Thesis (doctoral)--Lund University, 1995. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1995. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Orientador: Joni Augusto Cirelli / Resumo: As cisteíno-peptidases e as citocinas desempenham um papel importante no inicio e progressão dos processos imuno-inflamatórios, dentre estes, a doença periodontal. As fitocistatinas são cistatinas derivadas das plantas, inibidoras naturais das cisteíno- peptidases. Entre elas a Citrus CPI-2, derivada da laranja e a Cane CPI-4, derivada da cana-de-açúcar tem sido recentemente investigadas. O estudo das mesmas pode levar a novas terapias para o controle da doença periodontal, bem como outras doenças imuno- inflamatórias. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito inibitório das fitocistatinas (Cane CPI-4 e Citrus CPI-2) sobre mediadores da inflamação. Em estudo in vitro, foi avaliado o efeito da atividade inibitória das fitocistatinas sobre a expressão gênica (RT-PCR em tempo real) das catepsinas B e K e citocinas pró-inflamatórias (IL- 1β, IL-6 e TNF-α) em células de linhagem macrofágica de camundongos (RAW 264.7), após 12 e 24h de estímulo com Porphyromonas gingivalis inativada por calor. Em estudo in vivo, foi avaliada a ação de diferentes concentrações das fitocistatinas sobre a produção de TNF- a por células sanguíneas de ratos submetidos à injeção de LPS de E.coli . Todos os animais foram submetidos à implementação de cânulas na veia femoral para à injeção de LPS de E.coli e na artéria femoral para a extração de sangue em 6 diferentes tempos (de 30 a 180 minutos) após o estimulo com LPS de E.coli (IV, 100 Ug/Kg). A quan... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cysteine proteinases and the cytokines play an important role in the initiation and progression of immune-inflammatory processes such as periodontal disease. The phytocystatins are cystatins derived from plants and they are natural inhibitors of cysteine proteinases. Among them, the Citrus CPI-2 derived from orange and Cane CPI- 4 derived from sugar cane have been investigated. The study of them may lead to new therapies for the control of periodontal disease and other immune inflammatory diseases. The overall objective of this study was to evaluate the effect of phytocystatins CaneCPI- 4 and CitrusCPI-2 on mediators of inflammation. The aim of the in vitro study was to assess the inhibitory activity of phytocystatins on gene expression (RT-PCR) of cathepsins B and K and pro-inflammatory cytokines (IL- 1β and IL-6 and TNF-α) in murine macrophage cells (RAW 264.7) after 12 and 24 hours of stimulation with heatinactivated bacteria Porphyromonas gingivalis. The aim of the in vivo study was to assess the inhibitory activity of both phytocystatins in the production of TNF-α by blood cells of rats submitted by an injection of lipopolysaccharide (LPS) of E.coli. All animals were subjected to the implementation of cannulas to femoral artery and vein for blood collection at 6 different time points (from 30 to 180 minutes) after LPS stimulus (IV, 100 ug/kg). Quantification of TNF-α was performed by ELISA. According to the results of the in vitro study, Citrus CPI-2 showed a signifi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

This study was focused on the influence of hard tick from Ixodes ricinus on the replication of tick-borne encephalitis virus in vivo and the on the accompained changes in the levels of inflammatory cytokines which were determined in serum of infected mice. Futher the effect of tick cystatins, the inhibitors of cysteine proteases, on gene expression of interferon regulated factors was investigated in dendritic cells upon stimulation with Toll-like receptor ligands.

