Made available in DSpace on 2014-06-12T22:56:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1302_1.pdf: 2546017 bytes, checksum: bdd106d6526ee0f2aa37926b1732ddc5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / O cateterismo bilateral simultâneo dos seios petrosos inferiores utilizando o estímulo com hormônio liberador de corticotrofina (CRH) é o teste padrão ouro para o diagnóstico diferencial da síndrome de Cushing ACTH dependente. Relatos do uso do CRH+desmopressina (DDAVP) ou DDAVP isolado neste procedimento são limitados. O objetivo deste estudo foi comparar o uso do estímulo combinado CRH+DDAVP ou do DDAVP isolado durante este procedimento. O exame foi realizado em 34 pacientes, a média de idade (+ DP) e sexo (F/M) foram 31.4 + 10.0 anos e 25/9, no período de janeiro de 1998 a dezembro de 2008. Após a cateterização de ambos os seios petrosos, amostras de sangue para ACTH foram coletadas, simultaneamente, nos seios petrosos e veia periférica, tanto no estado basal como após três e cinco minutos da administração de CRH+DDAVP (100μg +10μg) em 16 pacientes ou DDAVP isolado (10μg) em 18 pacientes. No basal um gradiente de ACTH central: periférico ³ 2 foi encontrado em 14/16 (87.5%) pacientes do grupo do CRH+DDAVP e em 15/18 (83.3%) pacientes do grupo do DDAVP. Após estímulo, aos 3 minutos, todos os pacientes de ambos os grupos (100%) tiveram um gradiente central: periférico ³ 3, enquanto que aos 5 minutos, 14/16 (87.5%) pacientes do grupo do CRH+DDAVP e 15/18 (83.3%) pacientes do grupo do DDAVP tiveram gradiente. Considerando-se o gradiente interpetroso de 1.4, lateralização foi obtida em 93.7% no grupo do CRH+desmopressina e 100% no grupo da desmopressina. Os dois estímulos tiveram o mesmo poder na diferenciação da doença de Cushing. O tempo três minutos foi mais efetivo que o tempo cinco minutos. Portanto a realização da coleta aos 5 minutos não ofereceu vantagem na definição diagnóstica

A adolescência é um período crítico para o desenvolvimento dos indivíduos. Durante esta fase várias estruturas cerebrais responsáveis pelo controle das respostas estressoras atingem sua maturidade. Assim, estressores agudos ou crônicos podem repercutir negativamente e alterar a resposta de estresse bem como o comportamento na vida adulta. O eixo hipotálamo-hipófiseadrenal (HPA) integra o sistema do estresse, cujo controle inibitório está regulado pelos glicocorticoides, os quais agem em receptores dos tipos mineralocorticoide (MR) e glicocorticoide (GR). É desconhecido o papel destes receptores nos efeitos de longa duração induzidos pelo estresse na pré-puberdade em modelos animais. O objetivo deste trabalho foi verificar se o bloqueio dos receptores MR ou GR após o estresse na pré-puberdade previne suas alterações sobre o comportamento exploratório e o controle do eixo HPA, em ratas adultas. Desta forma, ratas pré-púberes, com 26 dias de idade, foram submetidas a uma ou sete sessões diárias de contenção e, em seguida, à administração dos antagonistas MR (Espironolactona) ou GR (RU- 486). Na fase adulta, aos 60 dias de idade, os animais foram avaliados no labirinto em cruz elevado e, no dia seguinte, submetidos novamente à contenção, concomitantemente com coleta seriada de sangue para avaliar a resposta do eixo HPA. Subsequentemente, realizou-se a perfusão do cérebro assim como a coleta das adrenais e timo. Efetuou-se a dosagem de corticosterona por radioimunoensaio e analisou-se a expressão e atividade dos neurônios CRH na região parvocelular medial do núcleo paraventricular do hipotálamo, por imuno-histoquímica. O estresse crônico na pré-puberdade causou redução no peso corporal, atraso na puberdade e diminuição da expressão de CRH e Fos em resposta ao estresse agudo na vida adulta. Não houve efeitos sobre o peso do timo e parâmetros comportamentais. Contudo, RU-486 promoveu aumento da corticosterona e adrenais. O estresse agudo ocasionou avanço da puberdade e associado com RU- 486 ou Espironolactona também diminuiu a atividade dos neurônios CRH em resposta ao mesmo estressor na vida adulta. Estes resultados demonstram que a administração de Espironolactona pode ser uma estratégia promissora para atenuar os