INTRODUÇÃO: A cistatina C é uma proteína não glicosilada de baixo peso molecular que é produzida por todas as células nucleadas. A medida da concentração sérica (CS) de cistatina C tem sido aclamada como um marcador de função renal superior à medida da CS de creatinina. No presente estudo, avaliou-se a acurácia diagnóstica da proteína cistatina C em estimar mudanças no Ritmo de Filtração Glomerular (RFG) medido por 51Cr-EDTA, em análise longitudinal prospectiva de pacientes transplantados renais com tempo de transplante recente e tardio. Em uma fase inicial (Fase A), definimos a melhor estratégia metodológica para a realização do RFG por depuração plasmática de 51Cr-EDTA em receptores de enxerto renal utilizando a depuração renal de inulina como método padrão-ouro. MÉTODOS: Medidas simultâneas de depuração renal de inulina e de depuração plasmática de 51Cr-EDTA foram feitas em pacientes transplantados renais. A precisão do método de medida do RFG por 51Cr-EDTA foi avaliada em doadores após um ano de doação de rim. A análise de Bland&Altman foi empregada para avaliar a concordância entre os métodos. Em uma segunda fase, foram realizadas medidas das CS de cistatina C e de creatinina e do RFG por 51Cr-EDTA nos meses 1, 3, 6 e 12 de seguimento clínico do estudo em pacientes transplantados renais. A cistatina C foi dosada em amostras de soro, por técnica de imunonefelometria (N Latex Cystatin C kit - Dade Behring). A tendência da função renal foi obtida por Regressão Linear Simples. RESULTADOS: Na fase A, foram incluídos 44 pacientes transplantados renais e 22 doadores de rim com tempo de doação de 12,4 a 53,5 meses. A depuração de 51Cr-EDTA com amostras de sangue coletadas nos tempos 2, 4, 6 e 8 horas após injeção do radiofármaco apresentou forte correlação e alto grau de concordância com a depuração de inulina; uma estratégia única para todos os níveis de função foi estabelecida com amostras de sangue nos tempos 4 e 6 horas. Em uma segunda fase do estudo, oitenta e dois pacientes foram incluídos, com idade média de 43,4 ± 11,9 anos. A maioria era da raça branca (56%) e do sexo masculino (68%). No mês 1, a média do RFG por 51Cr-EDTA foi de 50,6 ± 17,3 ml/min/1,73m², e foi de 1,62 ± 0,65 mg/L para a CS de cistatina C e de 1,40 ± 0,62 mg/dL para a CS de creatinina. Na análise transversal, foi encontrada uma forte correlação entre o RFG e a medida de CS de cistatina C. Entretanto, na análise longitudinal do seguimento clínico a CS de cistatina C não estimou a tendência de mudança no RFG. CONCLUSÕES: A depuração plasmática de 51Cr-EDTA é uma medida precisa e acurada de RFG que pode ser utilizada em substituição à depuração renal de inulina, em pacientes transplantados renais. Medidas seriadas da CS de cistatina C não foram capazes de detectar mudanças no RFG em pacientes transplantados renais. / INTRODUCTION: Cystatin C is a nonglycosylated protein that is synthesized by all nucleated cells. The present study aimed to analyze the accuracy of serum concentration of cystatin C for detecting longitudinal change in glomerular filtration rate in transplanted recipients, as well to define a better methodological strategy to perform the plasma clearance of 51Cr-EDTA in renal transplant patients using inulin clearance as the gold standard method. METHODS: in the first phase of the study, simultaneous measurements of plasma clearance of 51Cr-EDTA and renal clearance of inulin in stable renal transplanted patients were performed. The within-subject repeatability of the 51Cr-EDTA was evaluated in live kidney donors at least 12 months after donation. Bland&Altman statistical approach was used to quantify the degree of agreement between clearance of inulin and plasma clearance of 51Cr-EDTA. In a second phase, serial measures of plasma