>Magister Scientiae - MSc / This study investigated the effects that drought stress imposed on the growth and development of soybean plants. Soybeans were initially observed at the whole-plant level in order to identify the physical changes that had taken place in response to drought. Further investigation of the effects of drought stress on Soybean plants were quantified at the molecular level. Physical changes of soybeans in response to drought stress were typified by the change in leaf morphology and pigmentation. At the molecular level, it was observed that drought stress resulted in the accumulation of hydrogen peroxide in soybean leaves, which was met by elevated levels of lipid peroxidation. The effects of drought on the modulation of (and interplay between cystatins) cysteine protease (caspase-like) activity and programmed cell death (PCD) were also investigated. Total caspase-like activity and cell death were enhanced in response to water deficit despite the up-regulation in gene expression of the cystatin Glyma14g04250. The cystatin Glyma18g12240 was not expressed in soybean leaves, whilst the gene expression of the cystatin Glyma20g08800 remained unchanged in response to drought. This study was aimed at the characterization of two single domain soybean cystatins, namely, Glyma14g04250 and Glyma20g08800 which could potentially be overexpressed in transgenic soybean plants in an attempt to alleviate the effects of drought stress. / National Research Foundation (NRF)

INTRODUÇÃO: A cistatina C é uma proteína não glicosilada de baixo peso molecular que é produzida por todas as células nucleadas. A medida da concentração sérica (CS) de cistatina C tem sido aclamada como um marcador de função renal superior à medida da CS de creatinina. No presente estudo, avaliou-se a acurácia diagnóstica da proteína cistatina C em estimar mudanças no Ritmo de Filtração Glomerular (RFG) medido por 51Cr-EDTA, em análise longitudinal prospectiva de pacientes transplantados renais com tempo de transplante recente e tardio. Em uma fase inicial (Fase A), definimos a melhor estratégia metodológica para a realização do RFG por depuração plasmática de 51Cr-EDTA em receptores de enxerto renal utilizando a depuração renal de inulina como método padrão-ouro. MÉTODOS: Medidas simultâneas de depuração renal de inulina e de depuração plasmática de 51Cr-EDTA foram feitas em pacientes transplantados renais. A precisão do método de medida do RFG por 51Cr-EDTA foi avaliada em doadores após um ano de doação de rim. A análise de Bland&Altman foi empregada para avaliar a concordância entre os métodos. Em uma segunda fase, foram realizadas medidas das CS de cistatina C e de creatinina e do RFG por 51Cr-EDTA nos meses 1, 3, 6 e 12 de seguimento clínico do estudo em pacientes transplantados renais. A cistatina C foi dosada em amostras de soro, por técnica de imunonefelometria (N Latex Cystatin C kit - Dade Behring). A tendência da função renal foi obtida por Regressão Linear Simples. RESULTADOS: Na fase A, foram incluídos 44 pacientes transplantados renais e 22 doadores de rim com tempo de doação de 12,4 a 53,5 meses. A depuração de 51Cr-EDTA com amostras de sangue coletadas nos tempos 2, 4, 6 e 8 horas após injeção do radiofármaco apresentou forte correlação e alto grau de concordância com a depuração de inulina; uma estratégia única para todos os níveis de função foi estabelecida com amostras de sangue nos tempos 4 e 6 horas. Em uma segunda fase do estudo, oitenta e dois pacientes foram incluídos, com idade média de 43,4 ± 11,9 anos. A maioria era da raça branca (56%) e do sexo masculino (68%). No mês 1, a média do RFG por 51Cr-EDTA foi de 50,6 ± 17,3 ml/min/1,73m², e foi de 1,62 ± 0,65 mg/L para a CS de cistatina C e de 1,40 ± 0,62 mg/dL para a CS de creatinina. Na análise transversal, foi encontrada uma forte correlação entre o RFG e a medida de CS de cistatina C. Entretanto, na análise longitudinal do seguimento clínico a CS de cistatina C não estimou a tendência de mudança no RFG. CONCLUSÕES: A depuração plasmática de 51Cr-EDTA é uma medida precisa e acurada de RFG que pode ser utilizada em substituição à depuração renal de inulina, em pacientes transplantados renais. Medidas seriadas da CS de cistatina C não foram capazes de detectar mudanças no RFG