao vedamento contra a penetração bacteriana entre o implante e o componente protético, em função de alterações estruturais e uso de selantes industriais. Foram utilizados 126 implantes Titamax CM EX distribuídos em três tipos de componentes protéticos: Munhão Universal CM, Munhão Universal CM com Parafuso Passante e Munhão Universal CM Exact, todos da empresa Neodent (Curitiba, Paraná, Brasil). Estes implantes foram divididos em 3 grupos de 42 implantes componentes protéticos, sendo os grupos devidamente denominados: Grupo 1 (G1) - Controle, Grupo 2 (G2) - Jateamento e Grupo 3 (G3) - Adesivo. Estes implantes, devidamente distribuídos entre os componentes protéticos e seus grupos, foram avaliados quanto à contaminação bacteriana em um período de 28 dias após o término da experimentação inicial em que foi realizado o efeito de ciclagem sobre as amostras (sem e com carga). Os implantes foram perfurados em sua porção apical com uma fresa de 1mm de diâmetro, até o encontro de sua câmara interna. Foram instalados os componentes protéticos de titânio em cada grupo com torque recomendado pelo fabricante (32 e 15 N.cm). Antes os componentes dos grupos G2 e G3 passaram por alterações estruturais (jateamento e adesivo Dermabond® respectivamente). As peças foram anexadas a tampas de tubo de ensaio, com a porção do componente voltada para o interior do tubo. Os tubos de ensaio foram preenchidos com meio de cultura líquido LB, utilizando-se seringa estéril. Todos os conjuntos receberam esterilização por radiação Gama (Embrarad, Campinas, Brasil). Após a confirmação da efetividade da esterilização por meio de amostras controle, os orifícios apicais foram cuidadosamente desobstruídos e inoculados com cultura de E. coli. O controle de turvamento das amostras foi realizado diariamente, os resultados apontaram que três das amostras do G1, sete do G2 e duas do G3, que não foram submetidas a ciclagem, sofreram contaminação num período de até 28 dias, e que três amostras do G1, dez do G2 e nenhuma do G3, quando submetidas ao efeito da ciclagem, foram contaminaram. Todos os grupos apresentaram infiltração bacteriana, independentemente do componente protético e da ciclagem. Ficou evidenciado que o grupo jateamento apresentou os piores resultados e que o adesivo apenas reduziu, mas não impediu a infiltração bacteriana para o interior dos implantes cone Morse. / The aim of this study was to compare, in vitro, Morse taper implant systems sealing against bacterial penetration between implant and prosthetic component after modifying the abutment structure or using industrial strength sealants. 126 Titamax CM EX implants and three different types of prosthetic components were used: Universal Post CM, CM Universal Post with passing screw and Universal Post CM Exact (Neodent implants, Curitiba, Parana, Brazil). These samples were divided into three groups: Group 1 Control group (G1); Group 2 Sandblasting (G2); and Group 3 Adhesive (G3). The implant / prosthetic component bacterial leakage from each group was evaluated after 28 days with or without cyclic loading. A hole at the apical portion of the implant was done with a 1 mm bur to access the implant internal threads. The abutments were inserted and torqued according to the manufacturer recommendation (15 or 32 N.cm). G2 abutments were sandblasted before insertion. G3 abutments were sealed with Dermabond® adhesive. The samples were sterilized by Gamma irradiation (Embrarad, Campinas, Brazil) and attached to the test tube lid and placed in the test tube filled with bacterial growth media (LB). Control samples from each group were used to assess bacterial contamination before starting the experiment. The access holes at the apical part of the implants were accessed and an E. coli culture was inoculated inside the implant internal threads and then sealed again. Changes in the media color (turbidity), indicative of bacterial leakage from inside the implant to the media were evaluated daily. Three samples from G1, seven from G2 and two from G3 without cyclic loading showed bacterial leakage after 28 days. Three samples from G1, ten from G2 and none of the samples from G3 showed bacterial leakage in the cyclic loading condition. All groups demonstrated bacterial leakage disregard of the type of abutment and loading conditions. It was demonstrated that G2 (sandblasted surface) had the worst results. Use of industrial sealant reduced but did not completely prevented bacterial leakage in Morse taper implants.

