Made available in DSpace on 2014-06-12T22:56:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1299_1.pdf: 4243966 bytes, checksum: 33987aa570d610651572a1c8864e8498 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / O estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do treinamento físico aeróbico (TFA) na organização estrutural e funcional do tecido nervoso periférico em ratos com diabetes experimental. Foram utilizados 40 ratos machos, adultos, Wistar. Estes foram separados em 4 grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), diabético sedentário (DS), diabético treinado (DT). A indução do diabetes foi realizada nos animais, com 60 dias de vida, através da administração intraperitoneal de estreptozotocina, dose única de 60 mg/kg. O protocolo de exercício constou de nado forçado 1h/dia, 5 dias/semana, durante 6 semanas. Semanalmente eram avaliados a glicemia, o peso, a velocidade de condução nervosa (VCN) e a amplitude do potencial de ação do nervo caudal. Vinte e quatro horas após o término do período de TFA foram realizadas a coleta do nervo ciático, obtidos os blocos e realizados os cortes semi-finos e ultra-finos. A contagem e análise histomorfométrica dos vasos endoneurais e da área do nervo de cada animal (n=5) foi realizada através da técnica de varredura de todos os campos microscópicos (200X) e 75 microvasos endoneurais (3-5/animal, n=5/grupo) foram ultramicrografados aleatoriamente nos campos microscópicos (8.900X) para a realização das análises morfométricas. A área e perímetro vascular, a área e perímetro do lúmen, a área e perímetro endotelial, a área e perímetro da membrana basal, e a área do pericito foram registradas. A partir daí, determinadas a espessura da membrana basal, espessura da parede do vaso, e também foi contado o número de núcleos das células endoteliais e do pericito. A análise estatística foi realizada utilizando a média dos valores ± desvio-padrão e as comparações entre os grupos foram realizadas (ANOVA), múltiplas comparações post hoc Tukey (p < 0,05). Ao final do experimento observou-se que os animais do grupo diabético apresentaram peso menor que os controles, contrariamente aos níveis glicêmicos que mostraram-se significativamente maiores no grupo diabético. A VCN não sofreu interferência do treinamento demonstrando não diferir entre os grupos diabéticos, porém quando comparados ao grupo controle, apresentaram VCN mais baixas sugerindo um comprometimento funcional do nervo caudal sensorial nos animais diabéticos. Não foram encontradas diferenças significativas no número de microvasos endoneurais entre os animais do grupo diabético (DT 41,4 ± 11,9 vs DS 39,2 ± 3,6). Apesar da área do nervo ciático não diferir entre os grupos, os animais do grupo diabético (DS 0,68 ± 0,1 vs DT 0,67 ± 0,1) apresentaram médias menores em relação aos grupos controles. Da mesma forma, a densidade dos microvasos endoneurais não diferiu entre os grupos. Todas as áreas dos microvasos endoneurais sofreram interferência do TFA (p = 0,016). Nos animais diabéticos, a espessura da membrana basal e a espessura da parede do vaso não foram diferentes quando comparados com os animais do grupo controle. Houve uma tendência a hiperplasia de células endoteliais no grupo de animais DT (DT 2,5 ± 1,3 vs DS 1,6 ± 0,4; p = 0,063), no entanto a hiperplasia de células do pericito foi significativamente maior nos ratos DT quando comparados com DS (DT 1,2 ± 0,5 vs DS 0,7 ± 0,4; p = 0,038). Diante destes resultados, pode-se concluir que o tempo do experimento foi suficiente para causar uma neuropatia periférica nos ratos diabéticos com perdas funcionais, contudo por ser a neuropatia uma patologia de origem multifatorial, a realização de um TFA baseado no modelo experimental utilizado neste estudo não mostrou alterações na estrutura dos microvasos endoneurais de ratos com diabetes experimental. Porém, ultraestruturalmente, todas as áreas dos microvasos endoneurais dos animais diabéticos mensuradas sofreram interferência do TFA, igualmente a atividade celular periendotelial, aumentando o número de pericitos que envolvem os microvasos endoneurais

O trans-tramadol (trans-T), é um analgésico de ação central disponível na clínica como mistura racêmica dos enantiômeros (+)-trans-T e (-)-trans-T. O trans-T é biotransformado pelo CYP2D ao metabólito ativo O-desmetiltramadol (M1) e pelo CYP2B e CYP3A ao metabólito inativo N-desmetiltramadol (M2). O estudo investiga a influência do diabetes experimental na disposição cinética e no metabolismo dos enantiômeros do trans-T e seus metabólitos em animais tratados ou não com insulina e/ou quinidina. Os ratos machos Wistar foram divididos nos grupos controle, quinidina (dose única de quinidina i.p. 80mg/Kg 4 h antes do trans-T), diabético (dose única de estreptozotocina i.v. 45 mg/kg), diabético insulina (insulina NPH 2 UI/dia durante 12 dias), diabético quinidina e diabético insulina quinidina. Os animais (n=6/tempo de coleta) receberam dose única oral (gavagem) de 20 mg/kg de rac-trans-T e as coletas seriadas de sangue foram realizadas até 12 h após a administração. As concentrações plasmáticas dos enantiômeros do trans-T, M1 and M2 foram determinadas por LC-MS-MS usando a coluna de fase quiral Chiralpak® AD. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados com auxílio do programa WinNonlin 4.1. e expressos como mediana. A disposição cinética do trans-T é enantiosseletiva no grupo controle com acúmulo plasmático do (+)-trans-T (AUC 527,88 vs 116,38 ng.h/mL) e do (+)-M2 (AUC 1210,90 vs 225,34 ng.h/mL); teste de Wilcoxon com p<0,05. A administração de quinidina mostra perda da enantiosseletividade na disposição cinética do trans-T e acúmulo plasmático do (-)-M1 (AUC 957,61 vs 1672,70 ng.h/mL) e do (+)-M2 (AUC 4732,40 vs 1582,80 ng.h/mL). A comparação entre os grupos controle e quinidina permite observar que o tratamento com quinidina resulta em acúmulo plasmático do (-)-trans-T (AUC 828,44 vs 116,38 ng.h/mL), (+)-trans-T (AUC 2243,10 vs 527,88 ng.h/mL), (-)-M2 (AUC 1582,80 vs 225,34 ng.h/mL) e (+)-M2 (AUC 4732,40 vs 1210,90 ng.h/mL). Os animais com diabetes induzido por estreptozotocina quando comparados ao grupo controle mostram inibição (teste Kruskall-Wallis, p<0,05) do metabolismo do (+)-trans-T (AUC 527,88 vs 2617,80 ng.h/mL), (-)-trans-T (AUC 116,38 vs 1081,70 ng.h/mL) e do (-)-M1 (918,52 vs 2723,90 ng.h/mL). O tratamento com insulina durante 12 dias reverte a inibição preferencial no metabolismo do (-)-trans-T causada pelo diabetes experimental. Os valores de AUC do (-)-trans-T no grupo diabetes insulina (195,42 ng.h/mL) são próximos aos valores reportados para o grupo controle (116,38 ng.h/mL) e menores do que aqueles reportados para o grupo diabético (1081,70 ng.h/mL). Em relação ao (+)-trans-T pode-se observar tendência de redução nas concentrações plasmáticas no grupo de animais diabéticos tratados com insulina (AUC 1460,10 ng.h/mL) em relação ao grupo diabético (AUC 2617,80 ng.h/mL). Concluindo, os animais com diabetes induzido por estreptozotocina mostram inibição preferencial do metabolismo do (-)-trans-T, a qual é revertida pelo tratamento com insulina durante 12 dias. O tratamento com quinidina resulta em acúmulo plasmático do (-)-trans-T, (+)-trans-T, (-)-M2 e (+)-M2. Ressalta-se, no entanto que nos animais com diabetes induzido por estreptozotocina tratados ou não com insulina a quinidina não altera a disposição cinética de ambos os enantiômeros do trans-T. / Trans-tramadol (trans-T) is a central action analgesic, which is available in clinical practice as a racemic mixture of the (+)-trans-T and (-)-trans-T enantiomers. Trans-T is biotransformed by CYP2D to the active metabolite O-desmethyltramadol (M1) and by CYP2B and CYP3A to the inactive metabolite N-desmethyltramadol (M2). This study investigates the influence of experimental diabetes on the kinetic disposition and metabolism of the enantiomers of trans-T and its metabolites in animals treated or not with insulin and/or quinidine. Male Wistar rats were divided into the following groups: control, quinidine (single i.p. dose of 80 mg/kg quinidine administered 4 h before trans-T), diabetic (single i.v. dose of 45 mg/kg streptozotocin), insulin diabetic (2 IU/day NPH insulin for 12 days), quinidine diabetic, and insulin+quinidine diabetic. The animals (n=6 per sampling time) received a single oral (gavage) dose of 20 mg/kg racemic trans-T and serial blood samples were collected up to 12 h after administration of the drug. Plasma concentrations of the trans-T, M1 and M2 enantiomers were determined by LC-MS/MS using a Chiralpak® AD chiral column. The pharmacokinetic parameters were calculated using the WinNonlin 4.1 program and are expressed as median. The kinetic disposition of trans-T was enantioselective in the control group, with the plasma accumulation of (+)-trans-T (AUC 527.88 vs 116.38 ng.h/mL) and (+)-M2 (AUC 1210.90 vs 225.34 ng.h/mL) (Wilcoxon test, p<0.05). The administration of quinidine resulted in the loss of enantioselectivity in the kinetic disposition of trans-T and in the plasma accumulation of (-)-M1 (AUC 957.61 vs 1672.70 ng.h/mL) and (+)-M2 (AUC 4732.40 vs 1582.80 ng.h/mL). Comparison between the control and quinidine groups showed that treatment with quinidine resulted in the plasma accumulation of (-)-trans-T (AUC 828.44 vs 116.38 ng.h/mL), (+)-trans-T (AUC 2243.10 vs 527.88 ng.h/mL), (-)-M2 (AUC 1582.80 vs 225.34 ng.h/mL), and (+)-M2 (AUC 4732.40 vs 1210.90 ng.h/mL). Inhibition of the metabolism of (+)-trans-T (AUC 527.88 vs 2617.80 ng.h/mL), (-)-trans-T (AUC 116.38 vs 1081.70 ng.h/mL), and (-)-M1 (918.52 vs 2723.90 ng.h/mL) was observed in animals with streptozotocin-induced diabetes when compared to the control group (Kruskal-Wallis test, p<0.05). Treatment with insulin for 12 days reversed the preferential inhibition of the metabolism of (-)-trans-T caused by experimental diabetes. The AUC value of (-)-trans-T obtained for the insulin diabetic group (195.42 ng.h/mL) was close to that found for the control group (116.38 ng.h/mL) and lower than that observed for the diabetic group (1081.70 ng.h/mL). Plasma concentrations of (+)-trans-T tended to be lower in the group of diabetic animals treated with insulin (AUC 1460.10 ng.h/mL) compared to the diabetic group (AUC 2617.80 ng.h/mL). In conclusion, preferential inhibition of the metabolism of (-)-trans-T is observed in animals with streptozotocin-induced diabetes, which is reversed by insulin treatment for 12 days. Treatment with quinidine results in the plasma accumulation of (-)-trans-T, (+)-trans-T, (-)-M2, and (+)-M2. However, quinidine does not alter the kinetic disposition of either trans-T enantiomer in animals with streptozotocin-induced diabetes treated or not with insulin.

