Orientador: Carol Hollingworth Collins / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-21T08:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_PauloRobertoNogueira_D.pdf: 2958951 bytes, checksum: f467e72e3d59648c165286cecd155d38 (MD5) Previous issue date: 1996 / Doutorado

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T10:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bento_AntonioCarlos_D.pdf: 5486208 bytes, checksum: 86e0d68eb8dc5a8d1275f317cfca657e (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Nesta tese, caracterizamos bioquímica e farmacologicamente três polipeptídeos do veneno da aranha Phoneutria nigriventer. Após o fracionamento parcial do veneno através da filtração em gel de Sephadex G-1 O e cromatografia de troca iônica, obtivemos oito frações com atividade espasmogênica em tecidos arteriais e venosos de coelho e uma fração com atividade edematogênica em pele de coelho. Duas das frações com atividade sobre o músculo liso vascular foram selecionadas para purificação em HPLC e caracterização bioquímica através de eletroforese, determinação da composição de aminoácidos e seqüenciamento da região N-terminal dos polipeptídeos, denominados PNV1 e PNV2. A fração com atividade edematogênica em pele de coelho foi também purificada e o polipeptídeo responsável por esta atividade caracterizado bioquimicamente e denominado PNV3. A atividade espasmogênica do PNV1, PNV2 e das frações provenientes das várias etapas de purificação, foi testada num sistema de cascata. Os coelhos anestesiados, foram exsanguinados e os vasos sanguíneos (artéria pulmonar e veias cava e mesentérica) foram removidos, cortados em espiral e montados para registro isotônico das contrações. O PNV1, PNV2 e as frações obtidas após purificação por HPLC foram liofilizadas, ressuspendidas em H2O deionizada e injetadas na forma de "bolus" sobre os tecidos. A atividade edematogênica do PNV3 e das frações provenientes das várias etapas de purificação, foi testada em coelhos anestesiados e injetados com uma mistura de azul de Evans (0,5 ml/kg, 2,5%) e 1251-albumina (1,5 µCi/kg). As substâncias testadas foram injetadas intradermicamente no dorso dos animais. Após 30 minutos, foi coletado o sangue e o animal sacrificado. A pele dorsal foi removida e os sítios cortados para contagem de radioatividade acumulada. O PNV1, PNV2 e PNV3 possuem massa molecular de 13,9 kDa, 12,1 kDa e 14,5 kDa, com 125, 102 e 132 resíduos, respectivamente. A seqüência N-terminal para os três polipeptídeos foi a seguinte: EAFPGQST, LAKRADICQPGKTSQRACET e AVFAIQDQPC, respectivamente. A purificação e caracterização bioquímica destes peptídeos se constitui em ferramentas úteis não apenas para uma melhor compreensão dos mecanismos fisiopatológicos decorrentes do envenenamento humano por Phoneutria nigriventer mas também para a compreensão do papel do sistema calicreína tissular-cininogênio cinina, tendo em vista que nossos resultado sugerem fortemente que o PNV3 é capaz de ativar este sistema / Abstract: This thesis describes the biochemical and pharmacological characterization of three polypeptides from the venom of the spider Phoneutria nigriventer. The fractionation of Phoneutria nigriventer venom by gel filtration on Sephadex G-10-120 provided eight peaks (SI to S-VIII) of which only the first (S-I) was investigated further. lonexchange chromatography of S-I on CM-cellulose-52 yielded 16 fractions (C-I to C-XVI). Of these, Fractions C-VII + VIII and C-X +XI were further purified by reverse phase HPLC to yield two polypeptides (PNV1 and PNV2) with contractile activity. Similar purification of Fraction C-XIII by HPLC resulted in the isolation of the polypeptide with oedematogenic activity (PNV3). Ali three proteins were single chain polypeptides (as shown by SDS-PAGE under reducing conditions) with global amino acid compositions (excluding Trp) of 125, 102 and 132 residues corresponding to molecular weights of 13,900, 12,100 and 14,500 for PNV1, PNV2 and PNV3, respectively. The N-terminal amino acid sequencesof PNV1, PNV2 and PNV3 were: EAFPGQST, LAKRADICQPGKTSQRACET, and AVFAIQDQPC. The contractile activity of PNV1 and PNV2 was examined using rabbit arterial