Eggshell membrane (ESM) provides a physical and bioactive barrier to protect the developing embryo. Proteomics and bioinformatics analyses have revealed that the collagen-rich ESM is composed of >500 proteins with multiple functionalities. The goal of this study was to produce novel particalized ESM (PEM) with enhanced bioactivities for focused applications on positive skin health. A novel top-down method was developed to produce the PEM from table eggs, in a submicron size range. PEM exhibited dose- and size-dependent antimicrobial activity against Gram-positive Staphylococcus aureus (S. aureus), and Gram-negative Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) and Escherichia coli (E. coli) species. A dose-dependent anti-inflammatory activity for PEM was observed in an in vitro model but no significant difference between two finest sizes. Additionally, the antioxidant activity of PEM was significantly improved by optimized chemical hydrolysis with size-dependent activity. Taken together, the eco-friendly PEM has great potential as a novel topical ingredient for cosmetics/ skincare applications.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(情報学) / 甲第20025号 / 情博第620号 / 新制||情||108(附属図書館) / 33121 / 京都大学大学院情報学研究科社会情報学専攻 / (主査)教授 守屋 和幸, 教授 松田 哲也, 教授 廣岡 博之 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Informatics / Kyoto University / DGAM

[pt] A hidroxiapatita está entre os biomateriais cerâmicos de maior interesse na área médica, pois, além da sua semelhança com a fase inorgânica dos ossos e dentes, apresenta exelente biocompatibilidade e bioatividade. Devido a sua ampla aplicação e aos gastos inerentes a utilização de implantes em processos cirúrgicos, torna-se necessário o desenvolvimento de processos mais viáveis encomonicamente e de materiais com melhores propriedades, com isso, este trabalho teve como objetivo a síntese de hidroxiapatita (HAp) pelo método de precipitação utilizando cascas de ovos de galinha como fonte de cálcio na presença de diferentes concentrações de sacarose, para avaliar sua influência nas características dos materiais sintetizados. A utilização da casca de ovo surge como um insumo atrativo, uma vez que é composta majoritariamente por carbonato de cálcio, um material abundante e barato. A casca de ovo foi calcinada à 1000 graus Celsius para obtenção do CaO que foi hidrolisado para a obtenção do Ca(OH)2.Os materiais foram obtidos pela reação de precipitação entre o Ca(OH)2 e H3PO4 a temperatura ambiente e com controle de pH, utilizando diferentes quantidades de sacarose. Os materiais obtidos foram caracterizados pelos métodos de Difração de Raios X (DRX), Microscopia Eletrônica de Varredura com emissão de campo (MEV-FEG), adsorção de N2 a 77K (BET), Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), análise termogravimétrica (TG) e Fluorescência de Raios X (FRX). Os resultados de DRX confirmaram a formação da HAp. O FTIR apresentou as bandas correspondentes a HAp, corroborando os resultados de DRX, identificando também bandas de carbonato. Os resultados de EDXS confirmaram a composição química das amostras, sendo esta de P, O e Ca. A caracterização por MEV permitiu a avaliação da mudança da morfologia com o para as diferentes da quantidade de sacarose utilizada, sendo observada uma tendência a formação de partículas esferoidais. Os resultados de BET evidenciaram um aumento de superfície específica com o aumento da quantidade de sacarose, passando de 36 para 93 m2/g, decorrente do aumento de porosidade e diminuição do tamanho de partícula, resultado confirmado pelo MET, com tamanho de partícula passando 50 nm para valores em torno de 10-20 nm. Para avaliação da citotoxicidade foi realizado o ensaio da redução da resazurina para o período de 24h. Os resultados obtidos indicaram que as amostras são não citotóxicas. O ensaio de bioatividade foi realizado em meio McCoy para o período de 3 e 7 dias, apresentando resultados de dissolução das amostras compatíveis com caracteríticas de superfícies bioativas, porém, para o período de da análise, não foi observada a formação da camada bone like apatite. Os materiais sintetizados apresentaram propriedades semelhantes aos obtidos a partir de fontes de cálcio comerciais, apresentando promissor potencial em aplicações da engenharia de tecido ósseo, além de contribuir