Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-03-28T15:53:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Elisangela_Madeira.pdf: 846007 bytes, checksum: 5c12f30cc3a07b37c0ca5584d498bd95 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-03-28T21:00:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Elisangela_Madeira.pdf: 846007 bytes, checksum: 5c12f30cc3a07b37c0ca5584d498bd95 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T21:00:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Elisangela_Madeira.pdf: 846007 bytes, checksum: 5c12f30cc3a07b37c0ca5584d498bd95 (MD5) Previous issue date: 2015-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Os protocolos de vitrificação para produção in vitro de embriões (PIV) bovinos ainda são limitados. Portanto o objetivo desta tese foi identificar um novo protocolo para vitrificação de embriões bovinos PIV. No primeiro estudo (E1), foram determinadas as características de toxicidade do etilenoglicolmonometiléter (EGMME) na solução de vitrificação, com uma pré-exposição dos embriões em soluções contendo EGMME. No primeiro experimento do E1, as taxas de eclosão observadas para embriões expostos a soluções contendo EGMME em concentrações de 5, 10 e 15% durante 5 min a 39°C (30,5, 33,9 e 26,3%, respectivamente) foram semelhantes (P>0,05) à taxa observada para embriões não expostos ao EGMME (46,9%). No segundo experimento do E1, as taxas de eclosão de embriões não expostos a crioprotetores (33,4%) ou expostos ao EGMME a 10 ou 15% (32,9 e 25,1%, respectivamente) foram superiores (P<0,05) à observada para embriões expostos ao etilenoglicol (EG) a 20%,um crioprotetor comumente usado (17.0%). A expressão dos genes Bcl-2 (inibidor de apoptose), Bax (promotor de apoptose) e CCND2 (marcador de proliferação celular) não diferiu entre os grupos (P>0,05). No segundo estudo (E2), o EGMME foi testado em protocolos de vitrificação, em associação com o dimetilsulfóxido (DMSO), com avaliação das taxas de eclosão, da expressão gênica e da implantação dos embriões PIV em fêmeas bovinas previamente sincronizadas. No primeiro experimento do E2, embriões não expostos ao EGMME (controle) foram comparados com cinco tratamentos com exposição a soluções contendo: EG a 20% e DMSO a 20%; EGMME a 20% e DMSO a 15%; EGMME a 15% e DMSO a 15%; EGMME a 15% e DMSO a 20%; e EGMME a 10% DMSO a 20%. As taxas de eclosão não diferiram entre os tratamentos (P>0,05). No segundo experimento do E2, a taxa de eclosão de embriões não vitrificados (63.8%) foi superior (P<0,05) às taxas observadas para embriões vitrificados em soluções contendo EG a 20% e DMSO a 20% (T2) e EGMME a 20% e DMSO 20% (T3) (37.6% e 22.0% respectivamente). As taxas observadas em T2 e T3 foram similares (P>0,05), porém maiores que a taxa de 10.3%observada em T4 (EGMME a 15% e DMSO a 20%). A expressão dos genes BAX (promotor de apoptose) e CCND2 (marcador de proliferação celular) foram semelhantes para todos os grupos (P>0,05), mas a expressão do gene Bcl-2 (inibidor de apoptose) foi inferior no T4 (P<0,05), em comparação com os demais tratamentos. Trinta dias após a implantação dos embriões PIV em T2 e T3, as taxas de prenhez foram de 26,6% para ambos os grupos. Não foram implantados embriões PIV no T4. Esta tese Concluiu se que o EGMME pode ser usado como crioprotetor em protocolos de vitrificação de embriões bovinos PIV, pois não apresentou toxicidade nas concentrações avaliadas. / Vitrification protocols for in vitroproduction (IVP) of bovine embryos are limited. The objective of this thesis was to identify a novel protocols for vitrification of IVP bovine embryos. In the first study (S1), the toxicity characteristics of the Ethylene glycol monomethyl ether (EGMME) were determined after pre-exposure of embryos to solutions containing that cryoprotectant. In the first experiment of S1, hatching