Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-08-29Bitstream added on 2014-06-13T20:33:44Z : No. of bitstreams: 1 ondei_ls_me_sjrp.pdf: 1659909 bytes, checksum: 0234670a460d2993f23cb77243c91e66 (MD5) / As hemoglobinas (Hb) variantes, originadas em sua maioria por simples substituições de aminoácidos, resultam de mudanças na seqüência de nucleotídeos. Atualmente, o número de Hb anormais identificadas tem aumentado devido à melhoria nas metodologias de análises, porém muitos laboratórios de rotina não estão preparados para a correta identificação dos mutantes. A Hb S é uma variante de Hb bem caracterizada que apresenta prevalência variável nas diferentes regiões do Brasil. No entanto, há uma variedade de Hb que apresenta padrão de migração eletroforética semelhante ao da Hb S em pH alcalino as quais são denominadas “Hb S-like”, podendo ser erroneamente diagnosticadas e com suas freqüências subestimadas. Neste trabalho foram estabelecidos os valores referenciais de Hb por HPLC em portadores de Hb S e determinados os perfis eletroforético e cromatográfico das Hb “S-like” dentre as amostras enviadas ao LHGDH. Foram encontradas as Hb Hasharon, Hb D-Los Angeles, Hb Korle-Bu, Hb Lepore, Hb D-Iran, Hb tipo G, Hb Queens, Hb Montgomery e Hb Q-Índia. Também foram encontrados casos de associação entre dois mutantes de cadeia beta. As eletroforeses em pH alcalino e pH ácido foram utilizadas para o rastreamento inicial das Hb variantes e as eletroforeses de cadeias polipeptídicas em ambos pH foram realizadas para a identificação da cadeia globínica alterada. As análises cromatográficas permitiram o direcionamento dos prováveis mutantes, sendo também possível a quantificação precisa das frações de variantes. Desta forma, a associação de metodologias laboratoriais clássicas de diagnóstico é fundamental para o levantamento das suspeitas fenotípicas. Os perfis da Hb S e das Hb “S-like” estabelecidos neste estudo auxiliarão no diagnóstico dessas Hb variantes em serviços de saúde. / The variants hemoglobin (Hb) originated mainly by simple amino acid substitutions, result of nucleotides sequences changes. Currently, the number of abnormal hemoglobin identified has increased due to improvement in the analysis methodologies, but many routine laboratories are not prepared for the correct mutants identification. The Hb S is a variant Hb well characterized that shows variable prevalence in different regions of Brazil. However, there is a diversity of Hb that present electrophoretic migration on alkaline pH similar to Hb S, named Hb S-like, which can be incorrectly diagnosed and with their frequencies underestimated. At the present study the reference ranges for Hb S obtained by HPLC were established, and the electrophoretic and cromatographic profile for Hb S like were determined. The Hb Hasharon, Hb D-Los Angeles, Hb Korle-Bu, Hb Lepore, Hb D-Iran, Hb tipo G, Hb Queens, Hb Montgomery e Hb Q-Índia were found. Cases of association between two mutants of beta chain were also found. The electrophoresis on alkaline pH and acid pH were utilized to the initial screen of these variants Hb and the globin chains electrophoresis in both pH were performed to identify the mutant globin chain. The chromatographic analysis permitted the identification of the likely variant hemoglobin and also facilitated the exact quantification of variants. Therefore, the association of the classical laboratory methods of diagnostic is fundamental for the identification of variant Hb suspect. The Hb S and Hb S-like profile determined in this study will help in the diagnostic of these variants Hb in healthy service.