para a reciclagem desses bio-resíduos que é a casca de ovo. Os resultados obtidos indicam que a sacarose pode alterar as características do material, sendo um promissor aditivo/template de fácil obtenção e baixo custo, proporcionando materiais com elevada superfície específica e redução do tamanho de partícula. / [en] Hydroxyapatite is among the ceramic biomaterials of greatest interest in the medical field, because, in addition to its similarity with the inorganic phase of bones and teeth, it presents excellent biocompatibility and bioactivity. Due to its wide application and the expensive surgical processes, it is necessary to develop more viable processes and materials with better properties, therefore, the work aimed the hydroxyapatite synthesis (HAp) by precipitation method using hen’s eggshells as a calcium source in the presence of different sucrose concentrations, to evaluate its effect on the characteristics of the synthesized materials. A comparative study was also carried out with HAp samples obtained without sucrose and with commercial Ca(OH)2. The use of eggshells appears as an attractive raw material since it is mainly composed of calcium carbonate and because it is an abundant and cheap material. The eggshell was calcined at 1000 Celsius to obtain CaO, which was hydrolyzed to obtain Ca(OH)2. The materials were obtained by the precipitation reaction between Ca(OH)2 and H3PO4 at room temperature with pH control, using different amounts of sucrose. The obtained materials were characterized by X-Ray Diffraction (XRD), Scanning Electron Microscopy with field emission (SEM-FEG), N2 to 77K adsorption (BET), Transmission Electron Microscopy (TEM), infrared spectroscopy with Fourier transform (FTIR), thermogravimetric analysis (TG) and X-Ray Fluorescence (XRF). The XRD results confirmed the formation of HAp. The FTIR showed the bands corresponding to HAp, corroborating the results of DRX, in addition to the presence of carbonate bands. The results of EDXS confirmed the composition of the samples, being of P, O and Ca. The SEM characterization allowed the evaluation of the morphology changes for the different amounts of the sucrose used, forming spheroidal particles. The BET results showed an increase in specific surface area with the rise in the sucrose amount, from 36 to 93 m2/g, due to the rise in porosity and decrease in particle size, a result confirmed by TEM, with particle size changing from 50 nm to values around 10-20 nm. The resazurin reduction assay was performed for the 24h period to evaluate of cytotoxicity. The results obtained indicate that the samples were non-cytotoxic. The bioactivity assay was carried out in McCoy medium for 3 and 7 days, showing dissolution results of the samples compatible with characteristics of bioactive surfaces. The formation of the bone-like apatite layer was not observed for the analysis period. The synthesized materials showed properties similar to those obtained from synthetic calcium sources. Therefore, it presents promising potential in bone tissue engineering applications, besides contributing to the recycling of this bio-residue, the eggshell. The high specific surface area and small particle size results obtained indicate that sucrose can be a promising additive/template that is easy to obtain at low cost.

Laying hen welfare is gaining importance in the United States and several states have passed legislation for a welfareriendly housing environment, which has forced the egg industry to explore alternative housing environments. For this reason, our first objective was to determine the effect of housing environment and laying hen strain on production performance and egg quality. Results showed that production performance of the hens raised in the alternative housing system was similar to the conventional system. The second objective was to compare the eggshell and cloacal microbiology. Our results indicated that the microbial load observed was higher in the alternative system compared to the conventional system. The third objective was to determine the effects of housing environment and laying hen strain on tibia and femur bone properties. The results demonstrated that the alternative system provided better tibia and femur bone characteristics, but it varied among laying hen strains.