efeitos centrais a longo prazo decorrentes do estresse agudo na pré-adolescência / Adolescence is a critical period to the individual\'s development. Several brain structures responsible for the control of stressful responses reach maturity during this phase. Thus, acute or chronic stressors can have a negative effect and alter the stress response as well as behavior in adulthood. The hypothalamus-pituitary-adrenal axis (HPA) is part of the stress system, whose inhibitory control is regulated by glucocorticoids through mineralocorticoid (MR) and glucocorticoid (GR) receptors. It is unknown the role of these receptors in the long-term effects induced by stress in the prepuberty in animals models. The aim of this study was determine whether MR or GR receptor blockade after stress in prepuberty prevents their changes on exploratory behavior and control of the HPA axis in adult female rats. Thus, prepuberty female rats, at 26 days old, were submitted to one or seven daily restraint sessions followed by administration of MR (Spironolactone) or GR (RU-486) antagonists. In adulthood, at 60 days old, the animals were evaluated in the elevated plus maze. In the next day, they were subject again to restraint concurrently with serial blood sampling to evaluate the HPA axis response. Subsequently, it was performed the brain perfusion as well as the collection of the adrenal glands and thymus. It was conducted the dosage of corticosterone by radioimmunoassay and analyzed the expression and activity of CRH neurons in the medial parvocellular subdivision of the paraventricular nucleus of the hypothalamus by immunohistochemistry. Chronic stress in prepuberty reduced the body weight, delayed the puberty and decreased the CRH and Fos expression in response to acute stress in adulthood. There was no effect on thymus weight and behavioral parameters. However, RU-486 increased the corticosterone secretion and adrenal glands weight. Acute stress caused advancement of puberty and associated with RU-486 or Spironolactone also reduced the activity of CRH neurons in response to the same stressor in adulthood. These results demonstrate that Spironolactone administration may be a promising strategy to attenuate the central long-term effects resulting from acute stress in prepuberty.

A adolescência é um período crítico para o desenvolvimento dos indivíduos. Durante esta fase várias estruturas cerebrais responsáveis pelo controle das respostas estressoras atingem sua maturidade. Assim, estressores agudos ou crônicos podem repercutir negativamente e alterar a resposta de estresse bem como o comportamento na vida adulta. O eixo hipotálamo-hipófiseadrenal (HPA) integra o sistema do estresse, cujo controle inibitório está regulado pelos glicocorticoides, os quais agem em receptores dos tipos mineralocorticoide (MR) e glicocorticoide (GR). É desconhecido o papel destes receptores nos efeitos de longa duração induzidos pelo estresse na pré-puberdade em modelos animais. O objetivo deste trabalho foi verificar se o bloqueio dos receptores MR ou GR após o estresse na pré-puberdade previne suas alterações sobre o comportamento exploratório e o controle do eixo HPA, em ratas adultas. Desta forma, ratas pré-púberes, com 26 dias de idade, foram submetidas a uma ou sete sessões diárias de contenção e, em seguida, à administração dos antagonistas MR (Espironolactona) ou GR (RU- 486). Na fase adulta, aos 60 dias de idade, os animais foram avaliados no labirinto em cruz elevado e, no dia seguinte, submetidos novamente à contenção, concomitantemente com coleta seriada de sangue para avaliar a resposta do eixo HPA. Subsequentemente, realizou-se a perfusão do cérebro assim como a coleta das adrenais e timo. Efetuou-se a dosagem de corticosterona por radioimunoensaio e analisou-se a expressão e atividade dos neurônios CRH na região parvocelular medial do núcleo paraventricular do hipotálamo, por imuno-histoquímica. O estresse crônico na pré-puberdade causou redução no peso corporal, atraso na puberdade e diminuição da expressão de CRH e Fos em resposta ao estresse agudo na vida adulta. Não houve efeitos sobre o peso do timo e parâmetros comportamentais. Contudo, RU-486 