Thesis (doctoral)--Rijksuniversiteit te Utrecht, 1959. / Includes bibliographical references (p. 94-96).

Thesis (doctoral)--Rijksuniversiteit te Utrecht, 1959. / Includes bibliographical references (p. 94-96).

Thesis (Ph. D.)--University of Missouri--Columbia, 2002. / "December 2002." Typescript. Vita. Includes bibliographical references (leaves 141-160). Also issued on the Internet.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2002. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 81-97).

Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Marcio Garcia Ribeiro / Banca: Hélio Langoni / Banca: Christian Hirsch / Banca: Osimar de Carvalho Sanches / Resumo: O estudo objetivou identificar efeitos do tratamento com ribavirina, prednisona e DMSO na cinomose; identificar a presença viral no sangue, medula óssea e líquor antes e após o tratamento, os efeitos colaterais dos fármacos experimentais e associações. Foram utilizados 60 cães apresentando sinais neurológicos da cinomose com evolução de dez dias. Animais foram internados para tratamento de suporte; avaliados diariamente e submetidos ao hemograma e dosagens bioquímicas. Os grupos 1 e 2 foram tratados com ribavirina associada ao DMSO; os grupos 3 e 4 foram tratados com DMSO e prednisona e os grupos 5 e 6 foram tratados com ribavirina e prednisona, ribavirina, prednisona e DMSO. Os animais foram anestesiados e colhidos líquor, medula óssea e sangue, antes e após o tratamento e realizada a RTPCR das amostras; as negativas foram analisadas pela técnica de hn-PCR. O vírus foi encontrado em 95% das amostras de sangue, 90% de medula óssea e 53,3% de líquor pré-tratamento. O efeito adverso da ribavirina quando associada com a prednisona foi anemia. A prednisona na dose imunossupressora causou aumento da dosagem de proteína e diminuição da celularidade liquórica, leucocitose. Já a dose antinflamatória causou diminuição de proteína no líquor. Baseado nos índices de sobrevida e melhora clínica, o tratamento mais efetivo foi o G2 (80%); seguido do G1, G5 e G3 (70%); o G6 (60%); o G4 com o pior índice (30%). Pós-tratamento, a frequência viral foi 97,7% no sangue, 86,4% na medula óssea e 27,3% no líquor / Abstract: The present study aims at the identification of ribavirin, prednisone and DMSO's treatment effects in dogs with canine distemper, at the identification of the viral presence in the blood, bone marrow and cerebrospinal fluid (CSF) before and after the treatment and also at the identification of side effects of the experimental drugs and its combinations. Sixty dogs presenting canine distemper with neurological signs about ten days evolution were observed. The animals were hospitalized for the support treatment, assessed on daily basis and subjected to blood cells count and biochemical analysis. Groups 1 and 2 were treated with ribavirin and its combination with DMSO; Groups 3 and 4 treated with prednisone and DMSO, Group 5 treated with ribavirin and prednisone, while Group 6 with ribavirin, prednisone and DMSO. The animals were anesthetized for the cerebrospinal fluid, bone marrow and blood samples collection before and after the treatment, then the RT-PCR of the samples was proceeded. The negative were analysed according to the hn-PCR technique. The canine distemper virus were found in 95% of blood samples, 90% of bone marrow and 53,3% of CSF before the treatment. The adverse effect of ribavirin and its association with prednisone was anemia. Prednisone, at its immunosuppressive dose, led to the increase of protein and decrease of cellularity in CSF, and increase of leukocytes blood count. The antiinflammatory dose led to the CSF protein concentration's decrease. Considering the survival and clinical improvement rates, the most successful treatment was the one applied to the G2 (80%); followed by G1 (70%); G5 (70%) and G3 (70%); G6 (60%); and the lowest rate G4 (30%). After the treatment, the virus frequency was 97,7% in the blood, 86,4% in the bone marrow and 27,3% in the CSF / Doutor

