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Establecimiento de una fase sólida con un antígeno LPS-R de Brucella abortus cepa RB51, para la detección de anticuerpos contra LPS-R de Brucella ovis

Marambio Reinoso, Carolina Esmeralda January 2007 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La brucelosis ovina causada por Brucella ovis es una enfermedad infectocontagiosa que afecta a los ovinos, principalmente a los machos, que cursa con alteraciones reproductivas que merman los indicadores productivos de los rebaños. En hembras la susceptibilidad a la infección es menor y puede causar abortos. Existen pocos estudios sobre la prevalencia en Chile. Sólo hay estudios parciales que muestran que la seroprevalencia en algunos predios es de 52% (Arévalo, 2004). Este trabajo tuvo por objetivo desarrollar un ELISA-I utilizando un antígeno soluble de la cepa rugosa B. abortus RB51, extraído mediante el método de Galanos et al (1969), para la detección de anticuerpos contra B. ovis en sueros de carneros previamente estudiados en los Laboratorios de Microbiología de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Chile. Las alternativas evaluadas fueron placas Nunc 69620 y Maxisorp con 2 temperaturas de sensibilización (4ºC y ambiente) y “buffers” carbonato/bicarbonato pH 9,6 y PBS pH 7,2. Se utilizaron 6 diluciones de antígeno (1/10, 1/100, 1/1000, 1/2000, 1/5000 y 1/10000) y 4 de conjugado (1/4000, 1/6000, 1/8000 y 1/10000). Se estudiaron dos grupos de animales: los inoculados experimentalmente con 2 cepas de B. ovis (una de laboratorio y otra de campo) y los de animales sospechosos de campo. La infección estaba comprobada por el diagnóstico previo mediante las pruebas de inmunodifusión en gel de agar (AGID) y contrainmunoelectroforesis, en los sueros recibidos en el laboratorio, clasificándolos en positivos y negativos. En los animales cuya infección fue experimental, se extrajo una muestra antes de la inoculación (sueros considerados negativos) y 35 días posteriores a una segunda inoculación (sueros considerados positivos). Los sueros de los animales infectados de campo arrojaron resultados de densidad óptica (DO) más altos que los de inoculados experimentalmente, incluso en algunos casos los valores fueron casi el doble. También se observó un efecto similar en los valores de DO de animales negativos, donde los valores DO de los sueros negativos de campo eran muy similares a los de positivos inoculados. Estos bajos valores de DO de los sueros positivos inoculados, podría ser explicado por la patogenicidad atenuada de la cepa de laboratorio o que las dosis inoculadas fueron insuficientes para provocar una seroconversión de magnitud similar a la presentada por los animales expuestos naturalmente a la infección. Para calcular la Razón de Absorción (RA) con el fin de reconocer las mejores alternativas de fase sólida, se utilizaron los valores de DO de los sueros de animales negativos previa inoculación y los valores de DO de los animales de campo positivos. Los mejores resultados de RA (5,72 en la placa sensibilizada a 4ºC y 5,29 a temperatura ambiente) fueron obtenidos en las placas Nunc 69620, con “buffer” carbonato/bicarbonato, dilución de 1/10 y 1/6000 de antígeno y conjugado, respectivamente. Estos resultados son concordantes con los trabajos realizados anteriormente por varios autores. Estos resultados demuestran que existió adhesión de LPS-R de B. abortus RB51 a la placa de poliestireno y reconocimiento de los anticuerpos del suero de los animales positivos contra B. ovis con el LPS-R adherido. Por lo tanto, se podría desarrollar un ELISA-I utilizando como antígeno soluble el LPS-R de B. abortus cepa RB51, con un estudio que abarque mayor número de muestras. Palabras claves: Brucella ovis, Brucella abortus RB51, LPS-R, ELISA
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Seroreactividad por inmunodifusión en carneros inoculados con Brucella ovis cepas estándar y silvestre, frente a los antígenos homólogo y heterólogo

