Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: O uso do sêmen refrigerado proporciona maiores taxas de prenhez se comparado ao do sêmen congelado. Essa diferença parece estar relacionada às lesões mais severas das membranas espermáticas desencadeadas pelo processo de congelação. Por sua habilidade de se ligar às proteínas ligadoras de espermatozoides e ao íon cálcio, o caseinato de sódio vem sendo estudado como uma substância capaz de inibir a capacitação espermática precoce, uma importante causa de diminuição da taxa de prenhez quando do uso de sêmen congelado. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar a possibilidade de um diluente comercial a base de gema de ovo, destinado à congelação de sêmen bovino, ser empregado para a criopreservação de sêmen bubalino; o segundo objetivo foi investigar o efeito do uso desse diluente, suplementado com caseinato de sódio, na criopreservação de espermatozoides bubalinos, por meio da avaliação dos espermatozoides, por citometria de fluxo, e da cinética espermática, empregando-se o sistema CASA. Na primeira parte do estudo, quando comparados os resultados das avaliações da cinética espermática e integridade das membranas plasmática e acrossomal, observou-se que o processo de congelação seminal promoveu mais danos celulares que o processo de refrigeração. Na segunda parte do estudo, não foram observados efeitos da adição do caseinato de sódio ao diluente a base de gema de ovo. A partir dos resultados do presente estudo foi possível concluir que o diluente a base de gema de ovo testad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of cooled semen results in higher pregnancy rates compared than the use of frozen semen. This result seems to be related to the more severe damages triggered by the freezing process, when compared to those observed during the refrigeration. Due to its ability to bind to sperm-binding proteins and calcium ions, sodium caseinate has been studied as a ubstance capable to prevent early sperm capacitation, a major cause of decreased pregnancy rate after using frozen semen. The first objective of this study was to evaluate if a commercial egg yolk diluent developed for freezing bovine semen could be used for buffalo semen cryopreservation; the second objective was to investigate the effect of this diluent, added with sodium caseinate, during the procedures of buffalo sperm cryopreservation, using flow cytometry and computer-assisted sperm analysis. In the first part of the study, comparing the results of spermatic kinetics and plasma and acrosomal membranes integrity, it was observed that the freezing process resulted in more cell damage than the cooling process. In the second part of the study, no effects of the addition of sodium caseinate to the egg yolk diluent were observed. From the results of the present study it was possible to conclude that the egg yolk-based diluent was suitable for buffalo semen cryopreservation and that the addition of sodium caseinate did not decrease the deleterious effects related to seminal cryopreservation. / Mestre

A necessidade de tratamentos mais eficazes e menos invasivos para os pacientes, em adição à capacidade de diferenciação celular da medula óssea sugere que o transplante de células mononucleares totais poderia ser uma das melhores formas de tratamento para as diversas patologias existentes. Entretanto, vários fatores implicam sobre a viabilidade das células da medula óssea dos quais destacamos a ausência de padronização de protocolo de criopreservação que permita a manutenção da viabilidade celular, sendo altamente necessário o desenvolvimento de estudos nesta área. Deste modo, neste estudo, após a anestesia de um grupo de animais foi realizada punção da medula óssea, separação das células mononucleares e avaliação da viabilidade. Foram testados oito meios diferentes para criopreservação das células. O meio de congelamento A é composto por 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Dulbecco´s Modified Eagle´s Médium (DMEM) e 40% de Plasma Autólogo, o meio de congelamento B contém 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Roswell Park Memorial Institute (RPMI) e 40% de Plasma Autólogo, o meio de congelamento C tem em sua composição 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% soro fetal bovino (SFB) e 40% plasma autólogo, o meio de congelamento D é composto de 20% dimetilsulfóxido (DMSO) e 80% de plasma autólogo, o meio E constitui-se de 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) e 47,5% de plasma autólogo, o meio F contém 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) e 47,5% de plasma autólogo, o meio G contém 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de soro fetal bovino (SFB) e 47,5% de plasma autólogo e o meio H constitui-se de 5% dimetilsulfóxido (DMSO) e 95% de plasma autólogo. Após as análises realizadas pela técnica de citometria de fluxo, o meio mais eficiente na criopreservação das células mononucleares de suínos foi o protocolo D por possuir maior concentração de plasma autólogo e crioprotetor. / The necessity of the most efficient and less invasive treatments for the patients, in addition to the capacity of cellular differentiation of the bone marrow suggests that the