promoveu aumento da corticosterona e adrenais. O estresse agudo ocasionou avanço da puberdade e associado com RU- 486 ou Espironolactona também diminuiu a atividade dos neurônios CRH em resposta ao mesmo estressor na vida adulta. Estes resultados demonstram que a administração de Espironolactona pode ser uma estratégia promissora para atenuar os efeitos centrais a longo prazo decorrentes do estresse agudo na pré-adolescência / Adolescence is a critical period to the individual\'s development. Several brain structures responsible for the control of stressful responses reach maturity during this phase. Thus, acute or chronic stressors can have a negative effect and alter the stress response as well as behavior in adulthood. The hypothalamus-pituitary-adrenal axis (HPA) is part of the stress system, whose inhibitory control is regulated by glucocorticoids through mineralocorticoid (MR) and glucocorticoid (GR) receptors. It is unknown the role of these receptors in the long-term effects induced by stress in the prepuberty in animals models. The aim of this study was determine whether MR or GR receptor blockade after stress in prepuberty prevents their changes on exploratory behavior and control of the HPA axis in adult female rats. Thus, prepuberty female rats, at 26 days old, were submitted to one or seven daily restraint sessions followed by administration of MR (Spironolactone) or GR (RU-486) antagonists. In adulthood, at 60 days old, the animals were evaluated in the elevated plus maze. In the next day, they were subject again to restraint concurrently with serial blood sampling to evaluate the HPA axis response. Subsequently, it was performed the brain perfusion as well as the collection of the adrenal glands and thymus. It was conducted the dosage of corticosterone by radioimmunoassay and analyzed the expression and activity of CRH neurons in the medial parvocellular subdivision of the paraventricular nucleus of the hypothalamus by immunohistochemistry. Chronic stress in prepuberty reduced the body weight, delayed the puberty and decreased the CRH and Fos expression in response to acute stress in adulthood. There was no effect on thymus weight and behavioral parameters. However, RU-486 increased the corticosterone secretion and adrenal glands weight. Acute stress caused advancement of puberty and associated with RU-486 or Spironolactone also reduced the activity of CRH neurons in response to the same stressor in adulthood. These results demonstrate that Spironolactone administration may be a promising strategy to attenuate the central long-term effects resulting from acute stress in prepuberty.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

Os Transtornos por Uso de Substâncias (TUS) são propostos pela Associação Norte-Americana de Psiquiatria e englobam diversas dependências químicas, incluindo o tabagismo e a dependência de crack. O uso de crack tem aumentado consideravelmente nos últimos anos, segundo dados de levantamentos brasileiros e mundiais. Com mecanismo de ação semelhante ao da cocaína, porém com efeito mais rápido, o crack é uma droga que causa grave prejuízo a seus usuários e conduz à dependência em pouco tempo. O tabagismo também é uma condição bastante prevalente no mundo inteiro, sendo que os prejuízos relacionados a esse transtorno envolvem principalmente o desenvolvimento de doenças respiratórias e câncer. Diversos trabalhos têm buscado identificar fatores de suscetibilidade a esses transtornos, sendo que estudos de associação envolvendo genes do sistema de resposta a estresse vêm ganhando importância. O eixo Hipotálamo- Pituitária-Adrenal (HPA) é o sistema de resposta a estresse mais conhecido em humanos e alvo do presente trabalho, uma vez que o funcionamento dessa cascata de sinalização da produção de cortisol pode desempenhar um papel relevante no desenvolvimento de psicopatologias. Além disso, o eixo HPA pode ser considerado um mediador da relação entre situações adversas na infância e o surgimento de TUS. O objetivo desse trabalho, portanto, é investigar o papel de polimorfismos no gene CRHR1 (que codifica o receptor tipo 1 do hormônio liberador de corticotrofina – CRH, hormônio inicial do eixo HPA) sobre o desenvolvimento e características clínicas da dependência química. Para isso, foram realizados dois estudos, envolvendo amostras de mulheres. No primeiro artigo, a partir de três amostras – (1) 136 usuárias de crack, (2) 55 tabagistas e (3) 262 voluntárias saudáveis – foram identificadas diferenças de freqüências alélicas e genotípicas do SNP rs12944712; além disso, a análise de haplótipos envolvendo tal SNP e o rs110402 revelou maior frequência do haplótipo contendo o alelo G nos dois polimorfismos nos grupos de usuárias de crack e tabagistas. No segundo artigo, foi avaliado o efeito da interação geneambiente envolvendo os mesmos polimorfismos e situações adversas na infância – estimada pela escala Childhood Trauma Questionnaire (CTQ) –sobre características clínicas da amostra de usuárias de crack, como craving e gravidade da dependência – estimados, respectivamente, pelas escalas Cocaine Selective Severity Assessment (CSSA) e Addiction Severity Index (ASI6). A análise não revelou uma interação significativa. A presente dissertação, portanto, revela um efeito do gene CRHR1 sobre o desenvolvimento de TUS, embora esse efeito pareça não se manifestar sobre a gravidade. Mais estudos são necessários visando esclarecer o real efeito do gene e do eixo HPA como um todo sobre os fenótipos e comportamentos aditivos, bem como os mecanismos subjacentes a essa relação. / The Substance Use Disorders (SUD) are proposed by the American Psychiatric Association and comprise several addictions, including tobacco and crack cocaine smoking. The prevalence of crack cocaine dependence has grown considerably, according to survey data from Brazil and worldwide. With mechanism of action similar to cocaine but with faster effect, crack is a drug that causes severe impairments to its users and leads to dependence in a short time. Tobacco smoking is also a highly prevalent condition worldwide, and the impact related to this disorder includes cancer and respiratory diseases. Several studies have attempted the identification of susceptibility factors to these disorders, and association studies involving stress response system genes have been performed. The Hypothalamic-Pituitary-Adrenal (HPA) axis is the best known stress response system, and the signaling cascade production of cortisol may play a role in the development of psychopathology. In addition, HPA axis can be considered a mediator of the relationship between early life adversity and SUD. The aim of this study is to investigate the role of polymorphisms in CRHR1 gene (encoding the corticotrophin releasing factor – CRH – receptor type 1, an initial factor in HPA axis response) on the development and clinical traits of drug dependence. Two studies were conducted on women samples. In the first article, three groups were compared - (1) 136 crack smokers, (2) 55 tobacco smokers and (3) 262 healthy volunteers. Differences in allele and genotype frequencies of the SNP rs12944712 were identified; in addition, the haplotype analysis involving this SNP and rs110402 revealed a higher frequency of the haplotype containing G allele in both polymorphisms in the groups of nicotine dependents and crack smokers. In the second article, we evaluated the effect of a gene-environment interaction involving the same polymorphisms and childhood adversity - estimated by Childhood Trauma Questionnaire (CTQ) scale – on clinical characteristics of the sample of crack users, such as craving and severity of dependence - estimated respectively by the Cocaine Selective Severity Assessment (CSSA) and Addiction Severity Index (ASI6) scales. The analysis did not reveal a significant interaction. This dissertation thus shows an effect of CRHR1 genepolymorphism on the development of SUD, although this effect does not seem to impact disorder severity. More studies are needed in order to clarify the actual effect of the gene and of the HPA axis as a whole on addictive behaviors.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