Wainwright Flisfisch, Marie Isabel January 2007 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Brucella ovis (B. ovis) es el agente etiológico de la “epididimitis del carnero”, enfermedad de distribución mundial que provoca pérdidas económicas importantes en la producción ovina, debido a una baja en la fertilidad por la epididimitis y orquitis que induce en los carneros y a esporádicos abortos en ovejas. El objetivo del presente trabajo fue evaluar en el tiempo, mediante la prueba de inmunodifusión doble en gel de agar (ID), dos antígenos obtenidos por extracción salina caliente de B. ovis elaborados de dos cepas diferentes, uno de la cepa estándar 63/290 y el otro de la cepa chilena Til Til. Ambos antígenos fueron enfrentados a los sueros de dos carneros, cada uno inoculado experimentalmente con una de las cepas, además estos dos antígenos fueron reaccionantes positivos con el suero control positivo. Se comparó la reactividad de cada antígeno frente a los sueros tanto homólogos como heterólogos. Se utilizaron 54 sueros de cada carnero infectado, obtenidos sistemáticamente durante un periodo de 420 días de observación. Los sueros del carnero inoculado con la cepa Til Til, enfrentados a su antígeno heterólogo Ag. 63/290, presentaron un mayor porcentaje de positividad (65%) que con el Ag. homólogo TilTil (25%). La positividad detectada por el Ag 63/290 se mantuvo por un periodo continuo de 23 semanas mientras que con el Ag TilTil fue de solo 9 semanas y con un alto número de sueros sospechosos. La positividad de los sueros del carnero inoculado con cepa Til Til no se mantuvo hasta el final de la experiencia. Los sueros del carnero inoculado con la cepa 63/290 no presentaron reactividad con ninguno de los dos antígenos. El análisis del contenido proteico de cada antígeno fue de 1,4 y 1,1 mg/ml para Ag Til Til y 63/290 respectivamente
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Efectividad de una guía de diagnósticos de enfermería para el registro en pacientes con cardiopatias lima 2014

Asencios Ortiz, Vanessa Katherin Emilia January 2015 (has links)
Los registros de enfermería son actualmente más importantes que nunca, debido al aumento de las situaciones médico-legales, frente a las cuales es indispensable contar con un respaldo del trabajo realizado, respaldo que, idealmente, debe favorecer la comunicación entre los componentes del equipo de salud; utilizando un lenguaje estandarizado al momento de registrar las acciones en las notas de enfermería. Es por ello la importancia de este estudio, que tiene como objetivo Determinar la efectividad de una guía de diagnósticos de enfermería para el registro en pacientes con cardiopatías, aplicado a los enfermeros del servicio de tórax y cardiovascular del Instituto Nacional de Salud del Niño. El presente estudio es de tipo cuantitativo, nivel aplicativo, de corte transversal y utiliza el método cuasiexperimental. La población estuvo conformada por 13 enfermeros asistenciales del servicio y la unidad de análisis la conformaron las notas de enfermería registradas en las historias clínicas de los pacientes con cardiopatías del Servicio de Cirugía de Tórax y Cardiovascular. Las técnicas utilizadas fueron la observación y una encuesta, y los instrumentos una Guía de Diagnósticos de Enfermería y una Escala de Likert Modificada. Los resultados encontrados revelan que la guía de diagnósticos de enfermería es efectiva dado que sus 4 dimensiones fueron registrados en un 82.41% en las notas de enfermería, y los enfermeros estuvieron de acuerdo en su utilización en el servicio según la encuesta de opinión aplicada, con lo cual se aceptan la hipótesis de estudio. / Tesis
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Comparação dos métodos de inoculação intra-cerebral em camundongos (Mus musculus)e de inoculação em cultura de células BHK-21 (C13), no diagnóstico da raiva / Comparison between the mouse inoculation test (MIT) and rabies tissue culture infection test (RTCIT)using BHK-21 (C-13)cells, for rabies diagnosis

Xavier, Sheila de Matos January 2005 (has links)
Made available in DSpace on 2014-10-07T19:33:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 133.pdf: 2452371 bytes, checksum: d481f90d5521dbe7c2209d97167fc88b (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A presente pesquisa teve por objetivo a comparação dos métodos de inoculação intracerebral em camundongo e inoculação em cultivo de células BHK-21 (C13), no diagnostico da raiva, avaliando a sensibilidade e a especificidade destas técnicas, de forma a oferecer um resultado rápido e seguro.
