A poluição marinha por petróleo e seus derivados é uma preocupação crescente de caráter global. O litoral norte do estado de São Paulo é hoje caracterizado como a região mais altamente impactada por esses contaminantes de toda a costa Sul e Sudeste do país. Dentre as substâncias que compõem esses produtos estão os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos (HPAs), como o fenantreno, que apresentam potencial de alterar o sistema endócrino de peixes, gerando desajustes hormonais de alto risco para o processo reprodutivo dos animais expostos. Com base nestes fatos, o presente trabalho buscou verificar efeitos do fenantreno como desregulador endócrino em juvenis de E. marginatus. Essa espécie se caracteriza pelo hermafroditismo protogínico, de modo que os juvenis costumam apresentar altas concentrações de esteroides gonadais, o que gera preocupação quanto os efeitos reprodutivos decorrentes de alterações no padrão de produção de esteroides, especialmente em uma espécie que já vem sofrendo declínios populacionais por conta da sobrepesca. A CL50 encontrada para juvenis de E. marginatus foi 1,51 mg⁄L. Em seguida, foi realizado um bioensaio subletal (96h) com quatro grupos experimentais (n=5) em duplicata: grupo controle; duas concentrações distintas de fenantreno (0,1 mg⁄L e 1 mg⁄L) e grupo exposto ao veículo de diluição (0,004% de etanol). Foram dosadas as concentrações de 17β-estradiol (E2), testosterona (T) e 11-cetotestosterona (11-KT) plasmáticos por ELISA. Gônadas, fígado e baço foram processados para análise histológica. Foi conduzido bioensaio in vitro com incubação de fragmentos gonadais sob ação de fenantreno (50μM) ou etanol. Os níveis dos mesmos esteroides também foram dosados por ELISA. A exposição in vivo ao fenantreno resultou em aumento na área dos hepatócitos, bem como no número de centro melanomacrofágicos e hemossiderose no baço. O etanol induziu efeitos similares no baço. Os níveis de E2 e T não se alteraram no plasma ou no meio de incubação in vitro. O fenantreno reduziu a concentração de 11-KT in vitro e in vivo. No plasma, o etanol também causou esse decréscimo. Considerando a importância do 11-KT no desenvolvimento dos ovários em teleósteos, o fenantreno parece causar desregulação da esteroidogênese em juvenis de E. marginatus, possivelmente gerando disfunções durante a inversão sexual / Marine pollution by crude oil and its residual products is a growing global concern. The Northern coast of São Paulo is characterized as the highly impacted area by these contaminants through Brazil\'s South and Southeast coast. Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH), such as phenanthrene, are the main crude oil components and have a significant toxic potential to biota, acting as endocrine disruptors (ED) and negatively impacting reproduction. This study aimed to investigate the effects of phenanthrene as ED on gonadal steroidogenesis in E. marginatus juveniles. As a hermaphrodite protogynous species, E. marginatus juveniles maintain high levels of plasma steroids as substrates for sex inversion, which causes concern about reproductive effects of disruptions in steroid production patterns, especially in an overfished species. LD50 to E. marginatus exposed to phenanthrene was established in 1.51 mg⁄L. An in vivo sublethal exposure (96 h) to phenanthrene was carried out at two concentrations (0.1mg⁄L and 1 mg⁄L); exposure to the vehicle (ethanol) was also performed. Plasma levels of 17β-estradiol (E2), testosterone (T) and 11-ketotestosterone (11-KT) were measured by ELISA. Gonads, liver and spleen were processed for histological analysis. In an in vitro bioassay, gonad fragments were incubated with phenanthrene (50μM) or ethanol. Steroid levels in the culture media were also measured by ELISA. The in vivo exposure to phenanthrene triggered an increase of the area of the hepatocytes, increased number of melanomacrophagic centers and hemosiderosis in the spleen. Ethanol also induced similar effects on spleen. E2 and T levels did not change neither in plasma nor in vitro media. Phenanthrene sharply reduced 11-KT levels in vitro and in vivo. In plasma, ethanol also decreased 11-KT levels. Considering the importance of 11-KT in fish developing ovaries, phenanthrene seems to disrupt steroidogenesis in juvenile grouper, possibly being able to cause dysfunctions during sex change