rates for embryos exposed to solutions including 5%, 10%and 15% EGMME for 5 min at 39 °C (30.5%, 33.9% and 26.3% respectively) were similar (P<0.05) to those for unexposed embryos (46.9%). In the second experiment of S1, hatching rates for unexposed embryos (33.4%) and for embryos exposed to 10% EGMME (32.9%)and 15% EGMME (25.1%) were greater (P <0.05) than the rate for embryos exposed to 20% ethylene glycol (EG), a commonly used cryoprotectant (17.0%).The expression of the Bcl-2 (inhibitor of apoptosis), Bax (apoptosis promoter) and CCND2 (cell proliferation marker) genes did not differ amongthe groups (P> 0.05). In the second study (S2), EGMME was tested in vitrificationprotocolos, associated with Dimethyl sulfoxide (DMSO), with evaluation of hatching rates, gene expression and implantation vitrified of embryos in previously synchronized cows. In the first experiment of S2, embryos unexposed to EGMME were compared against five treatments with exposure to solutions containing: 20%EG and 20%DMSO; 20% EGMME and 15%DMSO; 15% EGMME and 15% DMSO; 15% EGMME and 20% DMSO; and 10%EGMME and 20% DMSO. Hatching rates were similar across all those treatments (P>0.05). In the second experiment of S2, the hatching rate of non-vitrified embryos (63.8%) was greater (P<0.05) than the rates observed for vitrified embryos conditioned in solutions containing 20% EG and 20% DMSO (T2)and 20% EGMME and 20% DMSO (T3) (37.6% and 22.0%, respectively). The rates of T2 and T3 were similar (P>0.05), but were greater than the 10.3% rate observed for T4 (15% EGMME and 20% DMSO). The expression of the BAX (apoptosis promoter) and CCND2 (cell proliferation marker) genes were similar across treatments (P>0.05). but the Bcl-2 gene (inhibitor of apoptosis) had lower expression in T4 than in the other treatments (P<0.05). Thirty days after implantation of embryos from T2 and T3, pregnancy rates of previously synchronized cows were equal to 26.6% for both groups (no embryos from T4 were used). This thesis concluded thatEGMME can be used as cryoprotectant in vitrificationprotocolos for IVP of cattle embryos because no toxicity was observed at the tested concentrations.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-02-24T13:21:02Z No. of bitstreams: 1 2015 - Tiago Viana da Costa.pdf: 2600428 bytes, checksum: 39f199c4685657caa0a1ce7d024f3332 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-24T13:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Tiago Viana da Costa.pdf: 2600428 bytes, checksum: 39f199c4685657caa0a1ce7d024f3332 (MD5) Previous issue date: 2015-07-08 / Funda??o de Amparo a Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Presente en todo continente americano, en los r?os de agua dulce y reproduci?ndose cerca de las desembocaduras, en virtud de su dependencia de la salinidad para la reproducci?n, el langostino Macrobrachium acanthurus es consumido por poblaciones tradicionales, que mediante pr?cticas extractivas lo capturan en sus diferentes fases del desarrollo. Este langostino presenta dimorfismo sexual, siendo los machos mayores que las hembras. En ?stos, los espermatozoides son producidos en los test?culos y reciben sustancias nutricionales a lo largo del vaso deferente donde son empaquetados en un espermat?foro que puede ser extra?do directamente de la ampolla terminal. El proceso de criopreservaci?n de especies nativas, tanto para proteger el patrimonio gen?tico o estimular una mayor producci?n animal mediante los procesos de inseminaci?n artificial, ha sido utilizado en varios organismos acu?ticos. En camarones, esta biotecnolog?a no ha sido empleada con suceso hasta ahora, aunque la mayor?a ha sido empleada a especies marinas. De esta forma, este trabajo tuvo como objetivo iniciar los estudios en esta especie nativa y diferente de otras investigaciones, no desarrollar un protocolo de