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Detecção do DNA de Trypanosoma cruzi por PCR em sangue de pacientes com doença de Chagas crônica e em dejetos de triatomíneos utilizados para o xenodiagnóstico / The detection of Trypanosoma cruzi by pcr-multiplex in blood of patients with suspected disease chronic wounds and waste of used for xenodiagnosis triatomines

Maia, Allan Rodrigo Soares January 2012 (has links)
MAIA, Allan Rodrigo Soares. Detecção do DNA de Trypanosoma cruzi por PCR-MULTIPLEX em sangue de pacientes com suspeita de doença de chagas crônica e em dejetos de triatomíneos utilizados para xenodiagnóstico. 2012. 132 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-10T13:57:06Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_arsmaia.pdf: 16319469 bytes, checksum: 8f535bd4a6023cd28e1ae58d18a5c058 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-05-16T13:39:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_arsmaia.pdf: 16319469 bytes, checksum: 8f535bd4a6023cd28e1ae58d18a5c058 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-16T13:39:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_arsmaia.pdf: 16319469 bytes, checksum: 8f535bd4a6023cd28e1ae58d18a5c058 (MD5) Previous issue date: 2012 / A doença de Chagas é causada pelo parasito intracelular Trypanosoma cruzi e afeta em torno de 17 milhões de pessoas na América Latina. A fase crônica da doença caracteriza-se por baixo nível de parasitemia e alto nível de anticorpos Anti-T.cruzi e o diagnóstico é feito preferencialmente utilizando-se métodos sorológicos, incluindo imunofluorescência indireta (IFI), hemaglutinação indireta (HAI) e imunoensaio enzimático (ELISA). São testes que apresentam alta sensibilidade, mas sofrem de baixa especificidade, e um variável número de indivíduos apresenta testes sorológicos inconclusivos. Nos últimos anos, muitos estudos têm usado a tecnologia da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para detectar sequências de DNA de T. cruzi em sangue de pacientes chagásicos crônicos. A alta especificidade da PCR tem apontado para sua aplicação como método confirmatório no diagnóstico de pacientes com provas sorológicas inconclusivas. O objetivo desse trabalho foi realizar uma análise comparativa entre a PCR e os métodos convencionais mais utilizados para o diagnóstico - sorologia e xenodiagnóstico, na detecção da infecção por T. cruzi, em indivíduos com doença de Chagas crônica. Sangue de 67 pacientes chagásicos crônicos, ambos os sexos, provenientes do ambulatório de doença de Chagas do Hospital Universitário Walter Cantídio, da Universidade Federal do Ceará, foram avaliados para T. cruzi, utilizando testes sorológicos (IFI, HAI e ELISA), PCR-Multiplex e xenodiagnóstico. Além disso, foi avaliado também a PCR-Multiplex em dejetos de triatomíneos provenientes do xenodiagnóstico destes pacientes. De acordo com o resultado dos testes sorológicos, os pacientes foram classificados em 3 grupos: 1°. Sorologia positiva (quando 2 ou 3 resultados dentre os 3 testes sorológicos foram positivos), 2°. Sorologia inconclusiva ou indeterminado (apenas 2 resultados foram negativos) e 3°. Sorologia negativa (quando os 3 resultados foram negativos). Dentre as 59 amostras com sorologia positiva foram obtidos 18 (30,5%) resultados positivos de PCR-Multiplex em sangue periférico e 41 (69,5%) resultados negativos. Nos PCR-Multiplex em dejetos de triatomíneos foram obtidos 20 (33,9%) resultados positivos e 39 (66,1%) resultados negativos. As 2 amostras com sorologia inconclusiva foram negativas na PCR-Multiplex, tanto em sangue periférico como em dejetos de triatomíneos. As amostras com sorologia negativa (n=6) apresentaram 2 resultados positivos (33,3%) na PCR-Multiplex em sangue e 4 resultados negativos (66,7%). Nos dejetos de triatomíneos, as 6 amostras com sorologia negativa foram negativas na PCR-Multiplex. Estes resultados mostraram que o ensaio da PCR-Multiplex em amostras de sangue periférico e em dejetos de triatomíneos, empregando iniciadores para regiões diferentes, no caso, DNA nuclear e DNA do cinetoplasto, podem ser aplicados para o diagnóstico da doença de Chagas crônica (mesmo com diferentes metodologias de extração de DNA total). Os dados mostraram também que a PCR-Multiplex em dejetos de triatomíneos é mais sensível que o ensaio do xenodiagnóstico.
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Efeitos da Violaceína sobre as formas evolutivas de Trypanosoma cruzi / Effects of Violacein on the evolutionary forms of Trypanosoma cruzi

Canuto, Jáder Almeida 19 February 2016 (has links)
CANUTO, J. A. Efeitos da Violaceína sobre as formas evolutivas de Trypanosoma cruzi. 2016. 78 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-13T12:12:37Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_jacanuto.pdf: 1383413 bytes, checksum: 294fb79f391911aa314db8d5184e0e10 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-13T12:12:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_jacanuto.pdf: 1383413 bytes, checksum: 294fb79f391911aa314db8d5184e0e10 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T12:12:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_jacanuto.pdf: 1383413 bytes, checksum: 294fb79f391911aa314db8d5184e0e10 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / The World Health Organization estimates that about 7 to 8 million people are infected with Trypanosoma cruzi in the world. Treatment of Chagas disease has limited efficacy and side effects that limit tolerability and patient compliance. The search for new therapeutic alternatives from bioactive substances has grown significantly in recent years. Violacein (VIO), a bacterial pigment produced by Chromobacterium violaceum has shown several biological actions, among them, antiulcer action, antitumor, antiviral, and antiparasitic. In this paper, we studied the effects of VIO on the evolutionary forms of Trypanosoma cruzi. Epimastigotes were cultured in LIT at 28 ° C in the presence of VIO (0.97; 1.9; 3.9; 7.8; 15.62; 31.25; 62.5; 125; 250 ; 500; 1000μM) for 24, 48 and 72 hours. The trypomastigotes were obtained after infection in LLC-MK2 cells resuspended in DMEM 2% FBS and incubated with VIO (0.97; 1.9; 3.9; 7.8; 15.62; 31,25μM ) for 24h. amastigotes were cultivated on circular coverslips within culture plates containing LLC-MK2 cells and treated with violacein (4.97 and 9.94 mM). Cytotoxicity on LLC-MK2 mammalian cells was assessed using the MTT reduction assay, after incubation with VIO (3.9; 7.8; 15.62; 31.25; 62.5; 125; 250; 500μM ) for 24h. The evaluation of the process of cell death was made from the marking epimastigotes with 7AAD and Annexin V-PE after treatment with VIO (51.39 and 102,78μM). To determine the production of reactive oxygen species, epimastigotes were incubated with VIO (51.39 and 102,78μM). In determining the effect on the mitochondrial membrane potential, it was used Rhodamine 123 marker in epimastigotes treated with VIO (102,78μM). In epimastigotes, the substance showed trypanocidal action, with IC50 value of 51.39; 104.7 67,78μM and 24, 48 and 72h of treatment, respectively. In trypomastigotes, the IC 50 was 4,97μM in 24 hours. The analysis of amastigotes reduced the percentage of infected cells and the survival rate of these, at 24 and 48 hours at concentrations of 4.97 and 9.94 uM. In determining the cytotoxic effect on LLC-MK2, there was obtained an IC50 of 47,91μM. The analysis of the mechanisms of cell death allowed to infer that the VIO cause death in parasites predominantly by apoptosis. It was observed the production of reactive oxygen species (ROS), which can contribute to the aforementioned type of death. It was also observed a reduction in the mitochondrial membrane potential in the treated groups. All experiments were performed in triplicate (n = 3). For comparison of the experimental groups, the ANOVA was used, with post-test Dunnett, using p <0.05 as significance criterion. Thus, VIO presented trypanocidal effects on all of the evolutionary cycle of the parasite forms, suggesting involvement of reactive oxygen species and changes in mitochondrial membrane potential in the process of cell death by apoptosis. / A Organização Mundial de Saúde estima que aproximadamente 7 a 8 milhões de pessoas encontram-se infectadas pelo Trypanosoma cruzi no mundo. O tratamento da doença de Chagas apresenta eficácia limitada e efeitos colaterais que limitam a tolerabilidade e a adesão dos pacientes. A busca de novas alternativas terapêuticas a partir de substâncias bioativas cresceu bastante nos últimos anos. A violaceína (VIO), um pigmento bacteriano produzido por Chromobacterium violaceum tem mostrado diversas ações biológicas, dentre elas, ações antiulcerogênica, antitumoral, antiviral e antiparasitária. No presente trabalho, estudamos os efeitos da VIO sobre as formas evolutivas do Trypanosoma cruzi. As formas epimastigotas foram cultivadas em meio LIT, a 28°C, na presença de VIO (0,97; 1,9; 3,9; 7,8; 15,62; 31,25; 62,5; 125; 250; 500; 1000μM) por 24, 48 e 72h. As formas tripomastigotas, foram obtidas após infecção em células LLC-MK2, ressuspensas em meio DMEM 2% de SBF e incubadas com VIO (0,97; 1,9; 3,9; 7,8; 15,62; 31,25μM) por 24h. Formas amastigotas foram cultivadas em lamínulas circulares no interior de placas de cultura contendo células LLC-MK2 e tratadas com violaceína (4,97 e 9,94 μM). A citotoxicidade sobre células de mamíferos LLC-MK2 foi avaliada por meio do ensaio de redução do MTT, após incubação com VIO (3,9; 7,8; 15,62; 31,25; 62,5; 125; 250; 500μM) por 24h. A avaliação do processo de morte celular foi feita a partir da marcação de formas epimastigotas com 7AAD e Anexina V-PE após tratamento com VIO (51,39 e 102,78μM). Para a determinação da produção de espécies reativas de oxigênio, formas epimastigotas foram incubadas com VIO (51,39 e 102,78μM). Na determinação do efeito sobre o potencial de membrana mitocondrial, foi utilizado o marcador Rodamina 123 em formas epimastigotas tratadas com VIO (102,78μM). Em formas epimastigotas, a substância demonstrou ação tripanocida, com valor de CI50 igual a 51,39; 104,7 e 67,78μM em 24, 48 e 72h de tratamento, respectivamente. Em formas tripomastigotas, a CI50 foi de 4,97μM em 24h. A análise sobre formas amastigotas reduziu o percentual de células infectadas e o índice de sobrevivência destes, nos tempos de 24 e 48h, nas concentrações de 4,97 e 9,94 μM. Na determinação do efeito citotóxico sobre LLC-MK2, obteve-se uma CI50 de 47,91μM. A análise dos mecanismos de morte celular permitiu inferir que a VIO causa morte nos parasitos predominantemente por apoptose. Foi observado a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), que podem contribuir para o tipo de morte supracitado. Foi ainda observada a redução do potencial de membrana mitocondrial nos grupos tratados. Todos os experimentos foram realizados em triplicata (n=3). Para comparação dos grupos experimentais, foi utilizado o teste estatístico ANOVA, com pós-teste de Dunnet, utilizando p<0,05 como critério de significância. Dessa forma, a VIO apresentou efeitos tripanocida em todas as formas do ciclo evolutivo do parasito, sugerindo envolvimento de espécies reativas de oxigênio e alterações no potencial de membrana mitocondrial no processo de morte celular por apoptose.