Orientador: Arielle Cristina Arena / Resumo: Entre as substâncias com potencial de desregulação endócrina, destaca-se o Benzo(a)pireno (BaP), um poluente orgânico persistente e amplamente difundido no ambiente. É gerado pela combustão incompleta de compostos orgânicos e está presente na fumaça de cigarro, na exaustão de automóveis, em alimentos e água contaminados. Estudos demonstram que o BaP se acumula em órgãos vitais e reprodutores, incluindo o testículo, e pode interferir no processo de esteroidogênese, através da interação com a proteína StAR. Sabe-se que substâncias que atuam como desreguladores endócrinos (DEs) podem gerar prejuízos não somente no indivíduo exposto, mas também nas gerações subsequentes, via células germinativas. A exposição aos DEs torna-se mais relevante em períodos hormônio-dependentes, como a gestação, a infância e a peripuberdade, denominados de janelas críticas do desenvolvimento. Assim, torna-se fundamental a investigação da exposição ao BaP durante uma janela crítica do desenvolvimento (juvenil e peripuberdade) e avaliar quais são as repercussões disto na vida reprodutiva, bem como os possíveis impactos no desenvolvimento e reprodução da prole, via paterna. Para tal, 40 ratos machos Wistar no período juvenil (23 dias de idade) foram distribuídos em quatro grupos experimentais, sendo um controle (óleo de milho + DMSO); e três grupos que receberam diferentes doses de BaP: 0,1, 1,0 ou 10 μg/kg/dia. A exposição ao poluente ocorreu durante 31 dias consecutivos, do dia pós-natal (DPN) 23 ao 53,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among substances with potential for endocrine disruptor, benzo(a)pyrene (BaP), a persistent organic pollutant widely distributed in the environment, stands out. It is generated by the incomplete combustion of organic compounds and is present in cigarette smoke, exhaust from cars, contaminated food and water. Studies have shown that BaP accumulates in vital and reproductive organs, including the testis; and may interfere with the steroidogenesis process through interaction with the StAR protein. It is known that substances that act as endocrine-disrupting chemicals (EDCs) can generate damages not only in the exposed individual, but also in subsequent generations by germ cells. Exposure to EDCs becomes more relevant in hormone-dependent periods, such as gestation, childhood and peripuberty, called critical windows of development. Thus, it is essential to investigate exposure to BaP during the critical development window (juvenile and peripuberty) and to investigate the repercussions of this on reproductive life and the possible impacts on the development and reproduction of the offspring, paternal way. For this, 40 male Wistar rats were used in the juvenile period (23 days of age) and distributed into four experimental groups, one control (corn oil + DMSO); and three groups receiving different doses of BaP: 0.1, 1.0 or 10 μg/kg/ day. The exposure to pollutant occurred during 31 consecutive days, from the postnatal day (PND) 23 to 53, via oral (gavage). During the treatment, cli... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Andréia Arantes Felício null (andreia_a.felicio@hotmail.com) on 2017-03-27T17:43:13Z No. of bitstreams: 1 Tese Andréia Arantes Felício.pdf: 4621912 bytes, checksum: fcb824edfc225a271b66a12fc039e014 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-03-29T19:14:18Z (GMT) / Submitted by Andréia Arantes Felício null (andreia_a.felicio@hotmail.com) on 2017-03-29T19:20:52Z No. of bitstreams: 1 Tese Andréia Arantes Felício.pdf: 4621912 bytes, checksum: fcb824edfc225a271b66a12fc039e014 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-03-29T19:24:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 felicio_aa_dr_sjrp.pdf: 4621912 bytes, checksum: fcb824edfc225a271b66a12fc039e014 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T19:24:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 felicio_aa_dr_sjrp.pdf: 4621912 bytes, checksum: fcb824edfc225a271b66a12fc039e014 (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Brasil é o principal produtor de cana-de-açúcar do mundo e, para que esta demanda seja suprida, muitos compostos químicos são aplicados nas culturas, visando controlar o