Rotavírus têm sido identificados mundialmente como o mais importante agente etiológico de diarréias agudas não-bacterianas em animais jovens de várias espécies, incluindo a humana. Foi desenvolvido e avaliado um método de ELISA tipo “duplo-sanduíche” para a detecção de rotavírus a partir de material fecal. Para tanto, a amostra NCDV de rotavírus do grupo A foi propagada em cultivo celular com células MA-104. O vírus foi concentrado por ultracentrifugação e inoculado em coelhos e carneiros. Em seguida, as frações IgG, oriundas de amostras de soro dos animais, foram purificadas por cromatografia de troca iônica e absorvidas com soro total de ambas espécies animais, utilizando-se polímero de glutaraldeído, de modo a eliminar reações inespecíficas. A presença do rotavírus foi detectada pela IgG de carneiros e revelada pela IgG de coelho, usando como conjugado IgG de cabra anti-IgG de coelho conjugada à peroxidase. Os valores de diluição dos componentes do ELISA e o valor do ponto-de-corte foram definidos usando-se 26 amostras fecais (13 positivas e 13 negativas) de leitões, tendo como prova padrão a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Aplicado a um painel constituído de 86 amostras fecais diarréicas de leitões, os resultados do ELISA foram: 100% de sensibilidade; 98,79% de especificidade, com uma concordância de 98,83%. A variância entre 86 repetições da mesma amostra foram 0,001 (para a amostra positiva) e 0,0002 (para a amostra negativa). Estes resultados demonstram que este ELISA é um teste sensível e específico para o diagnóstico de rotavírus a partir de material fecal. / Rotaviruses have been identified worldwide as a major etiologic agent of acute nonbacterial diarrhea in the young of many species, including humans. In this investigation was developed and evaluated a “double-sandwich” antibody ELISA method for detection of rotavirus from stool specimens. For that, the NCDV strain of rotavirus group A was serially cultivated in MA-104 cell culture. The virus was concentrated by ultra-centrifugation and inoculated in rabbits and sheeps. After that, the IgG of serum samples of the animals was purified by ion-exchange chromatography and absorbed with whole serum of both animal species using a glutaraldehyde polymer, in order to eliminate inespecific reactions. The presence of rotavirus was detected by the sheep’s IgG and revelated by the rabbit’s IgG, using a anti-rabbit IgG peroxidase conjugate developed in goat. The values of diluition of the components of the ELISA and the cut-off value were defined using 26 fecal samples (13 positive and 13 negative) of piglets. Following this procedure, the test was employed in a panel of 86 fecal samples from piglets with diarrhea, using as standard the polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE) test. The results of the ELISA were: 100% of sensivity; 98.79% of specificity, with an agreement of 98.83%. The variance between 86 repetitions of the same sample were 0.001 (for one positive sample) and 0.0002 (for one negative sample). These results showed that this ELISA is an sensitive and specific screening test for rotavirus diagnosis from fecal material.