clearance of 51Cr-EDTA, serum cystatin C and serum creatinine were examined in folowing at 1, 3, 6 and 12 months in kidney transplanted patients. Serum cystatin C was measured by a nephelometric immunoassay (N latex cystatin C kit - Dade Behring). The trend in renal function over time was obtained by linear regression. RESULTS: In the first phase, 44 transplanted patients and 22 kidney donors at least 12 months after donation (range 12,4 to 53,5 months) were enrolled. Plasma clearance of 51Cr-EDTA with four samples taken at 2, 4, 6 and 8 hours presented a strong association and closely agreement with inulin clearance. An abbreviated strategy was recommended with two blood sampling collected at 4 and 6 hours. In the second phase, 82 kidney transplanted patients were enrolled. Mean age was 43.4 ± 11.9 years. The majority were white (56%) and male (68%). The mean of the plasma clearance of 51Cr-EDTA was 50.6 ± 17.3, and it was 1.62 ± 0.65 mg/L and 1.40 ± 0.62 mg/dL for serum cystatin C and creatinine, respectively, at baseline. In cross-section analysis, serum cystatin C was strongly correlated with plasma clearance of 51Cr-EDTA. However, in longitudinal analysis serum cystatin C was not able for estimate GFR. CONCLUSIONS: Plasma clearance of 51Cr-EDTA is a precise method to measure GFR in renal transplanted recipients. The results showed that serial measurements of serum cystatin C are not able to detect trends in renal function in transplanted patients.

The papain-like cysteine protease family (C1 proteases) is highly important because of its involvement in research and industrial applications and its role in various human diseases. Protein inhibitors are an important aspect of C1 protease biology and are relevant to its clinical, industrial and research importance. To study the interaction between the proteases and the inhibitors it is very useful to have accurate structural models of the protease-inhibitor complexes. To this end, a high-throughput pipeline for modelling complexes of papain-like cysteine proteases and protein inhibitors was implemented and tested (Tastan Bishop & Kroon, 2011). The pipeline utilizes a novel technique for obtaining modelling templates by using superpositioning to combine coordinates from separate experimental structures. To test the pipeline, models of complexes with known structures (test set) were modelled using many different templates and the resultant models evaluated to compare the quality of the different templates. It was found that use of the new technique to obtain templates did not introduce significant errors, while allowing closer homologs to be used for modelling - leading to more accurate models. The test set models were also used to evaluate certain steps of the modelling protocol. The effect of Rosetta energy minimization on model accuracy and the use of Rosetta energy and DOPE Z-score values to identify accurate models were investigated. Several complexes were then modelled using the best available templates according to criteria informed by the previous results. A website was built that allows a user to download any of the metrics or models produced in the study. This website is accessible at http://rubi.ru.ac.za/cpmdb