surgimento e proliferação de pragas. Assim, faz-se o uso dos praguicidas, dentre eles, o diuron (N-(3,4-diclorofenil)-N,N-dimetiluréia), que é aplicado em plantações ao redor do mundo. O diuron pode ser biodegradado em outros três principais compostos o 3,4-dicloroanilina (DCA), 3,4-diclorofenilureia (DCPMU) e 2,4-diclorofenil-N-metilureia (DCPMU). Normalmente, o diuron é aplicado nas plantações juntamente com os alquilfenóis etoxilatos (APE), como o nonilfenol etoxilato (NPE) e o octilfenol etoxilato (OPE), compostos que facilitam a dispersão do diuron. Alguns estudos têm demonstrado que tanto o diuron quanto os alquilfenóis podem causar alterações enzimáticas e/ou estrogênicas em diversos organismos. Dentre as enzimas que podem ser alteradas, estão as enzimas de biotransformação, tanto de fase I (7-etoxirresorufina-O-deetilase – EROD, 7-pentóxiresorufinaO-desalquilase – PROD, 7-benzilóxiresorufina-O-desalquilase – BROD e a P450 aromatase), quanto as de fase II (glutationa-S-transferase – GST) e as proteínas de fase III (resistência a multixenobioticos – MXR). Outros parâmetros que podem sofrer alterações são os antioxidantes (superóxido dismutase – SOD, catalase – CAT, glutationa peroxidase – GPx, glutationa redutase – GR, glutationa-6-fosfato desidrogenase – G6PDH, aldeído desidrogenase – ALDH e peroxidação lipídica), que são os responsáveis pelo controle entre a produção e o combate às espécies reativas de oxigênio (ERO). Dentre os parâmetros endócrinos que podem ser alterados, e então utilizados como biomarcadores, estão as enzimas CYP3A e a 17β-hidroxiesteróide desidrogenase (17β-HSD) e ainda a proteína vitelogenina (Vtg). Assim o objetivo deste trabalho foi avaliar, em tilápias do Nilo (Oreochromis nilotucus) (1) quais os efeitos do diuron e seus metabólitos, em associação ou não, em diferentes concentrações e (2) quais os efeitos do diuron, seus metabólitos e os alquilfenois, em associação ou não em diferentes concentrações no fígado e nas brânquias de peixes expostos por 7 dias, utilizando os seguintes parametros, EROD, BROD, PROD, GST, MXR, SOD, CAT, GPx, G6PDH e peroxidação lipídica (MDA). Em uma terceira etapa, o objetivo do trabalho foi (3) avaliar parâmetros endócrinos em tilápias mozambique (Oreochromis mossambicus) expostas ao diuron, seus metabólitos e alquilfenóis, em associação ou não, em diferentes concentrações, expostas por 7 dias, em fígado e cérebro dos peixes expostos, analisando os seguintes parâmetros: 17β-HSD, P450 aromatase, CYP3A, vitelogenina e a biotransformação do xenobiótico (in vitro). Nossos resultados demonstraram que, em tilápias do Nilo expostas a esses contaminantes nas concentrações e no tempo de exposição utilizados, todos os biomarcadores analisados sofreram alguma alteração após a exposição, alguns mais expressivos como a EROD, MDA, GPx e G6PDH e outros menos. Os resultados obtidos após a exposição de tilápias mozambique aos contaminantes também nos mostraram alterações, confirmando que esses compostos podem ser considerados desreguladores endócrinos, já que todos os parâmetros endócrinos analisados foram alterados. Assim, os resultados obtidos nos mostraram que realmente o diuron, seus metabólitos e os alquilfenóis podem causar alterações bioquímicas em tilápias do Nilo e mozambique, expostos à concentrações ambientalmente relevantes por sete dias, sendo os metabólitos e os APs os principais compostos a causar alterações nos parâmetros analisados. / Brazil is the main sugar cane producer in the world, and to support these productions many chemical compounds have being apply in agriculture, aiming to control the appearance and proliferation of pests. Therefore, the use of pesticide, as diuron, (N- (3,4-dichlorophenyl) -N,N-dimethylurea), in some crops in the world is common. Diuron can be biodegraded in three others compounds, 3,4-dichloroaniline (DCA), 3,4-dichlorophenylurea (DCPU) and 2,4-dichlorophenyl-N-methylurea (DCPMU). Normally, diuron have being applied associated with alkylphenols ethoxylates (APE), like nonilphenol (NP) and octylphenol (OP), which increase the solubility and dispersion of the herbicide. Some studies have shown that diuron and alkylphenols can cause enzymatic and/or estrogenic changes, in various organisms. Therefore, biotransformation enzymes, phase I (7-ethoxirresorufin-O-deethylase – EROD, 7- pentaxirisorufin-O-dealkylase – PROD, 7-benzyloxysorufin-O-desalkylase – BROD and P450 aromatase), phase II (glutathione-S-transferase-GST) and phase III proteins (multixenobiotic resistance – MXR), and antioxidant parameters (superoxide dismutase – SOD, catalase – CAT, glutathione peroxidase – GPx, glutathione reductase – GR, glutathione-6-phosphate dehydrogenase – G6PDH, aldehyde dehydrogenase – ALDH and lipid peroxidation), which are responsible for the control between production and degradation of reactive oxygen species (ROS). The endocrine parameters that can be altered and used as biomarkers are the CYP3A and 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD) enzymes and the vitellogenin (Vtg) protein. All of these parameters can be altered after exposure of organisms to xenobiotics. Therefore, the aim of this work was evaluate the effects of (1) diuron and its metabolites, alone or in combination, in different concentrations, and the effect of (2) diuron, its metabolites and the alkyphenols, alone or in combination, in different concentration, in liver and gill of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) exposed for 7 days, using as parameters EROD, BROP, PROD, GST, MXR, SOD, CAT, GPx, G6PDH and lipid peroxidation (MDA). In a third step, the aim of the work as (3) evaluate endocrine parameters in mossambique tilapia (Oreochromis mossambicus), exposed to diuron, its metabolites and alkyphenols, alone or in combination, in different concentrations for 7 days, in liver and brain, using as parameters 17β-HSD, CYP3A, vitellogenin and xenobiotic biotransformation (in vitro). Our results demonstrated that all contaminants, at the concentration and time of exposure, can cause alteration in all biomarkers, some more than others, as EROD, MDA, GPx and G6PDH, in Nile tilapia, and the results obtained after mozambique tilapia exposure, to the contaminants, also showed changes, confirming that these compounds can be considered endocrine disruptors. Thus, the results showed that diuron, its metabolites and alkylphenols could cause biochemical changes in fish, Nile and mossambique tilapia, exposing to the environmentally relevant concentrations for seven days, being diruon metabolites and APs the main compounds to cause changes in the analyzed parameters. / FAPESP: 2014/18825-9

A poluição marinha por petróleo e seus derivados é uma preocupação crescente de caráter global. O litoral norte do estado de São Paulo é hoje caracterizado como a região mais altamente impactada por esses contaminantes de toda a costa Sul e Sudeste do país. Dentre as substâncias que compõem esses produtos estão os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos (HPAs), como o fenantreno, que apresentam potencial de alterar o sistema endócrino de peixes, gerando desajustes hormonais de alto risco para o processo reprodutivo dos animais expostos. Com base nestes fatos, o presente trabalho buscou verificar efeitos do fenantreno como desregulador endócrino em juvenis de E. marginatus. Essa espécie se caracteriza pelo hermafroditismo protogínico, de modo que os juvenis costumam apresentar altas concentrações de esteroides gonadais, o que gera preocupação quanto os efeitos reprodutivos decorrentes de alterações no padrão de produção de esteroides, especialmente em uma espécie que já vem sofrendo declínios populacionais por conta da sobrepesca. A CL50 encontrada para juvenis de E. marginatus foi 1,51 mg⁄L. Em seguida, foi realizado um bioensaio subletal (96h) com quatro grupos experimentais (n=5) em duplicata: grupo controle; duas concentrações distintas de fenantreno (0,1 mg⁄L e 1 mg⁄L) e grupo exposto ao veículo de diluição (0,004% de etanol). Foram dosadas as concentrações de 17β-estradiol (E2), testosterona (T) e 11-cetotestosterona (11-KT) plasmáticos por ELISA. Gônadas, fígado e baço foram processados para análise histológica. Foi conduzido bioensaio in vitro com incubação de fragmentos gonadais sob ação de fenantreno (50μM) ou etanol. Os níveis dos mesmos esteroides também foram dosados por ELISA. A exposição in vivo ao fenantreno resultou em aumento na área dos hepatócitos, bem como no número de centro melanomacrofágicos e hemossiderose no baço. O etanol induziu efeitos similares no baço. Os níveis de E2 e T não se alteraram no plasma ou no meio de incubação in vitro. O fenantreno reduziu a concentração de 11-KT in vitro e in vivo. No plasma, o etanol também causou esse decréscimo. Considerando a importância do 11-KT no desenvolvimento dos ovários em teleósteos, o fenantreno parece causar desregulação da esteroidogênese em juvenis de E. marginatus, possivelmente gerando disfunções durante a inversão sexual / Marine pollution by crude oil and its residual products is a growing global concern. The Northern coast of São Paulo is characterized as the highly impacted area by these contaminants through Brazil\'s South and Southeast coast. Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH), such as phenanthrene, are the main crude oil components and have a significant toxic potential to biota, acting as endocrine disruptors (ED) and negatively impacting reproduction. This study aimed to investigate the effects of phenanthrene as ED on gonadal steroidogenesis in E. marginatus juveniles. As a hermaphrodite protogynous species, E. marginatus juveniles maintain high levels of plasma steroids as substrates for sex inversion, which causes concern about reproductive effects of disruptions in steroid production patterns, especially in an overfished species. LD50 to E. marginatus exposed to phenanthrene was established in 1.51 mg⁄L. An in vivo sublethal exposure (96 h) to phenanthrene was carried out at two concentrations (0.1mg⁄L and 1 mg⁄L); exposure to the vehicle (ethanol) was also performed. Plasma levels of 17β-estradiol (E2), testosterone (T) and 11-ketotestosterone (11-KT) were measured by ELISA. Gonads, liver and spleen were processed for histological analysis. In an in vitro bioassay, gonad fragments were incubated with phenanthrene (50μM) or ethanol. Steroid levels in the culture media were also measured by ELISA. The in vivo exposure to phenanthrene triggered an increase of the area of the hepatocytes, increased number of melanomacrophagic centers and hemosiderosis in the spleen. Ethanol also induced similar effects on spleen. E2 and T levels did not change neither in plasma nor in vitro media. Phenanthrene sharply reduced 11-KT levels in vitro and in vivo. In plasma, ethanol also decreased 11-KT levels. Considering the importance of 11-KT in fish developing ovaries, phenanthrene seems to disrupt steroidogenesis in juvenile grouper, possibly being able to cause dysfunctions during sex change

Orientador: Renata Fracácio Francisco / Resumo: Chemicals with potential to cause endocrine disruption in vertebrates and invertebrates have been detected at low concentrations in the world's aquatic environments. Therefore, the search for removal methodologies in aquatic environments became a worldwide interest. The aim of this research was to investigate three materials (powered activated carbon - PAC, powered natural zeolites - ZP and aquatic humic substances - AHS) in chemical and ecotoxicological remediation of 17ß-estradiol (E2) and 17α-ethinylestradiol (EE2) in water through chemical and biological tests in vitro and in vivo. An environmentally relevant concentration of hormones (30 ng.L-1) was used during laboratory tests. The results obtained through an extensive list of morphological, reproductive and histological parameters showed the significant impact of HSFs on the development and maintenance of exposed fish. The superior efficiency of PAC was verified in relation to the other substrates in the endocrine disrupting chemicals (EDCs) removal in water. Nevertheless, their properties did not guarantee the same performance to the environmental samples, neither allow biological injuries monitored to be recovered after the period of depuration investigated. An additional study also allowed the development of a histochemical protocol capable of identifying the production of vitellogenin (VTG) prompted by exposure to the synthetic steroid EE2. / Doutor

Orientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Patricia Simone Leite Vilamaior / Banca: Luis Fernando Barbisan / Resumo: O TCDD (2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina), é considerado o contaminante ambiental com maior toxicidade na atualidade e sua ação está associada à interação com o receptor aril-hidrocarboneto (do termo inglês, AhR), responsável pela resposta biológica do TCDD sobre as células. Na próstata, o TCDD age diretamente no UGS inibindo o brotamento prostático através da ativação das vias dependentes de AhR. O Resveratrol destaca-se por suas propriedades anticâncer, antiagregação de plaquetas, antiinflamatória e antialérgica, atuando inclusive como antagonista do AhR. O estudo teve por objetivo avaliar o potencial quimioprotetor do Resveratrol sobre o desenvolvimento da próstata de ratos expostos ao TCDD durante a fase inicial da morfogênese prostática. Para isso, ratas prenhes da linhagem Wistar foram divididas em 4 grupos experimentais: Controle, TCDD, TCDD+Resveratrol e Resveratrol. O TCDD foi administrado em dose única no 15º. dia gestacional (DG15) na dose de 1μg/kg (diluído em óleo de milho) e o Resveratrol foi administrado entre o DG10 e o dia pós-natal 21 (DPN21) na dose de 20mg/kg (diluído em etanol 8%), ambos por via oral. Machos recém-nascidos (DPN1) foram eutanasiados para avaliação dos efeitos imediatos do TCDD (com ou sem a adição do Resveratrol) sobre a morfogênese prostática inicial, através de técnicas morfológicas e imunohistoquímicas, enquanto que, machos adultos (DPN90) foram eutanasiados para avaliação dos efeitos tardios. . No DPN1, os aspectos histológicos e morfométricos apontaram para a redução no número de brotos prostáticos no grupo TCDD quando comparado aos demais grupos Nesse mesmo grupo, as células epiteliais periféricas foram menos imunorreativas para p63 comparado com o Controle e TCDD+Resveratrol. O índice de proliferação celular nos brotos epiteliais e no mesênquima no grupo TCDD foi inferior ao observado nos grupos Controle e TCDD + Resveratrol, bem como o índice... / Abstract: TCDD (2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin) is the most toxic environmental contaminant which mechanism of action is through the interaction with the aryl hydrocarbon receptor (AhR). In the prostate, TCDD works inhibiting the prostatic budding and activating the AhR-dependent pathways. Resveratrol is known by your anticancer, antiplatelet, anti-inflammatory and anti-allergic properties, besides acting as AhR antagonist. Therefore, the current research aimed to assess the protective effect of Resveratrol on prostate development in rats exposed to TCDD during early prostate morphogenesis. Pregnant Wistar rars were divided in four experimental groups: Control, TCDD. TCDD+Resveratrol and Resveratrol. TCDD (1μg/kg body weight) diluted in corn oil was administered by gavage as a single dose on 15th gestational day (GD15) while Resveratrol (20mg/kg body weight) was given by gavage (diluted in 8% of ethanol) between GD10 and postnatal day 21 (PND21). Newborn males (PND1) were euthanized to evaluate immediate effects of TCDD and Resveratrol on the initial prostatic morphogenesis, through morphological and immunohistochemical assays, while male rats (PND90) were euthanized for evaluation the late effects. There was decreasing of prostatic buds number in TCDD group. In the same group, basal cells showed weak immunoreactivity for p63 when compared to Control and TCDD+Resveratrol. TCDD reduced the cell proliferation index in the epithelial buds and mesenchyme as well as the number of androgen receptor (AR)-positive mesenchyme cells compared to Control and TCDD+Resveratrol groups. It is worth mentioning that the AR immunostaining was weak in the epithelial buds and intense in the surrounding mesenchyme in all experimental groups. On the other hand, α-actin staining was less intense in the differentiated mesenchymal cell that surrounded the epithelial buds in the TCDD group. Regarding to adult animals (PND90), the histological analysis revealed in ... / Mestre

Orientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Ana Paula Alves Favareto / Banca: Patricia Fernanda Felipe Pinheiro / Resumo: As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Abstract: Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility / Mestre

SILVA, Maria Nataniela da. Determinação de desreguladores endocrinos na água e no sedimentos do açude Santo Anastácio na cidade de Fortaleza/Ce. 2016. 96 f. Dissertação (Mestrado em química)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2016. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T18:06:46Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_mnsilva.pdf: 3478037 bytes, checksum: 1050688c4f7e4c965ade54f50fe76a97 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:30:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_mnsilva.pdf: 3478037 bytes, checksum: 1050688c4f7e4c965ade54f50fe76a97 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_mnsilva.pdf: 3478037 bytes, checksum: 1050688c4f7e4c965ade54f50fe76a97 (MD5) Previous issue date: 2016 / Natural and synthetic estrogens are naturally excreted by humans and some vertebrates. These emerging contaminants classified as endocrine disruptors (EDs) present, even in small quantities, in water and sediment are able to affect the endocrine system and the stages of growth and reproduction of aquatic organisms and humans. In this context, this study aimed to perform a physical-chemical and microbiological characterization of reservoir water from Santo Anastácio, located in Ceará, Brazil, and the develop and validate an analytical method using High-performance liquid chromatography with detector diode array (HPLC-DAD) for the determination of caffeine (CAF) and estrone hormones, 17β-estradiol, estriol (natural) and 17α-ethinylestradiol (synthetic) for water and sediment phase of reservoir water studied. The physicochemical parameters evaluated were phosphorus, chlorophyll A, pheophytin, nitrogen, chloride, sulfide, hardness, calcium, magnesium, pH, alkalinity, turbidity and total and dissolved solids. Microbiological characterization evaluated the presence of total and fecal coliforms. For the determination of EDs by HPLC-DAD was used to extract solid phase techniques (SPE) for water sample and QuEChERS for the sediment sample. The results of physicochemical analyzes indicated above the allowed values by CONAMA 357/05 for class 2, only to phosphorus and sulfide. Microbiological characterization indicated the presence of coliforms far above the values stipulated by CONAMA. In determining the DEs concentrations from 0.54 to 0.93 μg L-1 were detected caffeine in water, and 0.76 to 4.94 mg kg-1 17β estradiol and estriol in the sediment. Therefore, the water reservoir is unsuitable for direct consumption and recreation within the law. The validated analytical method was efficient for the determination of analytes can be used for routine analysis since there is no legislation to caffeine and EDs. / Estrógenos naturais e sintéticos são naturalmente excretados por seres humanos e alguns vertebrados. Estes contaminantes emergentes classificados como desreguladores endócrinos (DEs) presentes, mesmo em pequenas quantidades, na água e no sedimento são capazes de afetar o sistema endócrino e as fases de crescimento e reprodução de organismos aquáticos e humanos. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivos efetuar uma caracterização físico-química e microbiológica da água do açude Santo Anastácio, localizado no Ceará, Brazil, além de desenvolver e validar um método analítico empregando a cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjos de diodos (HPLC-DAD) para determinação da cafeína e dos hormônios estrona, 17β-estradiol, estriol (naturais) e 17α-etinilestradiol (sintético) na água e no sedimento do açude mencionado. Os parâmetros físico-químicos avaliados foram fósforo, clorofila A, feofitina, nitrogênio, cloreto, sulfeto, dureza, cálcio, magnésio, pH, alcalinidade, turbidez e sólidos totais e dissolvidos. A caracterização microbiológica avaliou a presença de coliformes totais e termotolerantes. Para a determinação dos DEs por HPLC-DAD utilizou-se as técnicas de extração em fase sólida (SPE) para a amostra de água e QuEChERS para a amostra de sedimento. Os resultados das análises físico-químicas indicaram valores acima do permitido pelo CONAMA 357/05, para classe 2, apenas para fósforo e sulfeto. A caracterização microbiológica indicou a presença de coliformes muito acima dos valores estipulados pelo CONAMA. Na determinação dos DEs foram detectados as concentrações de 0,54 a 0,93 μg L-1 de cafeína na água, e, 0,76 a 4,94 mg kg-1 do 17β estradiol e estriol no sedimento. Diante disso, a água do açude encontra-se inadequada para consumo direto e recreação dentro da legislação vigente. O método analítico validado mostrou-se eficiente para determinação dos analitos podendo ser utilizado para análises de rotina uma vez que não existe legislação para a cafeína e os DEs.