O trabalho tem por objetivo desenvolver um protocolo experimental de avaliação da cicatrização de lesões cutâneas em ratos diabéticos (aloxânicos) através da análise do espectro de cor das fibras colágenas e de macrófagos. Considerando que em indivíduos normais, os mecanismos que regulam a cicatrização são bem conhecidos, determinou-se neste estudo verificar os mecanismos que regulam a cicatrização de animais diabéticos. Utilizamos inicialmente 60 ratos Wistar, machos. O diabetes foi induzido por injeção intravenosa (veia dorsal do pênis de Aloxana (2, 4, 5, 6 - Tetraoxypyrimidina; 5 - 6 Dioxyuracila) SIGMA, 0,1ml de solução a cada 100 g. de peso corporal. Para se chegar ao número de 12 ratos diabéticos, foram utilizados 48 ratos, destes 39,58% não desenvolveram a hiperglicemia nos néveis fixados (acima de 250mg/l ), 6,25% morreram por hipoglicemia nas primeiras 24 horas; nas 48 horas seguintes 20,83% % morreram por hiperglicemia, 4,17% morreram durante procedimento anestésico e 4,17% morreram ao longo do experimento. Foi realizada uma lesão no dorso dos animais que foram divididos em 2 grupos com 12 animais cada e receberam a denominação de Grupo 1 Diabético Grupo 2 Não Diabético. As 24 amostras dos tecidos colhidas no 3º, 7º e 14º após a lesão, foram incluídas em parafina e cortadas transversalmente e passaram por dois processos distintos, ou seja, 24 amostras por coloração com Tricrômico de Masson e 24 amostras pela técnica imunohistoquímica - anticorpo monoclonal HAM 56. Utilizou-se o software IMAGELAB para a análise morfométrica do percentual de fibras colágenas por densidade de cor e número de macrófagos evidenciados pela imunohistoquímica. Os dados obtidos em relação ao percentual de fibras colágenas e macrófagos foram tratados estatisticamente por testes paramêtricos de análise de variância, segundo dois critérios, e confirmados pelo Teste "Tukey" onde se fixou em 5% o nível de rejeição da hipótese de nulidade. Fixando-se: para ambos p< 0,5. Concluímos que o protocolo experimental para avaliação da cicatrização de lesões em ratos diabéticos se mostrou eficaz, demonstrando que a cicatrização no grupo de animais diabéticos apresentou-se retardada durante todas as etapas do processo de reparo e que a porcentagem de fibras colágenas e macrófagos pode ser facilmente analisada pelo espectro de cor. / This study aims to develop an experimental evaluation protocol of the healing of skin wounds in diabetic rats (aloxanic) through the analysis of color spectrum of collagenous fibres and macrophage. Considering that the mechanisms regulating scarring in normal individuals are well-known it was determined to verify the mechanisms regulating the scarring in diabetic animals. 60 Wistar male rats were used. Diabetes was induced by means of intravenous injection (dorsal penis vein of Aloxana (2, 4, 5, 6 - Tetraoxypyrimidine; 5 - 6 Dioxyuracila) SIGMA, 0,1 ml of solution per 100g of body weight. In order to reach 12 diabetic rats, 48 rats were used. 39.58% of them did not develop hypoglycemia in the established levels (above 250mg/l), 6.25% died from hypoglycemia within 24 hours; in the following 48 hours, 20.83% died from hypoglicemia, 4,17% died during the anesthetic procedures and 4,17% died along the experiment. In order to follow the study a lesion was performed on the back of the animals which were divided into two groups with 12 animals each and received the following denomination: Group I Diabetic and Group II Non-Diabetic. The 24 tissue samples collected in the 3rd , 7th and 14th days after the lesion were included in paraffine and transversally cut and suffered two different processes, that means, 24 samples received coloration with Masson Tricomic and 24 samples suffered the imunohistochemical technic - HAM 56 monoclonic antibody. The software IMAGELAB was used in the morphometric analysis of the percentage of collagen by density of colour and number of macrophage highlighted by immunehistochemistry The obtained data concerning the percentage of collagenous fibres and the number of macrophage were statistically treated by ANOVA following two criteria and confirmed by Tukey Test where the rejection level of nullity possibility was established to be 5% (alpha<=0,05). It was obtained p< 0,5 for both. We came to the conclusion that the experimental protocol for the evaluation of healing of wounds in diabetic rats has proved efficient, showing that the healing in the group of diabetic animals is slowed down during all the stages of the repairing process; the percentage of collagenous fibres and macrophage can be easily analysed by the colour spectrum.