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-09. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:51Z : No. of bitstreams: 1 000850064.pdf: 4306282 bytes, checksum: 43716ecb90f85e6190ef2c7b4fcce07b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A neoplasia mamária canina representa uma das maiores casuísticas na oncologia veterinária e o emprego de seus respectivos cultivos celulares são importantes, principalmente, na área terapêutica. Assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar e estabelecer cultivos celulares de tumores mamários caninos para testes in vitro com doxorrubicina e, correlacionar imunomarcações com vimentina, citoqueratina, p53 e HER-2 no tumor original e nas células do seu cultivo. Tumor misto benigno e os carcinomas complexo, simples e espinocelular foram cultivados a partir de explantes com posterior exposição das células à doxorrubicina (controle-0,25-0,50-0,75-1,0-2,0μM). A viabilidade celular foi mensurada pelo azul de Tripan e os testes com imunomarcadores para cada espécie tumoral foram por imuno-histoquímica e, no cultivo, pela imunofluorescência. Do total de 39 amostras, 40% foram cultivadas até a quinta ou mais passagens. As imunomarcações não foram expressas de forma similar entre as técnicas, com diferença significativa na frequência de vimentina, p53 e HER-2, de forma aumentada nos cultivos. A doxorrubicina apresentou alta eficácia nas células tumorais, mas sem diferença entre os tipos histológicos, porém cada cultivo comportou-se distintamente quando analisado em isolado. Conclui-se que é possível cultivar primariamente diferentes tumores mamários caninos utilizando-se meio de cultivo básico; os testes de expressão gênicas são mais indicados para análises comparativas entre tumor e seu respectivo cultivo e, quanto maior a concentração do quimioterápico, menor a viabilidade celular / Canine mammary tumors represent a high casuistry in veterinary oncology and few studies with cell culture are being employed, mainly with drug application. The purpose was to establish and standardize the cell culture of canine mammary tumors for in vitro efficacy of doxorubicin and to correlate the immunostaining of vimentin, cytokeratin, p53 and HER-2, in paraffin sections of original tumor and the cell cultures derivated. Benign mixed tumor, complex carcinoma, simple carcinoma and espinocelular carcinoma were cultivated from explants and the cells originated were incubated with doxorubicin in different concentrations (control-0.25-0.50-0.75-1.0-2.0μM). The percentual of viable cells were determined by the Trypan blue dye exclusion test and for immunoexpression, the immunohistochemistry was performed for the primary tumor and immunofluorescence, for the cells. A total of 39 tumor samples were collected and, 40% were cultivated up to fifth passages. A different imunnoexpression was observed between methodologies with higher expression at vimentin, p53 and HER-2 groups. It was observed that doxorubicin presented an elevated efficacy in canine mammary cell culture but without difference among the histological groups and each sample presented an individual responsiveness for the same treatment. So, it can be concluded that it was possible to realize a primary cell culture with a simple culture medium formulation; gene expression profiles in tumor tissue and cell culture derived from those tumors are better designated than immunoexpression tests and higher the concentration of doxorubicin, lower the cell viability

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:27Z : No. of bitstreams: 1 000850082.pdf: 818616 bytes, checksum: 3fd2568d0eccab7527d2da8ab5c61b6f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Em medicina veterinária, os tumores mamários de cadelas possuem alta casuística e o seu prognóstico, em muitos casos, já desfavorável. Dessa forma, é imperioso desenvolver formas eficientes para estudar o comportamento dessa neoplasia, utilizando cultivos celulares para aplicação de testes quimioterápicos associados à expressão de indutores da apoptose. Assim o objetivo desse estudo foi realizar o cultivo, em 3D, de tumores mamários, mimetizando o ambiente tumoral in vivo, em substituição aos testes experimentais com animais e cobaias de laboratório. Adicionalmente, pretendeuse analisar a expressão das proteínas caspase 2, 3, 8, 9, Bcl-2 e Bax em células após o tratamento com carboplatina (dose 1,25μM), e a p53 em cultivo monocamada em células de baixa e alta passagem (20 até 58, respectivamente). O cultivo em 3D demonstrou ser uma boa ferramenta para o estudo in vitro. Os esferoides