Orientador: Gisele Faria / Resumo: As cistatinas são inibidores naturais de cisteíno proteases e desempenham um papel crítico no controle da degradação de proteínas. As cistatinas de plantas, dentre elas a cistatina produzidas de forma recombinante a partir da Citrus sinensis (CsinCPI-2), têm mostrado potencial para serem usadas em diferentes abordagens terapêuticas. Os objetivos deste estudo foram avaliar a citocompatibilidade e o efeito da fitocistatina CsinCPI-2 sobre a proliferação, migração e diferenciação osteogênica de células da polpa dental humana (hDPCs). Previamente à realização dos ensaios, as hDPCs foram caracterizadas quanto a expressão de marcadores de células tronco mesenquimais por meio de citometria de fluxo. hDPCs expostas à CsinCPI-2 e não expostas (controle) foram avaliadas quanto à viabilidade celular por meio dos ensaios de metiltiazol tetrazólio (MTT) e alamar blue, apoptose por meio de citometria de fluxo, atividade da fosfatase alcalina (ALP) por meio do cálculo da liberação de timolfitaleína, produção de nódulos mineralizados por meio de coloração com vermelho de alizarina, migração celular pelo ensaio de transwell, proliferação por meio de ensaio de incorporação de bromodeoxiuridina (BrdU) e expressão gênica de proteína morfogenética óssea 2 (BMP-2), fator de transcrição osteogênica (RUNX2), fosfatase alcalina (ALP), osteocalcina (OC), sialoproteína óssea (BSP) e proteína da matriz da dentina (DMP-1) por meio da reação da polimerase em cadeia em tempo real quantitativa (qPCR).Os dad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cystatins are natural inhibitors of cysteine proteases and play a critical role in controlling protein degradation. Plant cystatins, among them a cystatins recombinantly produced from Citrus sinensis (CsinCPI-2), have shown potential to be used in different therapeutic approaches. The objectives of this study were to evaluate the cytocompatibility and effect of phytocystatin CsinCPI-2 on the proliferation, migration and osteogenic differentiation of human dental pulp cells (hDPCs). Previously to the performing the assays, hDPCs were characterized for the expression of mesenchymal stem cell markers by flow cytometry. hDPCs exposed to CsinCPI-2 and unexposed (control) were evaluated from cell viability by the methylthiazole tetrazolium (MTT) and alamar blue assays, apoptosis by flow cytometry, alkaline phosphatase (ALP) activity by calculation of thymolphtalein release, production of mineralized nodules by alizarin red staining, migration cells by Transwell assay, proliferation by bromodeoxyridine (BrdU) incorporation assay and gene expression of bone morphogenetic protein 2 (BMP-2), transcription factor (RUNX2), alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (OC), bone sialoprotein (BSP) and dentine matrix protein -1 (DMP-1) by quantitative real time PCR (qPCR). The data were analyzed by one-way analysis of variance (ANOVA) and Turkey post-test, two-way ANOVA and Bonferroni post-test or t-test (α = 0.05). hDPCs used in assays showed positive marking for mesenchymal stem cells (CD105,... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

INTRODUÇÃO: A cistatina C sérica apresenta boa correlação com o ritmo de filtração glomerular (RFG) e não é influenciada pela função renal materna, podendo ser um bom marcador da função renal, especialmente na 1ª semana de vida. Porém, não há valores normais definidos para o período neonatal. OBJETIVO: Determinar a evolução dos níveis séricos da cistatina C (Cis) em recém-nascidos (RN) de termo saudáveis ao longo do 1º mês de vida. MÉTODOS: Estudo prospectivo. Inclusão: idade gestacional (IG) entre 37 e 41 6/7 semanas; peso de nascimento adequado para a IG; Apgar 1º min > 7; mães sem insuficiência renal, hipertensão arterial ou uso de drogas que interferissem com a função renal do feto. Exclusão: má-formação major ou renal; ausência de diurese nas primeiras 12 horas de vida ou diurese no 2° ou 3° dia < 1mL/kg/h; perda de peso > 10% até o 3º dia; pressão arterial elevada; insuficiência cardíaca ou renal, fototerapia, infecção, alteração da função tireoidiana ou uso de drogas vasoativas ou diuréticos. Dosagens laboratoriais: Cis (mg/L) por imunonefelometria e creatinina sérica (Cr) (mg/dL) pelo método de Jaffé, da mãe e do RN, no cordão umbilical (d0) e