em pacientes transplantados renais. / INTRODUCTION: Cystatin C is a nonglycosylated protein that is synthesized by all nucleated cells. The present study aimed to analyze the accuracy of serum concentration of cystatin C for detecting longitudinal change in glomerular filtration rate in transplanted recipients, as well to define a better methodological strategy to perform the plasma clearance of 51Cr-EDTA in renal transplant patients using inulin clearance as the gold standard method. METHODS: in the first phase of the study, simultaneous measurements of plasma clearance of 51Cr-EDTA and renal clearance of inulin in stable renal transplanted patients were performed. The within-subject repeatability of the 51Cr-EDTA was evaluated in live kidney donors at least 12 months after donation. Bland&Altman statistical approach was used to quantify the degree of agreement between clearance of inulin and plasma clearance of 51Cr-EDTA. In a second phase, serial measures of plasma clearance of 51Cr-EDTA, serum cystatin C and serum creatinine were examined in folowing at 1, 3, 6 and 12 months in kidney transplanted patients. Serum cystatin C was measured by a nephelometric immunoassay (N latex cystatin C kit - Dade Behring). The trend in renal function over time was obtained by linear regression. RESULTS: In the first phase, 44 transplanted patients and 22 kidney donors at least 12 months after donation (range 12,4 to 53,5 months) were enrolled. Plasma clearance of 51Cr-EDTA with four samples taken at 2, 4, 6 and 8 hours presented a strong association and closely agreement with inulin clearance. An abbreviated strategy was recommended with two blood sampling collected at 4 and 6 hours. In the second phase, 82 kidney transplanted patients were enrolled. Mean age was 43.4 ± 11.9 years. The majority were white (56%) and male (68%). The mean of the plasma clearance of 51Cr-EDTA was 50.6 ± 17.3, and it was 1.62 ± 0.65 mg/L and 1.40 ± 0.62 mg/dL for serum cystatin C and creatinine, respectively, at baseline. In cross-section analysis, serum cystatin C was strongly correlated with plasma clearance of 51Cr-EDTA. However, in longitudinal analysis serum cystatin C was not able for estimate GFR. CONCLUSIONS: Plasma clearance of 51Cr-EDTA is a precise method to measure GFR in renal transplanted recipients. The results showed that serial measurements of serum cystatin C are not able to detect trends in renal function in transplanted patients.

A erosão dentária apresenta uma etiologia multifatorial, com isto, existem várias possibilidades preventivas e terapêuticas. A saliva é um dos mais importantes fatores biológicos envolvidos, tendo um papel protetor contra desafios erosivos, por contribuir na formação da película adquirida. Já a incorporação de proteínas á película adquirida, através da sua adição a produtos odontológicos, como soluções para bochecho ou géis, por exemplo, pode afetar sua habilidade em proteger contra a erosão. Experimentos preliminares revelaram que uma cistatina clonada recentemente a partir da cana-de-açúcar, denominada CaneCPI-5, tem uma grande força de interação com o esmalte, sendo capaz de protegê-lo contra a erosão inicial. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de soluções ou géis contendo CaneCPI-5, em diferentes concentrações, na proteção contra a erosão inicial do esmalte n vitro. Foram confeccionados 150 blocos de esmalte bovino (4 X 4 mm). Para cada um dos veículos a ser testado (solução ou gel) foram constituídos 5 grupos, sendo um grupo controle, constituído por água deionizada ou gel placebo e 4 grupos experimentais. Para as soluções, os grupos experimentais foram constituídos de: Mucina 0,27% + Caseína 0,5%, CaneCPI-5 0,025 g/L, CaneCPI-5 0,1 g/L e CaneCPI-5 1,0 g/L. Para os géis, os grupos experimentais foram: Mucina 0,27% + Caseína 0,5%, CaneCPI-5 0,1 g/L, CaneCPI-5 1,0 g/L e CaneCPI-5 2,0 g/L O tratamento dos espécimes com as soluções foi feito por 2 h a 30°C, sob agitação, enquanto com os géis foi feito por 1 min. Saliva estimulada foi coletada de 3 voluntários para formação da película adquirida (durante 2 h) sobre os espécimes. Os espécimes foram então incubados em solução de ácido cítrico 0,65% (pH = 3,4) por 1 min a 30ºC sob agitação constante. Cada espécime foi assim tratado uma vez ao