formados diminuíram de tamanho após tratamento com carboplatina. A expressão de Bcl-2, em duas amostras, indicou resistência à carboplatina em dois tipos histológicos (carcinoma solido e carcinoma espinocelular). As caspases 2 e 3 não foram expressas em amostras tratadas, indicando que a carboplatina não causa morte celular pela apoptose. A p53 foi marcada no núcleo e no citoplasma, indicando anormalidade nessa proteína, que pode estar associada à progressão maligna em neoplasias. Todos os ensaios desenvolvidos no cultivo 3D mostraram que é possível, com essa técnica, aprofundar os estudos sobre as neoplasias mamárias em cães, podendo contribuir para novas descobertas referente ao prognóstico e novos tratamentos / In Veterinary Medicine canine mammary tumors have high casuistry and in many cases bad prognosis the prognosis is bad. Thus it is imperative to develop efficient ways to study the behavior of this tumor using tissue culture tests for applying chemotherapeutic associated with expression inducers of apoptosis. The aim of this study was to grow cells of breast tumors in 3D culture where can mimic the environment in vivo. Additionally, analyze the expression of the caspase protein 2, 3, 8, 9, Bcl-2 and Bax and cells after treatment with carboplatin (dose 1.25 mM). Thus, analyse of p53 cells in monolayer culture in high-pass (up to 58 passages) and low-pass (up to 20 passages). The spheroids formed decreased in size after treatment with carboplatin. The expression of Bcl- 2 in both samples showed resistance to carboplatin in two histological types (solid carcinoma and squamous cell carcinoma). The caspase 2 and 3 not expressed in treated samples indicating that carboplatin does not cause cell death by apoptosis. P53 showed cytoplasmic and in the nucleus, indicating that abnormal protein may be associated with malignant progression in cancer. All assays developed in 3D culture showed that it is possible with this technique, further studies on mammary tumors in dogs that can contribute on new discoveries regarding the prognosis and treatments / FAPESP: 2011/613-7

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-23Bitstream added on 2014-06-13T18:48:23Z : No. of bitstreams: 1 figueiroa_fc_dr_botfmvz.pdf: 868542 bytes, checksum: 76abbb295655fa17bd152e2d78e90a3b (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Por ser a maior causa de morte entre as fêmeas caninas, o câncer de mama desperta o interesse da comunidade científica, pois sua apresentação e evolução clínica são muito semelhantes aos casos de câncer de mama na mulher. No intuito de permitir a continuação dos estudos comparativos entre os tumores de cadelas e os das mulheres, foram realizadas as marcações imunoistoquímicas para receptores de estrógeno (RE), HER-2, p63 e CK5, a fim de classificar os tumores de acordo com sua expressão, nos diferentes subtipos. Além disso, foram utilizados os marcadores para CD10, BMI-1, CD44, CD24, ESA e MUC-1 por meio da imunoistoquímica em lâminas confeccionadas pela técnica de Tissue microarray (TMA) para avaliar a presença de células-tronco tumorais. A partir dos resultados da imunoistoquímica os tumores foram classificados em Luminal A (RE+ e HER-2- ) (25,89%), Luminal B (RE+ e HER-2+) (33,93%), Superexpressão de HER-2 (RE- e HER-2 +) (14,29%) e Basal (RE-, HER-2- e p63 e/ou CK5 +) (25,89%). Dos 112 tumores, 75 foram positivos para CD10 (66,96%), 81 positivos para BMI-1 (72,32%), para o CD44 apenas seis tumores (5,35%) foram positivos, 48 tumores positivos para CD24 (42,86%), 24 positivos para ESA (21,43%) e 23 tumores foram positivos para MUC-1 (20,54%). Desses tumores, quatro apresentaram o imunofenótipo CD44+CD24-, representando 3,57% dos tumores. Ao correlacionar as marcações para células-tronco tumorais com os diferentes subtipos, alguns marcadores apresentaram diferença estatística, sugerindo que os tumores com imunofenótipo mais agressivo (Superexpressão de HER-2 e Basal) foram positivos para a marcação de células-tronco tumorais. Além disso, houve uma maior marcação das células-tronco tumorais para os carcinomas classificados em complexo, o que desafia os dados de literatura, já que esses tumores eram considerados com melhor prognóstico do que os carcinomas simples. São necessários novos estudos... / For being the biggest cause