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Ivan de Lucena Angulo / Banca: Carlos Roberto Ceron / Resumo: As hemoglobinas (Hb) variantes, originadas em sua maioria por simples substituições de aminoácidos, resultam de mudanças na seqüência de nucleotídeos. Atualmente, o número de Hb anormais identificadas tem aumentado devido à melhoria nas metodologias de análises, porém muitos laboratórios de rotina não estão preparados para a correta identificação dos mutantes. A Hb S é uma variante de Hb bem caracterizada que apresenta prevalência variável nas diferentes regiões do Brasil. No entanto, há uma variedade de Hb que apresenta padrão de migração eletroforética semelhante ao da Hb S em pH alcalino as quais são denominadas "Hb S-like", podendo ser erroneamente diagnosticadas e com suas freqüências subestimadas. Neste trabalho foram estabelecidos os valores referenciais de Hb por HPLC em portadores de Hb S e determinados os perfis eletroforético e cromatográfico das Hb "S-like" dentre as amostras enviadas ao LHGDH. Foram encontradas as Hb Hasharon, Hb D-Los Angeles, Hb Korle-Bu, Hb Lepore, Hb D-Iran, Hb tipo G, Hb Queens, Hb Montgomery e Hb Q-Índia. Também foram encontrados casos de associação entre dois mutantes de cadeia beta. As eletroforeses em pH alcalino e pH ácido foram utilizadas para o rastreamento inicial das Hb variantes e as eletroforeses de cadeias polipeptídicas em ambos pH foram realizadas para a identificação da cadeia globínica alterada. As análises cromatográficas permitiram o direcionamento dos prováveis mutantes, sendo também possível a quantificação precisa das frações de variantes. Desta forma, a associação de metodologias laboratoriais clássicas de diagnóstico é fundamental para o levantamento das suspeitas fenotípicas. Os perfis da Hb S e das Hb "S-like" estabelecidos neste estudo auxiliarão no diagnóstico dessas Hb variantes em serviços de saúde. / Abstract: The variants hemoglobin (Hb) originated mainly by simple amino acid substitutions, result of nucleotides sequences changes. Currently, the number of abnormal hemoglobin identified has increased due to improvement in the analysis methodologies, but many routine laboratories are not prepared for the correct mutants identification. The Hb S is a variant Hb well characterized that shows variable prevalence in different regions of Brazil. However, there is a diversity of Hb that present electrophoretic migration on alkaline pH similar to Hb S, named Hb S-like, which can be incorrectly diagnosed and with their frequencies underestimated. At the present study the reference ranges for Hb S obtained by HPLC were established, and the electrophoretic and cromatographic profile for Hb S like were determined. The Hb Hasharon, Hb D-Los Angeles, Hb Korle-Bu, Hb Lepore, Hb D-Iran, Hb tipo G, Hb Queens, Hb Montgomery e Hb Q-Índia were found. Cases of association between two mutants of beta chain were also found. The electrophoresis on alkaline pH and acid pH were utilized to the initial screen of these variants Hb and the globin chains electrophoresis in both pH were performed to identify the mutant globin chain. The chromatographic analysis permitted the identification of the likely variant hemoglobin and also facilitated the exact quantification of variants. Therefore, the association of the classical laboratory methods of diagnostic is fundamental for the identification of variant Hb suspect. The Hb S and Hb S-like profile determined in this study will help in the diagnostic of these variants Hb in healthy service. / Mestre

O autismo é uma síndrome que afeta todas as áreas do comportamento humano. Sua etiologia não está definida. Os estudos descreveram uma associação do autismo com diversas anormalidades fisiológicas entre elas, distúrbios relacionados ao metabolismo proteico. A teoria do excesso de peptídeos opioides afirma que o consumo de glúten e caseína pode intensificar o comportamento da síndrome do espectro autista. Outra hipótese é de que distúrbios do metabolismo da creatina também estão integrados à doença. Os objetivos desse estudo foram: avaliar a variedade e a frequência de alimentos consumidos por autistas, bem como a adequação desse consumo; avaliar as alterações do metabolismo da creatina; desenvolver testes preliminares para determinar as condições mais adequadas para a identificação e possível quantificação dos peptídeos opioides derivados do glúten e da caseína por HPLC. Para atingir esses objetivos foi elaborada uma anamnese nutricional, contendo questões sobre características sócio-demográficas das famílias dos autistas participantes, histórico pessoal de doenças, comportamento autista durante as refeições, e