com 3 (d3), 7 (d7) e 28 (d28) dias. O clearance de creatinina foi estimado pela fórmula de Schwartz (mL/min/1,73m2). Comparação de médias pelo teste ANOVA one way para medidas repetidas e teste de Tukey. Análise de correlação pelo coeficiente de correlação de Pearson. Nível de significância=0,05. RESULTADOS: Preencheram os critérios de inclusão 35 RN e, destes, 14 foram excluídos. Foram analisados 21 RN. Mães: idade (média): 29,1 anos. Os RN apresentaram IG (mediana) de 39,4 sem e peso (média) de 3224 g; 57,1% eram do sexo masculino. A diurese (média) no 2° e no 3° dias foi 2,1 e 2,4 mL/kg/h, respectivamente, e a perda de peso máxima (média) foi 7,1% e ocorreu com 2 dias (mediana). Dos 21 RN, 17 (81%) receberam aleitamento materno exclusivo e 13 (61,9%) tiveram icterícia. Cis (média±dp): mãe: 1,00±0,20; RN: d0=1,70±0,26; d3=1,51±0,19; d7=1,54±0,15; d28=1,51±0,15. Cr (média±dp): mãe: 0,63±0,15; RN: d0=0,63±0,15; d3=0,48±0,16; d7=0,37±0,10; d28=0,26±0,05. Os valores de Cr não foram diferentes dos encontrados na literatura para RN de termo saudáveis. A Cr da mãe não foi diferente de d0, enquanto a Cis materna foi menor do que em d0 (p<0,001). A Cr no RN diminuiu com o tempo (d0xd3, p=0,007; d3xd7, p=0,002; d7xd28, p<0,001). A Cis diminuiu de d0 para d3 (p=0,004) e manteve-se estável após d3. A Cis e a Cr da mãe apresentaram correlação positiva. Houve correlação positiva entre Cis e Cr em d3 e d28. CONCLUSÕES: A Cis do RN, que ao nascimento foi maior do que a da mãe, reduziu-se até d3 e permaneceu estável até d28. A Cis e a Cr da mãe correlacionaram-se entre si. Em d3 e d28 houve correlação entre Cis e Cr do RN. / INTRODUCTION: Cystatin C (Cys) is a good marker of glomerular filtration rate (GFR), and is not affected by maternal renal function. OBJECTIVE: To determine the levels of Cys in healthy term newborns (NB), along the 1st month of life. METHODS: Cohort study. Inclusion: term NB with appropriate weight; 1st min Apgar > 7; mother without renal failure or drugs that could affect fetal GFR. Exclusion: malformations; hypertension; no diuresis in the first 12 hours of life or oliguria in the first three days; excessive weight loss until the third day; heart or kidney failure; thyroid dysfunction; use of diuretics, vasoactive drugs or any drug that could affect renal function. Cys (mg/L) and creatinine (Cr) (mg/dL) were determined in the mother (Mo) and in the NB at birth (d0), 3rd (d3), 7th (d7) and 28th (d28) days. Creatinine clearance was estimated in the NB using the Schwartz formula. Statistics: one way ANOVA and Pearsons correlation tests. Significance level=0.05. RESULTS: Data from 21 NB were obtained. Mothers: age (mean): 29.1 years. NB: gestational age (median): 39.4 weeks; birth weight (mean): 3224 g; 57.1% were male. Diuresis (mean) in the 2nd and 3rd days of life: 2.1±0.6 and 2.4±0.7 mL/kg/h, respectively. Maximum weight loss (mean): 7.1%; it occurred in the 2nd day (median). 81% of the NB were breastfed and 61.9% had jaundice. Cys (mean±sd): Mo: 1.00±0.20; NB: d0=1.70±0.26; d3=1.51±0.19; d7=1.54±0.15; d28=1.51±0.15. Cr (mean±sd): Mo: 0.63±0.15; NB: d0=0.63±0.15; d3=0.48±0.16; d7=0.37±0.10; d28=0.26±0.05. These Cr values are similar to those found in the literature for healthy term NB. Mo Cr was not different from d0 Cr, while Mo Cys was lower than d0 Cys (p<0.001). NB Cr decreased (d0xd3, p=0.007; d3xd7, p=0.002; d7xd28, p<0.001) along the time, while Cys decreased from d0 to d3 (p=0.004). Correlations were obtained between Mo Cr and Mo Cys, as well as d3 Cr and d3 Cys, d28 Cr and d28 Cys. CONCLUSIONS: At birth, NB Cys values were higher than Mo Cys values. NB Cys decreased from d0 to d3 and remained stable from d3 to d28. Mo Cys correlated with Mo Cr and NB Cys correlated with NB Cr at d3 and d28.