dia durante 3 dias. As análises de microdureza de superfície (SHM) foram feitas e as alterações na SMH (SHM baseline SMH pós-erosão; %SHC) foram calculadas nos dias 1 e 3. Os dados foram analisados pelos teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (p<0,05). As soluções contendo CaneCPI-5 a 0,1 e 1,0 g/l reduziram significativamente %SHC em comparação aos demais tratamentos, para ambos os períodos experimentais, sem diferença entre si. Para os géis resultados semelhantes aos das soluções foram obtidos apenas no primeiro dia de tratamento. Após 3 dias, entretanto, o efeito protetor foi perdido. Em conclusão, o tratamento com solução contendo CaneCPI-5 a 0,1 g/L parece ser uma boa alternativa para prevenir a erosão inicial do esmalte, o que deve ser confirmado em estudos utilizando condições experimentais mais similares às situações clínicas. / Dental erosion has a multifactorial etiology, thus, there are several preventive and therapeutic possibilities. Saliva is one of the most important biological factors involved, having a protective role against erosive challenges and contributing to the formation of the acquired enamel pellicle. The incorporation of proteins in the acquired enamel pellicle, by their addition to dental products such as mouthwashes or gels, for example, can affect its ability to protect against erosion. Preliminary experiments from our group have shown that a sugar cane-derived protein that was recently cloned, known as CaneCPI-5 has a strong interaction force with the enamel and is capable of protecting it against initial erosion. The aim of this study was to evaluate the effect of solutions or gels containing CaneCPI-5, in different concentrations, on the protection against initial enamel erosion in vitro. Bovine enamel blocks (n=150) (4X4 mm) were prepared. For each of the vehicles tested (solution or gel) 5 groups (one control, constituted by deionized water or placebo gel and four experimental) were constituted. For the solutions, the experimental groups were constituted of: 0.27% mucin + 0.5% casein, 0.025 g/L CaneCPI-5, 0.1 g/L CaneCPI-5 or 1.0 g/L CaneCPI-5. For the gels, they were: 0.27% mucin + 0.5% casein, 0.1 g/L CaneCPI-5, 1.0 g/L CaneCPI-5 or 2.0 g/L CaneCPI-5. The specimens were treated with the solutions for 2 h at 30°C under stirring or with the gels for 1 min. Stimulated saliva was collected from three volunteers and the acquired enamel pellicle was formed for 2 h. Then the specimens were incubated in a solution of 0.65% citric acid (pH = 3.4) for 1 min at 30°C under stirring. Each specimen was treated once a day for 3 days. Surface hardness analysis (SHM) was made and changes in SMH (SHM baseline - posterosion SMH; %SHC) was calculated on days 1 and 3. Data were analyzed by Kruskall-Wallis and Dunn´s tests (p<0.05). The solutions containing 0.1 and 1.0 g/L CaneCPI-5 significantly reduced %SHC when compared with the other treatments, for both experimental periods, without significant difference between them. As for the gels, similar results were obtained but only at the first day of treatment. After 3 days, the protective effect was lost. In conclusion, the treatment with solution containing 0.1g/L CaneCPI-5 seems to be a good alternative to prevent initial enamel erosion, what needs to be confirmed using experimental conditions that more closely resemble the clinical situation.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2002. / Härtill 5 uppsatser.

Two murine models of acute inflammation, namely thioglycollate-induced peritonitis and carrageenan-induced paw edema, were optimized using non-steroidal anti-inflammatory drug indomethacin and corticosteroid dexamethasone. During the optimization phase, the presence of neutrophils, monocytes, macrophages, eosinophils, B cells and T cells in the peritoneal cavity at various time points after injection of thioglycollate medium was assessed via multicolor flow cytometry. Moreover, two different thioglycollate media (suppliers BD and Sigma-Aldrich) were compared for their ability to induce an inflammatory response. The optimization of thioglycollate-induced peritonitis and carrageenan-induced paw edema was followed by the evaluation of the anti-inflammatory activity of Ixodes ricinus cystatins G1 and G9 in both mouse models.