transplant of mononuclear total cells might be one of the best treatment for several pathologies. Meantime, several factors influence on the viability of the cells of the bone marrow as the absence of standardization of criopreservação protocol which could allow the maintenance of the cellular viability, being an important issue of investigation. In this study, after the anaesthesia of a group of animals, samples of bone marrow were collected, following the separation of the mononuclear cells and evaluation of the viability. Eight different protocols were tested for cells criopreservation. The protocol A by 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) and 40% autologus plasma, B protocol conatained 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Roswell Park Memorial Institute (RPMI) and 40% autologus plasma, the C protocol was composed 20 % dimetilsulfóxido (DMSO), 40% bovine fetal serum (SFB) e 40% autologus plasma, D protocol was made using 20% dimetilsulfóxido (DMSO) and 80% autologus plasma, E protocol was constituted by 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) and 47,5% autólogo plasma, the F contains 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) and 47,5% autologo plasma, the protocol G was compoed by 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de bovine feta serum (SFB) and 47,5% autologus plasma and the H protocol was 5% dimetilsulfóxido (DMSO) and 95% autologus plasma. After flux citometer analyses, the most efficient protocol in criopreservation of the mononuclear cells of pigs was the protocol D which was composed the by the most amount of autologus plasma and crioprotectant.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 281028 bytes, checksum: 78874dbf43dd25b05a14372123254675 (MD5) Previous issue date: 2006-06-09 / The objective of this work was to evaluate the effect of permeable and unpermeable protocols in the same dilution media and to compare two unfrozen canine semen protocols. Three adults males from Labrador Retrievier breed, were submitted to weekly collection of semen for five weeks, in a total of 15 samples in each experimental design. The in vitro testes applied to the semen samples were evaluation of: the progressive motility, the spermatic vigor, the integrity of plasma and acrosome membrane and the sperm longevity. The base mean diluent utilized for the crioprotectors associations was tris-citrate: (G1) (modified tris-citrate = 3% dimetil-formamide + 3% glycerol); (G2) (modified tris-citrate = 3% dimetilformamide + threalose) and (G3) (tris-citrate = 4% glycerol). For the unfrozen semen, was used a fast unfrozen protocol (75 ºC/ 7 ) and the slow unfrozen protocol (37 ºC/ 1 ). A difference was detected (P<0.01) among the tested associations, and the G1 and G3 associations were superior to the G2 one. But, evaluating each protector association separately, there was no difference (P>0.01) when utilizing the fast and slow unfrozen protocols. These results showed that the glycerol cryopreserved sperm cell showed better results as compared to the others associations used in preserving the canine sperm cells. / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da associação de crioprotetores permeáveis e impermeáveis em um mesmo meio diluidor e comparar dois protocolos de descongelamento de sêmen canino. Foram utilizados três machos adultos da raça Labrador do Retrievier, os quais foram submetidos a uma coleta de sêmen semanal durante o período de cinco semanas, totalizando quinze amostras em cada delineamento experimental. Os testes in vitro aplicados às amostras de sêmen foram a avaliação da motilidade progressiva, o vigor espermático, a avaliação de integridade da membrana plasmática e do acrossoma e avaliação da longevidade espermática. O meio diluente base utilizado para as associações de crioprotetores foi o Tris-citrato: (G1) (Tris-citrato modificado/ = 3% Dimetil-formamida + 3% Glicerol); (G2) (Tris-citrato modificado/ = 3% Dimetil-formamida + 3% Trealose) e (G3) (Tris-citrato/ = 4% Glicerol). Quanto ao método de descongelamento do sêmen, foi avaliado um protocolo de descongelamento rápido (75ºC/ 7 e 37ºC/ 1 minuto) e um protocolo de descongelamento lento (37ºC/ 1 minuto). Foi verificada diferença (P<0,01) entre as associações crioprotetoras testadas, de forma que foi apresentada superioridade aos grupos G1 e G3, quando comparado aos resultados inferiores demonstrados pelo G2. Porém, avaliando separadamente cada associação crioprotetora, não houve diferença (P>0,01) ao utilizar distintos protocolos de descongelamento, sendo um rápido e outro lento. Esses resultados indicam que a célula espermática criopreservada pela associação glicerol apresentou os melhores resultados, caracterizando maior eficácia na preservação dos espermatozóides da espécie canina comparado às demais associações testadas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 996495 bytes, checksum: d0704166d94adb1ce9c77dd01311d0e5 (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was evaluate the effectiveness of the Mangalarga Marchador stallions semen diluted with glycine-yolk egg based extender or milk-based extender and cooled at 5 °C for 24 hours, assessed by in vitro tests and of fertility in vivo. In Experiment 1, were used 5 ejaculated of 3 stallions. Following semen collection, the experimental group was divided into two treatments: 1 - cooling and dilution of semen with the milk-based extender, 2 - cooling and dilution of semen with extender glycine-egg yolk based extender. Semen was packaged in samples containing 12 mL of diluted semen with 30 x 106 viable sperm / mL concentration and then stored in Equitainer® for 24 hours. The sperm quality was evaluated after its dilution and after its cooling. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility, spermatic vigor, sperm morphology, integrity of the plasma membrane integrity by supravital test and epifluorescent using the dyes carboxyfluorescein diacetate (CFDA) and propidium iodide (PI); plasma membrane functionality by hypoosmotic test and progressive motility and spermatic vigor during the spermatic thermo-resistance test (TTR) for 90 minutes. The vigor of semen diluted with Kenney was higher (p <0.05) than T2 in the assessment of fresh diluted semen. No statistical difference was observed in other seminal characteristics from the fresh diluted semen. In the cooled semen, the Kenney extender had a better motility and spermatic vigor after the 24 hours storage, but Foote extender had higher average values for reactive spermatozoa percentage to the hypoosmotic test and the viabity to the epifluorescent test (p<0,05). In Experiment 2, the objective was to evaluate the fertility of cooled semen with both extenders previously described. Seventeen semen samples of stallion 1 and twenty three samples of stallion 2 were collected. Following semen collection, the semen was diluted with two extenders used in Experiment 1, and adjusted to an insemination dose of 500 million viable sperm in a final volume of 15 mL per dose. Semen was packaged in Equitainer® and cooled down to 5° C and storage for at least 24 hours. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility and vigor of the diluted and cooled semen; the sperm morphology of fresh semen and cooled with both extenders. Thirty one estrous cycles of 26 mares were used in the first period and 43 cycles of 28 mares in the second period. After detection 30 mm follicle size, the mares were randomly assigned into two groups: group A (mares inseminated with semen cooled with Kenney extender) and group B (mares inseminated with semen cooled with dilutive Foote). The stallions semen were used randomly among mares. The inseminations were done after a period of at least 24 hours of storage at 5° C. Semen was deposited in the body uterus, after the detection of a 30-40 mm follicle detection throughout ovulation. The inseminations were performed only on fixed days (Tuesday, Thursday and Saturday). The pregnancy diagnosis was performed by transrectal ultrasonography. As results, Kenney extender had higher progressive motility and spermatic vigor maintance after cooling compared to T2 extender. The pregnancy rate was higher from treatment A than treatment B (p<0,05), 55,26% (21/38) and 30,56% (11/36), respectively. With this data, it is possible to conclude that: the integrity and functionality of sperm cell plasma membrane evaluation tests are considered ancillary assessments in predicting the reproductive potential of stallions, but are not yet conclusive. The glycine-egg yolk based extender was not effective in preserving the seminal characteristics, and its fertility rate was not acceptable. The milk based extender proposed by Kenney et al. (1975) is still an excellent option for use in programs of AI with cooled semen from Mangalarga Marchador breed. / Objetivou-se neste estudo avaliar a eficácia de dois diluidores um à base de licina-gema de ovo e outro à base de leite em pó resfriado a 5 °C por 24 horas na preservação do sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador, determinada por meio de testes in vitro e avaliação da fertilidade in vivo. No experimento 1, foram utilizados cinco ejaculados de três garanhões da raça Mangalarga Marchador, que foram divididos em dois tratamentos: Kenney - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor à base de leite (Kenney et al., 1975); Foote - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor de glicina-gema de ovo (Foote, 2002). Amostras de 12 mL de sêmen foram diluídas numa concentração de 30 x 106 espermatozoides viáveis/mL e, depois, armazenadas em Equitainer® por 24 horas. A qualidade seminal foi avaliada após diluição e resfriamento do sêmen. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva; vigor espermático; morfologia espermática; integridade da membrana plasmática pelo teste supravital e da epifluorescência utilizando os corantes diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídeo; funcionalidade da membrana plasmática pelo teste hiposmótico; e motilidade progressiva e vigor espermáticos durante o teste de termorresistência por 90 minutos. O vigor espermático do sêmen diluído com Kenney foi superior (P<0,05) ao do Foote na avaliação do sêmen fresco diluído. Não houve diferença estatística entre as demais características seminais avaliadas no sêmen fresco diluído. No sêmen resfriado, o Kenney propiciou a manutenção da motilidade e do vigor espermático após as 24 horas de armazenamento, porém o Foote apresentou maiores valores médios (P<0,05) para porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico e viáveis pelo teste de epifluorescência. Os valores médios da motilidade progressiva e do vigor espermático durante os testes de termorresistência do sêmen resfriado foram inferiores ao preconizado pelo CBRA (1998) aos 30 minutos com o diluidor de Foote e aos 60 minutos com o dilluidor Kenney. No experimento 2, avaliou-se a fertilidade do sêmen resfriado com ambos os diluidores. Foram realizadas 17 coletas do sêmen do garanhão 1 e 23 coletas do garanhão 2. Após as coletas, o sêmen foi diluído com os diluidores utilizados no experimento 1 e ajustado para uma dose inseminante de 500 milhões de espermatozoides viáveis num volume final de 15 mL por dose. O sêmen foi acondicionado no Equitainer®, resfriado até 5 oC e armazenado por no mínimo 24 horas. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva e vigor espermático do sêmen diluído e resfriado; e morfologia espermática do sêmen fresco e resfriado com ambos os diluidores. Foram utilizados 31 ciclos estrais de 26 éguas no primeiro período experimental e 43 ciclos de 28 éguas no segundo período experimental. Após a detecção de folículo de 30 mm, as éguas foram distribuídas ao acaso em dois grupos: grupo A (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Kenney) e grupo B (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Foote). O sêmen dos garanhões foi utilizado aleatoriamente entre as éguas. As inseminações foram realizadas depois de no mínimo 24 horas de armazenamento do sêmen. O sêmen foi depositado no corpo do útero, a partir da detecção de um folículo de 30-40 mm até a observação da ovulação. As inseminações foram feitas somente em dias predeterminados (terça-feira, quinta-feira e sábado) e o diagnóstico de gestação foi realizado por meio de ultrassonografia transretal. O diluidor de Kenney se mostrou superior ao Foote na manutenção da motilidade progressiva e do vigor espermático após o período de resfriamento. A taxa de gestação do grupo A, 55,26% (21/38), foi maior (P<0,05) que a do grupo B, 30,56% (11/36). Os testes de avaliação da integridade e funcionalidade da membrana plasmática da célula espermática auxiliam na predição do potencial fecundante do garanhão, porém ainda não são conclusivos. O diluidor seminal à base de glicina-gema de ovo (Foote, 2002) não é eficaz em preservar as características seminais e não possibilita obter índice de fertilidade aceitável. O diluidor proposto por Kenney et al. (1975) ainda é uma ótima opção para inseminação artificial com sêmen resfriado de garanhões da raça Mangalarga Marchador.

A necessidade de tratamentos mais eficazes e menos invasivos para os pacientes, em adição à capacidade de diferenciação celular da medula óssea sugere que o transplante de células mononucleares totais poderia ser uma das melhores formas de tratamento para as diversas patologias existentes. Entretanto, vários fatores implicam sobre a viabilidade das células da medula óssea dos quais destacamos a ausência de padronização de protocolo de criopreservação que permita a manutenção da viabilidade celular, sendo altamente necessário o desenvolvimento de estudos nesta área. Deste modo, neste estudo, após a anestesia de um grupo de animais foi realizada punção da medula óssea, separação das células mononucleares e avaliação da viabilidade. Foram testados oito meios diferentes para criopreservação das células. O meio de congelamento A é composto por 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Dulbecco´s Modified Eagle´s Médium (DMEM) e 40% de Plasma Autólogo, o meio de congelamento B contém 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Roswell Park Memorial Institute (RPMI) e 40% de Plasma Autólogo, o meio de congelamento C tem em sua composição 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% soro fetal bovino (SFB) e 40% plasma autólogo, o meio de congelamento D é composto de 20% dimetilsulfóxido (DMSO) e 80% de plasma autólogo, o meio E constitui-se de 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) e 47,5% de plasma autólogo, o meio F contém 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) e 47,5% de plasma autólogo, o meio G contém 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de soro fetal bovino (SFB) e 47,5% de plasma autólogo e o meio H constitui-se de 5% dimetilsulfóxido (DMSO) e 95% de plasma autólogo. Após as análises realizadas pela técnica de citometria de fluxo, o meio mais eficiente na criopreservação das células mononucleares de suínos foi o protocolo D por possuir maior concentração de plasma autólogo e crioprotetor. / The necessity of the most efficient and less invasive treatments for the patients, in addition to the capacity of cellular differentiation of the bone marrow suggests that the transplant of mononuclear total cells might be one of the best treatment for several pathologies. Meantime, several factors influence on the viability of the cells of the bone marrow as the absence of standardization of criopreservação protocol which could allow the maintenance of the cellular viability, being an important issue of investigation. In this study, after the anaesthesia of a group of animals, samples of bone marrow were