of death among the canine females, mammary cancer arises the interest of the scientific community; therefore its presentation and clinical outcome are very similar to the cases of breast cancer in woman. In intention to allow the following of comparative studies between the tumors of dogs and women, immunohistochemical markers were performed to estrogen receptors (RE), HER-2, p63 e CK5, to classify the tumors according to their expression, in different subtypes. Beyond that, markers to CD10, BMI-1, CD44, CD24, ESA e MUC-1 were used through the immunohistochemical in slides made by Tissue microarray technique (TMA) to evaluate the presence of cancer stem cells. From the immunohistochemical results, tumors were classified in Luminal A (RE+ e HER-2-) (25,89%), Luminal B (RE+ e HER-2+) (33,93%), HER-2 Overexpression (RE- e HER-2 +) (14,29%) and Basal (RE-, HER-2- e p63 e/ou CK5 +) (25,89%). Among 112 tumors, 75 were positive to CD10 (66,96%), 81 positive to BMI-1 (72,32), to CD44 only six tumors (5,35%) were positive, 48 positive tumors to CD24 (42,86%), 24 positive to ESA (21,43%) and 23 tumors were positive to MUC-1 (20,54%). In these tumors, four presents CD44+CD24- immunophenotypes, performing 3,57% of tumors. To correlate cancer stem cells markers with the distinct subtypes, some markers presented statistical differences, suggesting that more aggressive tumors immunophenotypes (HER-2 Overexpression and Basal) were positive to cancer stem cells markers. Besides, there were higher cancer stem cell markers in complex carcinomas, which challenge literature data because this kind of tumor was considered with better prognosis when compared with simple carcinomas. More studies are necessary with new samples to confront this research results’ and determinate the more indicated markers. Still, the female dog must be considered to be used as experimental model for breast cancer ...

Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Co-orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Banca: Maria Gisela Laranjeira / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Banca: Paula Rahal / Resumo: A neoplasia mamária canina representa uma das maiores casuísticas na oncologia veterinária e o emprego de seus respectivos cultivos celulares são importantes, principalmente, na área terapêutica. Assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar e estabelecer cultivos celulares de tumores mamários caninos para testes in vitro com doxorrubicina e, correlacionar imunomarcações com vimentina, citoqueratina, p53 e HER-2 no tumor original e nas células do seu cultivo. Tumor misto benigno e os carcinomas complexo, simples e espinocelular foram cultivados a partir de explantes com posterior exposição das células à doxorrubicina (controle-0,25-0,50-0,75-1,0-2,0μM). A viabilidade celular foi mensurada pelo azul de Tripan e os testes com imunomarcadores para cada espécie tumoral foram por imuno-histoquímica e, no cultivo, pela imunofluorescência. Do total de 39 amostras, 40% foram cultivadas até a quinta ou mais passagens. As imunomarcações não foram expressas de forma similar entre as técnicas, com diferença significativa na frequência de vimentina, p53 e HER-2, de forma aumentada nos cultivos. A doxorrubicina apresentou alta eficácia nas células tumorais, mas sem diferença entre os tipos histológicos, porém cada cultivo comportou-se distintamente quando analisado em isolado. Conclui-se que é possível cultivar primariamente diferentes tumores mamários caninos utilizando-se meio de cultivo básico; os testes de expressão gênicas são mais indicados para análises comparativas entre tumor e seu respectivo cultivo e, quanto maior a concentração do quimioterápico, menor a viabilidade celular / Abstract: Canine mammary tumors represent a high casuistry in veterinary oncology and few studies with cell culture are being employed, mainly with drug application. The purpose was to establish and standardize the cell culture of canine mammary tumors for in vitro efficacy of doxorubicin and to correlate the immunostaining of vimentin, cytokeratin, p53 and HER-2, in paraffin sections of original tumor and the cell cultures derivated. Benign mixed tumor, complex carcinoma, simple carcinoma and espinocelular carcinoma were cultivated from explants and the cells originated