and venous vessels. The vessels were mounted in a cascade system and perfused with warm (37°C) and oxygenated (95% O2 + 5% CO2 Krebs' solution. Since the spasmogenic effect of whole Phoneutria nigriventer venom in rabbit vascular smooth muscle is not affected by tetrodotoxin, it is unlikely that sodium channel activation plays a role in these tissues, as it does in both rat phrenic-diaphragm muscle-nerve preparation and guinea-pig isolated atria. Furthermore, the finding that the a-adrenoceptor antagonist phenoxybenzamine does not affect PNV-induced contractions excludes the possibility that Phoneutria nígríventer venom induces endogenous noradrenaline release from autonomic nerve endings present in the vascular walls, as occurs in guinea pig auricles. Phoneutría envenomation is mainly characterized by severe local pain, but it may be accompanied by vascular disturbances such as lung oedema and priapism. Whether these peptides with vascular smooth muscle spasmogenic activity are responsible for the mentioned permeability alterations, it remains to be further investigated. The oedema formation induced by PNV3 was investigated in rabbit skin as the local accumulation of 1251-human serum albumin. Our results showed that PNV3 significantly increased the vascular permeability in the rabbit skin. The increased microvascular permeability induced by whole Phoneutría nígríventer venom in rabbit skin involves local kinin synthesis in response to the activation of tissue (but not plasma) kallikrein-kininogen-kinin system. The biochemical identification of the peptide responsible for this activity in Phoneutría venom might provide a useful tool to further understand the role of tissue kallikrein-kinin system / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Delia B. Rodriguez-Amaya / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T10:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Matsubara_Simara_M.pdf: 13774207 bytes, checksum: 354d03e56282f07c6a4f653b8eca780e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Os teores de miricetina, quercetina e kaempferol foram determinados em uma marca de ban-chá, duas de chá verde e quatro de chá preto. Analisou-se três lotes para cada marca em duplicata por cromatografia líquida de alta eficiência. Quercetina (2,5 - 3,4 mg/g de folha) predominou em todas as amostras, seguida por kaempferol (1,0 - 2,0 mg/g de folha), com exceção de uma amostra na qual kaempferol e miricetina tiveram teores iguais. Houve variação entre os tipos de chás e mesmo entre marcas do mesmo tipo. Miricetina (traços - 1,9 mg/g de folha) foi o flavonol que mais variou e que esteve em menor nível nos chás pretos. Amostras de chás muito consumidas no Brasil também foram investigadas quanto à presença e teor destes flavonóis. Em chás de frutas (maçã e morango) e de ervas (erva doce, camomila, erva cidreira, hortelã, boldo, mate e erva mate), não foi detectada miricetina, enquanto que quercetina foi encontrada em quatro chás (camomila, boldo, morango e erva mate) e kaempferol, em dois chás (boldo e erva-mate), em concentrações de 0,4 a 2,5 e 0,4 a 2,6 mg/g de folha, respectivamente. Conclui-se que estes chás são fontes de flavonóis na dieta brasileira, embora com teores menores que em chás verde e preto. Palavras-chave: chás, flavonóis, miricetina, quercetina, kaempferol / Abstract: Not informed / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Heloisa Mascia Cecchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T16:27:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mello_MarcioAlvesde_M.pdf: 1947530 bytes, checksum: c9dfd7339c59d4daa4faebbb428299ca (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Os métodos de cromatografia líquida empregados em estudos anteriores para a determinação de aspartame e seus produtos de decomposição foram avaliados para utilização em análises de refrigerantes nacionais. O método aqui otimizado permitiu a determinação de aspartame e seus principais produtos de decomposição, aspartilfenilalanina, dicetopiperazina e fenilalanina, através de uma única corrida cromatográfica, utilizando eluição por gradiente. As amostras (sabores cola, guaraná e limão) foram desgaseificadas