levantamento de hábito alimentar. Para caracterizar o quadro clínico da população foi realizada uma avaliação psicológica com aplicação do método quantitativo Childhood Autism Rating Scale (CARS) e a identificação de presença de retardo mental foi através de levantamento de avaliação clínica existente, feita por equipe multidisciplinar das instituições participantes. A concentração de creatinina na urina dos autistas e grupo controle formado por parentes do mesmo sexo foi determinada pelo método de Jaffé. Os resultados sobre a caracterização da população indicaram que 1/3 dos pais de autistas possuem baixa escolaridade e 60% renda familiar na faixa de 2 a 4 salários mínimos. Segundo o método de avaliação CARS 64% dos autistas são casos graves. A renite alérgica é a patologia de maior prevalência na população estudada. Em média 60,71% dos autistas apresentam sintomas gástricos, sendo o mais frequente a flatulência (39,90%). O registro sobre comportamento alimentar identificou que 50% dos autistas expressam o comportamento de comerem muito rápido e 46,43% consomem porções exageradas de alimentos. Esse fato influência diretamente o hábito alimentar. A avaliação de adequação de consumo de nutrientes revelou que 57,14% têm o consumo de energia superior ao recomendado e baixo consumo de fibras, ácido ascórbico e cálcio. As análises de concentração de creatinina revelaram que os valores são significativamente inferiores em crianças autistas e do grupo controle formado por parentes distantes e que são similares quando comparado com grupo formado por seus pais. As análises iniciais por cromatografia líquida de alta performance evidenciam que dos dois métodos desenvolvidos o codificado como número 2 é mais eficiente do que o número 1, pois consegue distinguir os picos de todos os padrões de peptídeos testados e que o protocolo inicial para a extração de peptídeos opioides em fase sólida deve ser revisto. / Autism is a syndrome that affects all areas of human behavior. Its etiology is not defined. The studies described an association of autism with various abnormalities including physiological disorders related to protein metabolism. The theory of excess opioid peptides says that consumption of gluten and casein can intensify the behavior of autistic spectrum syndrome. Another hypothesis is that disorders of creatine metabolism are also integrated to the disease. The objectives of this study were to assess the variety and frequency of foods consumed by autism, as well as the appropriateness of this consumption and to evaluate the changes of creatine metabolism, developing preliminary tests to determine the most appropriate conditions for the identification and possible quantification of opioid peptides derived from gluten and casein by HPLC. To achieve these objectives was drawn up a nutritional interview containing questions on sociodemographic characteristics of the families of autistic participants, personal history of disease, autistic behavior during meals, and a survey of eating habits. To characterize the clinical status of the population a psychological evaluation was performed using a quantitative Childhood Autism Rating Scale (CARS). The creatinine concentrations in urine of autistic and control group formed by relatives of the same sex was determined by the Jaffé. The results on the characterization of the population indicated that one third of parents of autistic children have lower education and 60% of family income in the range from 2 to 4 minimum wages. According to the method of evaluation CARS 64% of autistic children are severe cases. The allergic rhinitis is the most prevalent disease in this population. On average 60.71% of people with autism have gastric symptoms, the most frequent flatulence (39.90%). The record on eating behavior found that 50% of autistic children express the behavior of eating too fast, and 46.43% consume excessive portions of food. This fact directly influences the food habits. The assessment of adequacy of nutrient intake have revealed that 57.14% of energy consumption and lower than the recommended intake of fiber, and calcium acid ascorbic. The analysis revealed that creatinine concentration values are significantly lower in autistic children and the control group formed by distant relatives and are compared with similar group formed by his parents. Initial analysis by high performance liquid chromatography showed that the two methods developed and coded as number 2 is more efficient than a number, for it can distinguish the peaks of all patterns of peptides tested and that the initial protocol for the extraction of opioid peptides in the solid phase should be reviewed.