collected, following the separation of the mononuclear cells and evaluation of the viability. Eight different protocols were tested for cells criopreservation. The protocol A by 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) and 40% autologus plasma, B protocol conatained 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Roswell Park Memorial Institute (RPMI) and 40% autologus plasma, the C protocol was composed 20 % dimetilsulfóxido (DMSO), 40% bovine fetal serum (SFB) e 40% autologus plasma, D protocol was made using 20% dimetilsulfóxido (DMSO) and 80% autologus plasma, E protocol was constituted by 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) and 47,5% autólogo plasma, the F contains 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) and 47,5% autologo plasma, the protocol G was compoed by 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de bovine feta serum (SFB) and 47,5% autologus plasma and the H protocol was 5% dimetilsulfóxido (DMSO) and 95% autologus plasma. After flux citometer analyses, the most efficient protocol in criopreservation of the mononuclear cells of pigs was the protocol D which was composed the by the most amount of autologus plasma and crioprotectant.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-17Bitstream added on 2014-06-13T19:24:36Z : No. of bitstreams: 1 sousa_db_dr_botfmvz.pdf: 488884 bytes, checksum: cee00747e11c814a32c18443659e8194 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Várias pesquisas foram desenvolvidas visando a melhoria da congelabilidade do sêmen ovino. Contudo, ainda não houve progressos significativos na fertilidade do sêmen congelado após a inseminação artificial cervical. Diversos sistemas de análise computadorizada do movimento espermático (CASA) têm sido propostos e aplicados na tentativa de quantificar características específicas do movimento espermático, podendo ainda determinar a presença e a cinética das subpopulações de espermatozóides. Muitos testes para avaliar a função espermática foram desenvolvidos, permitindo analisar simultaneamente diferentes aspectos da função espermática. Análise da função mitocondrial oferece uma maneira de acessar a motilidade espermática. Foram objetivos otimizar o sistema CASA na avaliação do sêmen congelado; determinar parâmetros da cinética espermática que expressem analogia com as características da avaliação das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial (IP, FITC-PSA e JC-1; MITO; R-123) e utilizar conjuntamente os parâmetros fornecidos pelo sistema CASA e pelas sondas fluorescentes para agrupar as amostras de maneira qualitativa. Vinte e seis amostras de sêmen congelado de diferentes carneiros foram estudadas pelo CASA obtendo-se para os parâmetros VCL, VAP, VSL, ALH, BCF, LIN, STR, ELONG dados médios e individuais para cada espermatozóide e por sondas fluorescentes para a avaliação simultânea da integridade de membrana plasmática, reação acrossomal e potencial de membrana mitocondrial. Estatisticamente aplicou-se a análise exploratória de técnicas multivariadas obtendo-se três fatoriais sendo o primeiro fator F1 positivo e alto para as variáveis VAP, VSL, STR e LIN, que é interpretado com um fator relacionado à progressividade. Para o segundo fator F2, associam as variáveis VCL, ALH e MT, que representam um fator de deslocamento... / Many researches were developed to improve the ram semen criopreservation. However, no significant advances in the fertility rates with the frozen semen were observed with cervical artificial insemination. Several computer-assisted motility assessments (CASA) systems have been considered and applied in the attempt to quantify specific characteristics of the sperm motion and still them being able to determine the spermatozoa presence and subpopulations kinematics. A large number of sperm functions evaluation had been developed, making it possible to analyze different aspects of the sperm function simultaneously. Analysis of the mitochondrial function offers a way to have access the sperm motility. The aim of this study was to optimize the CASA system in the evaluation of the ram frozen semen; determine parameters of the sperm kinematics that express analogy with the characteristics of the evaluation of plasmatic, acrossomal and mitochondrial membranes (PI, FITC-PSA and JC-1; MITO; R-123) and use CASA parameters together with the fluorescent probes to group samples in a qualitative way. Twenty and six frozen semen samples of different rams were evaluated by CASA system for mean and individual sperm motion parameters VCL, VAP, VSL, ALH, BCF, LIN, STR, ELONG and for fluorescent probes leads for the simultaneous evaluation of the integrity of plasmatic, acrossomal membranes and membrane mitochondrial potential. The statistic applied was multivariate analysis getting to three different factorials. The first factor was positive and high (F1 factor) for variables VAP, VSL, STR and LIN, that were interpreted with the forward displacement. For F2 factor, there were associate variables VCL, ALH and MT that represent the displacement. The F3 factor, whose interpretation has to do with available energy, was associated with variables BCF, MITO and ELONG...(Complete abstract, click electronic address below)