Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da endotoxina associada ao formocresol em tecidos periapicais de dentes de macaco, por meio de avaliação histológica. Foram utilizados 36 pré-molares de 3 macacos, que após a abertura coronária e biopulpectomia, foram preenchidos com diferentes medicamentos: Grupo I (12 dentes): mistura de endotoxina/formocresol; Grupo II (15 dentes): endotoxina e curativo de formocresol; Grupo III (controle - 9 dentes): endotoxina. Decorridos 55 dias, os animais foram sacrificados, as peças removidas e submetidas a processamento histológico. Os resultados demonstraram que a associação endotoxina e formocresol, sendo ela na forma de mistura (grupo I) ou por introdução de endotoxina no canal e curativo de formocresol (grupo II) ocasionaram desenvolvimento de inflamação periapical severa, enquanto que a endotoxina sozinha (grupo III) provocou reação periapical moderada. De acordo com a análise estatística não houve diferença nos resultados entre o grupo I e grupo II. E foi observada diferença estatísticamente significante entre os grupos experimentais (grupo I e II) e o grupo controle (grupo III). / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of endotoxin associated with formocresol on the periapical tissues from monkeys teeth, by using histological evaluation. Thirty-six premolar teeth from 3 monkeys have been used, and after the coronary opening and pulpectomy, they were filled with different medicaments: Group I (12 teeth): endotoxin associated with formocresol; Group II (15 teeth): endotoxin and cotton pullet of formocresol; Group III (control - 9 teeth): endotoxin. After 55 days, the animals were sacrificed and the teeth removed and then submitted to histological processing. The results obtained shown severe inflammation on periapical tissue on group I and on group II, and group III shown moderate inflammation on periapical tissue. / Orientador: Lizeti Toledo de Oliveira Ramalho / Coorientador: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Denise Madalena Palomaria Spolidorio / Banca: Lourdes Aparecida Martins dos Santos Pinto / Banca: Maria Cristina Borsatto / Banca: Luis José Floriam / Doutor

Orientador: Silvio Issáo Myaki / Banca: Maria Naira Pereira Friggi / Banca: Yasmin Rodarte Carvalho / Resumo: O objetivo deste estudo in vitro foi analisar ao microscópio de luz polarizada o comportamento do esmalte decíduo adjacente a quatro materiais restauradores, após um desafio desmineralizante. Foram realizados preparos cavitários de Classe V nas faces vestibulares de quarenta molares decíduos hígidos, os quais foram aleatoriamente divididos em quatro grupos experimentais (n=10) de acordo com os seguintes materiais: uma resina composta modificada por poliácidos (Dyract AP), uma resina composta híbrida (Z-250), um cimento de ionômero de vidro modificado por resina (Vitremer) e um cimento de ionômero de vidro convencional (Fuji IX GP Fast). Após o polimento das restaurações, os espécimes foram impermeabilizados e submetidos a um desafio desmineralizante representado pela imersão dos espécimes em gelatina acidificada (pH4,5) em temperatura ambiente por 14 dias. Após este período, os espécimes foram incluídos em resina e seccionados longitudinalmente obtendo-se secções de 100µm de espessura, que foram embebidas em água destilada para análise ao microscópio de luz polarizada. Os resultados obtidos revelaram formação de lesões artificiais de cárie em todos os grupos e os valores de profundidade da lesão externa, obtidos por meio de análise histomorfométrica, foram submetidos aos testes estatísticos de Kruskal-Wallis e Dunn (5%) constatando-se que o grupo do cimento de ionômero de vidro exibiu profundidade da lesão externa significantemente menor do que o grupo restaurado com resina composta. Concluiu-se que a desmineralização do esmalte decíduo pode ser influenciada pelo uso de diferentes materiais restauradores / Abstract: The aim of this in vitro study was to evaluate by polarized light microscopy the development of artificial carious lesions in primary teeth adjacent to different restorative materials. Buccal class V restorations were prepared in 40 