Espécimens de saliva, oculares, de glândulas salivares e de encéfalo obtidos de 30 cães infectados naturalmente, foram examinados através das técnicas de IFD e de IIC e posteriormente comparados, com o objetivo de apreciar a sensibilidade de alternativas propostas para o diagnóstico da raiva. Os resultados evidenciam a ocorrência de discrepâncias entre as técnicas de IFD e de IIC apenas quando aplicadas aos espécimens de saliva, oculares e de glândulas salivares parôtidas, em 5 (16,66%), 9 (30%) e 11 (36,66%) casos respectivamente, mas sem revelar significância estatística. As glândulas salivares submaxilares e o encéfalo foram os espécimens mais apropriados para o diagnóstico da raiva, tanto à IFD, como à IIC, tendo ambos apresentado uma taxa de 100% de positividade, significativamente maior do que a observada com o exame da córnea, do humor aquoso e das glândulas salivares parótidas. A associação das duas técnicas para o diagnóstico da raiva, tornou o procedimento tão sensível quanto a combinação pareada dos diferentes espécimens, embora a eficiência de 100%, não tenha sido observada em todas as oportunidades, quando se considerou uma ou outra alternativa. O tratamento da saliva pelas técnicas de IFD e de IIC associadas, foi comparável à combinação da saliva com a córnea por IFD, para demonstrar a infecção rábica em cães. Ambas as alternativas revelaram uma positividade de 100%, idêntica à observada com cada um dos espécimens de glândulas salivares submaxilares e de encéfalo, quando tratados por uma ou outra técnica isoladamente. / glands specimens in 5 (16,66%), 9 (30%) and 11 (36,66%) cases respectivelly, without showing any evidence of statistical significance. The specimens from submaxillary salivary glands and encephalon were most suitable for the rabies diagnosis in either the direct immunofluorescence or in mouse intracerebral inoculation techniquess both of them showing a rate of 100% positiveness significantly greather than that observed in cornea, aqueous humor and parotid salivary glands examinations. The association of the two techniques for the rabies diagnosis aade the procedure as appreciable as the conjugation of different specimens taken two by two, although a 100% efficiency has not been observed in all cases, regarding to the procedures considered. The direct immunofluorescence and mouse intracerebral inoculation associated procedure for the saliva examination was comparable to combined of saliva and cornea by direct immunofluorescence in order to demonstrate a rabid infection in dogs. Both of the alternative procedures revealed a 100% positiveness identical to that observed for the submaxillary salivary glands and encephalon specimens, when submitted independently to either one or other technique.

Resumo não disponível

O trabalho avalia a contribuição da tomografia computadorizada de alta resolução (TCAR) para o estudo das alterações torácicas na fibrose cística, através da comparação com o exame radiologico convencional do tórax (ERCT). Determina os achados patológicos de 25 pacientes (com 5 a 17 anos) na TCAR e os compara com os identificados no ERCT. Os exames foram realizados em sucessão imediata. Utilizaram-se cortes axiais de 2 mm de espessura, com ]Omm de intervalo entre eles; tempo de rastreamento de 1,4 e 2,0 s; 125 kV e 150 mA. As TCAR foram fotografadas em 3 janelas de densidades apropriadas ao estudo do tórax: parênquima (nível-l024 e janela de 1200 a 2050), brônquios (nível- 550 a - 1000 e janela 1700 a 2300) e mediastino (nível - 30 a -80 e janela 320 a 500). Os achados mais freqüentemente detectados na TCAR do que no ERCT são: espessamento brônquico (100 %), bronquiectasias cilíndricas (96 %), adenomegalias (92 %), impacção mucóide (84 0/0), consolidação e/ou atelectasia (48 %), espessamento pleural costal (32 %), bolhas (20 %) e enfisema localizado (8 %). Bronquiectasias císticas (52 %) e deformação e/ou espessamento das cissuras (60 %) foram mais freqüentes no ERCT. A identificação de alterações das VIas aéreas nos segmentos broncopulmonares foi significativamente superior na TCAR (p<0,05). Em ambos exames, os lobos à direita foram mais freqüentemente comprometidos, especialmente o superior. Verificou-se, em 16 % das TCAR, espessamento do tecido intersticial ao longo dos feixes broncovasculares