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Efeito tripanocida do (-)-alfa-bisabolol sobre a cepa y de Trypanosoma cruzi / Tripanocidal effect of (-) - alpha-bisabolol on the strain and Trypanosoma cruzi

Menezes, Ramon Róseo Paula Pessoa Bezerra de January 2017 (has links)
MENEZES, R. R. P. P. B. Efeito tripanocida do (-)-alfa-bisabolol sobre a cepa y de Trypanosoma cruzi. 2017. 140 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-22T13:04:55Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_rrppbmenezes.pdf: 4168282 bytes, checksum: 729abccf6685a2e429ae740a5713d070 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-22T13:05:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_rrppbmenezes.pdf: 4168282 bytes, checksum: 729abccf6685a2e429ae740a5713d070 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T13:05:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_rrppbmenezes.pdf: 4168282 bytes, checksum: 729abccf6685a2e429ae740a5713d070 (MD5) Previous issue date: 2017 / Chagas disease is a major public health problem, and the drugs available possess limited efficacy and great toxicity. In this way, there is a pungent need of new drugs. The aim of this work was to evaluate the trypanocidal effect of (-)-α-bisabolol (BIS) over the life forms of Trypanosoma cruzi and investigate its selectivity and mechanism of action. BIS cytotoxicity over mammalian cells was evaluated over LLC-MK2 cells, using MTT assay. BIS caused cytotoxic effect only at 1000 and 500 µM, with CC50 = 528 ± 34 µM. Then the antiparasitic effect was investigated over epimastigote, which demonstrated a progressive and time- and concentration-dependent effect, with IC50/24h = 285 ± 20 µM; IC50/48h = 144.7 ± 8.6 µM; IC50/72h = 97.33 ± 3.25 µM; e IC50/96h = 59.8 ± 4.5 µM. Over trypomastigotes, BIS caused effect at all tested concentrations, with LC50 = 20 ± 3.84 µM. Using CC50 and LC50 values, selectivity index was estimated at 26.5. BIS also presented antiamastigote activity, with decrease on the percentage of infected cells, the number of amastigotes per infected cells and survival index. Besides, BIS caused its effects even when incubated by few time periods, as shown by growth recovery experiments. By flow cytometry, it was demonstrated that BIS trypanocidal effect was associated with apoptosis induction, increase on reactive oxygen species and loss of mitochondrial transmembrane potential. Also, swelling of reservosomes was present al late stages. Scanning electronic microscopy evaluation showed parasites with loss of typical format and with membrane pores. Finally, the interaction of BIS with tcGAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from T. cruzi) was evaluated by both theoretical and experimental methods. Docking simulation demonstrated possible interaction between tcGAPDH and BIS, which it was confirmed by enzymatic assay. In conclusion, it was demonstrated that BIS possess antiparasitic effect over Trypanosoma cruzi strain Y life forms, with possible induction of apoptosis and oxidative stress. Also, inhibition on tcGAPDH appears to be associated with this effect. / A doença de Chagas constitui um importante problema de saúde pública, e os fármacos disponíveis para tratamento apresentam eficácia limitada e efeitos colaterais importantes. Assim, há necessidade de novas estratégias terapêuticas eficazes e seguras. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial tripanocida do (-)-α-bisabolol (BIS) sobre as formas evolutivas de Trypanosoma cruzi e investigar sua seletividade e mecanismo de ação. A citotoxicidade de BIS foi avaliada em células LLC-MK2 pelo método do MTT. BIS causou efeito citotóxico nas duas maiores concentrações testadas, com CC50 = 528 ± 34 µM. Foi investigado o efeito de BIS sobre epimastigotas, que demonstrou efeito progressivo e dependente de tempo e concentração, com IC50/24h = 285 ± 20 µM; IC50/48h = 144,7 ± 8,6 µM; IC50/72h = 97,33 ± 3,25 µM; e IC50/96h = 59,8 ± 4,5 µM. Em tripomastigotas, BIS causou efeito em todas as concentrações, com LC50 = 20 ± 3,84 µM. A partir dos valores de CC50 e LC50 obtidos, foi estimado índice de seletividade de 26,5. BIS também apresentou efeito antiamastigota, com redução do percentual de células infectadas, da contagem média de amastigotas/células infectadas e do índice se sobrevivência. Além disso, foi observado efeito antiparasitário em pequenos períodos de tempo, através do ensaio de recuperação de crescimento. Por citometria de fluxo, foram observadas alterações sugestivas de morte celular por apoptose, com aumento das espécies reativas de oxigênio citoplasmáticas e redução do potencial transmembrânico mitocondrial. Adicionalmente, foi observado hipertrofia de reservossomos de forma tardia. Por microscopia eletrônica de varredura, foram observadas algumas alterações ultraestruturais, como alteração no formato típico e aparecimento de poros. Finalmente, foi avaliado o potencial de inibição da enzima tcGAPDH (gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de T. cruzi). O estudo de docking demonstrou possível interação entre BIS e o sítio catalítico de tcGAPDH. A confirmação foi realizada por ensaio colorimétrico. Em conclusão, o (-)-α-bisabolol apresenta efeito antiparasitário sobre as formas evolutivas de T. cruzi, com possível indução de apoptose e stress oxidativo. Além disso, a inibição da enzima tcGAPDH parece estar associada ao efeito biológico encontrado.
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Avaliação da resposta eletrocardiográfica e sorológica ao tratamento com benzonidazol em pacientes na fase crônica da doença de Chagas / Electrocardiographic and serological evaluation to treatment with benznidazole in chronic Chagas disease patients

Andrade, Mônica Coelho January 2013 (has links)
ANDRADE, Mônica Coelho. Avaliação da resposta eletrocardiográfica e sorológica ao tratamento com benzonidazol em pacientes na fase crônica da Doença de Chagas. 2013. 91 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-11-13T15:47:46Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_mcandrade.pdf: 1300707 bytes, checksum: 95232e3c4673b4f51a96eb835ffb253e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-11-13T15:48:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_mcandrade.pdf: 1300707 bytes, checksum: 95232e3c4673b4f51a96eb835ffb253e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-13T15:48:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_mcandrade.pdf: 1300707 bytes, checksum: 95232e3c4673b4f51a96eb835ffb253e (MD5) Previous issue date: 2013 / Chagas disease (CD) is a pathology of endemic nature, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, with pronounced relevance between heart disease. It was officially described in 1909 and even after more than a century of its discovery is still a public health problem. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of chemotherapy with Benznidazole (Bz) in patients with chronic Chagas disease by serological analysis and electrocardiography. This is a prospective non-concurrent and concurrent study, where patients were followed serologically once a year after treatment, from 2005, 2006 or 2007 (before treatment) until 2011. The electrocardiographic evaluation was performed at baseline (2005-2007) and end of the study (2011). The patients were treated with Bz in dose of 5mg/kg/day in two to three daily doses for 60 days. The serological analysis was conducted, through the techniques of ELISA (enzyme immunoassay) and IIF (indirect immunofluorescence). The electrocardiographic evaluation was performed at the University Hospital Walter Cantídio through the electrocardiograms (ECG) available in patient charts. This study followed 31 patients, 20 (64,5%) male and 11 (35,5%) female, from 25 to 64 years, where 51.6% (16/31) did not finish high school and 22,6% (7/31) were farmers. Serological analysis by ELISA demonstrated a significant decrease in the optical density of the samples collected before (2005 to 2007) when compared with the samples after treatment (2011). Now with regard to IIF, patients remained unchanged during the segment (variation in a maximum of a dilution of the sample between baseline and 2011). Regarding the electrocardiographic evaluation, 76.2% (16/21) showed maintenance of electrocardiographic reports throughout the study, with the exception of cinco cases. One patient was excluded from analysis electrocardiographic (there wasn’t ECG performed in 2011) required a defibrillator implantation during follow-up (2010). In conclusion, one can say that although Bz presents limited effectiveness in patients in the chronic phase of CD, this study demonstrated a beneficial effect of the drug in most followed patients, as the majority of these reports showed maintenance of electrocardiographic and serology showed a downward trend. However, it is necessary a longer segment, since the follow-up period of this study (5-7 years) is considered short for patients in the chronic phase of the disease. / A doença de Chagas (DC) é uma patologia de natureza endêmica, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, com pronunciada relevância entre as doenças cardíacas. Foi descrita oficialmente em 1909 e mesmo após mais de um século de sua descoberta ainda representa um problema de saúde pública. O objetivo deste trabalho foi avaliar a efetividade da quimioterapia com Benzonidazol (Bz) em pacientes chagásicos crônicos através de análise sorológica e eletrocardiográfica. Trata-se de um estudo prospectivo não concorrente e concorrente, onde os pacientes foram acompanhados sorologicamente uma vez ao ano depois do tratamento, a partir de 2005, 2006 ou 2007 (antes do tratamento) até 2011. A avaliação eletrocardiográfica foi realizada no início (2005 a 2007) e final da pesquisa (2011). Os pacientes foram tratados com Bz na dosagem de 5mg/Kg/dia em duas a três tomadas diárias durante 60 dias. A análise sorológica foi realizada através das técnicas de ELISA (Ensaio Imunoenzimático) e IFI (Imunofluorescência indireta). A avaliação eletrocardiográfica foi feita através dos eletrocardiogramas (ECG) realizados no Hospital Universitário Walter Cantídio e disponíveis nos prontuários dos pacientes. Foram acompanhados 31 pacientes, 20 (64,5%) do sexo masculino e 11 (35,5%) do feminino, de 25 a 64 anos, dos quais 51,6% (16/31) cursaram o primeiro grau incompleto e 22,6% (7/31) eram agricultores. A análise sorológica através do teste ELISA demonstrou queda significativa da densidade óptica das amostras coletadas antes (2005 a 2007) em relação às amostras pós-tratamento (2011). Com relação à IFI, os pacientes mantiveram-se inalterados durante o segmento (variação de no máximo uma diluição entre a amostra basal e 2011). No que diz respeito à avaliação eletrocardiográfica, 76,2% (16/21) apresentaram manutenção dos laudos eletrocardiográficos ao longo do estudo, com exceção de cinco casos. Um dos pacientes excluído da análise eletrocardiográfica (não existia ECG realizado em 2011) necessitou de um implante de desfibrilador ao longo do acompanhamento (2010). Em conclusão, pode-se afirmar que embora o Bz apresente efetividade limitada em pacientes na fase crônica da DC, este estudo demonstrou um efeito benéfico do medicamento na maioria dos pacientes acompanhados, já que a maioria destes apresentou manutenção dos laudos eletrocardiográficos e a sorologia mostrou uma tendência à queda. Entretanto, faz-se necessário um período maior de segmento, já que o tempo de acompanhamento deste estudo (5 a 7 anos) é considerado curto para pacientes na fase crônica da doença.
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Correlação entre alterações mínimas da função cardíaca, motilidade esofágica e variabilidade da frequência cardíaca em pacientes com a forma indeterminada da doença de Chagas / Correlation between minimal changes in cardiac function, esophageal motility and heart rate variability in patients with the indeterminate form of Chagas disease

Leopoldino, Danielle Melo de January 2011 (has links)
LEOPOLDINO, Danielle Melo de Leopoldino. Correlação entre alterações mínimas da função cardíaca, motilidade esofágica e variabilidade da frequência cardíaca em pacientes com a forma indeterminada da Doença de Chagas. 2011. 110 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-12T15:50:12Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_dmleopoldino.pdf: 1012219 bytes, checksum: a0aaf20d2aed08aa917cf81a512fa284 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-12T15:53:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_dmleopoldino.pdf: 1012219 bytes, checksum: a0aaf20d2aed08aa917cf81a512fa284 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-12T15:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_dmleopoldino.pdf: 1012219 bytes, checksum: a0aaf20d2aed08aa917cf81a512fa284 (MD5) Previous issue date: 2011 / Chagas disease (CD) is currently the fourth most impacting disease in Latin America. Infected individuals are at continued risk of developing chronic cardiomyopathy―the main cause of morbidity and mortality. CD may also lead to intrinsic denervation of the enteric nervous system (ENS). Previous studies have described important changes in the autonomic nervous system, myocardium and digestive system. Indeterminate chronic Chagas disease (ICD) is asymptomatic and cannot be detected by simple tests such as electrocardiography, esophagography, contrast enema or chest radiography. However, minimal changes in cardiac and digestive functions have been reported for patients without clear clinical signs of cardiac or ENS denervation. We hypothesize these changes may be due to autonomic dysfunction. The purpose of this study was to evaluate esophageal motility and ventricular function and their correlation with heart rate variability (HRV) in subjects with ICD. Methods. Sixteen subjects with ICD and 8 healthy controls were submitted to electrocardiography for 30 min. with monitoring of HRV in the time and frequency domains, echocardiography with monitoring of cardiac function (systolic/diastolic) and six-channel perfusion esophageal manometry. Results. The systolic function (ventricular ejection fraction) was preserved in ICD patients and controls (66.1±7.28 vs. 69.1±6.36; p=0.35), but a significant difference was observed in tissue Doppler E‟ wave values (0.12±0.02 vs. 0.14±0.01; p=0.02). The average E wave deceleration time was longer for ICD patients but the difference did not reach statistical significance (200.81±35.17 vs. 191.57±36.08). As for the HRV time domain, the average NN50 (27.93±33.97 vs. 138.75±176.13; p=0.02), pNN50 (2.61±3.47 vs. 11.66±16.16; p=0.04) and geometric index (9757±2787 vs. 13059±2793; p=0.01) were significantly lower for patients with ICD. Although SDNN (50.18±22.48 vs. 53.55±12.61; p=0.70) and rMSSD (23.05±13.78 vs. 32.32±18.18; p=0.18) were lower for ICD subjects on the average, the difference was not significant. In the frequency domains (expressed in normalized units), HF-FFT (fast Fourier transformation) (29.40±13.96 vs. 43.25±12.95; p=0.03), HF-AR (autoregressive) (29.26±14.7 vs. 43.71±12.54; p=0.02), LF-FFT (70.59±13.96 vs. 56.75±12.54; p=0.03) and LF-AR (70.74±14.75 vs. 56.28±12.54; p=0.02) differed significantly between the groups, with ICD patients displaying lower average HF values and higher average LF values, whether by FFT or AR. The inferior sphincter relaxation time was longer for ICD patients (8.68±2.95 vs. 5.73±1.80; p=0.04). A significant correlation was observed between E‟ wave values and HF-FFT (r²=0.37; p=0.01), between E‟ wave values and HF-AR (r²=0.38; p=0.01), between sphincter relaxation time and HF-AR (r²=0,55; p=0.01) and between sphincter relaxation time and LF-AR (r²=0.39; p=0.05). Conclusion. HF values were significantly lower and LF values significantly higher in individuals with ICD than in normal controls, possibly due to predominantly sympathetic dysautonomia. E‟ wave values were significantly lower in ICD patients possibly due to minimal changes in diastolic function. In addition, the inferior sphincter relaxation time was significantly longer in subjects with ICD. Dysautonomia and functional changes of the left ventricle and esophagus may be dependent phenomena. / Introdução. A doença de Chagas é considerada atualmente a quarta moléstia de maior impacto na América Latina. Indivíduos já infectados continuarão sob o potencial risco de desenvolver a cardiomiopatia chagásica crônica, a principal causa de morbimortalidade. A doença de Chagas representa, também, um modelo da desnervação intrínseca do Sistema Nervoso Entérico (SNE). Estudos prévios, demonstraram alterações importantes do sistema nervoso autônomo, do miocárdio e alterações motoras do sistema digestivo. A forma indeterminada da Doença é definida como assintomática e sem alterações de exames complementares simples (ECG, esofagograma, enema opaco, radiografia do tórax). Contudo, alterações mínimas tanto da função cardíaca quanto digestiva já foram relatadas neste grupo de pacientes que não apresentam sinais clínicos intensos de desnervação cardíaca ou do SNE. A nossa hipótese é que estas alterações possam ocorrer por disfunção autonômica. Este estudo teve como objetivo examinar a motilidade esofágica e a função ventricular, e suas relações com a variabilidade da frequência cardíaca (VFC) em indivíduos chagásicos na forma indeterminada. Métodos. Vinte e quatro indivíduos, sendo 16 pacientes chagásicos com a forma indeterminada e oito indivíduos saudáveis foram submetidos a monitorização eletrocardiográfica de 30 minutos, sendo analisada a VFC no domínio do tempo e frequência, avaliação ecocardiográfica com estudo das funções cardíacas (sistólica e diastólica), assim como avaliação da função motora esofágica por manometria de perfusão com seis canais. Resultados. Foram observados função sistólica (fração de ejeção ventricular) preservada nos grupos indeterminado e controle (66,1±7,28 versus 69,1±6,36, p=0,35) e diferença estatística significativa na avaliação da onda E‟ do Doppler tecidual, exibindo valores menores no grupo indeterminado (0,12±0,02 versus 0,14±0,01, p=0,02). Embora não houvesse diferença estatística significativa entre os valores médios do tempo de desaceleração da onda E (TDE), o grupo indeterminado apresentou valores aumentados em relação ao controle (200,81±35,17 versus 191,57±36,08). Nas medidas da VFC, no domínio do tempo, os valores médios de NN50 (27,93±33,97 versus 138,75±176, 13, p=0,02), pNN50 (2,61±3,47 versus 11,66±16,16, p=0,04), índice geométrico (9757±2787 versus 13059±2793, p=0,01) apresentavam-se menores no grupo indeterminado com diferença estatística significante. Os índices SDNN (50,18±22,48 versus 53,55±12,61, p=0,70), rMSSD (23,05±13,78 versus 32,32±18,18, p=0,18) apresentavam valores médios diminuídos no grupo indeterminado, embora sem diferença estatística. No domínio da frequência, as variáveis (unidades normalizadas) HF FFT (transformada de Fourier) (29,40±13,96 versus 43,25±12,95, p=0,03), HF AR (autorregressivo) (29,26±14,7 versus 43,71±12,54, p=0,02) e LF FFT (70,59±13,96 versus 56,75±12,54, p=0,03), LF AR (70,74±14,75 versus 56,28±12,54, p=0,02) apresentaram diferenças estatísticas significantes, exibindo valores médios diminuídos em relação a HF e aumentados em relação a LF no grupo indeterminado, seja pela transformada de Fourier ou pelo método autorregressivo. A duração do relaxamento do esfíncter inferior (EEI) apresentou valores maiores nos pacientes na forma indeterminada (8,68±2,95 versus 5,73±1,80, p=0,04). Observou-se correlação significativa entre a onda E‟do Doppler tecidual e a variável HF FFT (r²=0,37, p=0,01), entre a onda E‟do Doppler tecidual e a variável HF AR (r²=0,38, p=0,01), entre a duração do relaxamento do EEI e HF AR (r²=0,55, p=0,01), entre a duração do relaxamento do EEI e LF AR (r²=0,39,p=0,05). Conclusão. Os valores de HF power são significativamente menores nos indivíduos chagásicos com a forma indeterminada; os valores de LF power são significativamente maiores, nos indivíduos chagásicos com a forma indeterminada podendo corresponder a disautonomia com predomínio simpático. Os valores 7 da onda E‟ são significativamente menores nos indivíduos chagásicos com a forma indeterminada, podendo corresponder a mínima alteração da função diastólica. A duração do relaxamento do EEI apresenta valores significativamente maiores nos pacientes chagásicos. A disautonomia e as alterações funcionais do ventrículo esquerdo e do esôfago podem ser fenômenos dependentes.
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Avaliação da resposta imune celular de pacientes chagásicos após estímulo in vitro com os antígenos recombinantes CRA ou FRA de Trypanosoma cruzi / Evaluation of the cellular immune responses in chagasic patients after stimulus in vitro with the Trypanaosoma cruzi recombinant antigens CRA and FRA

Lorena, Virginia Maria Barros de January 2006 (has links)
Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000002.pdf: 934978 bytes, checksum: 6130fb3c5d45076149e34df39e1d2d14 (MD5) Previous issue date: 2006 / (...) nos propomos analisar a relação entre a resposta imune celular de pacientes chagásicos, após estímulo in vitro de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) com os antígenos recombinantes CRA (Cytoplasmatic Repetitive Antigen) ou FRA (Flagellar Repetitive Antigen) de Trypanosoma cruzi, e as formas clínicas crônicas da doença de Chagas. O grupo de pacientes chagásicos consistiu de 36 indivíduos (...). Um grupo de 19 indivíduos não chagásicos (NC) foi incluído como um grupo controle. PBMC foram isoladas por centrifugação através de um gradiente de densidade de Ficoll-Paque. As células foram estimuladas com Fitohemaglutinina, Concanavalina, CRA, FRA ou com antígeno solúvel de Epimastigota (Ag-Epi) por 24h, 72h ou 6 dias. Culturas sem estímulo foram utilizadas como controles negativos. A proliferação celular foi avaliada após estímulo por 6 dias de cultivo através da quantificação de 3 H-timidina incorporada. As citocinas foram detectadas em sobrenandantes de cultura obtidos após 24h (TNF-a e IL-4), 72h (IL-10) e 6 dias (IFN-g) através de ELISA de captura. Os resultados mostraram que apesar de apresentarem índices de estimulação baixos, as células dos pacientes chagásicos estimuladas com os antígenos recombinantes apresentaram maiores respostas proliferativas quando comparados com as dos indivíduos NC. Porém, não foi possível estabelecer um padrão de resposta linfoproliferativa entre os pacientes portadores das formas clínicas FC e FI da doença. Com relação às citocinas secretadas no sobrenadante de cultura após estímulo com antígenos de T. cruzi, os resultados mostraram que CRA, bem como Ag-Epi, foram capazes de estimular a produção de TNF-a e IFN-g em pacientes chagásicos quando comparado aos indivíduos NC. Porém, os níveis dessas citocinas mostraram-se similares entre os pacientes chagásicos portadores das formas clínicas FC e FI. Apesar de não apresentarem a capacidade de diferenciar as formas clínicas da doença de Chagas através do ensaio de linfoproliferação e da detecção de citocinas de sobrenadante de cultura por ELISA, os antígenos poderiam ser utilizados em estudos sobre a imunopatogênese da doença, investigando papéis imunorregulatórios antígeno-específicos. Além disso, esses antígenos poderiam dar continuidade ao desenvolvimento de marcadores de evolução de prognóstico das formas clínicas severas da doença de Chagas através da avaliação de citocinas intracitoplasmáticas por citometria de fluxo.
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Avaliação de polimorfismos genéticos de citocinas na doença de Chagas crônica / Evaluation of cytokines genetic polymorphisms in chronic Chagas disease

Vasconcelos, Romero Henrique Teixeira January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2015-06-08T13:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 34.pdf: 2083197 bytes, checksum: c8bc232619444a6c584242fffa408aa0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A doença de Chagas é largamente distribuída pelo continente americano, onde afeta milhões de indivíduos. Clinicamente, apresenta uma diversidade de manifestações. Na fase crônica, os indivíduos infectados pelo Trypanosoma cruzi podem ser assintomáticos ou apresentar complicações cardíacas e/ou digestivas. Alguns estudos têm demonstrado o envolvimento da resposta imune no desenvolvimento e manutenção das formas clínicas crônicas da infecção chagásica. A produção e a expressão diferencial de algumas citocinas entre os portadores da doença de Chagas crônica tornaram estas moléculas alvos de estudos de polimorfismos genéticos. O presente estudo teve o objetivo de avaliar polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) em portadores da doença de Chagas crônica. Foram avaliados os SNPs-1082G/A do gene IL-10 e -308G/A do gene TNF-alfa em uma população de portadores da doença de Chagas crônica selecionada no Ambulatório de Doença de Chagas e Insuficiência Cardíaca do Pronto Socorro Cardiológico de Pernambuco. Participaram desse estudo, 256 indivíduos, sendo 66 assintomáticos e 190 com cardiopatia chagásica crônica. A população estudada foi composta em sua maioria por mulheres idosas. Dentre as comorbidades presentes, a hipertensão arterial sistêmica foi a mais prevalente. A genotipagem dos SNPs foi realizada através de reação em cadeia da polimerase em tempo real com sondas TaqMan a partir de DNA genômico obtido de amostras de sangue periférico de cada indivíduo. Não foram observadas diferenças na distribuição das freqüências genotípicas e alélicas dos SNPs estudados entre as formas clínicas da doença de Chagas crônica. Também não foram observadas diferenças na distribuição das freqüências genotípicas e alélicas do SNP -1082G/A do gene IL-10 entre portadores de cardiopatia chagásica crônica. No entanto, observou-se um maior percentual, estatisticamente significante, do genótipo GA e do alelo A do SNP -308G/A do gene TNF-alfa nos portadores de cardiopatia chagásica leve, o que sugere que esse SNP pode atuar como um fator de proteção no desfecho da cardiopatia chagásica crônica
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Infecção natural de Triatoma brasiliensis brasiliensis, Caicó, Rio Grande do Norte, pelo Trypanosoma cruzi e o estudo de peptídeos antimicrobianos em diferentes espécies de triatomíneos (Hemiptera, Heteroptera, Reduviidae)

Lima, Ana Carolina Bastos de January 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2015-10-23T12:43:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ana_lima_ioc_mest_2013.pdf: 1197134 bytes, checksum: 2020503be811540cfd43d20788a70e53 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Triatoma brasiliensis é um dos vetores da doença de Chagas no Nordeste do Brasil, apresentando altos índices de infecção natural pelo Trypanosoma cruzi. No presente estudo, dois aspectos foram abordados: primeiro a coleta de exemplares de T. b. brasiliensis oriundos de Caicó, RN, para análise de infecção natural por T. cruzi, em períodos diferentes (abril e novembro de 2011). O segundo aspecto abordado está relacionado ao estudo do gene que codifica defensinas como marcador molecular filogenético para a análise de diferentes espécies de triatomíneos, incluindo o complexo T. brasiliensis, além de exemplares de T. b. brasiliensis coletados em Caicó. Em relação à infecção natural de T. b. brasiliensis por T. cruzi observamos um alto índice (86%), mais especificamente na localidade de Penedo. Também foi observado que não houve diferenças significativas entre as expedições realizadas nos períodos de chuva (abril de 2011) e seca (novembro de 2011) Além disso, cinco isolados de T. cruzi foram caracterizados molecularmente por duas metodologias: mini-exon, 24S\03B1 rDNA e 18S rDNA. Como resultados observamos os dois genótipos (TcI e TcII) circulando em Caicó. Foram obtidas sequências do gene que codifica defensina, onde diferentes isoformas deste gene puderam ser identificadas e caracterizadas nas diferentes espécies de triatomíneos estudadas. A espécie Panstrongylus megistus ficou nos mesmos clados que representantes do gênero Rhodnius. Houve uma clara separação dos clados em relação aos gêneros Triatoma e Rhodnius. Com relação aos membros do complexo T. brasiliensis, não foi possível uma clara distinção entre as espécies pelo fato da molécula de defensina apresentar menos que 500 bp em seu tamanho, além de ser bastante conservada, não sendo portanto um bom marcador para separar grupos muito proximamente relacionados / Triatoma brasiliensis is one of the main Chagas disease vectors in Northeastern Brazil, presenting a high natural Trypanosoma cruzi infection rate. In the present work, two diffe re nt aspects were investigated: First, t riatomines of the sub species T. b. brasiliensis were collected in Caicó, RN for analysis of natural infection by T. cruzi in two dissimilar periods (April and N ovember 2011). The second aspect is related to use of de fensin encoding genes as a phylogenetic marker for the study of different triatomine species, mainly the T. brasiliensis species complex, including T. b. brasiliensis specimens from Caicó. The results showed a high infection rate (86%) of T. b. brasiliensi s from Caicó by T. cruzi , especially in insects from Penedo. No significant differe nces between the rainy period (A pril 2011) and dried season (November 2011) could be observed. In addition, five T. cruzi isolates were cultivated and characterized by three different molecular methods (mini - exon, 24S α rDNA and 18S rDNA). The results showed the presence of TcI and TcII genotypes circulating in Caicó . Defensin encoding genes were amplified and sequenced for different triatomine species, showing three differing forms. Panstrongylus megistus clustered tog ether with representatives of the genus Rhodnius . A separation between the genus Triatoma and Rhodnius could also be detected. However, inside of the T. brasiliensis species complex the taxa could not be well separated. Since this molecular marker has a si ze of less than 500 bp and is highly conserved defensin encoding sequences might not be a good marker to separate closely related species and subspecies
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Estudo taxonômico da tribo Bolboderini (Hemiptera-Heteroptera, Reduviidae, Triatominae), com análise cladística

Santana, Hélcio Reinaldo Gil January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2015-11-04T13:40:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 helcio_santana_ioc_dout_2014.pdf: 4459117 bytes, checksum: 40f6c65c668cf57c380dd4a78c1fda3e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Bolboderini é uma das cinco tribos de Triatominae (Hemiptera: Heteroptera: Reduviidae), subfamília que inclui os vetores da doença de Chagas (tripanosomíase americana) nas Américas. Atualmente a tribo inclui quatro gêneros e treze espécies: Belminus Stål, 1859, com oito espécies: B. corredori Galvão & Angulo, 2006, B. costaricencis Herrer, Lent & Wygodzinsky, 1954, B. ferroae Sandoval, Pabón, Jurberg & Galvão, 2007, B. herreri Lent & Wygodzinsky, 1979, B. laportei Lent, Jurberg & Carcavallo, 1995, B. peruvianus Herrer, Lent & Wygodzinsky, 1954, B. pittieri Osuna & Ayala, 1993 e B. rugulosus Stål, 1859; Bolbodera Valdés, 1910, com uma espécie: B. scabrosa Valdés, 1910; Microtriatoma Prosen & Martínez, 1952, com duas espécies: M. borbai Lent & Wygodzinsky, 1979 e M. trinidadensis (Lent, 1951); Parabelminus Lent, 1943, com duas espécies: P. carioca Lent, 1943 e P. yurupucu Lent & Wygodzinsky, 1979. Realizou-se revisão dos táxons da tribo, com diagnoses e redescrições dos mesmos, elaboração de chaves para identificação e mapas de distribuição geográfica. A análise cladística baseou-se em 40 caracteres morfológicos e 23 táxons terminais, utilizando cinco espécies de Triatominae de outras três tribos, quatro espécies de Reduviidae e uma espécie de Pachynomidae como grupo externo A análise de parcimônia foi realizada com o método de \201Cbranch-and-bound\201D, com auxílio dos programas \201CTNT 1.1\201D e \201CAsado ver 1.89 TNT\201D. Os resultados sustentaram a hipótese de que Bolboderini e os gêneros que a compõem são monofiléticos e o relacionamento entre os táxons foi: ((Microtriatoma borbai + Microtriatoma trinidadensis) ((Parabelminus carioca + Parabelminus yurupucu) (Bolbodera scabrosa ((Belminus rugulosus (Belminus costaricensis + Belminus peruvianus)) (Belminus corredori (Belminus laportei (Belminus herreri (Belminus ferroae + Belminus pittieri))))))))). Os gêneros mostraram-se muito bem suportados na presente análise. Os resultados são compatíveis com a composição taxonômica atual desses táxons e nenhuma alteração foi sugerida. A topologia dos clados do grupo externo entre si e com Bolboderini suportou a hipótese de polifilia de Triatominae. A distribuição geográfica conhecida dos Bolboderini não está de acordo com nenhuma hipótese biogeográfica de vicariância que explique a filogenia obtida para o grupo. Tanto a deficiência de amostragem, quanto a dispersão podem ter mascarado eventos vicariantes, impedindo o estabelecimento de uma hipótese biogeográfica congruente com padrões anteriormente propostos para a biota Neotropical / Bolboderini is one of the five tribes of Triatominae (Hemiptera: Heteroptera: Reduviidae), subfamily that includes the vectors of Chagas Disease (American trypanosomiasis) in the Americas . C urrently , the tribe includes four genera and t hirteen species : Belminus Stål, 1859, with eig ht species : B. corredori Galvão & Angulo, 2006, B. costaricencis Herrer, Lent & Wygodzinsky, 1954, B. ferroae Sandoval, Pabón, Jurberg & Galvão, 2007, B. herreri Lent & Wygodzinsky, 1979, B. laportei Lent, Jurberg & Carcavallo, 1995, B. peruvianus Herrer, Lent & Wygodzinsky, 1954, B. pittieri Osuna & Ayala, 1993 and B. rugulosus Stål, 1859; Bolbodera Valdés, 1910, with one species : B. scabrosa Valdés, 1910; Microtriatoma Prosen & Martínez, 1952, with two species : M. borbai Lent & Wygodzinsky, 1979 and M. tr inidadensis (Lent, 1951); Parabelminus Lent, 1943, with two species : P. carioca Lent, 1943 and P. yurupucu Lent & Wygodzinsky, 1979. The taxa of the tribe were revised, with diagnosis and redescription s of them , elaboration of identification keys and geog raphical distribution maps . The c ladistic analysis was based on 4 0 morphological characters and 23 terminal taxa, with five Triatominae species belonging to other three tribes, four R eduviidae species e a species of Pachynomidae as outgroup. The parsimony analysis was performed with the method “branch - and - bound”, with the aid of programs “TNT 1.1” e “Asado ver 1.89 TNT ”. The results supported the hypothesis that Bolboderini and its genera a re monophyletic and the relationship among taxa w as : (( Microtriatoma borbai + Microtriatoma trinidadensis ) (( Parabelminus carioca + Parabelminus yurupucu ) ( Bolbodera scabrosa (( Belminus rugulosus ( Belminus costaricensis + Belminus peruvianus )) ( Belminus corredori ( Belminus laportei ( Belminus herreri ( Belminus ferroae + Belm inus pittieri ))))))))). The genera showed to be very well supported in this analysis. The results are compatible with the current taxonomic arrangement of these taxa and no changes were suggested. The topology of outgroup clades with each other and Bolbode rini support ed the hypothesis of polyphyly of Triatominae. The known geographical distribution of Bolboderini does not agree with a ny vicariance biogeographic hypothesis to explain the phylogeny obtained for the group. Both deficient sampling as dispersion may have masked events of vicariance, preventing the establishment of a consistent hypothesis consistent with previously proposed patterns for the Neotropical biota.
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Composição e variabilidade da microbiota intestinal de triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae): o papel das comunidades bacterianas na transmissão da doença de Chagas

Díaz Zuleta, Sebastían January 2016 (has links)
Triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae) conhecidos no Brasil como “barbeiros” são os vetores do flagelado Trypanosoma cruzi, o parasita causador da doença de Chagas, uma das mais importantes doenças parasitárias no continente americano. O estudo da microbiota intestinal dos triatomíneos tem ganhado relevância nos últimos anos dado seu papel potencial em modular a competência vetorial, além do uso de bactérias modificadas geneticamente para inibir o desenvolvimento do inseto ou do parasita. Porém, para um uso prospectivo em estratégias de controle, se requer um bom conhecimento da interação vetor-microbiota-parasita, incluindo a composição da microbiota, rotas de transmissão e a resposta a infecção com T. cruzi. Para responder estas perguntas, neste trabalho foi amostrada a microbiota intestinal de insetos criados em colônias de laboratório de seis espécies representativas dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus, usando sequenciamento em larga escala de um fragmento do gene ribossomal 16S. Nosso estudo compara insetos desafiados experimentalmente contra T. cruzi e controles não desafiados, bem como amostras obtidas de intestino e gônadas. Nossos resultados demostram que a microbiota intestinal de triatomíneos tem uma baixa diversidade dentro de indivíduos, pode ser transmitida horizontal ou tanto vertical como horizontalmente, e é altamente variável na sua composição taxonômica dentro de uma mesma espécie de hospedeiro. No entanto, as espécies bacterianas da microbiota padrão são principalmente restritas a Enterobacteriales e Corynebacteriales. Nossos resultados sugerem que desafio com T. cruzi influencia a composição da microbiota de acordo com a susceptibilidade do vetor: nas espécies com infecção não detectável, ela é variável entre os grupo desafiado e o controle, mas nas espécies com infecção detectável, ela permanece em sua maioria sem mudanças. Nossas observações são discutidas à luz do nosso conhecimento sobre a resposta imune do inseto e sobre a capacidade do parasita de modulá-la. Nós consideramos que, embora a diversidade da microbiota ser altamente variável entre espécies e indivíduos, grupos taxonômicos-chave definem a microbiota padrão intestinal dos triatomíneos, permitindo-nos explorar o papel dos simbiontes na nutrição e defesa do hospedeiro. Finalmente, nós sugerimos caminhos através dos quais novas pesquisas sobre a regulação fisiológica dos triatomíneos pela microbiota intestinal podem ser realizados a fim de avaliar a sua resposta posterior contra T. cruzi e ser usada como indicador de susceptibilidade dos insetos à infecção pelo o parasita. / Triatomine bugs (Hemiptera: Reduviidae) known in Brazil as “barbeiros” are the vectors of flagellate Trypanosoma cruzi, the causative agent of the Chagas disease, one of the most important parasitic diseases in the American continent. The study of triatomine gut microbiota has gained relevance in the last years given its potential role to modulate vector competence, besides the use of genetically modified bacteria to inhibit the development of either insects or parasites. However, for a prospective use in control strategies, a good understanding of the vector-microbiota-parasite interactions is required, including microbiota composition, its transmission routes, and its responses to T. cruzi infection. To answer these questions, we sampled the gut microbiota of colony-reared insects of six representative species of the genera Triatoma, Rhodnius and Panstrongylus, using high throughput sequencing of a fragment of the ribosomal gene 16S. Our study compares experimental T. cruzi-challenged and non-challenged control individuals, as well as samples obtained from guts and gonads. Our results demonstrate that the triatomine gut microbiota has a low intra-individual diversity, is either horizontally or both horizontally and vertically transmissible, and is highly variable in its taxonomic composition within the same host species. Nevertheless, bacterial species of the core microbiota are mostly restricted to Enterobacteriales and Corynebacteriales. T. cruzi-challenge seems to influence microbiota composition according to vector susceptibility: in species with non-detectable infection, it is variable between experimentally challenged and non-challenged vectors, while in species with detectable infection, the microbiota remains mostly undisturbed. This latter observation is discussed in the light of insect immune responses and the parasite capacity of modulating it. We consider that, although the microbiota diversity is highly variable between species and individuals, key taxonomic groups define the core triatomine gut microbiota, allowing us to explore their symbiotic role in host nutrition and defense. Finally, we suggest avenues through which new research on triatomine physiological regulation of gut microbiota could be conducted in order to evaluate its subsequent response to T. cruzi and be used as indicator of infection susceptibility to the parasite.

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