INTRODUÇÃO: A cistatina C sérica apresenta boa correlação com o ritmo de filtração glomerular (RFG) e não é influenciada pela função renal materna, podendo ser um bom marcador da função renal, especialmente na 1ª semana de vida. Porém, não há valores normais definidos para o período neonatal. OBJETIVO: Determinar a evolução dos níveis séricos da cistatina C (Cis) em recém-nascidos (RN) de termo saudáveis ao longo do 1º mês de vida. MÉTODOS: Estudo prospectivo. Inclusão: idade gestacional (IG) entre 37 e 41 6/7 semanas; peso de nascimento adequado para a IG; Apgar 1º min > 7; mães sem insuficiência renal, hipertensão arterial ou uso de drogas que interferissem com a função renal do feto. Exclusão: má-formação major ou renal; ausência de diurese nas primeiras 12 horas de vida ou diurese no 2° ou 3° dia < 1mL/kg/h; perda de peso > 10% até o 3º dia; pressão arterial elevada; insuficiência cardíaca ou renal, fototerapia, infecção, alteração da função tireoidiana ou uso de drogas vasoativas ou diuréticos. Dosagens laboratoriais: Cis (mg/L) por imunonefelometria e creatinina sérica (Cr) (mg/dL) pelo método de Jaffé, da mãe e do RN, no cordão umbilical (d0) e com 3 (d3), 7 (d7) e 28 (d28) dias. O clearance de creatinina foi estimado pela fórmula de Schwartz (mL/min/1,73m2). Comparação de médias pelo teste ANOVA one way para medidas repetidas e teste de Tukey. Análise de correlação pelo coeficiente de correlação de Pearson. Nível de significância=0,05. RESULTADOS: Preencheram os critérios de inclusão 35 RN e, destes, 14 foram excluídos. Foram analisados 21 RN. Mães: idade (média): 29,1 anos. Os RN apresentaram IG (mediana) de 39,4 sem e peso (média) de 3224 g; 57,1% eram do sexo masculino. A diurese (média) no 2° e no 3° dias foi 2,1 e 2,4 mL/kg/h, respectivamente, e a perda de peso máxima (média) foi 7,1% e ocorreu com 2 dias (mediana). Dos 21 RN, 17 (81%) receberam aleitamento materno exclusivo e 13 (61,9%) tiveram icterícia. Cis (média±dp): mãe: 1,00±0,20; RN: d0=1,70±0,26; d3=1,51±0,19; d7=1,54±0,15; d28=1,51±0,15. Cr (média±dp): mãe: 0,63±0,15; RN: d0=0,63±0,15; d3=0,48±0,16; d7=0,37±0,10; d28=0,26±0,05. Os valores de Cr não foram diferentes dos encontrados na literatura para RN de termo saudáveis. A Cr da mãe não foi diferente de d0, enquanto a Cis materna foi menor do que em d0 (p<0,001). A Cr no RN diminuiu com o tempo (d0xd3, p=0,007; d3xd7, p=0,002; d7xd28, p<0,001). A Cis diminuiu de d0 para d3 (p=0,004) e manteve-se estável após d3. A Cis e a Cr da mãe apresentaram correlação positiva. Houve correlação positiva entre Cis e Cr em d3 e d28. CONCLUSÕES: A Cis do RN, que ao nascimento foi maior do que a da mãe, reduziu-se até d3 e permaneceu estável até d28. A Cis e a Cr da mãe correlacionaram-se entre si. Em d3 e d28 houve correlação entre Cis e Cr do RN. / INTRODUCTION: Cystatin C (Cys) is a good marker of glomerular filtration rate (GFR), and is not affected by maternal renal function. OBJECTIVE: To determine the levels of Cys in healthy term newborns (NB), along the 1st month of life. METHODS: Cohort study. Inclusion: term NB with appropriate weight; 1st min Apgar > 7; mother without renal failure or drugs that could affect fetal GFR. Exclusion: malformations; hypertension; no diuresis in the first 12 hours of life or oliguria in the first three days; excessive weight loss until the third day; heart or kidney failure; thyroid dysfunction; use of diuretics, vasoactive drugs or any drug that could affect renal function. Cys (mg/L) and creatinine (Cr) (mg/dL) were determined in the mother (Mo) and in the NB at birth (d0), 3rd (d3), 7th (d7) and 28th (d28) days. Creatinine clearance was estimated in the NB using the Schwartz formula. Statistics: one way ANOVA and Pearsons correlation tests. Significance level=0.05. RESULTS: Data from 21 NB were obtained. Mothers: age (mean): 29.1 years. NB: gestational age (median): 39.4 weeks; birth weight (mean): 3224 g; 57.1% were male. Diuresis (mean) in the 2nd and 3rd days of life: 2.1±0.6 and 2.4±0.7 mL/kg/h, respectively. Maximum weight loss (mean): 7.1%; it occurred in the 2nd day (median). 