e filtradas em filtros de celulose de 0,45 µm antes da análise, enquanto que as amostras sabores laranja foram centrifugadas por 15 minutos a 10 000 g e filtradas antes da análise. A separação foi realizada em coluna de fase reversa C18 SpherisorbTM ODS-2 e fase móvel composta por KH2PO4 0,0125 mol L-1 (pH 3,50): acetonitrila (95:5, v/v). A concentração de acetonitrila foi aumentada linearmente até 25% aos 40 minutos de corrida cromatográfica, com uma vazão de 0,80 mL min-1. A detecção foi feita por detector por arranjo de diodos a 210 nm. Foram necessários 20 minutos de condicionamento da coluna com a fase móvel inicial antes da próxima injeção. A recuperação variou de 99,0 a 100,0%. Os coeficientes de variação foram de 0,13% para aspartame, de 0,53% para dicetopiperazina, de 0,17% para fenilalanina e, de 0,85% para aspartilfenilalanina. O limite de detecção foi de 0,04 mg 100 mL-1 para o aspartame e de 0,02 mg 100 mL-1 para os produtos de decomposição. O limite de quantificação foi de 0,08 mg 100 mL-1 para o aspartame, e de 0,04 mg 100 mL-1 para os produtos de decomposição. Todas as marcas de refrigerantes analisadas apresentaram níveis de decomposição do aspartame que variaram de 22,22 a 51,75% das quantidades de aspartame apresentadas nos rótulos. Os níveis de dicetopiperazina variaram de 0,55 a 6,70mg 100 mL-1, representando 4,57 a 20,91% da quantidade de aspartame. Os níveis de aspartilfenilalanina variaram de 0,95 a 4,74 mg 100 mL-1, representando 7,93 a 21,85% da quantidade de aspartame. Os níveis de fenilalanina foram baixos em todas as amostras analisadas, variando de 0,13 a 0,51 mg 100 mL-1, representando 0,60 a 2,54% da quantidade de aspartame. A técnica é exata, precisa, sensível e é capaz de separar outros edulcorantes (acesulfame-K e sacarina), e também a cafeína em refrigerantes, numa mesma corrida cromatográfica sem interferir com o aspartame e seus produtos de decomposição. O método é conseqüentemente adequado para controle de qualidade ou monitoramento de refrigerantes / Abstract: Liquid chromatographic methods for the determination of aspartame and its decomposition products in soft drinks were evaluated, to apply in national soft drinks analysis. The method here defined was able to determine aspartame and its decomposition products, dicetopiperazine, aspartilphenylalanine and phenylalanine, with only one chromatographic injection, using gradient elution. The samples (cola, guaraná and lemon) were homogenized, degassed and filtered in filters of cellulose of 0.45 µm, before the injection in the chromatograph. The samples of orange soft drinks were centrifuged at 10,000 g for 15 min before analysis using a reversed phase C18 SpherisorbTM ODS-2 column, and a mobile phase of 0.0125 mol L-1 KH2PO4 buffer (pH=3.50): acetonitrile (95:5, v/v). The acetonitrile concentration was linearly increased up to a concentration of 25% in 40 min of chromatographic run, with flow rate of 0.80 mL min-1. Detection was effected using a diode array detector at 210 nm. Twenty minutes were necessary to condition the column to the initial mobile phase, before the next injection. Recovery using this method was between 99.0 and 100.00%. The variability coefficients for repeatability were 0.13% for aspartame, 0.53% for dicetopiperazine, 0.17% for phenylalanine and 0.85% for aspartilphenylalanine. The minimum detection level was 0.04 mg 100 mL-1 for aspartame and 0.02 mg 100 mL-1 for the decomposition products. The minimum quantification level was 0.08 mg 100 mL-1 for aspartame and 0.04 mg 100 mL-1 for the decomposition products. The aspartame decomposition level found in cola A, cola B, orange A, orange B, guaraná and lemon soft drinks, had been 22.22%, 34.96%, 41.46%, 51.74%, 36.03% e 37.54%, after 66, 44, 64, 148, 37 e 53 days of manufacture, respectively. The dicetopiperazine levels found were from 0.55 to 6.70 mg 100 mL-1, representing from 4.57 to 20.91% of the aspartame added to the soft drinks. Aspartilphenylalanine levels were from 0.95 to 4.74 mg 100 mL-1, representing from 7.93 to 21.85% of the aspartame added. Phenylalanine levels were low in all the samples analyzed, being between 0.13 and 0.51 mg 100 mL-l, representing