congelamiento, sino viabilizar pr?cticas para que en el futuro se logre el suceso obtenido en otros organismos de cultivo. Para esto, se realizaron tres estudios, donde en el primero se identific? la mejor voltaje (6,0 Voltios) que permiti? la extracci?n del espermat?foro sin causar da?os ni al semen y ni a los animales, as? como la talla (18,0 mm de largo del caparaz?n) y peso (5,0 g peso vivo) con que estos animales podr?an contribuir con producci?n esperm?tica m?xima. El segundo estudio se realiz? para obtener una dieta que mejorase la producci?n de espermatozoides, sin comprometer su calidad para la criopreservaci?n. De las dietas probadas, una mezcla entre alimento fresco, compuesto de m?sculo de pescado y calamar, y un alimento seco, con un total de 30% de prote?na cruda, fue el recomendado, justificado por el bajo impacto proporcionado en la constituci?n del espermat?foro; sin embargo se necesitan m?s investigaciones en esto aspecto. El tercero experimento fue dividido en tres partes, habi?ndose realizado una prueba de toxicidad, donde el metanol 10% y el glicerol 10 y 20% con un tiempo de equilibrio de 10 minutos se presentaron como los menos t?xicos para el material seminal, siendo utilizados en cuatro pruebas de congelamiento; dos pruebas fueron hechas en un equipo comercial (automatizado) y otras dos con un m?todo convencional de congelamiento. El mejor resultado (21,83% de supervivencia) fue obtenido con el m?todo convencional, con glicerol 10%. En la tercera parte se realiz? una prueba de supervivencia esperm?tica con el uso de agua destilada por 10 d?as, siendo el material refrigerado a 5?C. Los resultados revelaron que los espermatozoides se mantienen viables hasta tres d?as, pudiendo utilizarse para la fecundaci?n. / Macrobrachium acanthurus ocorre em todo continente americano, ocupa rios de ?gua doce e se reproduz pr?ximo ? foz, em virtude da depend?ncia da salinidade para reprodu??o. ? uma esp?cie apreciada pelas popula??es tradicionais, que atrav?s de pr?ticas extrativistas o capturam em suas diversas fases do desenvolvimento. Este camar?o apresenta dimorfismo sexual, sendo os machos geralmente maiores que as f?meas. Os espermatozoides desta esp?cie s?o produzidos nos test?culos e recebem subst?ncias nutritivas ao longo do vaso deferente, at? serem empacotados em um espermat?foro, que pode ser extra?do diretamente da ampola terminal. O processo de criopreserva??o de esp?cies nativas, seja para resguardar o patrim?nio gen?tico ou induzir a uma maior produ??o animal pelo processo de insemina??o artificial, t?m sido utilizado em diversos organismos aqu?ticos. Em camar?es, no entanto, esta biotecnologia n?o tem sido empregada com sucesso, sendo a maioria delas aplicadas a esp?cies marinhas. Desta forma, este trabalho teve como objetivo iniciar os estudos com esta esp?cie nativa e ao contr?rio de outras pesquisas, n?o desenvolver um protocolo de congelamento, mas viabilizar pr?ticas para que se alcancem num futuro o sucesso obtido em outros organismos de cultivo. Para tanto foram desenvolvidos tr?s estudos, sendo o primeiro a identifica??o da melhor voltagem (6,0 Volts), que possibilitou a extra??o do espermat?foro, sem causar danos ao material seminal e ao animal, bem como o tamanho (18,0 mm de comprimento de cefalot?rax) e peso (5,0 g de peso vivo) para contribui??o m?xima de produ??o esperm?tica. O segundo estudo foi ? determina??o de uma dieta, que estimulasse maior produ??o esperm?tica, sem comprometer a qualidade do espermat?foro para a criopreserva??o. Para as dietas testadas, um mix entre o alimento fresco, composto por m?sculo de pescado e lula, e um alimento seco, totalizando 30% de prote?na bruta, foi o recomendado, justificado pelo baixo impacto proporcionado na constitui??o do espermat?foro, entretanto necessitando de mais pesquisas futuras. O terceiro experimento foi