81% of the NB were breastfed and 61.9% had jaundice. Cys (mean±sd): Mo: 1.00±0.20; NB: d0=1.70±0.26; d3=1.51±0.19; d7=1.54±0.15; d28=1.51±0.15. Cr (mean±sd): Mo: 0.63±0.15; NB: d0=0.63±0.15; d3=0.48±0.16; d7=0.37±0.10; d28=0.26±0.05. These Cr values are similar to those found in the literature for healthy term NB. Mo Cr was not different from d0 Cr, while Mo Cys was lower than d0 Cys (p<0.001). NB Cr decreased (d0xd3, p=0.007; d3xd7, p=0.002; d7xd28, p<0.001) along the time, while Cys decreased from d0 to d3 (p=0.004). Correlations were obtained between Mo Cr and Mo Cys, as well as d3 Cr and d3 Cys, d28 Cr and d28 Cys. CONCLUSIONS: At birth, NB Cys values were higher than Mo Cys values. NB Cys decreased from d0 to d3 and remained stable from d3 to d28. Mo Cys correlated with Mo Cr and NB Cys correlated with NB Cr at d3 and d28.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6416.pdf: 7607633 bytes, checksum: e01f0f58b2ee5032346c3d9eae67f4ac (MD5) Previous issue date: 2014-09-05 / Financiadora de Estudos e Projetos / Cystatins are reversible inhibitors of cysteine peptidases. The cystatins found in plants are called phytocystatins, and represent an independent subfamily of the cystatins superfamily. Some studies have reported significant pleiotropic effects for recombinant cystatins expressed in transgenic plants, notably including tolerance phenotypes against attack of herbivorous arthropods and pathogens, and against abiotic and biotic stresses. Besides, the recombinant sugarcane cystatin, CaneCPI-4, showed potential to inhibit development of melanoma cells. Thus, the study and knowledge about phytocystatins, become interesting from agricultural and medicinal point of view. The sugarcane genome project (SUCEST) allowed the identification of about 25 putative cystatins in this plant, which were gathered in 4 groups, by phylogenetic analysis. In this study, we propose a new classification for the putative cystatins found in the SUCEST database. Furthermore, we describe the heterologous expression, purification and characterization of two novel sugarcane cystatins, CaneCPI-5 and CaneCPI-6, which showed different inhibitory activities against human cathepsin B. While protein CaneCPI-6 was not able to inhibit this enzyme efficiently (Ki = 1,83 &#956;M), the protein CaneCPI-5 showed a good inhibitory capacity against the same enzyme (Ki = 6,87 nM). The CaneCPI-5 cystatin was also analyzed against recombinant cathepsin L from the beetle Sphenophorus levis (rSl-CathL), and showed a good inhibitory capacity against this enzyme (Ki = 0,059 nM). Finally, both of proteins, CaneCPI-5 and CaneCPI-6, proved to be thermostable when kept at 100°C for 30 minutes. / Cistatinas são inibidores reversíveis de cisteíno-peptidases. As cistatinas encontradas em plantas são denominadas fitocistatinas, e constituem uma subfamília independente da superfamília das cistatinas. Alguns estudos têm relatado importantes efeitos pleiotrópicos para cistatinas recombinantes expressas em plantas transgênicas, incluindo principalmente, fenótipos com tolerância ao ataque de artrópodes herbívoros e patógenos, e contra estresses bióticos e abióticos. Ademais, a cistatina recombinante de cana-de-açúcar, CaneCPI-4, apresentou potencial para inibir o desenvolvimento de células de melanoma. Dessa maneira, o estudo e conhecimento sobre as fitocistatinas, tornam-se interessantes do ponto de vista agrícola e na saúde. O projeto genoma da cana-de-açúcar (SUCEST) possibilitou a identificação de 25 possíveis cistatinas nesta planta, que foram reunidas em 4 grupos, por meio de análises filogenéticas. Nesse trabalho propomos uma reanálise das prováveis cistatinas encontradas no banco