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Métodos nível crítico, dris e cnd validados na qualidade de mudas clonais de Eucalyptus spp. / Critical level, dris and cnd validated methods in the quality of Eucalyptus spp. clonal seedlings

Barros, Thaís Chagas 17 May 2018 (has links)
Submitted by Thaís Chagas Barros (tthaisbarross@hotmail.com) on 2018-07-06T12:56:18Z No. of bitstreams: 1 Tese_Thais Barros.pdf: 1852111 bytes, checksum: 8184b869026578d5eba56d9984750935 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-07-10T14:19:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barros_tb_dr_jabo.pdf: 1852111 bytes, checksum: 8184b869026578d5eba56d9984750935 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T14:19:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barros_tb_dr_jabo.pdf: 1852111 bytes, checksum: 8184b869026578d5eba56d9984750935 (MD5) Previous issue date: 2018-05-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O desenvolvimento de mudas de Eucalyptus spp. aferido por índices de qualidade ou de acúmulo de matéria seca depende do estado nutricional adequado. No entanto, a qualidade dos métodos para interpretação do estado nutricional de mudas clonais de eucalipto ainda não é conhecida. Objetivou-se avaliar a qualidade dos diagnósticos obtidos pelos métodos do nível crítico (NC), sistema integrado de diagnose e recomendação (DRIS) e composição da diagnose nutricional (CND) na avaliação do estado nutricional de mudas de Eucalyptus spp., frente a dois diferentes indicadores de produção. O banco de dados foi obtido de viveiros comerciais e de experimentos de calibração, tendo sete nutrientes (N, P, K, Mg, Ca, B e Fe) e quatro concentrações por nutriente, dispostos em blocos casualizados, com quatro repetições. O clone de Eucalyptus spp. utilizado nos experimentos foi o AEC 0144. As mudas da área experimental e dos viveiros comerciais totalizaram 222 mudas, nas quais, foram determinados os teores foliares dos nutrientes, a massa seca de planta inteira (MS) e calculado o Índice de Qualidade de Dickson (IQD). Nas parcelas experimentais realizou-se a acurácia dos diagnósticos, a partir da comparação do diagnóstico com a resposta da planta em função da adição do nutriente correspondente. Cinco medidas de acurácia foram usadas para testar a eficiência dos métodos diagnósticos: acurácia total, acurácia para deficiência e suficiência, razão de deficiência e razão de eficiência, e o incremento líquido na MS e no IQD. O desempenho dos métodos diagnósticos variou entre os métodos NC, DRIS e CND, como também entre os nutrientes estudados. Dado que o sistema de produção de mudas é, em grande parte, um sistema mais controlado e onde as variações ambientais são mínimas, e considerando que os diferentes métodos diagnósticos apresentaram desempenho distinto em relação a avaliação do verdadeiro estado nutricional das mudas de eucalipto, o método do NC deve ser o mais indicado para essa situação, seja pelo seu melhor desempenho em avaliar o estado nutricional para a maioria dos nutrientes, seja pela facilidade de sua implementação. / The efficiency of methods in adequately interpreting the nutritional status of Eucalyptus spp. clonal seedlings remains unknown. The aim was to evaluate the quality of diagnoses obtained using the critical level (CL), diagnosis and recommendation integrated system (DRIS) and compositional nutrient diagnosis (CND) methods to assess the nutritional status of Eucalyptus spp. seedlings, based on two different yield indicators. The data were obtained from commercial nursery and calibration experiments, using seven nutrients as treatments (N, P, K, Mg, Ca, B and Fe) and four concentrations per nutrient, arranged in randomized blocks, with four repetitions. The Eucalyptus spp. clone used in the experiments was AEC 0144. A total of 222 seedlings were obtained from the experimental area and commercial nurseries and the following were determined: leaf nutrient content, whole plant dry matter (DM) content and the Dickson quality index (DQI). Diagnostic accuracy in the experimental plots was ascertained by comparing the diagnosis with plant response as a function of adding the corresponding nutrient. Five measures of accuracy were used to test the efficiency of the diagnostic methods: total accuracy, accuracy for deficiency and sufficiency, deficiency ratio, efficiency ratio, and the net increase in in DM and DQI. The performance of diagnostic methods varied between CL, DRIS and CND, and among the nutrients studied. Given that the seedling production system is largely more controlled, where environmental variations are minimal, and considering that the different diagnostic methods exhibited distinct performance in terms of assessing the true nutritional status of eucalyptus seedlings, the CL method is the most indicated for this situation, due to its better performance in evaluating the nutritional status of most nutrients and easy implementation.