dos segmentos basais de ambos os pulmões, incluil1do vasos venosos e a gordura presente entre estas diferentes estruturas. A aplicação de sistema de escores para os achados da TCAR permite avaliação mais objetiva da extensão e intensidade das alterações detectadas, diminuindo o componente subjetivo da interpretação radiológica. A TCAR contribui para o entendimento da natureza de alguns achados do ERCT. / This study evaluate the contribution of high resolution computed tomography (HRCT) in assessing thoracic involvement in cystic fibrosis, as compared to chest plain radiography (CPR). The HRCT findings of 25 patients (5 to 17 years old) were determined and compared with those obtained by CPR. The two investigations were performed in elose succession. Sections 2 mm thick were obtained at 10 mm intervals with IA to 2.0 s acquisition time at 125 kV and 150 mA. AlI images were photographed at three leveIs and windows settings appropriated for evaluation of the thorax: parenchyma (widths 1200 to 2050 at leveI -1024), bronchi (widths 1700 to 2300 at leveI -550 to -] 000) and mediastinum (widths 320 to 500 at leveI -30 to -80). The findings more frequently detected by HRCT than by CPR were: peribronchial thickening (100 %), cylindrical bronchiectasis (96 %), adenomegaly (92 %), mucus plugging (84 %), consolidationlatelectasis (48 %), costal pleural thickening (32 %), bullae (20 %) and local emphysema (8 %). Cystic bronchiectasis (52 0/0) and fissures deformationlthickening (60%) were more frequent1y detected by CPR. Detection of airways abnormalities in the bronchopulmonary segments was significant1y superior by HRCT (p<0,05). By either exam the right lobes were more frequently involved, specially the upper lobe. Thickening of the intersticial tissue along the bronchovascular bundles in bilateral basilar segments, ineluding venous vessels and the fat present between these different structures, were manifested in ]6 % of the HRCT exams. The use of a scoring system to HRCT findings allows a more objetive evaluation of the extent and severity of the abnormalities detected and diminish the subjective component of radiographic interpretation. HRCT did contribute to the understanding ofthe pathologic nature of some CPR findings.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina el rol del nivel leucocitario en el diagnóstico de apendicitis aguda en el Tópico de Cirugía de Emergencia del Hospital Emergencias Grau durante el periodo enero-diciembre 2013, Lima-Perú. El estudio es de tipo observacional, descriptivo, retrospectivo. Se recogieron los datos de 621 historias clínicas de pacientes con sospecha de apendicitis aguda que fueron sometidos a cirugía, que cumplieron criterios de inclusión y exclusión. Se analizaron en distribución de frecuencias, medidas de tendencia central y dispersión. El performance diagnóstico del nivel de leucocitos totales, abastonados y neutrófilos, fue analizado mediante el uso de Curvas ROC. De los pacientes con apendicitis, 59.8% (n=332) eran hombres y 40.2% (n=223) mujeres. El grupo etáreo más afectado fue de 20 a 29 años (23.6%). El índice de apendicectomia con apéndice sin alteraciones significativas fue de 10.6%. Se confirmó apendicitis aguda mediante histopatología en el 92.6% (n=428) de pacientes con nivel de leucocitos totales elevado, en el 93.4% de pacientes con nivel de abastonados >500 cel/mm3 y en el 92.7% de pacientes con nivel de neutrófilos elevado. La media del conteo de leucocitos totales (17604 ± 4708), abastonados (958 ± 1081) y neutrófilos (13991 ± 4276) fue mayor en los pacientes con apendicitis aguda gangrenada. Para diferenciar entre pacientes con y sin apendicitis el punto de corte con mejor performance de leucocitos totales fue 12,320 cel/mm3 (S: 70.45%; E: 69.70% y ABC=0.708), de abastonados fue 384 cel/mm3 (S: 53.15%; E: 75.76% y ABC=0.655), y de neutrófilos fue 10,260 cel/mm3 (S: 63.60%; E: 77.27% y ABC=0.717); para diferenciar entre pacientes con apéndice normal y apendicitis no perforada (simple y gangrenada) el punto de corte de leucocitos totales fue 12,870 cel/mm3 (S: 64.97%; E: 74.24% y ABC=0.707), de abastonados fue 384 cel/mm3 (S: 52.45%; E: 75.76% y ABC=0.649), y de neutrófilos fue 10,260 cel/mm3 (S: 63.01%; E: 77.27% y ABC=0.714); y para diferenciar entre pacientes