de dados do SUCEST. Além disso, descrevemos a expressão heteróloga, purificação e caracterização de duas novas cistatinas de cana-de-açúcar, CaneCPI-5 e CaneCPI-6, as quais apresentaram diferenças na ação inibitória contra a catepsina B humana. Enquanto a proteína CaneCPI-6 não foi capaz de inibir esta enzima de forma eficiente (Ki = 1,83 &#956;M), a proteína CaneCPI-5 apresentou um bom poder inibitório contra a mesma enzima (Ki = 6,87 nM). A cistatina CaneCPI-5 foi analisada também contra a catepsina L recombinante do inseto Sphenophorus levis (rSl-CathL), e apresentou alto poder inibitório contra essa enzima (Ki = 0,059 nM). Por fim, ambas as proteínas, CaneCPI-5 e CaneCPI-6, mostraram-se termoestáveis quando mantidas à 100°C durante 30 minutos.

A cistatina C sérica tem sido apontada como um marcador de filtração glomerular. Neste trabalho realizamos a validação de um método específico e automatizado, a imunonefelometria, mensurando os níveis séricos de cistatina C através do nefelômetro da empresa Behring (BN II). O ensaio perfaz o intervalo de referência de 0.23-7.25 mg/L, até sete vezes acima dos limites considerados normais. A imprecisão intra e interensaio foram de 8,73% and 5,38% , respectively. A recuperação analítica de cistatina C após adição de controle foi entre 86,7 % e 98% (média 92,3%). A estabilidade da cistatina C a temperatura ambiente, sob refrigeração e sob congelamento foi testada. A perda mais significativa foi encontrada nas amostras armazenadas sob temperatura ambiente, onde foi perdido até 10% da concentração inicial. Nós encontramos CV de 14,79 % para sensibilidade analítica. Durante todo o processo nós comparamos os resultados com o controle de qualidade e obtivemos bons resultados. Depois destes testes, nós comparamos as correlações em 3 grupos de pacientes transplantados renais sob diferentes esquemas de imunossupressão (n=197) [azatioprina (n=36), micofenolato mofetil (n=131) ou sirolimus (n=30)], entre as equações de estimativa de filtração glomerular( Cockroft Gault, Nankivell e MDRD) e cistatina C sérica ou creatinina sérica. Nós concluimos que o ensaio nefelométrico cistatina C pode perfeitamente ser adequado à nossa rotina laboratorial e as correlações entre creatinina sérica e as diferentes equações de estimativa de filtração glomerular são melhores do que quando comparamos as mesmas à cistatina C nos 3 grupos independentemente da terapia imunossupressora utilizada. / Serum cystatin C has been suggested as a marker of glomerular filtration rate (GFR). We describe a validation of an automated and rapid particle-enhanced nephelometric immunoassay (PENIA) for measuring serum cystatin C on the Behring nephelometer (BN II). The assay covers the range 0.23-7.25 mg/L, up to seven times the upper limit of normal. The intra- and interassay imprecision are 8,73% and 5,38% , respectively. The analytical recovery by cystatin C addition between 86,7% and 98% (mean 92,3%). The estability of cistatyn C room temperature, refrigerator temperature and frozen temperature was tested. The higher lost was when we stored sample in a room temperature, when we can lost until 10% of initial concentration. We found CV of 14,79 % for analytical sensibility. During all the process we compare the results with a quality control and we obtained good results. After this validation, we have compared the correlation, in 3 different patients groups after renal transplant (n=197) were using different imunossupressors [azatioprine (n=36), micophenolic acid (n=131) or sirolimus (n=30), between glomerular filtration equations (Cockroft Gault, Nankivell and MDRD) and cystatin C or creatinine serum levels. We concluded cystatin C assay may be perfectly used in our laboratory and the correlation between serum creatinine and glomerular filtration equations are better then cystatin C at the same groups independent of imunosupressor therapy.