were incubated with doxorubicin in different concentrations (control-0.25-0.50-0.75-1.0-2.0μM). The percentual of viable cells were determined by the Trypan blue dye exclusion test and for immunoexpression, the immunohistochemistry was performed for the primary tumor and immunofluorescence, for the cells. A total of 39 tumor samples were collected and, 40% were cultivated up to fifth passages. A different imunnoexpression was observed between methodologies with higher expression at vimentin, p53 and HER-2 groups. It was observed that doxorubicin presented an elevated efficacy in canine mammary cell culture but without difference among the histological groups and each sample presented an individual responsiveness for the same treatment. So, it can be concluded that it was possible to realize a primary cell culture with a simple culture medium formulation; gene expression profiles in tumor tissue and cell culture derived from those tumors are better designated than immunoexpression tests and higher the concentration of doxorubicin, lower the cell viability / Doutor

Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Co-orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Camila da Silva Frade / Banca: Maria Gisela Laranjeira / Banca: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Resumo: Em medicina veterinária, os tumores mamários de cadelas possuem alta casuística e o seu prognóstico, em muitos casos, já desfavorável. Dessa forma, é imperioso desenvolver formas eficientes para estudar o comportamento dessa neoplasia, utilizando cultivos celulares para aplicação de testes quimioterápicos associados à expressão de indutores da apoptose. Assim o objetivo desse estudo foi realizar o cultivo, em 3D, de tumores mamários, mimetizando o ambiente tumoral "in vivo", em substituição aos testes experimentais com animais e cobaias de laboratório. Adicionalmente, pretendeuse analisar a expressão das proteínas caspase 2, 3, 8, 9, Bcl-2 e Bax em células após o tratamento com carboplatina (dose 1,25μM), e a p53 em cultivo monocamada em células de baixa e alta passagem (20 até 58, respectivamente). O cultivo em 3D demonstrou ser uma boa ferramenta para o estudo "in vitro". Os esferoides formados diminuíram de tamanho após tratamento com carboplatina. A expressão de Bcl-2, em duas amostras, indicou resistência à carboplatina em dois tipos histológicos (carcinoma solido e carcinoma espinocelular). As caspases 2 e 3 não foram expressas em amostras tratadas, indicando que a carboplatina não causa morte celular pela apoptose. A p53 foi marcada no núcleo e no citoplasma, indicando anormalidade nessa proteína, que pode estar associada à progressão maligna em neoplasias. Todos os ensaios desenvolvidos no cultivo 3D mostraram que é possível, com essa técnica, aprofundar os estudos sobre as neoplasias mamárias em cães, podendo contribuir para novas descobertas referente ao prognóstico e novos tratamentos / Abstract: In Veterinary Medicine canine mammary tumors have high casuistry and in many cases bad prognosis the prognosis is bad. Thus it is imperative to develop efficient ways to study the behavior of this tumor using tissue culture tests for applying chemotherapeutic associated with expression inducers of apoptosis. The aim of this study was to grow cells of breast tumors in 3D culture where can mimic the environment "in vivo". Additionally, analyze the expression of the caspase protein 2, 3, 8, 9, Bcl-2 and Bax and cells after treatment with carboplatin (dose 1.25 mM). Thus, analyse of p53 cells in monolayer culture in high-pass (up to 58 passages) and low-pass (up to 20 passages). The spheroids formed decreased in size after treatment with carboplatin. The expression of Bcl- 2 in both samples showed resistance to carboplatin in two histological types (solid carcinoma and squamous cell carcinoma). The caspase 2 and 3 not expressed in treated samples indicating that carboplatin does not cause cell death by apoptosis. P53 showed cytoplasmic and in the nucleus, indicating that abnormal protein may be associated with malignant progression in cancer. All assays developed in 3D culture showed that it is possible with this technique, further studies on mammary tumors in dogs that can contribute on new discoveries regarding the prognosis and treatments / Doutor