deciduous human molars with margins in enamel which were ramdonly divided into four groups (n=10): a poliacid modified resin composite (Dyract AP); a hybrid resin composite (Z-250); a resin-modified glass ionomer cement (Vitremer) and a conventional glass ionomer cement (Fuji IX GP Fast). After the restorative procedures, all teeth surfaces were coated with nail polish, except for the restoration area and 1 mm rim of tooth structure. ln order to induce artificial carious lesions, the specimens were immersed into an acidified gel (pH 4,5) for 14 days at room temperature. After this, the specimens were prepared for polarized light microscopy in an imbibition's media of water. The results showed the development of caries lesions in all groups. The data was analysed by Kruskal-Wallis and Dunn's test (5%) and the specimens restored with glass ionomer cement exhibited- the depth of caries significantly lower than the group restored with composite resin. lt was concluded that the restorative material can influence the demineralization of primary enamel / Mestre

A técnica da remoção seletiva de tecido cariado (RSTC) para lesões de cárie profundas em dentina de dentes decíduos e permanentes, já é consenso na literatura e é sustentada por pesquisas que demonstram excelentes resultados clínicos, radiográficos e microbiológicos. No entanto, a longevidade de restaurações adesivas realizadas após a RSTC, principalmente na dentição decídua, vem gerando algumas dúvidas e preocupações quanto ao seu desempenho, merecendo esclarecimentos. O objetivo deste estudo randomizado, controlado e multicêntrico foi comparar a taxa de sucesso de restaurações adesivas realizadas em dentes decíduos posteriores após a remoção total (RTTC) ou seletiva (RSTC) de tecido cariado ao longo de 30 meses. Métodos: Crianças de 4 a 8 anos de idade portadoras de pelo menos duas lesões cavitadas ativas em metade interna de dentina (metade interna da dentina na avaliação do RX interproximal e com pelo menos 1mm de dentina separando a lesão cariosa da polpa) e que se enquadrassem nos critérios de inclusão e exclusão participaram do estudo. Para cada criança os dentes (no mínimo dois, mas podendo ser mais) foram aleatoriamente divididos de acordo com os seguintes tratamentos: RTTC (grupo controle) ou RSTC (grupo teste). Nos casos em que ocorreu exposição pulpar, o dente foi devidamente tratado e excluído da amostra, os dados em relação ao tipo de remoção de tecido cariado que levou à exposição foram coletados. Quatro instituições participaram do estudo (Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Universidade de São Paulo; Universidade Peruana Cayetano Heredia; Universidade Internacional do Equador), resultando em quatro odontopediatras que realizaram os procedimentos de remoção de tecido cariado e posterior restauração em resina composta, avaliadas clinicamente no baseline, 6, 12, 18, 24 e 30 meses. Todos os procedimentos foram realizados sob anestesia local e isolamento absoluto. Características sociodemográficas foram coletadas no baseline e características clínicas como índice ceod/CPOD, índice de placa visível (IPV) e índice de sangramento gengival (ISG) foram coletados em todos os períodos de acompanhamento. Em todos os momentos experimentais foram avaliados os aspectos clínicos das restaurações por um examinador cego e calibrado através do índice FDI adaptado. Para determinar as taxas de sucesso das restaurações de resina composta foram geradas curvas de sobrevida com o estimador Kaplan-Meyer para cada grupo avaliado, assim como as taxas de falha anual das restaurações. O modelo de regressão de Cox com falhas compartilhadas foi realizado para avaliar diferenças nas taxas de sobrevida das restaurações de acordo com o tratamento, instituição e características clínicas e demográficas da amostra. Resultados: Cento e seis crianças (51 meninos e 55 meninas) colaboraram com 278 dentes submetidos a restaurações adesivas, 137 após RTTC e 141 após RSTC. Oito exposições pulpares ocorreram no grupo da RTTC e quatro no grupo da RSTC. A taxa global de sucesso das restaurações foi 87,1% (85,4% para RTTC e 88,7% para RSTC) e o tempo médio de sobrevida foi de 30 meses. A taxa anual de falha foi de 7% após 24 meses de acompanhamento. Não houve diferença no risco de falha (TR) de acordo com o grupo de tratamento (TR 0,75; IC 95%: 0,38-1,46) e instituição (USP TR 0,44; IC 95%: 0,94-2,09; PERU TR 0,92; IC 95%: 0,26-3,19 EQUADOR TR 1,39; IC 95%: 0,45-4,28). Foram encontradas observações análogas em relação a todas as variáveis clínicas e demográficas. Conclusões: As restaurações adesivas realizadas em dentes decíduos com lesões cavitadas profundas em dentina apresentam sobrevida satisfatória após 33 meses de acompanhamento, independentemente da técnica realizada para remoção de tecido cariado. / The selective caries removal technique (SCR) for active deep carious lesions in deciduous and permanent teeth is already a consensus in the literature and is supported by studies that demonstrate excellent clinical, radiographic and microbiological results. However, the longevity of restorations performed after the SCR, mainly in primary dentition, has generated some doubts and concerns about its performance, deserving clarification. This multicenter study aimed to compare the success rate of adhesive restorations performed on posterior deciduous teeth after total or selective caries removal over 30 months Methods: Children between 4 - 8 years old with at least two active cavitated lesions in deep dentin (inner half of the dentin in the evaluation of the interproximal RX and with at least 1mm of dentin separating the carious lesion of the pulp) and that met the inclusion and exclusion criteria participated in the study. For each child, teeth were randomized and submitted to one of the treatment groups: total caries removal (TCR - control group) or SCR (test group). Children could have more than 2 teeth included. In cases of pulp exposure, data were analyzed and the tooth was excluded from the sample. Four institutions participated in the study (Federal University of Rio Grande do Sul, Peruvian University Cayetano Heredia and International Universidad of Ecuador), resulting in four pediatric dentists who performed the caries removal procedures and subsequent restorations in composite resin. Clinical evaluation was performed at baseline, 6, 12, 18, 24 and 30 months. All procedures were performed under local anesthesia and rubber dam use. Sociodemographic characteristics were collected at the baseline and clinical characteristics as dmft and visible plaque and gingival bleeding index were collected in all follow-up periods. Radiographs were taken only at baseline and restorations were clinically assessed at baseline, 6, 12, 18, 24 and 33 months by a blinded, trained and calibrated operator in each institution. The characteristics of the restorations were recorded according to an adaptation of the FDI criteria. Survival estimates for restoration longevity were evaluated using the Kaplan-Meier method. We also estimated the annual failure rate of the restorations. Cox regression model with shared frailty was performed to assess differences in survival rates of the restoration according to the intervention treatment, institution and clinical and demographic characteristics of the sample. Results: one hundred and six children (51 boys and 55 girls) collaborated with 278 teeth submitted to adhesive restorations (137 after TCR and 141 after SCR). Pulp exposure occurred in eight teeth (2.8%) allocated to TCR, and in four (1.4%) allocated to SCR group. The overall success rate of restorations was 87.1% (85.4% for TCR and 88.7% for SCR) and mean survival time was 30.3 months. The annual failure rate was 7% after 24 months of follow-up. There were no differences in the risk of failure according to the treatment group (HR 0.75;95%CI:0.38-1.46) and institution (USP HR 0.44;95%CI:0.94-2.09; PERU HR 0.92;95%CI:0.26-3.19; ECUADOR HR 1.39;95%CI:0.45-4.28). Analogous observations were found regarding all the clinical and demographic variables. Conclusions: Composite restorations of active deep carious lesions performed in posterior primary teeth show satisfactory survival of 87.1% after 33 months of follow-up, regardless of the technique performed for carious tissue removal.