Tick saliva contains a lot of molecules with antihemostatic and immunosupressive effects.The goal of this thesis is to test the effects of tick salivary cystatins from I.ricinus and I.scapularis on TLR - induced maturation of bone-marrow derived dendritic cells and production of chosen cytokines. Over all, the supressive effect of tick cystatins was observed in relation to TLR-induced maturation of DC. In addition, cystatins enhanced production of IL-10 and attenuated induction of IL-12 cytokines.

A cistatina C sérica tem sido apontada como um marcador de filtração glomerular. Neste trabalho realizamos a validação de um método específico e automatizado, a imunonefelometria, mensurando os níveis séricos de cistatina C através do nefelômetro da empresa Behring (BN II). O ensaio perfaz o intervalo de referência de 0.23-7.25 mg/L, até sete vezes acima dos limites considerados normais. A imprecisão intra e interensaio foram de 8,73% and 5,38% , respectively. A recuperação analítica de cistatina C após adição de controle foi entre 86,7 % e 98% (média 92,3%). A estabilidade da cistatina C a temperatura ambiente, sob refrigeração e sob congelamento foi testada. A perda mais significativa foi encontrada nas amostras armazenadas sob temperatura ambiente, onde foi perdido até 10% da concentração inicial. Nós encontramos CV de 14,79 % para sensibilidade analítica. Durante todo o processo nós comparamos os resultados com o controle de qualidade e obtivemos bons resultados. Depois destes testes, nós comparamos as correlações em 3 grupos de pacientes transplantados renais sob diferentes esquemas de imunossupressão (n=197) [azatioprina (n=36), micofenolato mofetil (n=131) ou sirolimus (n=30)], entre as equações de estimativa de filtração glomerular( Cockroft Gault, Nankivell e MDRD) e cistatina C sérica ou creatinina sérica. Nós concluimos que o ensaio nefelométrico cistatina C pode perfeitamente ser adequado à nossa rotina laboratorial e as correlações entre creatinina sérica e as diferentes equações de estimativa de filtração glomerular são melhores do que quando comparamos as mesmas à cistatina C nos 3 grupos independentemente da terapia imunossupressora utilizada. / Serum cystatin C has been suggested as a marker of glomerular filtration rate (GFR). We describe a validation of an automated and rapid particle-enhanced nephelometric immunoassay (PENIA) for measuring serum cystatin C on the Behring nephelometer (BN II). The assay covers the range 0.23-7.25 mg/L, up to seven times the upper limit of normal. The intra- and interassay imprecision are 8,73% and 5,38% , respectively. The analytical recovery by cystatin C addition between 86,7% and 98% (mean 92,3%). The estability of cistatyn C room temperature, refrigerator temperature and frozen temperature was tested. The higher lost was when we stored sample in a room temperature, when we can lost until 10% of initial concentration. We found CV of 14,79 % for analytical sensibility. During all the process we compare the results with a quality control and we obtained good results. After this validation, we have compared the correlation, in 3 different patients groups after renal transplant (n=197) were using different imunossupressors [azatioprine (n=36), micophenolic acid (n=131) or sirolimus (n=30), between glomerular filtration equations (Cockroft Gault, Nankivell and MDRD) and cystatin C or creatinine serum levels. We concluded cystatin C assay may be perfectly used in our laboratory and the correlation between serum creatinine and glomerular filtration equations are better then cystatin C at the same groups independent of imunosupressor therapy.