A colonização e proliferação de micro-organismos periodontopatogênicos na gengiva marginal aos implantes dentários, assim como ao redor de seus componentes protéticos, pode representar riscos à saúde dos tecidos peri-implantares, à semelhança do que ocorre com os tecidos periodontais. O objetivo deste estudo foi identificar e quantificar 32 espécies microbianas de biofilmes coletados das superfícies de dois sistemas de encaixe para sobredentaduras retidas por implantes: um esférico (Retentive Anchor, Institut Straumann AG, Suíça - RA) e um cilíndrico (Locator, Zest Anchors Inc., CA-USA - Loc), das próteses, implantes e sulcos peri-implantares, ao longo do tempo. Os biofilmes analisados foram coletados em um estudo randomizado envolvendo 24 pacientes portadores de prótese total superior e sobredentadura inferior retida por dois implantes com sistemas de encaixe esférico RA (n= 12) ou cilíndrico Loc (n= 12). Amostras de biofilme foram coletadas de sete sítios para cada implante, nos períodos: após a instalação de novos encaixes (baseline), assim como aos 3 e 12 meses subsequentes. A identificação e quantificação das espécies microbianas foram realizadas por meio da técnica de hibridização DNA-DNA Checkerboard. Os resultados foram submetidos à análise não paramétrica de modelo misto ANOVAF, e matriz de covariância não estruturada para cada tratamento, com nível de significância de 0.05, posteriormente ajustado por Benjamini-Hochberg false discovery rate (FDR). Considerando-se todos os sítios e períodos investigados em conjunto e as 32 espécies bacterianas investigadas, apenas a S. constellatus foi encontrada em maior abundância nos biofilmes associados ao sistema RA. A análise sítio-específica revelou maior prevalência das espécies S. constellatus e P. micra na rosca do componente macho do encaixe esférico RA e da espécie S. sanguinis na superfície externa do componente macho do encaixe cilíndrico Loc. De modo geral, pôde-se concluir que os sistemas de encaixe para retenção de sobredentaduras RA e Loc são colonizados por microbiotas com perfis semelhantes, embora esses sistemas exerçam influência seletiva sobre o padrão de colonização das espécies bacterianas S. constelatus, P. micra e S. sanguinis / The colonization and proliferation of periodontopathogenic microorganisms in the dental implants marginal gingiva, as well as around their prosthetic components, may represent risks to the health of the peri-implant tissues, similar to what occurs with the periodontal tissues. The objective of this study was to identify and quantify 32 microbial species of biofilms collected from the surfaces of two attachment systems for implant retained mandibular overdentures: one spherical (Retentive Anchor, Institut Straumann AG, Switzerland - RA) and one cylindrical (Locator, Zest Anchors Inc., CA-USA - Loc), of prostheses, implants and peri-implant sulcus, over time. The biofilms analyzed were collected in a randomized study involving 24 patients with superior complete dentures and inferior overdenture retained by two implants with spherical attachment RA (n = 12) or cylindrical Loc (n = 12) systems. Biofilm samples were collected from seven sites of each implant, at the periods: after new attachments installation (baseline), as well at the next 3 and 12 months. The microbial species identification and quantification were carried out using DNA-DNA Checkerboard hybridization technique. The results were submitted to the mixed model non-parametric analysis \"ANOVAF\" and non-structured covariance matrix for each treatment, with 0.05 significance level, later adjusted by \"Benjamini-Hochberg\" false discovery rate (FDR). Considering all the sites and periods investigated together and the 32 bacterial species investigated, only S. constellatus was found in greater abundance in the biofilms associated to the RA system. The site-specific analysis revealed a higher prevalence of S. constellatus and P. micra species on the male component of the RA spherical attachment and of S. sanguinis species on the outer surface of the male component of the cylindrical Loc attachment. In general, it can be concluded that the overdenture attachment systems RA and Loc are colonized by microbiotas with similar profiles, although these systems exert a selective influence on the colonization pattern of S. constelatus, P. micra and S. sanguinis bacterial species