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Filtração da radiação X : uso do estanho na avaliação da qualidade da imagem radiografica

Devito, Karina Lopes 26 May 2004 (has links)
Orientador: Jose Roberto Tamburis / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:47:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Devito_KarinaLopes_D.pdf: 2128196 bytes, checksum: f55459b22d06e0e146dfe49a68d40f20 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O objetivo neste trabalho foi avaliar a influência da utilização do filtro de Estanho na qualidade da imagem radiográfica. Para avaliação laboratorial foram realizadas radiografias de uma escala de densidade utilizando filtros de Alumínio (1,5mm), Estanho de 0,05mm (Sn1) e Estanho de 0,5mm (Sn2). Os fatores físicos da radiação (tempo de exposição, quilovoltagem e dose) foram monitorados. Após o processamento radiográfico, obtiveram-se as leituras densitométricas dos degraus da escala. Para cada radiografia foram construídas as curvas de densidade óptica e de contraste. Os valores das áreas das curvas de contraste para os três filtros foram submetidos a tratamento estatístico. Para a avaliação clínica do filtro de Estanho foram radiografados phantoms constituídos de dentes humanos. As radiografias interproximais obtidas foram avaliadas por 25 cirurgiões dentistas quanto à presença ou ausência de cáries proximais, utilizando uma escala de cinco escores. Posteriormente, os dentes foram seccionados e analisados microscopicamente (padrão ouro). As áreas sob curvas ROC foram determinadas para selecionar o filtro que apresentou a melhor performance no diagnóstico de cárie proximal. Os resultados mostraram diferenças significativas nos valores do contraste radiográfico para os três filtros, sendo que o filtro Sn2 apresentou o maior contaste (-2,538), seguido pelo filtro de Alumínio (-2,288) e pelo filtro Sn1 (-2,242). Analisando a área sob a curva ROC observou-se que o filtro Sn1 (0,6510) não apresentou uma redução da performance para o diagnóstico de cárie proximal quando comparado ao filtro de Alumínio (0,6319). Para o filtro Sn2 o valor da área foi de 0,6299. Além disso, o filtro Sn1 necessitou de um menor tempo de exposição e apresentou uma redução na dose de 12%, tornando-se uma alternativa viável para a utilização em aparelhos de raios X odontológicos / Abstract: This study aimed to evaluate the influence of the use of a tin filter on the quality of the radiographic image. For the laboratory evaluation, radiographs of a stepwedge were obtained using aluminum filters (1.5mm), tin of 0.05mm (Sn1) and tin of 0.5mm (Sn2). The physical radiation factors (exposure time, kilovoltage and dose) were monitored. After development, the densitometric readings of the stepwedge steps were obtained. For each radiograph, optical density and contrast curves were constructed. The values of the areas of the contrast curves for the three filters were submitted to statistical analysis. For the clinical evaluation of the tin filter, phantoms comprised of human teeth were radiographed. Twenty-five dentists evaluated the bitewing radiographs obtained with regard to the presence or absence of approximal caries, using a five-score scale. Next, the teeth were sectioned and analyzed microscopically (gold standard). The areas under ROC curves were determined to select the filter that presented the best performance in the diagnosis of approximal caries. The results showed significant differences in the radiographic contrast values for the three fi Iters , with the Sn2 filter presenting the greatest value (-2.538), followed by the aluminum filter (-2.288) and the Sn1 filter (-2.242). The analysis of the area under ROC curve showed that the Sn1 filter (0.6510) did not present a reduction in performance for diagnosing approximal caries when compared with aluminum filter (0.6319). For Sn2 filter, the value of the area was 0.6299. Moreover, the Sn1 filter required shorter exposure times and presented a reduction of 12% in the dose, making it a feasible alternative for use in dental x-ray machines / Doutorado / Radiologia Odontologica / Doutor em Radiologia Odontológica