Seven experimental trials were conducted to develop and use novel techniques to examine the relationships between pre- and post-hatch physiological parameters in the progeny of young broiler breeders. Trials 1, 2 and 3 together examined the safer and effective use of transponders to determine embryonated egg air cell temperature (Temb) as an estimation of broiler embryo temperature during incubation, and to subsequently calculate eggshell water vapor conductance (GH2O), specific GH2O (gH2O) and GH2O constants (KH2O) in modern broiler strains. Trials 4 and 5 together examined the relationships of early, middle and late post-hatch growth quality parameters and tissue nutritional profiles of broilers with the corresponding Temb, GH2O, gH2O and KH2O. Furthermore, Trials 6 and 7 together examined the changes in nutritional profiles and histological structures of the broiler embryonic pipping muscle between 15 and 19 days of incubation. Based on the results from Trials 1, 2 and 3, it was concluded that transponders may be effectively implanted in the embryonated egg air cells with minimal invasion to the broiler embryo to efficiently determine Temb, and to subsequently calculate GH2O, gH2O and KH2O of modern broiler strain eggs during incubation. The results from Trials 4 and 5 also suggested that within physiological limits, an increased gH2O results in increased embryo metabolism, which subsequently increases growth and yolk sac absorption in the corresponding broiler chicks through 3 days post-hatch. Moreover, it was also observed that a higher gH2O was negatively associated with chick hydration status on day 28 post-hatch; although such effects were not observed through day 48 of the post-hatch grow out period. It was concluded that the effects of gH2O on post-hatch broiler physiology may be more pronounced during early and middle post-hatch periods and may subside as the chick reaches marketing age. Furthermore, the results from Trials 6 and 7 indicated that changes in the nutritional profiles of the pipping muscle occur in accordance with corresponding changes in liver metabolism, and that these together with associated morphological changes in the pipping muscle, as observed through histological techniques may be critical for the broiler embryo’s preparation for hatch.

A oviparidade é o modo reprodutivo ancestral dos répteis e a viviparidade surgiu diversas vezes independentemente nos Squamata. O cenário evolutivo mais aceito para a evolução da viviparidade em répteis Squamata propõe que ela é uma adaptação a baixas temperaturas e que resulta de aumentos graduais e progressivos na quantidade de desenvolvimento embrionário ocorrendo dentro do útero antes da postura dos ovos. Essa transição é frequentemente tida como irreversível. No presente trabalho as cobras-dágua da tribo Hydropsini foram utilizadas como modelo para testar de forma comparativa diversas predições derivadas desse cenário. Especificamente, foi avaliado se a evolução da viviparidade na tribo (1) seria um fenômeno irreversível, (2) se ela seria associada a modificações na morfologia uterina e na espessura da casca do ovo e (3) se ela seria correlacionada a regiões de climas frios. Diferentes métodos de análise não corroboram a suposta irreversibilidade da viviparidade e sugerem que a oviparidade em algumas espécies possa ser resultado de reversões. A aquisição da viviparidade em Hydropsini foi acompanhada de modificações importantes na morfologia uterina que incluem a diminuição das dimensões das glândulas uterinas que secretam o material que compõe a casca de ovo. A hipótese de que os aumentos na retenção uterina são acompanhados por diminuição na espessura da casca do ovo não foi corroborada. Por fim, o teste das predições da hipótese do clima frio não obteve suporte para baixas temperaturas como pressão seletiva favorecendo a origem da viviparidade nos Hydropsini. Hipóteses alternativas para explicar a origem da viviparidade na tribo são exploradas. / Oviparity is the ancestral reproductive mode of reptiles and viviparity evolved multiple times independently in Squamata. The most accepted evolutionary scenario for the evolution of viviparity in squamate reptiles suggests that it is an adaptation to low temperatures and that it arises from progressive and gradual increases in the amount of intrauterine embryonic development before egg-laying. In this study, the water snakes of the tribe Hydropsini were used as model system to test, within a comparative framework, several predictions derived from the gradualist scenario for the evolution of viviparity in Squamata. Specifically, it