O trabalho tem por objetivo desenvolver um protocolo experimental de avaliação da cicatrização de lesões cutâneas em ratos diabéticos (aloxânicos) através da análise do espectro de cor das fibras colágenas e de macrófagos. Considerando que em indivíduos normais, os mecanismos que regulam a cicatrização são bem conhecidos, determinou-se neste estudo verificar os mecanismos que regulam a cicatrização de animais diabéticos. Utilizamos inicialmente 60 ratos Wistar, machos. O diabetes foi induzido por injeção intravenosa (veia dorsal do pênis de Aloxana (2, 4, 5, 6 - Tetraoxypyrimidina; 5 - 6 Dioxyuracila) SIGMA, 0,1ml de solução a cada 100 g. de peso corporal. Para se chegar ao número de 12 ratos diabéticos, foram utilizados 48 ratos, destes 39,58% não desenvolveram a hiperglicemia nos néveis fixados (acima de 250mg/l ), 6,25% morreram por hipoglicemia nas primeiras 24 horas; nas 48 horas seguintes 20,83% % morreram por hiperglicemia, 4,17% morreram durante procedimento anestésico e 4,17% morreram ao longo do experimento. Foi realizada uma lesão no dorso dos animais que foram divididos em 2 grupos com 12 animais cada e receberam a denominação de Grupo 1 Diabético Grupo 2 Não Diabético. As 24 amostras dos tecidos colhidas no 3º, 7º e 14º após a lesão, foram incluídas em parafina e cortadas transversalmente e passaram por dois processos distintos, ou seja, 24 amostras por coloração com Tricrômico de Masson e 24 amostras pela técnica imunohistoquímica - anticorpo monoclonal HAM 56. Utilizou-se o software IMAGELAB para a análise morfométrica do percentual de fibras colágenas por densidade de cor e número de macrófagos evidenciados pela imunohistoquímica. Os dados obtidos em relação ao percentual de fibras colágenas e macrófagos foram tratados estatisticamente por testes paramêtricos de análise de variância, segundo dois critérios, e confirmados pelo Teste "Tukey" onde se fixou em 5% o nível de rejeição da hipótese de nulidade. Fixando-se: para ambos p< 0,5. Concluímos que o protocolo experimental para avaliação da cicatrização de lesões em ratos diabéticos se mostrou eficaz, demonstrando que a cicatrização no grupo de animais diabéticos apresentou-se retardada durante todas as etapas do processo de reparo e que a porcentagem de fibras colágenas e macrófagos pode ser facilmente analisada pelo espectro de cor. / This study aims to develop an experimental evaluation protocol of the healing of skin wounds in diabetic rats (aloxanic) through the analysis of color spectrum of collagenous fibres and macrophage. Considering that the mechanisms regulating scarring in normal individuals are well-known it was determined to verify the mechanisms regulating the scarring in diabetic animals. 60 Wistar male rats were used. Diabetes was induced by means of intravenous injection (dorsal penis vein of Aloxana (2, 4, 5, 6 - Tetraoxypyrimidine; 5 - 6 Dioxyuracila) SIGMA, 0,1 ml of solution per 100g of body weight. In order to reach 12 diabetic rats, 48 rats were used. 39.58% of them did not develop hypoglycemia in the established levels (above 250mg/l), 6.25% died from hypoglycemia within 24 hours; in the following 48 hours, 20.83% died from hypoglicemia, 4,17% died during the anesthetic procedures and 4,17% died along the experiment. In order to follow the study a lesion was performed on the back of the animals which were divided into two groups with 12 animals each and received the following denomination: Group I Diabetic and Group II Non-Diabetic. The 24 tissue samples collected in the 3rd , 7th and 14th days after the lesion were included in paraffine and transversally cut and suffered two different processes, that means, 24 samples received coloration with Masson Tricomic and 24 samples suffered the imunohistochemical technic - HAM 56 monoclonic antibody. The software IMAGELAB was used in the morphometric analysis of the percentage of collagen by density of colour and number of macrophage highlighted by immunehistochemistry The obtained data concerning the percentage of collagenous fibres and the number of macrophage were statistically treated by ANOVA following two criteria and confirmed by Tukey Test where the rejection level of nullity possibility was established to be 5% (alpha<=0,05). It was obtained p< 0,5 for both. We came to the conclusion that the experimental protocol for the evaluation of healing of wounds in diabetic rats has proved efficient, showing that the healing in the group of diabetic animals is slowed down during all the stages of the repairing process; the percentage of collagenous fibres and macrophage can be easily analysed by the colour spectrum.

O trans-tramadol (trans-T), é um analgésico de ação central disponível na clínica como mistura racêmica dos enantiômeros (+)-trans-T e (-)-trans-T. O trans-T é biotransformado pelo CYP2D ao metabólito ativo O-desmetiltramadol (M1) e pelo CYP2B e CYP3A ao metabólito inativo N-desmetiltramadol (M2). O estudo investiga a influência do diabetes experimental na disposição cinética e no metabolismo dos enantiômeros do trans-T e seus metabólitos em animais tratados ou não com insulina e/ou quinidina. Os ratos machos Wistar foram divididos nos grupos controle, quinidina (dose única de quinidina i.p. 80mg/Kg 4 h antes do trans-T), diabético (dose única de estreptozotocina i.v. 45 mg/kg), diabético insulina (insulina NPH 2 UI/dia durante 12 dias), diabético quinidina e diabético insulina quinidina. Os animais (n=6/tempo de coleta) receberam dose única oral (gavagem) de 20 mg/kg de rac-trans-T e as coletas seriadas de sangue foram realizadas até 12 h após a administração. As concentrações plasmáticas dos enantiômeros do trans-T, M1 and M2 foram determinadas por LC-MS-MS usando a coluna de fase quiral Chiralpak® AD. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados com auxílio do programa WinNonlin 4.1. e expressos como mediana. A disposição cinética do trans-T é enantiosseletiva no grupo controle com acúmulo plasmático do (+)-trans-T (AUC 527,88 vs 116,38 ng.h/mL) e do (+)-M2 (AUC 1210,90 vs 225,34 ng.h/mL); teste de Wilcoxon com p<0,05. A administração de quinidina mostra perda da enantiosseletividade na disposição cinética do trans-T e acúmulo plasmático do (-)-M1 (AUC 957,61 vs 1672,70 ng.h/mL) e do (+)-M2 (AUC 4732,40 vs 1582,80 ng.h/mL). A comparação entre os grupos controle e quinidina permite observar que o tratamento com quinidina resulta em acúmulo plasmático do (-)-trans-T (AUC 828,44 vs 116,38 ng.h/mL), (+)-trans-T (AUC 2243,10 vs 527,88 ng.h/mL), (-)-M2 (AUC 1582,80 vs 225,34 ng.h/mL) e (+)-M2 (AUC 4732,40 vs 1210,90 ng.h/mL). Os animais com diabetes induzido por estreptozotocina quando comparados ao grupo controle mostram inibição (teste Kruskall-Wallis, p<0,05) do metabolismo do (+)-trans-T (AUC 527,88 vs 2617,80 ng.h/mL), (-)-trans-T (AUC 116,38 vs 1081,70 ng.h/mL) e do (-)-M1 (918,52 vs 2723,90 ng.h/mL). O tratamento com insulina durante 12 dias reverte a inibição preferencial no metabolismo do (-)-trans-T causada pelo diabetes experimental. Os valores de AUC do (-)-trans-T no grupo diabetes insulina (195,42 ng.h/mL) são próximos aos valores reportados para o grupo controle (116,38 ng.h/mL) e menores do que aqueles reportados para o grupo diabético (1081,70 ng.h/mL). Em relação ao (+)-trans-T pode-se observar tendência de redução nas concentrações plasmáticas no grupo de animais diabéticos tratados com insulina (AUC 1460,10 ng.h/mL) em relação ao grupo diabético (AUC 2617,80 ng.h/mL). Concluindo, os animais com diabetes induzido por estreptozotocina mostram inibição preferencial do metabolismo do (-)-trans-T, a qual é revertida pelo tratamento com insulina durante 12 dias. O tratamento com quinidina resulta em acúmulo plasmático do (-)-trans-T, (+)-trans-T, (-)-M2 e (+)-M2. Ressalta-se, no entanto que nos animais com diabetes induzido por estreptozotocina tratados ou não com insulina a quinidina não altera a disposição cinética de ambos os enantiômeros do trans-T. / Trans-tramadol (trans-T) is a central action analgesic, which is available in clinical practice as a racemic mixture of the (+)-trans-T and (-)-trans-T enantiomers. Trans-T is biotransformed by CYP2D to the active metabolite O-desmethyltramadol (M1) and by CYP2B and CYP3A to the inactive metabolite N-desmethyltramadol (M2). This study investigates the influence of experimental diabetes on the kinetic disposition and metabolism of the enantiomers of trans-T and its metabolites in animals treated or not with insulin and/or quinidine. Male Wistar rats were divided into the following groups: control, quinidine (single i.p. dose of 80 mg/kg quinidine administered 4 h before trans-T), diabetic (single i.v. dose of 45 mg/kg streptozotocin), insulin diabetic (2 IU/day NPH insulin for 12 days), quinidine diabetic, and insulin+quinidine diabetic. The animals (n=6 per sampling time) received a single oral (gavage) dose of 20 mg/kg racemic trans-T and serial blood samples were collected up to 12 h after administration of the drug. Plasma concentrations of the trans-T, M1 and M2 enantiomers were determined by LC-MS/MS using a Chiralpak® AD chiral column. The pharmacokinetic parameters were calculated using the WinNonlin 4.1 program and are expressed as median. The kinetic disposition of trans-T was enantioselective in the control group, with the plasma accumulation of (+)-trans-T (AUC 527.88 vs 116.38 ng.h/mL) and (+)-M2 (AUC 1210.90 vs 225.34 ng.h/mL) (Wilcoxon test, p<0.05). The administration of quinidine resulted in the loss of enantioselectivity in the kinetic disposition of trans-T and in the plasma accumulation of (-)-M1 (AUC 957.61 vs 1672.70 ng.h/mL) and (+)-M2 (AUC 4732.40 vs 1582.80 ng.h/mL). Comparison between the control and quinidine groups showed that treatment with quinidine resulted in the plasma accumulation of (-)-trans-T (AUC 828.44 vs 116.38 ng.h/mL), (+)-trans-T (AUC 2243.10 vs 527.88 ng.h/mL), (-)-M2 (AUC 1582.80 vs 225.34 ng.h/mL), and (+)-M2 (AUC 4732.40 vs 1210.90 ng.h/mL). Inhibition of the metabolism of (+)-trans-T (AUC 527.88 vs 2617.80 ng.h/mL), (-)-trans-T (AUC 116.38 vs 1081.70 ng.h/mL), and (-)-M1 (918.52 vs 2723.90 ng.h/mL) was observed in animals with streptozotocin-induced diabetes when compared to the control group (Kruskal-Wallis test, p<0.05). Treatment with insulin for 12 days reversed the preferential inhibition of the metabolism of (-)-trans-T caused by experimental diabetes. The AUC value of (-)-trans-T obtained for the insulin diabetic group (195.42 ng.h/mL) was close to that found for the control group (116.38 ng.h/mL) and lower than that observed for the diabetic group (1081.70 ng.h/mL). Plasma concentrations of (+)-trans-T tended to be lower in the group of diabetic animals treated with insulin (AUC 1460.10 ng.h/mL) compared to the diabetic group (AUC 2617.80 ng.h/mL). In conclusion, preferential inhibition of the metabolism of (-)-trans-T is observed in animals with streptozotocin-induced diabetes, which is reversed by insulin treatment for 12 days. Treatment with quinidine results in the plasma accumulation of (-)-trans-T, (+)-trans-T, (-)-M2, and (+)-M2. However, quinidine does not alter the kinetic disposition of either trans-T enantiomer in animals with streptozotocin-induced diabetes treated or not with insulin.