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Aplicação dos critérios diagnósticos do lúpus eritematoso sistêmico em pacientes com hanseníase multibacilar

TEIXEIRA JUNIOR, Gilson José Allain January 2006 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T18:32:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8106_1.pdf: 544188 bytes, checksum: 50d4f46a54770776106edcd91b04ec1c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença inflamatória crônica que acomete múltiplos órgãos ou sistemas. O LES não apresenta manifestação clínica patognomônica ou teste laboratorial sensível e específico o suficiente para gerar um diagnóstico definitivo. Para o diagnóstico, são utilizados mundialmente os critérios propostos pelo Colégio Americano de Reumatologia (ACR), realizados em 1982 e modificados em 1997. A presença de quatro ou mais destes critérios tem sensibilidade e especificidade de 96%. Porém os critérios diagnósticos para o LES podem ter especificidade mais baixa em regiões endêmicas para doenças infecciosas crônicas, como o Brasil, endêmico para Hanseníase, doença que pode apresentar manifestações clínico-laboratoriais semelhantes àquela doença. Objetivos: estabelecer a prevalência de cada um dos critérios diagnósticos do LES propostos pelo Colégio Americano de Reumatologia em 1997, entre pacientes com diagnóstico recente de hanseníase multibacilar, assim como calcular sua especificidade e o número de falso-positivos dos critérios nesses doentes. Pacientes e Métodos: Foi realizado um estudo de prevalência, onde foram aplicados os critérios diagnósticos de LES propostos pelo ACR, nos pacientes com diagnóstico recente de hanseníase multibacilar, além de calculada a especificidade e o número de falso-positivos dos critérios nesse grupo de doentes. A população estudada foi composta por pacientes com diagnóstico recente (até 6 meses) de Hanseníase multibacilar, baseado com o índice baciloscópico maior que zero, que deram entrada no ambulatório de hanseníase da Clínica Dermatológica da UFPE durante o período da coleta de dados. Resultados e Conclusões: Foram incluídos 100 pacientes com diagnóstico de hanseníase multibacilar. As prevalências de alguns dos critérios de LES foram elevadas. Os critérios com maior prevalência foram o eritema malar (44%), a artrite(23%), a fotossensibilidade(29%), a linfopenia(19%) e a presença dos anticorpos antifosfolípides, incluídos no critério imunológico(20%). A especificidade encontrada (84%) foi menor do que a atribuída aos critérios em 1997 pelo ACR. Doenças presentes em nosso meio, como a Hanseníase nas formas multibacilares, mimetizam o quadro clínico-laboratorial do LES, o que deve deixar o profissional de saúde atento à realidade das doenças infecciosas locais antes de afirmar com certeza que um paciente apresenta LES
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Implementación de una técnica diagnóstica molecular para la detección del gen de la glicoproteína B del virus herpes felino

Sepúlveda Estay, Constanza Isabel January 2012 (has links)
Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Existe una amplia variedad de patologías que afectan a los gatos domésticos, generando gastos económicos por parte de sus dueños en busca de soluciones y la eventual mejoría de sus mascotas. Dentro de todas éstas, el virus herpes felino tipo 1 (VHF-1) uno de los agentes etiológicos del llamado complejo respiratorio felino, genera múltiples problemas en los gatos domésticos, dejando incluso secuelas importantes que afectan posteriormente su calidad de vida. Además, por ser un patógeno altamente distribuido alrededor del mundo y de fácil transmisión, existe un gran porcentaje de animales infectados y por su característica de patógeno latente, continúa distribuyéndose sin control a través de las poblaciones de gatos. En la clínica de animales pequeños su diagnóstico es en base a los signos clínicos presentados por los gatos afectados, existiendo hasta la fecha