Os Transtornos por Uso de Substâncias (TUS) são propostos pela Associação Norte-Americana de Psiquiatria e englobam diversas dependências químicas, incluindo o tabagismo e a dependência de crack. O uso de crack tem aumentado consideravelmente nos últimos anos, segundo dados de levantamentos brasileiros e mundiais. Com mecanismo de ação semelhante ao da cocaína, porém com efeito mais rápido, o crack é uma droga que causa grave prejuízo a seus usuários e conduz à dependência em pouco tempo. O tabagismo também é uma condição bastante prevalente no mundo inteiro, sendo que os prejuízos relacionados a esse transtorno envolvem principalmente o desenvolvimento de doenças respiratórias e câncer. Diversos trabalhos têm buscado identificar fatores de suscetibilidade a esses transtornos, sendo que estudos de associação envolvendo genes do sistema de resposta a estresse vêm ganhando importância. O eixo Hipotálamo- Pituitária-Adrenal (HPA) é o sistema de resposta a estresse mais conhecido em humanos e alvo do presente trabalho, uma vez que o funcionamento dessa cascata de sinalização da produção de cortisol pode desempenhar um papel relevante no desenvolvimento de psicopatologias. Além disso, o eixo HPA pode ser considerado um mediador da relação entre situações adversas na infância e o surgimento de TUS. O objetivo desse trabalho, portanto, é investigar o papel de polimorfismos no gene CRHR1 (que codifica o receptor tipo 1 do hormônio liberador de corticotrofina – CRH, hormônio inicial do eixo HPA) sobre o desenvolvimento e características clínicas da dependência química. Para isso, foram realizados dois estudos, envolvendo amostras de mulheres. No primeiro artigo, a partir de três amostras – (1) 136 usuárias de crack, (2) 55 tabagistas e (3) 262 voluntárias saudáveis – foram identificadas diferenças de freqüências alélicas e genotípicas do SNP rs12944712; além disso, a análise de haplótipos envolvendo tal SNP e o rs110402 revelou maior frequência do haplótipo contendo o alelo G nos dois polimorfismos nos grupos de usuárias de crack e tabagistas. No segundo artigo, foi avaliado o efeito da interação geneambiente envolvendo os mesmos polimorfismos e situações adversas na infância – estimada pela escala Childhood Trauma Questionnaire (CTQ) –sobre características clínicas da amostra de usuárias de crack, como craving e gravidade da dependência – estimados, respectivamente, pelas escalas Cocaine Selective Severity Assessment (CSSA) e Addiction Severity Index (ASI6). A análise não revelou uma interação significativa. A presente dissertação, portanto, revela um efeito do gene CRHR1 sobre o desenvolvimento de TUS, embora esse efeito pareça não se manifestar sobre a gravidade. Mais estudos são necessários visando esclarecer o real efeito do gene e do eixo HPA como um todo sobre os fenótipos e comportamentos aditivos, bem como os mecanismos subjacentes a essa relação. / The Substance Use Disorders (SUD) are proposed by the American Psychiatric Association and comprise several addictions, including tobacco and crack cocaine smoking. The prevalence of crack cocaine dependence has grown considerably, according to survey data from Brazil and worldwide. With mechanism of action similar to cocaine but with faster effect, crack is a drug that causes severe impairments to its users and leads to dependence in a short time. Tobacco smoking is also a highly prevalent condition worldwide, and the impact related to this disorder includes cancer and respiratory diseases. Several studies have attempted the identification of susceptibility factors to these disorders, and association studies involving stress response system genes have been performed. The Hypothalamic-Pituitary-Adrenal (HPA) axis is the best known stress response system, and the signaling cascade production of cortisol may play a role in the development of psychopathology. In addition, HPA axis can be considered a mediator of the relationship between early life adversity and SUD. The aim of this study is to investigate the role of polymorphisms in CRHR1 gene (encoding the corticotrophin releasing factor – CRH – receptor type 1, an initial factor in HPA axis response) on the development and clinical traits of drug dependence. Two studies were conducted on women samples. In the first article, three groups were compared - (1) 136 crack smokers, (2) 55 tobacco smokers and (3) 262 healthy volunteers. Differences in allele and genotype frequencies of the SNP rs12944712 were identified; in addition, the haplotype analysis involving this SNP and rs110402 revealed a higher frequency of the haplotype containing G allele in both polymorphisms in the groups of nicotine dependents and crack smokers. In the second article, we evaluated the effect of a gene-environment interaction involving the same polymorphisms and childhood adversity - estimated by Childhood Trauma Questionnaire (CTQ) scale – on clinical characteristics of the sample of crack users, such as craving and severity of dependence - estimated respectively by the Cocaine Selective Severity Assessment (CSSA) and Addiction Severity Index (ASI6) scales. The analysis did not reveal a significant interaction. This dissertation thus shows an effect of CRHR1 genepolymorphism on the development of SUD, although this effect does not seem to impact disorder severity. More studies are needed in order to clarify the actual effect of the gene and of the HPA axis as a whole on addictive behaviors.

Os Transtornos por Uso de Substâncias (TUS) são propostos pela Associação Norte-Americana de Psiquiatria e englobam diversas dependências químicas, incluindo o tabagismo e a dependência de crack. O uso de crack tem aumentado consideravelmente nos últimos anos, segundo dados de levantamentos brasileiros e mundiais. Com mecanismo de ação semelhante ao da cocaína, porém com efeito mais rápido, o crack é uma droga que causa grave prejuízo a seus usuários e conduz à dependência em pouco tempo. O tabagismo também é uma condição bastante prevalente no mundo inteiro, sendo que os prejuízos relacionados a esse transtorno envolvem principalmente o desenvolvimento de doenças respiratórias e câncer. Diversos trabalhos têm buscado identificar fatores de suscetibilidade a esses transtornos, sendo que estudos de associação envolvendo genes do sistema de resposta a estresse vêm ganhando importância. O eixo Hipotálamo- Pituitária-Adrenal (HPA) é o sistema de resposta a estresse mais conhecido em humanos e alvo do presente trabalho, uma vez que o funcionamento dessa cascata de sinalização da produção de cortisol pode desempenhar um papel relevante no desenvolvimento de psicopatologias. Além disso, o eixo HPA pode ser considerado um mediador da relação entre situações adversas na infância e o surgimento de TUS. O objetivo desse trabalho, portanto, é investigar o papel de polimorfismos no gene CRHR1 (que codifica o receptor tipo 1 do hormônio liberador de corticotrofina – CRH, hormônio inicial do eixo HPA) sobre o desenvolvimento e características clínicas da dependência química. Para isso, foram realizados dois estudos, envolvendo amostras de mulheres. No primeiro artigo, a partir de três amostras – (1) 136 usuárias de crack, (2) 55 tabagistas e (3) 262 voluntárias saudáveis – foram identificadas diferenças de freqüências alélicas e genotípicas do SNP rs12944712; além disso, a análise de haplótipos envolvendo tal SNP e o rs110402 revelou maior frequência do haplótipo contendo o alelo G nos dois polimorfismos nos grupos de usuárias de crack e tabagistas. No segundo artigo, foi avaliado o efeito da interação geneambiente envolvendo os mesmos polimorfismos e situações adversas na infância – estimada pela escala Childhood Trauma Questionnaire (CTQ) –sobre características clínicas da amostra de usuárias de crack, como craving e gravidade da dependência – estimados, respectivamente, pelas escalas Cocaine Selective Severity Assessment (CSSA) e Addiction Severity Index (ASI6). A análise não revelou uma interação significativa. A presente dissertação, portanto, revela um efeito do gene CRHR1 sobre o desenvolvimento de TUS, embora esse efeito pareça não se manifestar sobre a gravidade. Mais estudos são necessários visando esclarecer o real efeito do gene e do eixo HPA como um todo sobre os fenótipos e comportamentos aditivos, bem como os mecanismos subjacentes a essa relação. / The Substance Use Disorders (SUD) are proposed by the American Psychiatric Association and comprise several addictions, including tobacco and