from 0.60 to 2.54% ofthe added aspartame. This technique is precise, accurate and sensitive; it enables to separate other intense sweeteners (acesulfam-K and saccharin), and also caffeine in soft drinks, during the same chromatographic run without interfering with the aspartame and its decomposition products. Thus the method is suitable for the quality control and monitoring of soft drinks / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Cesar Costapinto Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-19T02:22:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_JoaoPauloFernandes_M.pdf: 2071458 bytes, checksum: 4e3166090a9b86f0b92b425b128fb73f (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A enantiosseparação de alguns compostos é um brilhante e interessante tópico de muitas áreas da química analítica, principalmente na farmacêutica e biomédica. Sabe-se que apesar dos enantiômeros apresentarem fórmulas e massa molecular iguais, quando expostos em um ambiente biológico podem mostrar grandes diferenças nas suas atividades biológicas. O Fmoc-POAC (9-fluorenilmetiloxicarbonil -2,2,5,5-tetrametilpirrolidina-N-oxil-3-amino-4- ácido carboxílico) é um marcador paramagnético quiral com grande potencialidade de uso como derivado marcador de estruturas peptídicas com funções no organismo animal. De acordo com a literatura consultada, não há relatos de escalas semipreparativas na separação enantiomérica desse composto, extremamente necessária para testes de clínicos-analíticos. Este estudo teve como objetivo o desenvolvimento de métodos inovadores na separação enantiomérica do Fmoc-POAC e obtenção dos parâmetros necessários para um aumento de escala. O presente trabalho realizou uma avaliação experimental através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para enantiosseparação desse composto, com eluição isocrática e nas colunas quirais de fase estacionária normal e reversa: i) analítica da OD-RH Chiralcel® (150x4,6 mm); ii) Analítica Lux Cellulose-2 da Phenomenex® (250x4,6 mm); iii) Semipreparativa OD da Chiralcel® (150x10 mm); iv) Semipreparativa OD-RH da Chiralcel® (250x21 mm). A partir desses ensaios experimentais, foram estimados os parâmetros cromatográficos da enantiosseparação do marcador molecular Fmoc-POAC nas colunas estudadas, além de parâmetros de transferência de massa e termodinâmicos. Os resultados desse trabalho foram que todas as colunas estudadas apresentaram a possibilidade de separação enantiomérica do Fmoc-POAC através desses métodos relativamente simples comparados aos apresentados na literatura, com destaque para a coluna de fase estacionária normal Lux Cellulose-2 (250x4,6 mm), com resolução de até 18,4. De acordo com resultados obtidos, temos a possibilidade de realizar a separação e recuperação desse composto, lançando-se mão de técnicas cromatográficas de maior rendimento, como sistemas contínuos de separação cromatográfica / Abstract: The enantioseparation of some compounds has interesting application in several areas of analytical chemistry, especially in pharmaceutical and biomedical. It is well known that some compounds with same chemical formulas and molecular mass, when exposed to a biological environment, may show different biological activities. The 9- fluorenilmetiloxicarbonil-2,2,5,5-tetrametilpirrolidina-N-oxil-3-amino-4-carboxylic acid (Fmoc-POAC) is a chiral paramagnetic marker with great potential as a marker for peptide structures with functions in the animal organism. According to the literature, there are no reports of enantiomeric separation of this compound unless in laboratory scale and large scale would be necessary for clinical and analytical testing. This study aimed at the development of innovative methods for the enantiomeric separation of Fmoc-POAC as well as obtaining the necessary parameters for scale up of their purification. The present work carried out an experimental evaluation using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for this compound enantioseparation with isocratic elution and columns with normal and reverse chiral stationary phase: i) Analytical Chiralcel® OD-RH (150x4, 6 mm ), ii) Analytical Lux Cellulose-2 from