Orientador: César Tadeu Spadella / Banca: Walkyria de Paula Pimenta / Banca: Luiz Antônio Lima Resende / Banca: Antônio de Castro Rodrigues / Banca: Lauro Bogodar Ruczynski / Resumo: A neuropatia motora distal é uma das freqüentes complicações do Diabetes Mellitus , e sua prevalência pode ser considera igual a 100%, se pacientes com alterações de condução nervosa, sem acompanhamento de sinais ou sintomas, são inclusos. Neste contexto, o presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de obter informações relacionadas às polineuropatias periféricas em animais com diabetes induzido pela aloxana. Os grupos experimentais foram formados por 50 ratos diabéticos (GD) sem tratamento, da raça Wistar, machos, e 50 ratos não diabéticos (GND) da mesma espécie e idade. As avaliações eletrofisiológicas foram obtidas após 1, 3, 6, 9 e 12 meses de seguimento, respectivamente, nos cinco subgrupos, cada um, com cinco animais. Os exames dos nervos ciático e caudal mostraram: (i) os potenciais de ação muscular composto (CMAPs) apresentaram diminuição da amplitude e aumento da dispersão temporal; (ii) a velocidade de condução nervosa (NCV) foi menor (p < 0,05) no GD, com diferença estatisticamente significante na NCV do nervo caudal nos diferentes intervalos de tempo; (iii) a latência distal (DLAT) foi maior (p < 0,05) no GD, com diferença estatisticamente significante na DLAT do nervo caudal entre os vários subgrupos do GD. Estes resultados demonstram que o modelo experimental proposto pode ser usado para o estudo funcional da neuropatia diabética. Os parâmetros obtidos fornecem subsídios para testes com as terapias convencionais, as cirúrgicas e as de suplementação no tratamento da neuropatia diabética motora distal. / Abstract: Distal motor neuropathy is one of the most common complications of diabetes mellitus, and its prevalence can be considered as high as 100 percent if patients with abnormalities of nerve conduction without accompanying signs or symptoms are included. In this context, the present study was undertaken to obtain information concerning the peripheral polyneuropathies in alloxan-induced diabetic animals. Experiments were carried out on 50 untreated diabetic control (DG) Wistar male rats, and 50 age-matched nondiabetic controls (NDG). Electrophysiological assessments were obtained after 1, 3, 6, 9, and 12 months of follow-up, respectively, in the five subgroups with 5 animals each. Analysis of the recorded response from the right sciatic and caudal nerves showed: (i) diminished amplitude and increased temporal dispersion of the compound muscle action potentials (CMAPs) in the DG; (ii) nerve conduction velocity (NCV) lower (p< 0.05) in the DG, with statistically significant difference in NCV of the caudal nerve at different time intervals; (iii) distal latency (DLAT) higher (p< 0.05) in the DG, with statistically significant difference in DLAT of the caudal nerve among the several diabetic subgroups. These results demonstrate that the experimental model proposed can be used for a functional study of diabetic neuropathy. The parameters obtained supply assistance for tests with conventional therapies, with surgeries and those with supplementation in treatment of distal motor diabetic neuropathy. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-05Bitstream added on 2014-06-13T19:19:08Z : No. of bitstreams: 1 alberti_s_dr_botfm.pdf: 1965763 bytes, checksum: 152896f45a1eaa1245533a7d1c8b084d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A neuropatia motora distal é uma das freqüentes complicações do Diabetes Mellitus , e sua prevalência pode ser considera igual a 100%, se pacientes com alterações de condução nervosa, sem acompanhamento de sinais ou sintomas, são inclusos. Neste contexto, o presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de obter informações relacionadas às polineuropatias periféricas em animais com diabetes induzido pela aloxana. Os grupos experimentais foram formados por 50 ratos diabéticos (GD) sem tratamento, da raça Wistar, machos, e 50 ratos não diabéticos (GND) da mesma espécie e idade. As avaliações eletrofisiológicas foram obtidas após 1, 3, 6, 9 e 12 meses de seguimento, respectivamente, nos cinco subgrupos, cada um, com cinco animais. Os exames dos nervos ciático e caudal mostraram: (i) os potenciais de ação muscular composto (CMAPs) apresentaram diminuição da amplitude e aumento da dispersão temporal; (ii) a velocidade de condução nervosa (NCV) foi menor (p < 0,05) no GD, com diferença estatisticamente significante na NCV do nervo caudal nos diferentes intervalos de tempo; (iii) a latência distal (DLAT) foi maior (p < 0,05) no GD, com diferença estatisticamente significante na DLAT do nervo caudal entre os vários subgrupos do GD. Estes resultados demonstram que o modelo experimental proposto pode ser usado para o estudo funcional da neuropatia diabética. Os parâmetros obtidos fornecem subsídios para testes com as terapias convencionais, as cirúrgicas e as de suplementação no tratamento da neuropatia diabética motora distal. / Distal motor neuropathy is one of the most common complications of diabetes mellitus, and its prevalence can be considered as high as 100 percent if patients with abnormalities of nerve conduction without accompanying signs or symptoms are included. In this context, the present study was undertaken to obtain information concerning the peripheral polyneuropathies in alloxan-induced diabetic animals. Experiments were carried out on 50 untreated diabetic control (DG) Wistar male rats, and 50 age-matched nondiabetic controls (NDG). Electrophysiological assessments were obtained after 1, 3, 6, 9, and 12 months of follow-up, respectively, in the five subgroups with 5 animals each. Analysis of the recorded response from the right sciatic and caudal nerves showed: (i) diminished amplitude and increased temporal dispersion of the compound muscle action potentials (CMAPs) in the DG; (ii) nerve conduction velocity (NCV) lower (p< 0.05) in the DG, with statistically significant difference in NCV of the caudal nerve at different time intervals; (iii) distal latency (DLAT) higher (p< 0.05) in the DG, with statistically significant difference in DLAT of the caudal nerve among the several diabetic subgroups. These results demonstrate that the experimental model proposed can be used for a functional study of diabetic neuropathy. The parameters obtained supply assistance for tests with conventional therapies, with surgeries and those with supplementation in treatment of distal motor diabetic neuropathy.