crack cocaine smoking. The prevalence of crack cocaine dependence has grown considerably, according to survey data from Brazil and worldwide. With mechanism of action similar to cocaine but with faster effect, crack is a drug that causes severe impairments to its users and leads to dependence in a short time. Tobacco smoking is also a highly prevalent condition worldwide, and the impact related to this disorder includes cancer and respiratory diseases. Several studies have attempted the identification of susceptibility factors to these disorders, and association studies involving stress response system genes have been performed. The Hypothalamic-Pituitary-Adrenal (HPA) axis is the best known stress response system, and the signaling cascade production of cortisol may play a role in the development of psychopathology. In addition, HPA axis can be considered a mediator of the relationship between early life adversity and SUD. The aim of this study is to investigate the role of polymorphisms in CRHR1 gene (encoding the corticotrophin releasing factor – CRH – receptor type 1, an initial factor in HPA axis response) on the development and clinical traits of drug dependence. Two studies were conducted on women samples. In the first article, three groups were compared - (1) 136 crack smokers, (2) 55 tobacco smokers and (3) 262 healthy volunteers. Differences in allele and genotype frequencies of the SNP rs12944712 were identified; in addition, the haplotype analysis involving this SNP and rs110402 revealed a higher frequency of the haplotype containing G allele in both polymorphisms in the groups of nicotine dependents and crack smokers. In the second article, we evaluated the effect of a gene-environment interaction involving the same polymorphisms and childhood adversity - estimated by Childhood Trauma Questionnaire (CTQ) scale – on clinical characteristics of the sample of crack users, such as craving and severity of dependence - estimated respectively by the Cocaine Selective Severity Assessment (CSSA) and Addiction Severity Index (ASI6) scales. The analysis did not reveal a significant interaction. This dissertation thus shows an effect of CRHR1 genepolymorphism on the development of SUD, although this effect does not seem to impact disorder severity. More studies are needed in order to clarify the actual effect of the gene and of the HPA axis as a whole on addictive behaviors.

This study is interested in properties of fungal transglycosylases, specifically Phr1, Phr2 and Crh2. These enzymes are involved in the remodelling of yeast cell walls due to their cleavage of structural donor polysaccharides and transfer of their fragments to the other acceptor (poly)saccharide molecules. The mammalian cells do not contain cell walls, nor cell wall transglycosylases, that´s why these enzymes are possible targets for antifungal agents. In this diploma thesis the effect of 67 commercially available inhibitors on Phr1 and Phr2 enzymes was studied by rapid screening. In the case of the Phr1 enzyme, two inhibitors showed a potential effect which was subsequently tested by size exclusion chromatography column incorporated into HPLC device. None of the inhibitors were found to have an inhibitory effect on Phr1 or Phr2 enzymes in contrast to DMSO in which all inhibitors were dissolved. The mode of action of Phr enzymes was also studied by thin layer chromatography and high performance liquid chromatography. The first method allowed to monitor the formation of products only in the later stages of the reaction, but more sensitive size exclusion chromatography showed the product formation at the beginning of the reaction. Phr1 cleaved the donor substrate near the non-reducing end and forms small fragments that are transfered to labeled acceptors during the whole reaction. Phr2 utilized random action pattern, thus creating products with higher molecular weight from the beginning of reaction. The effect of the polymerization degree of acceptor on it´s affinity with the Crh2 was also studied. The Michaelis-Menten constants showed no effect of acceptor lenght on the affinity between enzyme and substrate.

No description available.