Phenomenex® (250x4, 6 mm), iii) Semi-preparative Chiralcel OD® (150x10 mm), iv) Semi-preparative Chiralcel OD-RH® (250x21 mm). From these assays, chromatographic parameters were estimated for the enantioseparation of Fmoc-POAC molecular marker beside parameters related to the thermodynamics and mass transfer. The conclusions in this research were that all columns present the possibility of enantiomeric separation of Fmoc-POAC by methods relatively simple compared to those presented in the literature, specially the column with normal stationary phase Lux Cellulose-2 (250x4, 6 mm) with resolution of up to 18.4. The results indicate the possibility of enantioseparation and recovery of these compounds by high yield continuous chromatography techniques / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador : Isabel Cristina Sales Fontes Jardim / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-01T10:24:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Queiroz_SoniaClaudiadoNascimentode_D.pdf: 4599553 bytes, checksum: a452d0da3b94561b07f382cde2fb409c (MD5) Previous issue date: 2001 / Doutorado

Orientadores: Helena Teixeira Godoy, Elizabeth Maria Tala de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T07:20:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramos_KarlaLisboa_M.pdf: 23818894 bytes, checksum: 8c118a161cd54d26e176eafa1b410dfd (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo; No Brasil, programas de alimentação alternativa estimulam o consumo de novas fontes alimentares. Instituições não governamentais adotaram o uso de não convencionais, ou alimentos alternativos, com a finalidade de prevenir e recuperar crianças desnutridas com idade pré-escolar. Entretanto, a falta de metodologias analíticas apropriadas dificulta o conhecimento dos teores de micronutrientes, em especial as vitaminas, em alimentos não convencionais. Com a finalidade de suprir essa carência, este trabalho desenvolveu e validou uma metodologia para determinação simultânea das vitaminas 81e 82 por CLAE. O método desenvolvido foi aplicado a folhosos verde-escuros não convencionais, como beldroega (Portulacca oleracea L.), caruru (Amaranthus sp), serralha (Sonchus oleraceus L.), tanchagem (Plantago tomentosa Lom.) e pó da folha de mandioca (Manihot esculenta). ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: In Brazil, programs of alternative feeding stimulate the consumption of new food sources. Non governmental institutions adopted the use of unconventional foods or alternative foods with the purpose of preventing and recovering malnourished children in preschool age. However, the lack of appropriate analytical methodologies turns difficult the assessment of micronutrients levels, specially vitamins, in unconventional foods. In order to fil! this deficiency, this work developed and validated a methodology for simultaneous determination of vitamins 81 and 82, by HPLC. The developed method was applied to unconventional dark green leaf vegetables, as beldroega (Oleracea Portulacca L.), caruru (Amaranthus sp), serralha (Sonchus oleraceus L), tanchagem (Tomentosa Plantago Lom.) and cassava leaf powder (Manihot esculenta). Vitamins 81 and 82 were extracted with HCI 0.1N followed by enzymatic hydrolysis. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Isabel Cristina Sales Fontes Jardim / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T11:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pozzebon_JoseaneMontagner_D.pdf: 5217535 bytes, checksum: d57ab4a2a89bc7770300abaf8865d91f (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Orientador: Isabel Cristina Sales Fontes Jardim / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:31:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morais_LaisSayuriRibeirode_M.pdf: 2716061 bytes, checksum: f02e9247f86da3e9d9a06d99b69a252b (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientador: Adriana Zerlotti Mercadante / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:25:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rios_AlessandroDeOliveira_D.pdf: 28869816 bytes, checksum: 4f802a792f6d5a177264ffde2331b95c (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos