Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1911.pdf: 1095367 bytes, checksum: 719fee66f02d6939f843c1b2cf2be7d9 (MD5) Previous issue date: 2007-04-13 / Universidade Federal de Sao Carlos / This work reports the investigation of a series of bovine serum albumin (BSA) restricted access media columns (RAM) for on-line egg samples deproteinization. High exclusion percentage of egg s proteins were obtained with the three RAM BSA columns prepared (C8, C18 and phenyl) using only water as eluent. However, an increase of pressure of the chromatographic system was observed at each injection, which made unfeasible the use of these columns for direct injection of the egg samples. To prolong the life-time of the RAM-BSA columns, acetonitrile was used as a protein precipitate agent. This clean-up procedure allowed the repetitive injection of 300 µL of whole egg samples. For the simultaneous quantification of sulfamethoxazole (SMX) and trimethoprim (TMP) in eggs samples, RAM-BSA columns, in different lengths (10 and 5 cm) sizes and different chromatographic conditions were thoroughly evaluated. A bidimensional higher performance liquid chromatography configuration having a RAM C18 BSA column in the first dimension, and a C18 analytical column in the second dimension were used for simultaneous quantification of these antibiotics. The developed method showed good selectivity, accuracy and precision with limits of quantification 80 ng/mL for both compounds. Thus, the validated method is reliable and sensitive for monitoring residues in whole eggs samples. / Neste trabalho foi preparada e avaliada uma série de colunas de acesso restrito (RAM) de albumina sérica bovina (BSA) para a desproteinização on-line de amostras de ovo. As três colunas preparadas (C8, C18 e fenil) mostraram elevada percentagem de exclusão de proteínas do ovo, usando somente água como eluente. No entanto, foi observado aumento da pressão no sistema cromatográfico, a cada injeção, o que tornou inviável a injeção direta das amostras de ovo, nas condições inicialmente avaliadas. Para prolongar a vida útil das colunas RAM-BSA foi necessário a utilização de um agente de precipitação de proteínas, e dentre os agentes avaliados, acetonitrila mostrou-se o solvente mais eficiente, permitindo a injeção repetitiva de volumes de 300µL de amostras de ovo, sem alteração da pressão no sistema cromatográfico. Para o desenvolvimento do método de análise simultânea dos antibióticos sulfametoxazol (SMX) e trimetoprima (TMP) em ovos, no modo multidimensional, foram também avaliadas colunas RAM-BSA de diferentes comprimentos (10 e 5 cm) e em diferentes condições cromatográficas. O sistema, composto por uma coluna RAM C18-BSA, acoplada a uma coluna analítica C18, permitiu o desenvolvimento do método com excelente precisão, exatidão e com adequada sensibilidade. Os limites de quantificação foram de 80 ng/mL, para ambos compostos. Desta forma, o método desenvolvido poderá ser utilizado para o monitoramento de resíduos destes antibióticos em amostras de ovo.

Orientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Paulo Clairmont Feitosa de Lima Gomes / Banca: Carmen Lúcia Cardoso / Resumo: Separações utilizando cromatografia líquida bidimensional têm atraído grande interesse nas últimas décadas devido ao seu elevado potencial no poder de separação para análises de misturas complexas. Apesar do uso de colunas ortogonais e da multiplicação teórica da capacidade de picos quando essa técnica é utilizada, uma questão permanece: "As técnicas bidimensionais são realmente melhores do que as monodimensionais para análises de extratos vegetais?". Esta questão motivou o presente trabalho, que consistiu em comparar o desempenho entre LC e LC×LC, utilizando amostras de folhas de Casearia sylvestris, também conhecida como "guaçatonga", uma árvore amplamente utilizada na medicina popular brasileira por apresentar diversas atividades biológicas. Além disso, devido ao grande volume de resíduos gerados em LC, a substituição de solventes convencionais por etanol (EtOH), um candidato menos tóxico e biodegradável, foi implementada. A parte mais desafiadora de qualquer cromatografia multidimensional é o desenvolvimento do método cromatográfico, pelo grande número de variáveis que devem atuar de forma integrada em uma única análise. Duas estratégias de desenvolvimento foram propostas neste trabalho. A primeira foi dividida em 4 etapas, que consistiram em selecionar o par de colunas mais ortogonal dentre as combinações disponíveis; o desenvolvimento de um método para a 1D utilizando planejamento experimental; seguido do estudo das melhores condições para a 2D (2tc, tempo de modulação ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bidimensional liquid chromatographic separations have attracted intense interest over the past decade based on the potential improvements in resolving power they offer for analysis of complex samples. Despite the use of orthogonal columns and the theoretical multiplication of peak capacity from both dimensions, one question remains: "Are bidimensional techniques superior to monodimensional ones for analysis of vegetal extracts?". This question led to the purpose of the present work, that was to compare the performance between LC and LC×LC, using leaves from Casearia sylvestris, a widely used tree in Brazilian folk medicine by its biological activities. Furthermore, due to the large volume of waste generated by LC, the replacement of conventional solvents by ethanol (EtOH), a less toxic and biodegradable alternative solvent was chosen. The most challenging issue of any multidimensional chromatography is the method development, since the large number of interacting parameters that must work together in a single run. Two strategies for method development were used in this work. The first one was divided into 4 steps: experiments were carried out to select the most orthogonal pair of columns, 1D method development using design of experiments, another design of experiments for 2D conditions was proposed (2tc, modulation time and tre, re-equilibration time after each modulation) and aware of the best conditions for both dimensions, 2D gradient types were evaluated. The second strat... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5332.pdf: 4017045 bytes, checksum: 8d6a03cf052bf8f7092edd1046623850 (MD5) Previous issue date: 2013-04-05 / Universidade Federal de Sao Carlos / This work reports the application of bioanalitycal methods by direct injection sample for the quantification of drugs in breast milk. Columns with stationary phase type RAM-BSA, in conventional scale and microbore, were prepared and evaluated in the exclusion of total protein and human milk oligosaccharides. In the conventional scale, the RAM-BSA C18 column (4.6 mm id) was used in a single-column mode for cleanup and simultaneous quantification of carbamazepine and its major metabolite, employing an analyzer of the type ion trap. Selectivity, extraction efficiency, accuracy and precision were achieved employing 100 μL of the sample, without preparation, with detection limits of 20.0 ng/mL for CBZ and 40.0 ng/mL for CBZE. The developed method was validated and applied to analyze breast milk samples from one nursing mother. CBZ and CBZE were quantified in the concentrations of 2.26 μg/mL and 1.54 μg/mL, respectively. To our knowledge, this is the first report on the simultaneous determination of CBZ and its active metabolite by direct injection of human milk serum. The method for quantification of fluoxetine and norfluoxetine by direct injection of nature human milk employing a liquid chromatography tandem mass spectrometry system was performed in a multidimensional system with total analysis time of 12 min. The chromatographic system was configured using a RAM-BSA C18 (2.1 mm, i.d.) column in the first dimension that was able to excluded 94% of proteins. A fused core column was used in the the second dimension as analytical column. Selectivity, extraction efficiency, accuracy and precision were achieved employing 10 μL of the sample, without sample clean-up, with quantification limits of 3.0 ng/mL and 4.0 ng/mL for FLU and NOR, respectively. / O presente trabalho reporta a aplicação de métodos bioanalíticos com injeção direta de amostra para a quantificação de fármacos no leite materno. Colunas contendo fase do tipo RAM-BSA, em escala convencional e microbore, foram preparadas e avaliadas na exclusão de proteínas totais e oligossacarídeos de leite materno. Na escala convencional, a coluna RAM-BSA C18 (4,6 mm d.i.) foi utilizada no modo simples de análise para clean-up e quantificação simultânea de carbamazepina e do seu metabolito principal, empregando-se um analisador do tipo ion trap. Seletividade, eficiência de extração, a exatidão e precisão foram obtidos, injetandose 100 μL de amostra sem pré-tratamento. Foram alcançados limites de detecção de 20,0 ng/mL para CBZ e 40,0 ng/mL para ECBZ. O método desenvolvido foi validado e aplicado para a análise de uma amostra de leite materno de uma mãe em tratamento com carbamazepina. Ambos, CBZ e CBZE, foram quantificados nas concentrações de 2,26 μg/mL e 1,54 μg/mL, respectivamente. Para nosso conhecimento, este é o primeiro trabalho sobre a determinação simultânea de CBZ e seu metabólito ativo por injeção direta de leite materno. O método para a quantificação de fluoxetina e norfluoxetina por injeção direta de leite materno utilizando um sistema de 2D LC-MS foi desenvolvido com um tempo total de análise de 12 minutos. O sistema cromatográfico foi configurado usando uma coluna RAM-BSA C18 (2,1 mm d.i.), na primeira dimensão, que foi capaz de excluir 94% de proteínas. Uma coluna do tipo fused core foi utilizada na segunda dimensão, como coluna analítica. Seletividade, eficiência da extração, exatidão e precisão foram obtidos com a injeção de apenas 10 μL de amostra, sem pré-tratamento. Os limites de quantificação conseguidos foram de 3,0 ng/mL e 4,0 ng/mL para FLU e NOR, respectivamente.