con apendicitis perforada vs pacientes con apéndice normal y apendicitis no perforada, el punto de corte de leucocitos totales fue 12,640 cel/mm3 (S: 81.82%; E: 37.78% y ABC=0.539), de abastonados fue 187 cel/mm3 (S: 88.64%; E: 36.05% y ABC=0.574), y de neutrófilos fue 9,468 cel/mm3 (S: 81.82%; E: 35.88% y ABC=0.557). Se concluye que los niveles de leucocitos totales, abastonados y/o neutrófilos no pueden ser utilizados como test diagnóstico ni marcadores de severidad del cuadro de apendicitis aguda, sin embargo estos niveles elevados sí apoyan al diagnostico de apendicitis aguda. Además un nivel de leucocitos totales mayor a 17604 cel/mm3, abastonados mayor a 958 cel/mm3, y/o de neutrófilos mayor a 13991 cel/mm3, apoyan al diagnóstico de apendicitis aguda gangrenada. / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / El documento digital no refiere asesor / Estudio realizado en el Hospital Militar Central de tipo descriptivo, retrospectivo, transversal en pacientes mayores de 15 años sintomáticos respiratorios, con patrón radiológico anormal y con baciloscopía directa en esputo y/o esputo inducido negativos en, por lo menos, 2 oportunidades y a quienes para descartar tuberculosis (TBC) pulmonar se les realiza broncofibroscopía; durante el periodo 2011- 2012. El objetivo es el de determinar la utilidad del aspirado bronquial obtenido por broncofibroscopía en el diagnóstico de TBC pulmonar. Se realizan 146 broncofibroscopías a igual número de pacientes. El diagnóstico de tuberculosis pulmonar se realiza en 129 pacientes, evaluándose los resultados del examen directo de cada una de las muestras así obtenidas y del cultivo del aspirado bronquial. Encontramos que la sensibilidad (Se) y especificidad (Es) para el examen directo del aspirado bronquial es de 30.00 % y 96.20 % con un valor predictivo positivo (VPP) de 83.33% y un valor predictivo negativo (VPN) de 68.47%. Para el cultivo del lavado bronquial, se encuentra una sensibilidad (Se) del 38.75% y especificidad del 100%, con un VPP del 100% y VPN del 17.71%. Cuando se considera juntos el examen directo del aspirado bronquial y cultivo del aspirado bronquial se encuentra una sensibilidad y especificidad de 46.31% y 100%. Concluyéndose que el examen directo del aspirado bronquial obtenidas por broncofibroscopía más el cultivo del aspirado bronquial incrementa la sensibilidad para el diagnóstico de tuberculosis en más de un 40%. Por lo que es un procedimiento sencillo, válido y de gran utilidad para el diagnóstico de tuberculosis. / Trabajo académico

Orientador: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Pio Colepicolo Neto / Banca: Flávio Henrique da Silva / Resumo: As leishmanioses são um grupo de doenças causadas pelo gênero Leishmania e colocam em risco 350 milhões de pessoas no mundo. Após o sequenciamento do genoma de algumas espécies de Leishmania spp., estudos moleculares de suas formas celulares (amastigotas e promastigotas) trouxeram informações importantes sobre sua biologia e potencial aplicação no aperfeiçoamento ou desenvolvimento de técnicas diagnósticas e terapêuticas. Nesse contexto, este projeto visou avaliar o gene LinJ.36.419 de Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) e seu produto quanto a potencial aplicação no dsenvolvimento de novas abordagens diagnósticas. Ensaios de PCR quantitativa mostraram que a expressão deste gene é maior em formas amastigotas, estágio responsável pela manifestação da doença, podendo corresponder a um potencial marcador diagnóstico. Um fragmento de 255 aminoácidos da proteína Lc36 foi caracterizado quanto ao seu potencial antigênico utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram especificidade de 74% e sensibilidade de 78% (99% de confiança), com acurácia de 76%, em uma população escolhida randomicamente. Análises adicionais mostraram reação cruzada pouco significativa para soro de cães infectados com Leptospira interrogans e Toxoplasma gondii, e revelaram reação cruzada contra soro de cães infectados por Babesia canis e Ehrlichia canis, todos organismos infecciosos comuns em cães. Análises de bioinformática mostraram que a proteína Lc36 possui um domínio denominado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis are diseases caused by Leishmania genus protozoan and endanger 350 million