O objetivo deste estudo foi avaliar a resistência de união (RU) do esmalte e da dentina decídua após desafio erosivo utilizando sistemas adesivos convencionais e autocondicionantes. Noventa e seis molares decíduos foram seccionados mesio-distalmente para obtenção de blocos de esmalte, foram embebidos em resina epóxi e polidos com lixas de carbeto de silício (600, 1200, 2400 e 4000). As amostras foram randomizadas e divididas entre os 4 sistemas adesivos utilizados: SB (Adper Single Bond 2), SBU (Single Bond Universal), OBFL (Optibond FL) e BF (Bond Force). Metade das amostras (grupo teste, n=48) foram submetidas a desafio erosivo/abrasivo (50 mL de Coca-Cola®, pH 2,6, 1 min, 4x ao dia, 5 dias, seguido de escovação por 1 min com dentifrício fluoretado, NaF 1450 ppm e saliva artificial). A outra metade dos blocos (grupo controle) foi mantida imersa em saliva artificial. Em seguida foram realizadas restaurações de resina flow (Tetric Flow) utilizando matrizes de polivinil siloxano com diâmetro de 0,9mm e 1mm de altura. As amostras foram colocadas na máquina de ensaio universal e foi aplicada força de cisalhamento com velocidade de 1,0mm/min até que a fratura ocorresse. Os mesmos blocos tiveram suas superfícies de dentina expostas, em seguida, as mesmas etapas foram realizadas (restaurações e RU). Foram utilizados os testes ANOVA de duas vias e Tukey (p=0,05). No esmalte, os grupos teste e controle não apresentaram diferença estatística, independentemente dos sistemas adesivos utilizados. Na dentina, o BF apresentou melhores valores de no grupo teste (p=0,04). O fator adesivo foi significativo na análise fatorial (p<0,001) assim como a interação entre desafio erosivo/abrasivo e os sistema adesivo utilizado (p=0,046). Somente o substrato dentinário teve influência significativa na RU (p=0,395). Conclui-se que a RU ao esmalte decíduo não foi afetada pelo desafio erosivo/abrasivo para todos os sistemas adesivos utilizados, enquanto a RU na dentina decídua somente foi afetada pelo sistema adesivo autocondicionante contendo flúor. / The aim of this in vitro study was to evaluate the microshear bond strength of four adhesive systems on eroded or sound primary teeth. Methods: Ninety-six primary molars were cut mesio-distally, embedded, ground and polished with SiC papers (600, 1200, 2400 and 4000). Specimens were randomly divided according to 4 adhesive systems: SB (Adper Single Bond2®), SBU (Universal Single Bond®), OBFL (OptibondFL®) and BF (BondForce®). Half of the specimens were exposed to erosive/abrasive challenge, and the other half (control group; n=48) remained immersed in artificial saliva. Erosive challenge consisted of specimen immersion in Coca-Cola® (pH 2.6, 50ml, 1min, 4x, 5 days). Once a day, the specimens were brushed using an electric toothbrush with a slurry (artificial saliva and NaF toothpaste, 1450 ppm) for 1 minute. Polyvinyl siloxane molds with a perforation 0.9 mm in diameter and 1 mm in height were placed over the specimens in order to build restorations with flowable resin composite. The molds were cut with surgical blades and removed to allow for microshear bond strength testing. Bonded specimens were attached to an universal testing machine and a shear load was applied with a steel wire at a crosshead speed of 1.0 mm/min until failure occurred. After the tests in enamel, dentin was exposed and polished to perform the same tests in this substrate. Two-way ANOVA and Tukey tests were performed (p=0.05). Results: No statistically significant difference was found between the eroded and sound enamel for any of the adhesives. BF was statistically significant better in eroded dentin than sound dentin (p=0.04). A factorial analysis indicated that the factor adhesive was significant (p<0.001) as was the interaction between adhesive and erosive tooth wear (p=0.046). Only the dentin substrate had a significant influence on microshear bond strength (p=0.395). Conclusion: Bond strength to primary enamel was not affected by erosive/abrasive challenge for all the adhesives systems, while in primary dentin the bond strength was affected only after the use of self-etch adhesive containing fluoride.

O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

Este estudo teve como objetivo analisar, longitudinalmente, a distância entre a junção cemento-esmalte (JCE) - crista óssea alveolar (COA) e o aspecto da COA em radiografias interproximais de molares decíduos. As radiografias foram digitalizadas e separadas de acordo com as variáveis: grupo etário, momento da avaliação (primeiro e segundo momento), característica radiográfica da superfície proximal (hígida→hígida; hígida→não-hígida; nãohígida→ não-hígida), dente e sistema de atendimento. As mensurações da distância entre a JCE-COA foram realizadas na distal do primeiro molar e/ou na mesial do segundo molar inferior no programa Image Tool. O aspecto radiográfico da COA foi classificado em escores e para sua inspeção foi realizado exame visual da crista na sua totalidade (região 74/75 e 84/85). Como resultados da distância JCE-COA, pôde-se constatar que houve interação entre as seguintes variáveis: avaliação-grupo etário, grupo etáriodente, avaliação-condição radiográfica da superfície proximal e grupo etáriocondição radiográfica da superfície proximal. Observou-se que a distância da JCE-COA aumentou significativamente com o evoluir da idade, principalmente no primeiro molar inferior decíduo. Ainda, houve aumento significativo das médias quando comparado o grupo de superfícies hígidas→hígidas com o de não-hígidas→não-hígidas. Em relação ao aspecto radiográfico da COA, não se obteve associação deste com a condição radiográfica da superfície proximal, bem como com o grupo etário. Desta forma, pode-se concluir que o tempo é um fator relevante para o aumento da distância da JCE-COA e que a existência de superfícies não-hígidas podem representar indicativo de risco à perda óssea alveolar. / The present study is a longitudinal radiographic assessment of the distance between the cemento-enamel junction (CEJ) - alveolar bone crest (ABC) and the aspect of ABC in bitewings of deciduous molar. Radiographs were digitized and divided into age groups, moment of evaluation (first and second), radiographic proximal surface condition (sound→sound; sound→unsound; unsound→unsound), tooth and form of service. The CEJ-ABC distances were measured on the distal site of the first deciduous molar and/or the mesial site of the second lower deciduous molar, using the Image Tool software. For the ABC analysis, the data was regrouped in regions (74/75 and 84/85) and a qualitative assessment by visual inspection was conducted. The results revealed interactions between the following variables: evaluation-age, age-tooth, evaluation-proximal surface condition, and age-proximal surface condition. It has been detected that CEJ-ABC distances have significantly increased with time, particularly in terms of assessment of primary lower first molars. Yet, this increase is greater in unsound when compared to sound surfaces. No relationship was observed between crest score and age groups, as well with the condition of the proximal surface. Therefore, this study suggests that time is a relevant factor in terms of increasing of CEJ-ABC mean distances and that the presence of unsound surfaces might be a sign of risk of alveolar bone loss.

As perdas ósseas representam um desafio à cirurgia reparadora, onde a utilização de diferentes fontes de enxertos ósseos com limitações físicas, químicas e biológicas é frequente. Atualmente, a bioengenharia alia os conhecimentos de diferentes áreas para o estudo de novas formas de produção de tecidos, inclusive para uso em cirurgias reparadoras. O objetivo deste estudo foi associar a nanotecnologia e as células-tronco, para estudar a neoformação óssea na região de defeitos ósseos criados em calota craniana de ratos. Dois estudos foram conduzidos. No primeiro, confeccionaram-se matrizes de nanofibras (scaffolds) a partir do ácido poli (lático-co-glicólico) (PLGA) pela técnica de electrospinning, as quais apresentaram propriedades morfológicas adequadas para seu emprego no estudo. Após, cinco amostras de Stem Cell from Deciduos Tooth (SCDT) de humanos, em processo de rizólise, foram obtidas e cultivadas até atingirem entre 5ª e 7ª passagem, momento no qual foram empregadas no estudo. As SCDT foram semeadas em placas de cultura (grupo controle) e nos scaffolds (grupo teste) para os ensaios de adesão, viabilidade e proliferação celular. Observou-se que a capacidade das SCDT em realizar adesão no grupo teste foi semelhante à sua capacidade de adesão no grupo controle, sem diferença estatística entre os grupos. Verificou-se que as células mantiveram-se viáveis durante todos os dias do experimento (21 dias) nos grupos teste e controle, não apresentando diferença estatística entre os grupos. Em ambos os grupos ocorreu o aumento gradativo da viabilidade celular a partir do inicio do experimento até o 14º dia de cultura, seguido pela sua diminuição quando analisada no 21º dia. O segundo trabalho objetivou avaliar a capacidade da associação scaffolds/SCDT em promover neoformação óssea em ratos. Para isso utilizou-se 15 ratos Wistar, nos quais foram confeccionados defeitos críticos de 8,0 mm de diâmetro nas calotas cranianas. Os animais foram divididos em três grupos experimentais com 5 animais cada: grupo 1 – implante no defeito ósseo de scaffolds; grupo 2 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT; grupo 3 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT que foram mantidas durante 13 dias em meio de diferenciação osteogênica prévio a sua implantação. Decorrido 60 dias pós operatório, foi realizada a análise 10 histométrica, a qual avaliou a quantidade de tecido ósseo formado no interior do defeito produzido Observou-se que a associação scaffold/SCDT mantida em meio osteogênico previamente à implantação apresentou uma maior neoformação óssea em relação aos demais grupos, sendo esta diferença estatisticamente significante. Em vista dos resultados obtidos, conclui-se que, obedecidos os parâmetros utilizados, os scaffolds de PLGA apresentam resultados favoráveis em relação à interação com as SCDT. Ainda, a utilização de meio de diferenciação osteogênico associado ao scafolld/SCDT, prévio a implantação, mostrou que essa associação possui a capacidade de promover neoformação óssea, sendo a sua utilização adequada para o uso na bioengenharia. / Bone loss is a challenge to reconstructive surgery, where the use of different sources of bone grafts with physical, chemical and biological limitations is common. Currently, bioengineering combines knowledge from different fields to study new forms of tissue production, including for use in reconstructive surgery. The aim of this study was to associate nanotechnology and stem cells in relation to the study of bone formation in the area of bone defects created in rat calvaria. Two studies were conducted. Firstly, nanofiber matrices (scaffolds) were made from acid poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) by the electrospinning technique, which showed morphological properties suitable for use in the study. Following this, five samples from Deciduous Tooth Stem Cells (SCDT) from human, in the process of rhizolysis, were obtained and grown until they reached between the 5th and 7th passage, at which point they were used in the study. The SCDT were seeded onto culture plates (control group) and scaffolds (test group) for adhesion assays, cell viability and proliferation. It was observed that the ability of SCDT to adhere in the test group was similar to their ability to adhere in the control group. There was no statistical difference between the groups. It was found that the cells remained viable for every day of the experiment (21 days) in the test and control groups. There was no statistical difference between the groups. In both groups there was a gradual increase in cell viability from the start of the experiment until the 14th day of culture, followed by their decrease when analyzed on day 21. The second study evaluated the ability of the association scaffolds / SCDT to promote new bone formation in rats. For this, 15 Wistar rats were used, in which were induced critical defects of 8.0 mm diameter in the skulls. The animals were divided into three groups of five: group 1 - bone defect of the implant scaffolds, group 2 - implant in the bone defect of scaffolds seeded with SCDT, group 3 - implant in the bone defect of scaffolds that were seeded with SCDT and kept for 13 days in osteogenic differentiation medium prior to implantation. After 60 days postoperatively, histometric analysis was performed, which assessed the amount of bone formed within the imposed defect. It was observed that the scaffold association/SCDT maintained in osteogenic medium prior to implantation showed greater bone formation than the other groups. This 12 difference was statistically significant. In the light of these results, it can be concluded that, in compliance with the parameters used, the PLGA scaffolds have favorable results in relation to the interaction with the SCDT. Furthermore the use of osteogenic differentiation associated with scafolld / SCDT, prior to implantation showed that this association has the ability to promote bone formation and its use is therefore appropriate for use in bioengineering.

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

Uma variedade de biomateriais são estudados para aplicação na engenharia de tecidos, entre os quais os scaffolds de ácido poli (láctico-co-glicólico) (PLGA), produzidos pela técnica de electrospinning. Por meio dessa técnica é possível adicionar diferentes moléculas bioativas durante o processo de produção do biomaterial, tais como a dexametasona (DEX). A DEX é caracterizada por o seu potencial anti-inflamatório e imunossupressor e pela sua capacidade de promover a diferenciação de células-tronco mesenquimais (MSCs) em linhagem osteogênica. Este estudo teve o objetivo de produzir e caracterizar scaffolds de PLGA com diferentes quantidades de DEX (100% puro) e verificar suas propriedades mecânicas, bem como a sua influência sobre MSCs de polpa de dentes decíduos. Sete grupos de scaffolds foram produzidos nas seguintes proporções: 1 parte de DEX para 20 partes de PLGA, identificado como 1:20. Seguindo este, 1:10, 1: 4, 1: 2, 3: 4 e 1: 1, partes de DEX:PLGA foram usadas. Assim, os seguintes grupos foram estudados: A: scaffolds de PLGA sem DEX (grupo controle); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 e G: 1:1. A presença de DEX nos scaffolds e a sua taxa de libertação foi avaliada no decorrer de 21 dias por análise de luz UV (λ = 254 nm). Todos os scaffolds foram avaliados quanto às suas características físico-químicas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e por análise mecânica dinâmica (DMA). A interação dos scaffolds com as MSCs foi avaliada durante 21 dias por meio do ensaio de WST-8 e lactato desidrogenase (LDH). O potencial osteogênico dos scaffolds com DEX foi avaliada pela expressão de fosfatase alcalina, coloração com Alizarin Red e análise por RT-PCR. A análise por luz UV mostrou que após 21 dias de cultura, todos os grupos liberaram entre 73 a 79 % da DEX total presente nos scaffolds presente no início do experimento. As fotomicrografias de MEV mostraram fibras distribuídas de maneira aleatória em todos os grupos, com um grande número de poros interconectados. A análise de DMA mostrou que com o aumento da incorporação de DEX, o diâmetro das fibras e a espessura dos scaffolds também aumentou, enquanto o módulo de elasticidade não se alterou. O ensaio de WST-8 e LDH mostraram que ao longo de 21 dias a viabilidade celular aumentou nos grupos A, B, C e D, enquanto que diminuiu nos grupos E, F e G. Com base nos ensaios de avaliação osteogénica, pode-se observar que scaffolds com DEX não apresentaram tal potencial. A partir dos dados do presente estudo, pode ser concluído que os scaffolds com DEX surgem como uma ferramenta promissora para aplicação em engenharia de tecidos, no entanto, esta associação não apresentou potencial de promover a diferenciação osteogénica de MSCs. / A variety of biomaterials are undergoing studies for application in tissue engineering, among which are poly (lactic-co-glycolic) acid (PLGA) scaffolds, produced by the electrospinning technique. Through this technique, it is possible to add different bioactive molecules during the biomaterial production process, such as dexamethasone (DEX). DEX is characterized by its anti-inflammatory and immunosuppressive potential and by its ability to promote the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) to osteogenic lineages. This study has aimed to produce and characterize PLGA scaffolds with different quantities of DEX (100% pure) and verifies the mechanical properties of the scaffolds, as well as the role of the scaffolds on the outcome of the MSCs from deciduous teeth. Seven groups of scaffolds were produced in the following proportions: 1 part DEX to 20 parts PLGA, identified as 1:20. Following this, 1:10, 1:4, 1:2, 3:4 and 1:1, DEX:PLGA parts were used. The following groups were studied: A: PLGA scaffold without DEX (control group); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 and G: 1:1. The DEX presence in the scaffolds and its release rate from the scaffolds over 21 days were determined by UV light analysis (λ = 254 nm). All the scaffolds were evaluated for their physicochemical characteristics by scanning electron microscope (SEM) and by dynamic mechanical analysis (DMA). The interaction of the scaffolds with MSCs was assessed over 21 days by WST-8 and lactate dehydrogenase (LDH) assay. The osteogenic potential of the scaffold with DEX was assessed by alkaline phosphatase assay, Alizarin red staining and RT-PCR analysis. The UV light analysis showed that after 21 days of culture all the groups released between 73 to 79% of the total DEX present in the scaffolds at the beginning of the experiment. The SEM micrographs showed fibers distributed in a random manner in all groups, with a large number of interconnected pores. DMA analysis showed that with the increase of DEX incorporation, the fiber diameter and scaffolds thickness also increased while their elastic modulus did not change. The WST-8 and LDH assay showed that, over 21 days of culture, the cell viability increased in groups A, B, C and D, while decreased in groups E, F and G. Based on the osteogenic assays, it could be observed that the scaffolds with DEX did not have the osteogenic potential. From the data of this study, it can be concluded that the scaffolds with DEX appear to be a promising tool for application in tissue engineering, however, this association did not show the potential for promote the osteogenic differentiation.

As evidências, até então disponíveis, revelam o sucesso de tipos diferentes de abordagem conservadora de lesões de cárie profundas e as reações do complexo dentino-pulpar, entre elas a formação de dentina reacional. O objetivo do presente estudo foi avaliar histologicamente o tecido pulpar de dentes decíduos humanos submetidos a diferentes abordagens conservadora. A amostra foi composta por 25 molares decíduos, divididos em 5 grupos, sendo os primeiros tratados com remoção total de tecido cariado sem exposição pulpar (RTTC), remoção parcial de tecido cariado em sessão única (RPTC) e tratamento expectante (TE), além dos controles positivo (molares hígidos) e negativo (molares com lesão de cárie ativa profunda em dentina sem tratamento restaurador). Foi realizada a quantificação de dentina reacional, da presença ou não de inflamação e reabsorção pulpar e uma análise descritiva da morfologia pulpar através da observação de cada lâmina ao microscópio. Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os grupos, entretanto houve maior formação de dentina reacional no grupo de RPTC, nos levando a entender que o tratamento menos invasivo pode ser uma alternativa terapêutica definitiva para o tratamento das lesões profundas de cárie em dentina de dentes decíduos. / The evidence available so far shows the success of the conservative approach of deep carious lesions and the reactions of the pulp-dentin complex, including the formation of reactionary dentin. The aim of this study was to evaluate histologically the pulp tissue of human deciduous teeth undergoing different conservative treatments. The sample was composed of 25 primary molars, divided into 5 groups, the first being treated with total caries removal without pulp exposure (TCR), partial caries removal in one session (PCR) and stepwise excavation (SW), and positive controls (sound molars) and negative (molars with active deep caries lesion without restorative treatment). Quantification of reactive dentin was performed, the presence or absence of resorption and inflammation and pulp descriptive analysis of the morphology of pulp through observation of each slide under a microscope. There was no statistically significant difference between the groups, but there was more reactionary dentin formation in PCR group, leading us to understand that the less invasive treatment may be an alternative therapy for the definitive treatment of deep caries lesions in dentin of deciduous teeth.