A erosão dentária apresenta uma etiologia multifatorial, com isto, existem várias possibilidades preventivas e terapêuticas. A saliva é um dos mais importantes fatores biológicos envolvidos, tendo um papel protetor contra desafios erosivos, por contribuir na formação da película adquirida. Já a incorporação de proteínas á película adquirida, através da sua adição a produtos odontológicos, como soluções para bochecho ou géis, por exemplo, pode afetar sua habilidade em proteger contra a erosão. Experimentos preliminares revelaram que uma cistatina clonada recentemente a partir da cana-de-açúcar, denominada CaneCPI-5, tem uma grande força de interação com o esmalte, sendo capaz de protegê-lo contra a erosão inicial. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de soluções ou géis contendo CaneCPI-5, em diferentes concentrações, na proteção contra a erosão inicial do esmalte n vitro. Foram confeccionados 150 blocos de esmalte bovino (4 X 4 mm). Para cada um dos veículos a ser testado (solução ou gel) foram constituídos 5 grupos, sendo um grupo controle, constituído por água deionizada ou gel placebo e 4 grupos experimentais. Para as soluções, os grupos experimentais foram constituídos de: Mucina 0,27% + Caseína 0,5%, CaneCPI-5 0,025 g/L, CaneCPI-5 0,1 g/L e CaneCPI-5 1,0 g/L. Para os géis, os grupos experimentais foram: Mucina 0,27% + Caseína 0,5%, CaneCPI-5 0,1 g/L, CaneCPI-5 1,0 g/L e CaneCPI-5 2,0 g/L O tratamento dos espécimes com as soluções foi feito por 2 h a 30°C, sob agitação, enquanto com os géis foi feito por 1 min. Saliva estimulada foi coletada de 3 voluntários para formação da película adquirida (durante 2 h) sobre os espécimes. Os espécimes foram então incubados em solução de ácido cítrico 0,65% (pH = 3,4) por 1 min a 30ºC sob agitação constante. Cada espécime foi assim tratado uma vez ao dia durante 3 dias. As análises de microdureza de superfície (SHM) foram feitas e as alterações na SMH (SHM baseline SMH pós-erosão; %SHC) foram calculadas nos dias 1 e 3. Os dados foram analisados pelos teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (p<0,05). As soluções contendo CaneCPI-5 a 0,1 e 1,0 g/l reduziram significativamente %SHC em comparação aos demais tratamentos, para ambos os períodos experimentais, sem diferença entre si. Para os géis resultados semelhantes aos das soluções foram obtidos apenas no primeiro dia de tratamento. Após 3 dias, entretanto, o efeito protetor foi perdido. Em conclusão, o tratamento com solução contendo CaneCPI-5 a 0,1 g/L parece ser uma boa alternativa para prevenir a erosão inicial do esmalte, o que deve ser confirmado em estudos utilizando condições experimentais mais similares às situações clínicas. / Dental erosion has a multifactorial etiology, thus, there are several preventive and therapeutic possibilities. Saliva is one of the most important biological factors involved, having a protective role against erosive challenges and contributing to the formation of the acquired enamel pellicle. The incorporation of proteins in the acquired enamel pellicle, by their addition to dental products such as mouthwashes or gels, for example, can affect its ability to protect against erosion. Preliminary experiments from our group have shown that a sugar cane-derived protein that was recently cloned, known as CaneCPI-5 has a strong interaction force with the enamel and is capable of protecting it against initial erosion. The aim of this study was to evaluate the effect of solutions or gels containing CaneCPI-5, in different concentrations, on the protection against initial enamel erosion in vitro. Bovine enamel blocks (n=150) (4X4 mm) were prepared. For each of the vehicles tested (solution or gel) 5 groups (one control, constituted by deionized water or placebo gel and four experimental) were constituted. For the solutions, the experimental groups were constituted of: 0.27% mucin + 0.5% casein, 0.025 g/L CaneCPI-5, 0.1 g/L CaneCPI-5 or 1.0 g/L CaneCPI-5. For the gels, they were: 0.27% mucin + 0.5% casein, 0.1 g/L CaneCPI-5, 1.0 g/L CaneCPI-5 or 2.0 g/L CaneCPI-5. The specimens were treated with the solutions for 2 h at 30°C under stirring or with the gels for 1 min. Stimulated saliva was collected from three volunteers and the acquired enamel pellicle was formed for 2 h. Then the specimens were incubated in a solution of 0.65% citric acid (pH = 3.4) for 1 min at 30°C under stirring. Each specimen was treated once a day for 3 days. Surface hardness analysis (SHM) was made and changes in SMH (SHM baseline - posterosion SMH; %SHC) was calculated on days 1 and 3. Data were analyzed by Kruskall-Wallis and Dunn´s tests (p<0.05). The solutions containing 0.1 and 1.0 g/L CaneCPI-5 significantly reduced %SHC when compared with the other treatments, for both experimental periods, without significant difference between them. As for the gels, similar results were obtained but only at the first day of treatment. After 3 days, the protective effect was lost. In conclusion, the treatment with solution containing 0.1g/L CaneCPI-5 seems to be a good alternative to prevent initial enamel erosion, what needs to be confirmed using experimental conditions that more closely resemble the clinical situation.