people worldwide. After genomic sequencing of Leishmania spp., molecular studies of their cycle forms (amastigotes and promastigotes) brought important information, which can contribute to the development of new diagnostic approaches and treatments. In this study we evaluated the potencial application of the Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) gene Lc.36.4190 and its encoded protein for development of new diagnostic approaches. Quantitative PCR assays showed that the gene is more expressed in intracellular amastigotes, the stage related to the clinical manifestation of these diseases, thus presenting potential to be a diagnostical target. We evaluated antigenic features of a 255 aminoacids fragment of the Lc36 protein using immunoenzimatic assay (ELISA). The results showed specificity of 74% and sensibility of 78% (99% of confidence) and accuracy of 76%, in a randomically chosen population. Additional analysis showed low cross-reaction against Leptospira interrogans and Toxoplasma gondii, and showed cross-reaction against Babesia canis and Ehrlichia canis, all infective organisms common in dogs. Bioinformatics analysis showed that the protein Lc36 contains one DNA polymerase sigma domain (COG5260) found on several organisms, being related to nucleic acid replication, recombination and repair, and might be related to the crossreactions observed. Thus, another fragment (297 aminoa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

El documento digital no refiere asesor / Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina la utilidad de los predictores clínicos para el diagnóstico de coledocolitiasis en pacientes mayores de 14 años atendidos en el Hospital María Auxiliadora durante el Año 2013. El estudio es observacional, descriptivo, retrospectivo, de corte transversal. Se trabajó con un total de 54 pacientes con alto grado de sospecha de coledocolitiasis y con resultados de CPRE, atendidos en el Hospital María Auxiliadora durante el periodo de Enero a Diciembre del 2013. La evaluación de los predictores clínicos incluyó los signos y síntomas, examen ultrasonográfico y pruebas de laboratorio. Para el análisis estadístico se utilizó como indicador auxiliar el OR y el nivel de predicción con la aplicación de la prueba multivariante: Regresión Logística. El promedio edad de los pacientes fue de 45 años, de sexo femenino (79.6%) y con sobrepeso (53.7%). Clínicamente los signos y síntomas más frecuentes en los pacientes con sospecha de coledocolitiasis al ingreso, fueron: dolor (98.1%), ictericia (51.9%) y náuseas y/o vómitos (64.8%). Asimismo entre los hallazgos ecográficos se observó que la mayoría tenían litiasis en el colédoco (72.2%) y dilatación del conducto colédoco (64.8%). Y entre las complicaciones que se observaron en las pacientes, el 16.7% presento pancreatitis, 18.5% colangitis y ninguno presentó sangrado. El grado de predicción de todas las variables de estudio es R2= 57.5% y se determinó mediante análisis multivariante de regresión logística que los predictores que contribuían significativamente a diagnosticar la coledocolitiasis fueron: la orina oscura con OR = 9.98 y IC = (1.29 - 77.18) y el colédoco dilatado con OR = 26.37 y IC = (4.45 - 156.17). Los resultados del análisis bivariado fueron los siguientes: la ictericia OR=7.0, IC=1.8-25.9), coluria “orina oscura” (OR=8.94, IC=1.789-44.69), dilatación del colédoco (OR=21.7, IC=5.048-93.29) y litiasis en el colédoco (OR=8.846, IC=2.151-36.375). Y entre los predictores clínicos de laboratorio, se encontraron que son factores de riesgo para diagnosticar coledocolitiasis, la bilirrubina total (OR=5.52, IC=1.30-25.04), el TGO (OR=7.975, IC=1.71-40.23) y la fosfatasa alcalina (OR=9.0, IC=1.85-47.95). Los resultados multivariantes de estimadores diagnósticos más significativos son: la orina oscura (p<0.001) y OR = 9.98 y IC = (1.29 – 77.18) y el colédoco dilatado (p<0.001) y OR = 26.37 y IC = (4.45 – 156.17). Los principales predictores clínicos multivariantes significativos para el diagnóstico de la coledocolitiasis son: la orina oscura y el colédoco dilatado. / Trabajo académico

Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

Tese de mestrado integrado. Engenharia Informátca e Computação. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008