en Chile sólo una forma de diagnóstico de laboratorio específico para identificar el agente que no se utiliza rutinariamente en clínica. Por lo anterior, el tratamiento generalmente se basa en el conocimiento y experiencia del médico veterinario tratante, sin confirmación real del agente que está actuando. Por esta razón, en esta memoria de título se propuso implementar un método de diagnóstico molecular alternativo en gatos menores de un año de edad con signología clínica correspondiente a infección con VHF-1. Para ello se realizó la detección del gen de la glicoproteína B del virus a través de la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y se determinó el porcentaje de identidad nucleotídica (PIN) del segmento obtenido, comparándolo con datos de la base genómica online Genbank®. De los once gatos analizados, en solo uno de ellos se logró amplificar un segmento correspondiente al gen de la glicoproteína B. El valor de PIN obtenido (96%) validaría que el segmento obtenido corresponde al gen de la glicoproteína B del VHF-1. Se discute la eficiencia del método implementado / PROGRAMA AUCAI 2011
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Detección de proteínas priónicas en cerebros de bovino mediante inmunoensayo enzimático

Padilla de Beer, Danielle A. January 2004 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La Encefalopatía Espongiforme Bovina (BSE) pertenece a un grupo de enfermedades neurodegenerativas denominadas Espongiformes Transmisibles (EET), dentro de las cuales se destacan además la Enfermedad de Creutzfeld Jakob (CJD) con su nueva variante (NV-CJD) en los humanos y el Scrapie en animales. Estas patologías se caracterizan por ser mortales, tener un largo período de incubación y presentar signos neurológicos progresivos. En el análisis histopatológico del sistema nervioso central (SNC) de los afectados predomina una vacuolización de la sustancia gris. El agente etiológico de estas patologías se denomina "prión" (partícula infecciosa de naturaleza proteica) y consiste en una isoforma infectiva (PrPsc) de una proteína celular normal (PrPc) que, además de poseer una gran resistencia a la proteinasa K, adquiere la capacidad de transformar la isoforma normal en patológica. La BSE ha adquirido gran importancia en el último tiempo debido a sus graves consecuencias económicas y por su posible transmisión al hombre, dando origen a la nueva variante de la Enfermedad de Creutzfeld Jakob (nv-CJD) a través del consumo de productos cárneos infectados. A pesar de que nuestro país es considerado libre de BSE y con bajo riesgo de introducción de esta enfermedad, es muy importante contar con métodos de diagnóstico específicos, rápidos, reconocidos y utilizados internacionalmente. En este estudio se logró purificar la proteína priónica celular (PrPc), a partir de cerebros de bovino y se caractrizó mediante electroinmunotransferencia utilizando un anticuerpo monoclonal específico 6H4. Además se caracterizó una proteína priónica recombinante (PrPrec). Por otra parte, se realizó una inmunodetección de proteínas priónicas mediante la utilización de un "kit" de inmunoensay enzimático (ELISA), aprobado por la Comisión Europea en 1999 como método de diagnóstico para BSE. Mediante este ensayo se analizaron 45 muestras de óbex de bovinos, mayores de 30 meses de edad, provenientes de mataderos de la Región Metropolitana. En un estudio inicial se obtuvieron 2 muestras sospechosas, lo cual se pudo deber a errores de operación. Posteriormente estas muestras fueron analizadas nuevamente, resultando finalmente el 100% de las muestras en estudio negativas. A través de este estudio se logró implementar en forma pionera en nuestro país este método diagnóstico para BSE, utilizado y reconocido ampliamente a nivel internacional, aportando así un nuevo método a las medidas epidemiológicas nacionales destinadas a mantener a nuestro país libre de BSE / FINANCIAMIENTO: CENTRO DE BIOLOGIA Y BIOTECNOLOGIA (CBB) DEL INSTITUTO MILENIO DE ESTUDIOS AVANZADOS DE LA UNIVERSIDAD DE CHILE SERVICIO AGRICOLA Y GANADERO (SAG