O autismo é uma síndrome que afeta todas as áreas do comportamento humano. Sua etiologia não está definida. Os estudos descreveram uma associação do autismo com diversas anormalidades fisiológicas entre elas, distúrbios relacionados ao metabolismo proteico. A teoria do excesso de peptídeos opioides afirma que o consumo de glúten e caseína pode intensificar o comportamento da síndrome do espectro autista. Outra hipótese é de que distúrbios do metabolismo da creatina também estão integrados à doença. Os objetivos desse estudo foram: avaliar a variedade e a frequência de alimentos consumidos por autistas, bem como a adequação desse consumo; avaliar as alterações do metabolismo da creatina; desenvolver testes preliminares para determinar as condições mais adequadas para a identificação e possível quantificação dos peptídeos opioides derivados do glúten e da caseína por HPLC. Para atingir esses objetivos foi elaborada uma anamnese nutricional, contendo questões sobre características sócio-demográficas das famílias dos autistas participantes, histórico pessoal de doenças, comportamento autista durante as refeições, e levantamento de hábito alimentar. Para caracterizar o quadro clínico da população foi realizada uma avaliação psicológica com aplicação do método quantitativo Childhood Autism Rating Scale (CARS) e a identificação de presença de retardo mental foi através de levantamento de avaliação clínica existente, feita por equipe multidisciplinar das instituições participantes. A concentração de creatinina na urina dos autistas e grupo controle formado por parentes do mesmo sexo foi determinada pelo método de Jaffé. Os resultados sobre a caracterização da população indicaram que 1/3 dos pais de autistas possuem baixa escolaridade e 60% renda familiar na faixa de 2 a 4 salários mínimos. Segundo o método de avaliação CARS 64% dos autistas são casos graves. A renite alérgica é a patologia de maior prevalência na população estudada. Em média 60,71% dos autistas apresentam sintomas gástricos, sendo o mais frequente a flatulência (39,90%). O registro sobre comportamento alimentar identificou que 50% dos autistas expressam o comportamento de comerem muito rápido e 46,43% consomem porções exageradas de alimentos. Esse fato influência diretamente o hábito alimentar. A avaliação de adequação de consumo de nutrientes revelou que 57,14% têm o consumo de energia superior ao recomendado e baixo consumo de fibras, ácido ascórbico e cálcio. As análises de concentração de creatinina revelaram que os valores são significativamente inferiores em crianças autistas e do grupo controle formado por parentes distantes e que são similares quando comparado com grupo formado por seus pais. As análises iniciais por cromatografia líquida de alta performance evidenciam que dos dois métodos desenvolvidos o codificado como número 2 é mais eficiente do que o número 1, pois consegue distinguir os picos de todos os padrões de peptídeos testados e que o protocolo inicial para a extração de peptídeos opioides em fase sólida deve ser revisto. / Autism is a syndrome that affects all areas of human behavior. Its etiology is not defined. The studies described an association of autism with various abnormalities including physiological disorders related to protein metabolism. The theory of excess opioid peptides says that consumption of gluten and casein can intensify the behavior of autistic spectrum syndrome. Another hypothesis is that disorders of creatine metabolism are also integrated to the disease. The objectives of this study were to assess the variety and frequency of foods consumed by autism, as well as the appropriateness of this consumption and to evaluate the changes of creatine metabolism, developing preliminary tests to determine the most appropriate conditions for the identification and possible quantification of opioid peptides derived from gluten and casein by HPLC. To achieve these objectives was drawn up a nutritional interview containing questions on sociodemographic characteristics of the families of autistic participants, personal history of disease, autistic behavior during meals, and a survey of eating habits. To characterize the clinical status of the population a psychological evaluation was performed using a quantitative Childhood Autism Rating Scale (CARS). The creatinine concentrations in urine of autistic and control group formed by relatives of the same sex was determined by the Jaffé. The results on the characterization of the population indicated that one third of parents of autistic children have lower education and 60% of family income in the range from 2 to 4 minimum wages. According to the method of evaluation CARS 64% of autistic children are severe cases. The allergic rhinitis is the most prevalent disease in this population. On average 60.71% of people with autism have gastric symptoms, the most frequent flatulence (39.90%). The record on eating behavior found that 50% of autistic children express the behavior of eating too fast, and 46.43% consume excessive portions of food. This fact directly influences the food habits. The assessment of adequacy of nutrient intake have revealed that 57.14% of energy consumption and lower than the recommended intake of fiber, and calcium acid ascorbic. The analysis revealed that creatinine concentration values are significantly lower in autistic children and the control group formed by distant relatives and are compared with similar group formed by his parents. Initial analysis by high performance liquid chromatography showed that the two methods developed and coded as number 2 is more efficient than a number, for it can distinguish the peaks of all patterns of peptides tested and that the initial protocol for the extraction of opioid peptides in the solid phase should be reviewed.