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:00Z : No. of bitstreams: 1 000847999.pdf: 2110688 bytes, checksum: 3cfbc2629db1b4c973c6917a12690b53 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:38Z : No. of bitstreams: 1 000850629.pdf: 1293633 bytes, checksum: 7a36256ec415fe3756d2343f25e98753 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O TCDD (2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina), é considerado o contaminante ambiental com maior toxicidade na atualidade e sua ação está associada à interação com o receptor aril-hidrocarboneto (do termo inglês, AhR), responsável pela resposta biológica do TCDD sobre as células. Na próstata, o TCDD age diretamente no UGS inibindo o brotamento prostático através da ativação das vias dependentes de AhR. O Resveratrol destaca-se por suas propriedades anticâncer, antiagregação de plaquetas, antiinflamatória e antialérgica, atuando inclusive como antagonista do AhR. O estudo teve por objetivo avaliar o potencial quimioprotetor do Resveratrol sobre o desenvolvimento da próstata de ratos expostos ao TCDD durante a fase inicial da morfogênese prostática. Para isso, ratas prenhes da linhagem Wistar foram divididas em 4 grupos experimentais: Controle, TCDD, TCDD+Resveratrol e Resveratrol. O TCDD foi administrado em dose única no 15º. dia gestacional (DG15) na dose de 1μg/kg (diluído em óleo de milho) e o Resveratrol foi administrado entre o DG10 e o dia pós-natal 21 (DPN21) na dose de 20mg/kg (diluído em etanol 8%), ambos por via oral. Machos recém-nascidos (DPN1) foram eutanasiados para avaliação dos efeitos imediatos do TCDD (com ou sem a adição do Resveratrol) sobre a morfogênese prostática inicial, através de técnicas morfológicas e imunohistoquímicas, enquanto que, machos adultos (DPN90) foram eutanasiados para avaliação dos efeitos tardios. . No DPN1, os aspectos histológicos e morfométricos apontaram para a redução no número de brotos prostáticos no grupo TCDD quando comparado aos demais grupos Nesse mesmo grupo, as células epiteliais periféricas foram menos imunorreativas para p63 comparado com o Controle e TCDD+Resveratrol. O índice de proliferação celular nos brotos epiteliais e no mesênquima no grupo TCDD foi inferior ao observado nos grupos Controle e TCDD + Resveratrol, bem como o índice... / TCDD (2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin) is the most toxic environmental contaminant which mechanism of action is through the interaction with the aryl hydrocarbon receptor (AhR). In the prostate, TCDD works inhibiting the prostatic budding and activating the AhR-dependent pathways. Resveratrol is known by your anticancer, antiplatelet, anti-inflammatory and anti-allergic properties, besides acting as AhR antagonist. Therefore, the current research aimed to assess the protective effect of Resveratrol on prostate development in rats exposed to TCDD during early prostate morphogenesis. Pregnant Wistar rars were divided in four experimental groups: Control, TCDD. TCDD+Resveratrol and Resveratrol. TCDD (1μg/kg body weight) diluted in corn oil was administered by gavage as a single dose on 15th gestational day (GD15) while Resveratrol (20mg/kg body weight) was given by gavage (diluted in 8% of ethanol) between GD10 and postnatal day 21 (PND21). Newborn males (PND1) were euthanized to evaluate immediate effects of TCDD and Resveratrol on the initial prostatic morphogenesis, through morphological and immunohistochemical assays, while male rats (PND90) were euthanized for evaluation the late effects. There was decreasing of prostatic buds number in TCDD group. In the same group, basal cells showed weak immunoreactivity for p63 when compared to Control and TCDD+Resveratrol. TCDD reduced the cell proliferation index in the epithelial buds and mesenchyme as well as the number of androgen receptor (AR)-positive mesenchyme cells compared to Control and TCDD+Resveratrol groups. It is worth mentioning that the AR immunostaining was weak in the epithelial buds and intense in the surrounding mesenchyme in all experimental groups. On the other hand, α-actin staining was less intense in the differentiated mesenchymal cell that surrounded the epithelial buds in the TCDD group. Regarding to adult animals (PND90), the histological analysis revealed in ... / FAPESP: 2013/04401-0