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do treinamento físico (TF) sobre as alterações do metabolismo energético induzidas pelo diabetes em camundongos com 1 e 3 cópias do gene da enzima conversora de angiotensina (ECA). Para isso, camundongos machos C57BL/6 geneticamente modificados com 1 e 3 cópias do gene da ECA foram induzidos ao diabetes por estreptozotocina (STZ), e separados em 4 grupos de acordo com a realização ou não de TF com natação: 1 cópia sedentário (1S, n=14), 1 cópia treinado (1T, n=15), 3 cópias sedentário (3S, n=10), e 3 cópias treinado (3T, n=11). Os principais resultados foram: não houve diferença no ganho de peso corporal, porém o peso do depósito de gordura retroperitoneal e diâmetro de adipócito foram menores no grupo 3T comparado ao 1S, 1T e 3S; menor consumo de ração diária do 1S comparado ao 1T, 3S e 3T; maior consumo de oxigênio de repouso do 3S comparado ao 1T e 3T; melhor capacidade de realizar exercício físico e menor glicemia de jejum do 1T comparado ao 1S e 3S (1T=305±34 vs. 1S=479±47 e 3S=496±49 mg/dl); maior concentração de leptina no 1T comparado ao 1S (1T=5,65±0,33 vs 1S=4,07±0,43 ng/ml) xi e maior atividade lipolítica no 1T comparada aos grupos 1S, 3S e 3T (1T=288±50 nmol/106cels/h vs. 1S=79±37, 3S=123±37 e 3T=50±20 nmol/106cels/h); Não houve diferença estatística entre os grupos na tolerância à glicose, na atividade da enzima lipogênica ácido graxo sintase, na atividade da enzima citrato sintase, na tipagem de fibras e na razão capilar/fibra muscular do músculo sóleo. Esses resultados demonstraram que as adaptações metabólicas promovidas pelo TF no diabetes são parcialmente associadas ao genótipo da ECA / The main purpose of this study was to evaluate the effects of physical training (PT) on changes in energy metabolism induced by diabetes in mice harboring 1 and 3 copies of angiotensin converting enzyme (ACE) gene. For this, transgenic adult male mice (C57BL/6) with 1 or 3 copies of ACE gene were induced to diabetes by Streptozotocin (STZ) and separated into groups sedentary or physical trained with swimming: 1 copy sedentary (1S, n = 14), 1 copy trained (1T, n = 15), 3 copies sedentary (3S, n = 10) and 3 copies trained (3T, n = 11). The main results were: body weight gain was not different among groups, but 3T group reduced retroperitoneal fat pad and adipocyte diameter compared to 1S, 1T and 3S groups; daily food intake was lower in 1S compared to 1T, 3S and 3T groups; resting oxygen uptake was higher in 3S compared to 1T and 3T; physical exercise ability increased and fasting glucose decreased only in 1T group compared to 1S and 3S (1T=305±34 vs. 1S=479±47 e 3S=496±49 mg/dl); serum leptin increased in 1T compared to 1S (1T=5,65±0,33 vs 1S=4,07±0,43 ng/ml), and lipolytic activity was higher in 1T compared to 1S, 3S and 3T groups (1T=288±50 nmol/106cels/h vs. 1S=79±37, 3S=123±37 e 3T=50±20 nmol/106cels/h). There were no statistical differences among groups in glucose tolerance, lipogenic activity of fat acid synthase, activity of citrate synthase enzyme, fibre type composition and capillary-to-fibre ratio of soleous muscle. These results demonstrated that metabolic adaptations promoted by PT in diabetes are partially associated with ACE genotype

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do treinamento físico (TF) sobre as alterações do metabolismo energético induzidas pelo diabetes em camundongos com 1 e 3 cópias do gene da enzima conversora de angiotensina (ECA). Para isso, camundongos machos C57BL/6 geneticamente modificados com 1 e 3 cópias do gene da ECA foram induzidos ao diabetes por estreptozotocina (STZ), e separados em 4 grupos de acordo com a realização ou não de TF com natação: 1 cópia sedentário (1S, n=14), 1 cópia treinado (1T, n=15), 3 cópias sedentário (3S, n=10), e 3 cópias treinado (3T, n=11). Os principais resultados foram: não houve diferença no ganho de peso corporal, porém o peso do depósito de gordura retroperitoneal e diâmetro de adipócito foram menores no grupo 3T comparado ao 1S, 1T e 3S; menor consumo de ração diária do 1S comparado ao 1T, 3S e 3T; maior consumo de oxigênio de repouso do 3S comparado ao 1T e 3T; melhor capacidade de realizar exercício físico e menor glicemia de jejum do 1T comparado ao 1S e 3S (1T=305±34 vs. 1S=479±47 e 3S=496±49 mg/dl); maior concentração de leptina no 1T comparado ao 1S (1T=5,65±0,33 vs 1S=4,07±0,43 ng/ml) xi e maior atividade lipolítica no 1T comparada aos grupos 1S, 3S e 3T (1T=288±50 nmol/106cels/h vs. 1S=79±37, 3S=123±37 e 3T=50±20 nmol/106cels/h); Não houve diferença estatística entre os grupos na tolerância à glicose, na atividade da enzima lipogênica ácido graxo sintase, na atividade da enzima citrato sintase, na tipagem de fibras e na razão capilar/fibra muscular do músculo sóleo. Esses resultados demonstraram que as adaptações metabólicas promovidas pelo TF no diabetes são parcialmente associadas ao genótipo da ECA / The main purpose of this study was to evaluate the effects of physical training (PT) on changes in energy metabolism induced by diabetes in mice harboring 1 and 3 copies of angiotensin converting enzyme (ACE) gene. For this, transgenic adult male mice (C57BL/6) with 1 or 3 copies of ACE gene were induced to diabetes by Streptozotocin (STZ) and separated into groups sedentary or physical trained with swimming: 1 copy sedentary (1S, n = 14), 1 copy trained (1T, n = 15), 3 copies sedentary (3S, n = 10) and 3 copies trained (3T, n = 11). The main results were: body weight gain was not different among groups, but 3T group reduced retroperitoneal fat pad and adipocyte diameter compared to 1S, 1T and 3S groups; daily food intake was lower in 1S compared to 1T, 3S and 3T groups; resting oxygen uptake was higher in 3S compared to 1T and 3T; physical exercise ability increased and fasting glucose decreased only in 1T group compared to 1S and 3S (1T=305±34 vs. 1S=479±47 e 3S=496±49 mg/dl); serum leptin increased in 1T compared to 1S (1T=5,65±0,33 vs 1S=4,07±0,43 ng/ml), and lipolytic activity was higher in 1T compared to 1S, 3S and 3T groups (1T=288±50 nmol/106cels/h vs. 1S=79±37, 3S=123±37 e 3T=50±20 nmol/106cels/h). There were no statistical differences among groups in glucose tolerance, lipogenic activity of fat acid synthase, activity of citrate synthase enzyme, fibre type composition and capillary-to-fibre ratio of soleous muscle. These results demonstrated that metabolic adaptations promoted by PT in diabetes are partially associated with ACE genotype

Diabetes mellitus tipo 1 resulta da produção insuficiente ou da ausência de insulina, decorrente da destruição de células &#946;, por mecanismo auto-imune. O tratamento deste tipo de diabetes consiste na administração subcutânea de insulina exógena. Recentemente, foi demonstrado que o transplante de ilhotas pancreáticas é capaz de tornar o portador de diabetes tipo 1 independente de insulina exógena. Apesar do sucesso alcançado, a necessidade permanente de imunossupressão é uma das principais barreiras para que o transplante de ilhotas possa ser realizado em número maior de pacientes. Assim, o desenvolvimento de novas metodologias que evitem a rejeição do enxerto, como o macro e o microencapsulamento de ilhotas, continua sendo crucial para o estabelecimento definitivo do transplante de ilhotas como opção terapêutica no tratamento de diabetes tipo 1. Neste trabalho, foi padronizado um modelo animal para avaliar, in vivo, a funcionalidade das ilhotas pancreáticas humanas isoladas e purificadas na Unidade de Ilhotas Pancreáticas Humanas do IQUSP. Ratos NIH nude foram tornados diabéticos através de injeção de estreptozotocina para o implante de ilhotas pancreáticas humanas nuas e microencapsuladas. As ilhotas foram microencapsuladas em Biodritina, um novo heteropolissacarídeo patenteado e cedido ao nosso laboratório, tendo sido possível padronizar a produção de microcápsulas uniformes e homogêneas, com tamanho médio entre 400&#181;m e 600 &#181;m. A reversão do diabetes ocorreu em 24% dos ratos nude transplantados com ilhotas pancreáticas humanas nuas. Por outro lado, não observamos reversão do diabetes quando ilhotas encapsuladas foram implantadas, apesar do teste de atividade funcional realizado in vitro ter demonstrado que elas continuam a secretar insulina e a responder ao estímulo com glicose após o encapsulamento. Para elucidar este efeito, cápsulas vazias foram implantadas em ratos nude e em ratos imunocompetentes, os quais desenvolveram processo inflamatório acompanhado de processo fibrótico no local do implante. Estudo imuno-histoquímico está sendo realizado para esclarecer a natureza e a intensidade destes processos. / Type 1 diabetes mellitus results from insufficient or absence of insulin production, as a consequence of destruction of pancreatic &#946; cells, by an auto-imune mechanism. Treatment for this type of diabetes consists of subcutaneous administration of exogenous insulin. Recently, it has been demonstrated that pancreatic islet cell transplantation is capable of rendering type I diabetic patients independent of exogenous insulin. However, in spite of the success achieved, permanent immunosuppression is still required, being the main barrier to expand this treatment to a large number of patients. Therefore, development of new technologies, such as islet macro and microencapsulation to avoid rejection of the tissue implanted, is still crucial for definitive establishment of islet transplantation as a therapeutic alternative for type I diabetes. In the present work, an animal model was established for in vivo evaluation of the functional ability of human pancreatic islets, which were isolated and purified at the Human Pancreatic Islet Unit of the University of São Paulo Chemistry Institute. Diabetes was induced in NIH nude rats through streptozotocin injection followed by implantation of naked or microencapsulated human pancreatic islets. Biodritin, a new and patented heteropolyssaccaride was used to microencapsulate the islets. The production of uniform and homogeneous microcapsules with diameters in the range of 400&#181;m e 600 &#181;m was successfully established. Reversion of diabetes occurred in 24% of the nude rats transplanted with human pancreatic islets. On the other hand, no reversion of diabetes was observed when encapsulated islets were implanted, although their functional activity in vitro indicated that they secreted insulin and responded to glucose stimulation upon encapsulation. In order to elucidate this effect, empty capsules were implanted in nude rat and in immunocompetent rats, both of which developed an inflammatory process accompanied by a fibrotic process in the site of the implant. Immunohistochemical studies are underway to address the nature and the intensity of these inflammatory processes.