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-11-03T16:46:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lilian Ribeiro Batista - 2015.pdf: 1964612 bytes, checksum: b9bd7ed726cf48d3b1c896f2d3efb42a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-04T09:38:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lilian Ribeiro Batista - 2015.pdf: 1964612 bytes, checksum: b9bd7ed726cf48d3b1c896f2d3efb42a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T09:38:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lilian Ribeiro Batista - 2015.pdf: 1964612 bytes, checksum: b9bd7ed726cf48d3b1c896f2d3efb42a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Despite the efforts of many pharmaceutical companies to replace or reduce the content, many liquid medications still contains ethanol, which needs to have its contents regulated and monitored by quality control. Ethanol analyzes are generally carried out using one-dimensional gas chromatograph, however this technique does not always have adequate separation for the analysis of complex samples. The multidimensional chromatography has emerged as an innovative alternative because it allows the combination of two or more independent separation steps, significantly increasing the power of separation of the corresponding one-dimensional techniques. In this way, towards doing ethanol analysis in syrups for child and adult audience, a method by multidimensional gas chromatography-mass spectrometry was developed and validated for quality control purposes in the pharmaceutical industry. The analytical method developed led to a gain in selectivity by using the headspace extraction phase of ethanol in miniaturized and automated sample preparation. The use of HS-MDGC / GCMS provided a better separation of syrup components allowing to evidence that some commercial syrup have ethanol content above the maximum levels recommended by ANVISA. The method was validated according to standards established by ANVISA. The method was validated according ANVISA standards, presenting LOD 0.03% (v / v) and the LOQ of 0.06% (v / v) ethanol. The recovery values were 96.71% to 101.38%. Commercial samples of syrup in selected pharmacies in Goiânia/GO were analyzed by the proposed method and the content of ethanol in some samples was higher than maximum value allowed for this medicines. / Apesar dos esforços de muitas empresas farmacêuticas em substituir ou reduzir o teor alcoólico, muitos medicamentos líquidos ainda contém etanol, o qual precisa ter seu teor regulado e monitorado por técnicas específicas e precisas de controle da qualidade. Análises de etanol são geralmente realizadas utilizando cromatografia gasosa unidimensional, porém esta técnica nem sempre apresenta adequada separação para a análise de amostras complexas. A cromatografia multidimensional surgiu como uma alternativa inovadora, pois permite a combinação de duas ou mais etapas de separação independentes, aumentando significativamente o poder de separação das técnicas unidimensionais correspondentes. Assim, visando efetuar a análise de etanol em xaropes destinados ao público infantil e adulto, um método via cromatografia gasosa multidimensional acoplada à espectrometria de massas foi desenvolvido e validado para fins de controle de qualidade na indústria farmacêutica. O método analítico desenvolvido proporcionou ganho de seletividade pela utilização do headspace como fase extratora de etanol em sistema miniaturizado e automatizado de preparo de amostra. O uso de HS-MDGC-MS proporcionou a separação mais adequada dos componentes do xarope, permitindo evidenciar que alguns xaropes comerciais apresentam teor de etanol acima dos teores máximos preconizados pela Anvisa. O método foi validado segundo as normas estabelecidas pela Anvisa apresentando LD de 0,03% (v/v) e o LQ de 0,06% (v/v) de etanol. Os valores de recuperação foram de 96,71% a 101,38%. Amostras comerciais de xarope selecionados em farmácias de Goiânia/GO foram analisadas pelo método proposto, sendo que em algumas dessas amostras a concentração de etanol obtida foi superior aos limites máximos permitidos nestes medicamentos.