O processo fermentativo da Saccharomyces cerevisiae para a produção de etanol tem grande relevância para o Brasil por ser responsável por uma fonte de energia renovável que é amplamente usada na indústria automotiva. No entanto, em escalas industriais, a fermentação da levedura não ocorre em ambiente asséptico, sendo que diferentes micro-organismos contaminantes são capazes de crescer, competir por nutrientes e até mesmo interferir na fermentação da S. cerevisiae. A fim de melhor compreender quem são os micro-organismos contaminantes e o que fazem na dorna de fermentação, foi utilizado uma abordagem polifásica. O levantamento da microbiota bacteriana presente nas usinas do estado de São Paulo foi realizado através de técnicas independentes de cultivo. Posteriormente, foram realizados ensaios fermentativos com S. cerevisiae CAT-1 na presença do contaminante Lactobacillus fermentum (I-2) para a análise da interação destes na dorna de fermentação. A análise foi realizada por metabolômica acessada através da cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC-MS) e, para isso, inicialmente foi estabelecida uma metodologia eficiente para análise através de GC-MS. Nas usinas, foi reportada uma porcentagem de Lactobacillus maior do que a descrita e a população bacteriana pareceu ser característica de cada usina e persistente ao longo do tempo. Já o estabelecimento da metodologia de análise de metabólitos da fermentação por GC-MS possibilitou a identificação de 261 metabólitos, e as três classes mais abundantes foram Carbohydrates and carbohydrate conjugates (16%), Carboxylic acids and derivatives (12%) e Fatty Acyls (5%). E no ensaio de S. cerevisiae CAT-1 na presença do contaminante L. fermentum (I-2), possibilitou a identificação de 208 metabólitos, onde 50 foram diferencialmente abundantes. Além disso, a via glicolítica foi reforçada na fermentação de S. cerevisiae CAT-1, sendo que nas fermentações de S. cerevisiae (CAT-1) na presença de L. fermentum (I-2), a produção de aminoácidos a partir do glutamate pareceu ser importante. Desta forma, uma análise polifásica pode auxiliar no esclarecimento da relação dos micro-organismos contaminantes com a levedura dentro da dorna de fermentação. / The fermentation of Saccharomyces cerevisiae for ethanol production has great importance to Brazil since it is responsible for the production of a renewable energy source that is widely used in the automotive industry. However, in industrial scale, the yeast fermentation does not occur in an aseptic environment, where different contaminant microorganisms are capable of growing, competing for nutrients and even interfering with the S. cerevisiae fermentation. In order to better understand who the contaminating microorganisms are and what they do in the fermenter, it was used one polyphasic approach. The survey of the bacterial microflora present in two different São Paulo state distilleries was carried out by cultivation independent techniques. Subsequently, fermentation assays were performed with S. cerevisiae CAT-1 in the presence of the contaminant Lactobacillus fermentum (I-2) to analyze the interaction of these microorganisms in the fermenter. The analysis was performed through metabolomics accessed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and, for that, initially was established an efficient methodology for fermentation metabolite analysis by GC-MS. In the distilleries, it was reported a higher percentage of Lactobacillus than ever described and bacterial population appeared to be characteristic of each distillery and persistent over time. After the establishment of fermentation metabolite analysis methodology by GC-MS, it was possible to identify 261 metabolites, and the three most abundant classes were Carbohydrates and carbohydrate conjugates (16%), Carboxylic acids and derivatives (12%) and Fatty acyls ( 5%). In the fermentation assay of S. cerevisiae CAT-1 in the presence of the contaminant L. fermentum (I-2), it was possible to identify 208 metabolites, where 50 were differentially abundant. In addition, the glycolytic pathway was enhanced in the fermentation of S. cerevisiae CAT-1, and in fermentation of S. cerevisiae (CAT-1) in the presence of L. fermentum (I-2), the production of amino acids from glutamate appeared to be important. Thus, a polyphasic analysis can help in the understanding of the relationship between contaminating microorganisms with the yeast in the fermenter.

A passagem bacteriana através da interface entre implante e conector protético com a conseqüente colonização dos implantes tem sido relatada em diversos estudos na literatura. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a passagem de espécies bacterianas da saliva humana para o interior dos implantes através da interface implante-conector protético após simulação de carga cíclica controlada. Foram avaliados 60 implantes de um sistema de 2 componentes e seus respectivos conectores protéticos, divididos em 3 grupos de acordo com o tipo de conexão utilizado: hexágono externo, hexágono interno e cone morse. Cada grupo foi dividido em 2 subgrupos (n=10), submetidos à aplicação de carga e controle. Previamente ao teste, amostras do interior dos implantes foram coletadas para servirem como controle negativo da contaminação. Os conectores foram adaptados aos implantes com um torque final de 20 Ncm, de acordo com a recomendação do fabricante. Os conjuntos foram imersos em saliva humana e submetidos a 500.000 ciclos de carga com uma força de 120 N ou incubados em 35°C durante 7 dias sem aplicação de carga (controle). A eventual contaminação do interior dos implantes foi avaliada após o período experimental usando o método DNA Checkerboard. Microrganismos foram encontrados no interior dos implantes de todos os tipos de conexões avaliadas após o teste de carga cíclica. Os grupos cone morse apresentaram os menores valores de contagem bacteriana nos grupos submetidos a ciclagem de carga e controle. Os implantes submetidos à carga cíclica apresentaram maiores valores de contagem bacteriana do que seus respectivos controles no hexágono externo e interno. Nenhuma espécie bacteriana foi encontrada abrigando o interior dos implantes antes do teste de contaminação (controle negativo). Os implantes do grupo cone morse apresentaram menores quantidades de microrganismos nas duas condições testadas. Pode-se concluir que espécies bacterianas provenientes da saliva humana podem penetrar através da interface implante-conector protético com ou sem a simulação de carga cíclica, e que a aplicação de carga contribuiu para o aumento da contaminação nos implantes com conexão hexagonal externa e interna. / Bacterial leakage along the implant-abutment interface with consequent species harboring the inner parts of two-part dental implant systems has been reported. The aim of this in vitro study was to evaluate the bacterial leakage from human saliva to the internal part of the implants along the implant-abutment interface under loading conditions. Sixty dental implants, 20 for each external or internal hexagon and morse cone connection, and their conical abutments were used in this study. Each connection was sub-divided in 2 groups (n=10), loaded implants and control (unloaded). Previously to the bacterial leakage test, samples from the inner parts of the implants were collected with sterile microbrushes as negative control of contamination. The abutments were tightened to 20 Ncm on the implants. The assemblies were immersed in human saliva and loaded with 500,000 cycles of 120 N in experimental or incubated for 7 days at 35°C in control group. After this period, possible contamination of the internal parts of the implants was evaluated using the DNA Checkerboard method. Microorganisms were found in the internal surfaces of all connections evaluated. Morse cone connection presented the lowest count of microorganisms in control and loading group. Loaded implants present higher counts of microorganisms than control group in external and internal hexagon. No microorganisms were found in the samples recovered from the implants before contamination test (negative control). It can be concluded that bacterial species from human saliva may penetrate along the implant-abutment interface under unloaded and loaded conditions, and morse cone connection presented the lowest count of microorganisms.

A passagem bacteriana através da interface entre implante e conector protético com a conseqüente colonização dos implantes tem sido relatada em diversos estudos na literatura. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a passagem de espécies bacterianas da saliva humana para o interior dos implantes através da interface implante-conector protético após simulação de carga cíclica controlada. Foram avaliados 60 implantes de um sistema de 2 componentes e seus respectivos conectores protéticos, divididos em 3 grupos de acordo com o tipo de conexão utilizado: hexágono externo, hexágono interno e cone morse. Cada grupo foi dividido em 2 subgrupos (n=10), submetidos à aplicação de carga e controle. Previamente ao teste, amostras do interior dos implantes foram coletadas para servirem como controle negativo da contaminação. Os conectores foram adaptados aos implantes com um torque final de 20 Ncm, de acordo com a recomendação do fabricante. Os conjuntos foram imersos em saliva humana e submetidos a 500.000 ciclos de carga com uma força de 120 N ou incubados em 35°C durante 7 dias sem aplicação de carga (controle). A eventual contaminação do interior dos implantes foi avaliada após o período experimental usando o método DNA Checkerboard. Microrganismos foram encontrados no interior dos implantes de todos os tipos de conexões avaliadas após o teste de carga cíclica. Os grupos cone morse apresentaram os menores valores de contagem bacteriana nos grupos submetidos a ciclagem de carga e controle. Os implantes submetidos à carga cíclica apresentaram maiores valores de contagem bacteriana do que seus respectivos controles no hexágono externo e interno. Nenhuma espécie bacteriana foi encontrada abrigando o interior dos implantes antes do teste de contaminação (controle negativo). Os implantes do grupo cone morse apresentaram menores quantidades de microrganismos nas duas condições testadas. Pode-se concluir que espécies bacterianas provenientes da saliva humana podem penetrar através da interface implante-conector protético com ou sem a simulação de carga cíclica, e que a aplicação de carga contribuiu para o aumento da contaminação nos implantes com conexão hexagonal externa e interna. / Bacterial leakage along the implant-abutment interface with consequent species harboring the inner parts of two-part dental implant systems has been reported. The aim of this in vitro study was to evaluate the bacterial leakage from human saliva to the internal part of the implants along the implant-abutment interface under loading conditions. Sixty dental implants, 20 for each external or internal hexagon and morse cone connection, and their conical abutments were used in this study. Each connection was sub-divided in 2 groups (n=10), loaded implants and control (unloaded). Previously to the bacterial leakage test, samples from the inner parts of the implants were collected with sterile microbrushes as negative control of contamination. The abutments were tightened to 20 Ncm on the implants. The assemblies were immersed in human saliva and loaded with 500,000 cycles of 120 N in experimental or incubated for 7 days at 35°C in control group. After this period, possible contamination of the internal parts of the implants was evaluated using the DNA Checkerboard method. Microorganisms were found in the internal surfaces of all connections evaluated. Morse cone connection presented the lowest count of microorganisms in control and loading group. Loaded implants present higher counts of microorganisms than control group in external and internal hexagon. No microorganisms were found in the samples recovered from the implants before contamination test (negative control). It can be concluded that bacterial species from human saliva may penetrate along the implant-abutment interface under unloaded and loaded conditions, and morse cone connection presented the lowest count of microorganisms.

O presente estudo relata a avaliação da metodologia de microplaqueamento em gotas como uma forma alternativa para contagem da bactéria Lactobacillus fermentum CCT 1407 em cultura isolada, ou em cultura mista com Saccharomyces cerevisiae, utilizando o meio de cultivo MRS e actidiona como inibidor da levedura. A análise dos resultados revelou que a metodologia de microplaqueamento em gotas foi equivalente ao plaqueamento em profundidade, o qual é a metodologia rotineiramente utilizada. Este trabalho também relata o comportamento das linhagens Fleischmann, PE-2 e M-26 quando em cultivo misto com a bactéria L. fermentum CCT 1407 durante seis reciclos fermentativos realizados com mosto composto de 30% de melaço e 70% caldo de cana, incubados à temperatura de 32 o C. Foi utilizada a análise de variância para analisar as variáveis e análise sob o esquema parcelas subdivididas no tempo em delineamento blocos ao acaso. Os resultados obtidos mostram que ocorreram reduções de viabilidade nos tratamentos realizados com a linhagem Fleischmann promovendo um estímulo à multiplicação bacteriana, porém, os tratamentos com a linhagem PE-2 apresentaram menores reduções de viabilidade e o estímulo à multiplicação bacteriana foi menor. Ao comparar a o comportamento das linhagens M-26 e PE-2 durante a fermentação em cultivo misto com L. fermentum CCT 1407 não houve diferença estatística significativa, através do teste F, para os seguintes parâmetros: viabilidade celular, rendimento fermentativo, teor alcoólico, massa microbiana e glicerol, sendo detectada diferença significativa para os parâmetros contaminação bacteriana e pH do vinho delevurado. Para o início do experimento comparativo entre as linhagens M-26 e PE-2 foi inoculada a bactéria (1,5.10 6 UFC.mL -1 ) e ao final do sexto ciclo as contaminações foram 3,3.10 7 UFC.mL -1 e 6,0.10 7 UFC.mL -1 nos tratamentos realizados com as linhagens M-26 e PE-2, respectivamente. O aumento da contaminação bacteriana estimulou a formação de glicerol. O teor de trealose apresentou relação positiva com a viabilidade sendo considerado um indicador das condições fisiológicas da levedura, independentemente da linhagem avaliada. / The present study reports the evaluation of pour plate method in drops as an alternative to count the bacteria L. fermentum CCT 1407 in isolated culture, or in mixed culture with Saccharomyces cerevisiae, using the means of cultivation MRS and actidiona as inhibitor of yeast. The analysis of the results revealed that the pour plate method was equivalent to the in depth plate method, which is the methodology most commonly used. This study also presents the behavior of the strain Fleischmann, PE-2 and M-26 when in mixed culture with the bacteria L. fermentum CCT 1407 for six fermentative re cycles accomplished with composed must of 30% of molasses and 70% cane broth, incubated to the temperature of 32 o C. The variance analysis was used to analyze the variables. The obtained results show viability reductions in the treatments accomplished with the strain Fleischmann promoting bacterial multiplication, even so, the treatments with the strain PE-2 presented smaller viability reductions and the incentive to the bacterial multiplication was also smaller. When comparing the behavior of the both strains, M-26 and PE-2, during the fermentation in mixed cultivation with L. fermentum CCT 1407 there was no significant statistical difference, according to the results of the test F, for the following parameters: cellular viability, fermentative output, alcohol content, microbial mass, and glycerol. Significant difference was just detected for the parameters of bacterial contamination and pH of the wine. For the beginning of the first fermentative cycle it was inoculated 1,5.10 6 UFC.mL -1 and at the end of the sixth cycle the contamination was 3,3.10 7 UFC.mL -1 and 6,0.10 7 UFC.mL -1 in the treatments accomplished with the strains M-26 and PE-2, respectively. The increase of bacterial contamination stimulated the glycerol formation and the trehalose content-presented positive relationship with the viability being considered an indicator of the physiologic conditions of the yeast, regardless the appraised yeast strains.

O processo fermentativo da Saccharomyces cerevisiae para a produção de etanol tem grande relevância para o Brasil por ser responsável por uma fonte de energia renovável que é amplamente usada na indústria automotiva. No entanto, em escalas industriais, a fermentação da levedura não ocorre em ambiente asséptico, sendo que diferentes micro-organismos contaminantes são capazes de crescer, competir por nutrientes e até mesmo interferir na fermentação da S. cerevisiae. A fim de melhor compreender quem são os micro-organismos contaminantes e o que fazem na dorna de fermentação, foi utilizado uma abordagem polifásica. O levantamento da microbiota bacteriana presente nas usinas do estado de São Paulo foi realizado através de técnicas independentes de cultivo. Posteriormente, foram realizados ensaios fermentativos com S. cerevisiae CAT-1 na presença do contaminante Lactobacillus fermentum (I-2) para a análise da interação destes na dorna de fermentação. A análise foi realizada por metabolômica acessada através da cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC-MS) e, para isso, inicialmente foi estabelecida uma metodologia eficiente para análise através de GC-MS. Nas usinas, foi reportada uma porcentagem de Lactobacillus maior do que a descrita e a população bacteriana pareceu ser característica de cada usina e persistente ao longo do tempo. Já o estabelecimento da metodologia de análise de metabólitos da fermentação por GC-MS possibilitou a identificação de 261 metabólitos, e as três classes mais abundantes foram Carbohydrates and carbohydrate conjugates (16%), Carboxylic acids and derivatives (12%) e Fatty Acyls (5%). E no ensaio de S. cerevisiae CAT-1 na presença do contaminante L. fermentum (I-2), possibilitou a identificação de 208 metabólitos, onde 50 foram diferencialmente abundantes. Além disso, a via glicolítica foi reforçada na fermentação de S. cerevisiae CAT-1, sendo que nas fermentações de S. cerevisiae (CAT-1) na presença de L. fermentum (I-2), a produção de aminoácidos a partir do glutamate pareceu ser importante. Desta forma, uma análise polifásica pode auxiliar no esclarecimento da relação dos micro-organismos contaminantes com a levedura dentro da dorna de fermentação. / The fermentation of Saccharomyces cerevisiae for ethanol production has great importance to Brazil since it is responsible for the production of a renewable energy source that is widely used in the automotive industry. However, in industrial scale, the yeast fermentation does not occur in an aseptic environment, where different contaminant microorganisms are capable of growing, competing for nutrients and even interfering with the S. cerevisiae fermentation. In order to better understand who the contaminating microorganisms are and what they do in the fermenter, it was used one polyphasic approach. The survey of the bacterial microflora present in two different São Paulo state distilleries was carried out by cultivation independent techniques. Subsequently, fermentation assays were performed with S. cerevisiae CAT-1 in the presence of the contaminant Lactobacillus fermentum (I-2) to analyze the interaction of these microorganisms in the fermenter. The analysis was performed through metabolomics accessed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and, for that, initially was established an efficient methodology for fermentation metabolite analysis by GC-MS. In the distilleries, it was reported a higher percentage of Lactobacillus than ever described and bacterial population appeared to be characteristic of each distillery and persistent over time. After the establishment of fermentation metabolite analysis methodology by GC-MS, it was possible to identify 261 metabolites, and the three most abundant classes were Carbohydrates and carbohydrate conjugates (16%), Carboxylic acids and derivatives (12%) and Fatty acyls ( 5%). In the fermentation assay of S. cerevisiae CAT-1 in the presence of the contaminant L. fermentum (I-2), it was possible to identify 208 metabolites, where 50 were differentially abundant. In addition, the glycolytic pathway was enhanced in the fermentation of S. cerevisiae CAT-1, and in fermentation of S. cerevisiae (CAT-1) in the presence of L. fermentum (I-2), the production of amino acids from glutamate appeared to be important. Thus, a polyphasic analysis can help in the understanding of the relationship between contaminating microorganisms with the yeast in the fermenter.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA11MA086.pdf: 508247 bytes, checksum: 068115e565f2fefa22610ca6fc918645 (MD5) Previous issue date: 2011-11-09 / Artificial insemination is a established and applied biotech of reproduction to the current swine production, which main objective is to maximize the use of ejaculated, maintaining and improving reproductive efficiency. However, when there is a bacterial contamination in the semen, may be seriously impaired for sperm viability. Inseminated doses with bacterial contamination have reduced motility and pH, increase of agglutination, abnormalities of the acrosome and dead cells. The objective of this study was to investigate the bacterial contamination in semen collected in boar studs and relate it to quantitative and qualitative semen qualities, and test the sensitivities of the isolated agent using different antibiotics. Boar semen was collected from three artificial insemination centers in different regions of the state of Santa Catarina. These samples were analyzed at the Centro de Diagnóstico Microbiológico Animal CAV-UDESC, where it was performed the isolation, identification, bacterial count besides the antibiograns. The same samples were also evaluated for motility, vigor, concentration and agglutination. For this evaluation it was used data provided by the company. Smears were prepared from semen samples and stained with eosin-negrosina for the evaluation of sperm morphology. The data were subjected to analysis of variance using the GLM procedure of SAS statistical package. There was isolated 17 different bacterial genera, among which the most frequent were Staphylococcus sp. (26.43%), Proteus sp. (20.53%), Escherichia coli (9.47%), Pseudomonas sp. (11.05%), but there was not a significant correlation (P> 0.05) when comparing the number of colony forming unit / mL of semen with motility, concentration and morphological changes. It was found an isolated effect of the genus Staphylococcus sp. (P <0.05) causing a decrease in sperm motility of the samples where it was isolated. Most bacterial pathogens showed resistant to commercial antibiotics tested which refers to those used in the preparation of the inseminated doses from the boar studs / A Inseminação Artificial é uma biotécnica da reprodução bem estabelecida e aplicada na suinocultura atual, cujo objetivo principal é a maximização do uso dos ejaculados, mantendo e melhorando a eficiência reprodutiva. Entretanto, quando há contaminação bacteriana no sêmen, pode haver sério comprometimento para a viabilidade espermática. Doses inseminantes com contaminação bacteriana apresentam diminuição da motilidade e do pH, aumento da aglutinação, de anormalidades do acrossoma e de células mortas. O objetivo deste trabalho foi pesquisar a contaminação bacteriana em sêmens coletados em centrais de inseminação artificial e relacionar com suas qualidades quantitativas e qualitativas, além de testar a sensibilidades dos agentes isolados frente a diferentes antibióticos. Foi coletado sêmen suíno de três centrais de inseminação artificial em diferentes regiões do estado de Santa Catarina. Essas amostras foram submetidas à análise microbiológica no Centro de Diagnóstico Microbiológica Animal CAV-UDESC, onde foi realizado o isolamento, identificação, contagem bacteriana além dos antibiogramas. Estas mesmas amostras foram também avaliadas quanto à motilidade, vigor, aglutinações e concentração. Para esta avaliação foram utilizados dados fornecidos pela empresa. Foram realizados esfregaços das amostras de sêmen e corados com eosina-negrosina para a avaliação da morfologia espermática. Os dados foram submetidos à análise de variância utilizando-se o procedimento GLM do pacote estatístico SAS. Houve isolamento de 17 diferentes gêneros bacterianos, entre os quais os mais freqüentes foram Staphylococcus sp. (26,43%) Proteus sp. (20,53%), Escherichia coli (9,47%), Pseudomonas sp. (11,05%), porém não houve uma correlação significativa (P>0,05) quando comparados o número de unidade formadora de colônia /mL do sêmen com motilidade, concentração e alterações morfológicas. Foi encontrado um efeito isolado do gênero Staphylococcus sp. P(<0,05) provocando uma diminuição na motilidade dos espermatozóides das amostras onde o mesmo foi isolado. A maioria dos agentes bacterianos mostrou-se resistentes aos antibióticos comercias testados que foram aqueles mais utilizados para diluição de sêmen nas centrais de inseminação artificial