dividido em tr?s partes, sendo realizado um teste de toxicidade, onde o metanol 10% e o glicerol 10 e 20%, em um tempo de equil?brio de 10 minutos apresentaram-se como os menos t?xicos ao material seminal. Na segunda parte foram utilizados quatro curvas de congelamento; duas foram realizadas com equipamento comercial (automatizado) e outras duas em sistema convencional de congelamento, obtendo-se o melhor resultado (21,83% de sobreviv?ncia) no sistema convencional, com o uso de glicerol 10%. Em todos os dois sistemas houve 100% de mortalidade, quando o metanol 10% foi utilizado como crioprotetor. A terceira parte foi composta de um simples teste de sobreviv?ncia esperm?tica em ?gua destilada por 10 dias, estando o material armazenado em refrigerador a 5?C. Os resultados apontaram que por at? tr?s dias os espermatozoides se mant?m vi?veis e podem ser utilizados num processo de fecunda??o.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_gissele_rambo.pdf: 235931 bytes, checksum: a4e2ca4dc38eed3295f04e66a374e019 (MD5) Previous issue date: 2008-11-24 / The evaluation of the efficiency of semen cryopreservation is critical to make the use of frozen semen feasible in artificial insemination programs in swine. This study compared the efficiency of two non-penetrating cryoprotectants (dimetilacetamide-DMA or glycerol) on parameters of post-thawing semen quality and in vitro fertility with frozen swine semen. The sperm-rich fractions of 28 ejaculates from four boars were frozen with either DMA or glycerol. The efficiency of semen freezing was evaluated through parameters of post-thawing semen quality and in vitro penetration (IVP) of swine oocytes and embryo production. For samples frozen with DMA, sperm motility (38.1%) and membrane integrity (39.9%) were greater (P < 0.05) than those for glycerol (21.9% and 13.0%, respectively). Both the IVP rate and the number of spermatozoa per oocyte were greater (P < 0.05) for DMA (27.9% and 29.2, respectively) than for glycerol (13.6% and 20.7, respectively). The cleavage rate with DMA and glycerol samples (13.0% and 15.6%, respectively) were similar (P > 0.05). The embryo development rate did not differ (P < 0.05) for DMA (15.8%) and glycerol (22.0%). Therefore, when compared to glycerol, DMA was associated with improved post-thawing semen quality and in vitro fertility. / A avaliação da eficiência da criopreservação do sêmen é uma importante ferramenta para viabilizar o uso de sêmen congelado na inseminação artificial em suínos. Um experimento foi realizado a fim de identificar qual crioprotetor interno (dimetilacetamida-DMA ou glicerol) seria associado com melhores indicadores de qualidade seminal pós-descongelamento e fertilidade in vitro com sêmen suíno congelado. A fração espermática rica em espermatozóides de 28 ejaculados provenientes de quatro machos foi congelada com DMA ou glicerol. Para estimar o sucesso da criopreservação do sêmen foram utilizados parâmetros de qualidade seminal pós-descongelamento, teste de penetração in vitro (TPIV) de ovócitos suínos e produção in vitro de embriões. Para amostras congeladas com DMA, a motilidade (38,1%) e a integridade da membrana espermática (39,9%) foram superiores (P < 0,05) às observadas com glicerol (21,9% e 13,0%, respectivamente). A taxa de TPIV e o número de espermatozóides por ovócito também foram superiores (P < 0,05) para a DMA (27,9% e 29,2, respectivamente) do que para o glicerol (13,6% e 20,7, respectivamente). A taxa de clivagem alcançada com a DMA (13,0%) foi similar (P > 0,05) à obtida com glicerol (15,6%). A taxa de desenvolvimento embrionário não diferiu (P > 0,05) entre DMA e glicerol (15,8% e 22,0%, respectivamente). Portanto, considerando o conjunto de todos os testes, em comparação com o glicerol, a DMA foi associada com melhores indicadores de qualidade seminal e fertilidade in vitro.