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Detección y caracterización de proteínas priónicas en óbex de bovino mediante inmunotransferencia

Núñez Rodríguez, Paula January 2004 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico / Existe un grupo de patologías neurodegenerativas letales que afectan a los humanos y a los animales denominadas encefalopatías espongiformes transmisibles (EET). En los humanos, destaca la enfermedad de Creutzfeldt Jacob (CJD), y la aparición en los últimos años de una nueva variante (nvCJD) que es causada por el agente de la encefalopatía espongiforme bovina (BSE). Dentro de las EET animales, destaca el scrapie de ovinos y caprinos, y la BSE, que además de afectar al ganado bovino, es transmisible a los humanos. La teoría más aceptada sobre el agente etiológico de estas enfermedades es la teoría del prión, que corresponde a una proteína priónica patológica (PrPsc) resistente a proteasas, que se origina por un cambio conformacional de una proteína priónica celular del huésped (PrPc). La encefalopatía espongiforme bovina (BSE) ha causado impacto mundial por el daño que ha provocado en la salud animal y en la economía, y por su relevancia en la salud pública al ser una enfermedad zoonótica. Durante años, el método de diagnóstico de rutina para la BSE fue el examen histopatológico del SNC de los bovinos sospechosos. Sin embargo, la epidemia desencadenada en Europa, principalmente en el Reino Unido, aumentó la necesidad de implementar métodos diagnósticos más rápidos y certeros. Esto originó el desarrollo de pruebas rápidas de diagnóstico, basadas en técnicas de inmunodetección del agente patológico (PrPsc) como es la inmunotransferencia o western blot. El presente trabajo se orientó por una parte, a la purificación, caracterización y detección inmunológica de proteínas priónicas en óbex de bovinos, mediante la utilización de la inmunotransferencia. Para obtener la PrPc, se utilizó un método de purificación de proteínas priónicas, y en el caso de la PrPsc se utilizó una proteína priónica recombinante (PrPrec); además, se evaluó la respuesta de ambas proteínas frente a la actividad enzimática de la proteinasa K. Para la posterior caracterización y detección inmunológica de estas proteínas, se realizó una electroinmunotransferencia. Por otra parte, para evaluar un método rápido de diagnóstico que detecte el agente de la BSE, se utilizaron 84 muestras de óbex de bovinos provenientes de mataderos de la Región Metropolitana, las que se analizaron individualmente por Western Blot mediante un kit comercial (Prionics Check-Western), aceptado y utilizado internacionalmente para el monitoreo y diagnóstico de esta enfermedad. Los resultados del presente estudio muestran la caracterización y detección inmunológica de la PrPc y la PrPrec mediante la inmunotransferencia. Además, se demuestra la sensibilidad a la digestión de ambas proteínas con la proteinasa K, lo que las diferencia de la PrPsc, que es una proteína proteasa resistente. En cuanto a los resultados obtenidos con el kit (Prionics Check-Western), de las 84 muestras analizadas 60 arrojaron un resultado negativo a BSE, ya que no se detectó inmunológicamente la PrPsc. El resto de las muestras (24) fueron analizadas nuevamente por dar resultados inconclusos, al aparecer bandas en el rango de peso molecular de la PrPsc. Sin embargo, finalmente el total de las muestras (84) arrojaron resultados negativos a BSE, lo que indica que las muestras inconclusas eran falsas positivas originadas por una deficiente digestión enzimática de la PrPc. La importancia de esta memoria de título radica en el hecho de ser pionera en la caracterización e inmunodetección de las proteínas priónicas de bovinos utilizando la inmunotransferencia, y en lograr la utilización e implementación en nuestro país de un método de diagnóstico rápido para BSE basado en un kit comercial, que es utilizado y aceptado internacionalmente para la detección del agente etiológico de esta patología

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