was evaluated if the evolution of viviparity in the tribe (1) is an irreversible phenomenon, (2) if it is associated with changes in uterine morphology and eggshell thickness and (3) if it is correlated to cold climates. The different analytical methods used did not corroborate the irreversibility of viviparity and suggest that oviparity may be revolved in some species. The evolutionary acquisition of viviparity in Hydropsini was accompanied by important uterine changes, including the reduction of the glands that secrete the shell components. The hypothesis that the increases in egg retention are accompanied by decreasing eggshell thickness was not corroborated. Finally, it was not found support for the test of the predictions derived from the cold climate hypothesis for the evolution of viviparity in Hydropsini. Alternative hypothesis explaining this reproductive mode in the group were explored.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-09-26T18:41:07Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Itallo Conrado PDF.pdf: 1385053 bytes, checksum: 2683757eec44901652cc4f8c98297b4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-09-26T19:01:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação Itallo Conrado PDF.pdf: 1385053 bytes, checksum: 2683757eec44901652cc4f8c98297b4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-26T19:01:56Z (GMT). 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The variables were subjected to analysis of variance and means were compared by quantitative and qualitative Tukey test (5%) and Kruskal-Wallis (5%) respectively, although the data for embriodiagnosis were subjected to Fisher's exact test (5%). In experiment 1 there was no interaction between treatments (P> 0.05), verifying, however, differences (P <0.05) for some of the results. The machine did not influence incubate the eggs hatch (P> 0.05). Arrays with older age (59w) had higher rates of infertility (6.84%) and lower hatching rates (88.26%). The early embryonic mortality (0-4 d) was higher (5.47%) in the eggs of breeders 59w. The hatch window was lower (P <0.05) for eggs incubated in SS. The weight of the eggs hatched followed the age pattern, influencing the weights of newborns. The chicks from SS machines had higher birth weight, weight and net weight of the shipment (P <0.05). Chicks from the SS had higher quality physical scores and length. For the results of experiment 2 there was no interaction between the treatments for conductance or shell thickness (P> 0.05). The breeders aged influenced conductance being greater in eggs from breeders of 59w (0.323 mg d1-1 torr), the region of the shell being affected conductance region of the thin edge was lower (0.024 mg d-1 torr -1). The shell thickness was similar peel breeders derived from 29w or 35w, being higher (P <0.05) the thickness found in egg shells breeders 59w. The largest thickness found in the region of the pointy tip (P <0.05). There was an interaction (P <0.05) for the porosity of the eggshell conductance and bark. Regardless of age, the tip region has a higher number of large pores. Regarding age, the wide end regions of the equator and exhibit significant increases (P <0.05) pores. Weak correlations were found between the average conductance of the shell eggs and incubation parameters. Weak correlations were also observed between the average thickness of the eggshell and incubation parameters. There was a strong positive correlation (P <0.05) between the average porosity of the shell eggs and some parameters of incubation. It was concluded that both machines offer conditions for embryonic development without affecting the hatching rate, however the physical quality of the chicks was better in newborns chicks from the single stage machine. Yet, the technique using fragments of eggshell can be used to measure the conductance of the shell. The porosity of the eggshell was better correlated with parameters of incubation. / Objetivou-se avaliar a idade da matriz pesada e o tipo de máquina de incubação sobre os parâmetros de eclosão, a janela de nascimento, o embriodiagnóstico e a qualidade física dos pintos neonatos. Avaliou-se também a técnica de mensuração da condutância da casca dos ovos utilizando fragmentos de casca e ainda a correlação dos valores de condutância com parâmetros de incubação. No experimento 1 foi utilizado delineamento em DBC, sendo utilizando DIC para o embriodiagnóstico. Em esquema fatorial 2x3 - máquinas de estágio múltiplo (EM) ou único (EU) e idades da matriz pesada (29s, 35s e 59s). No experimento 2 delineamento foi em DBC. Em esquema fatorial 3x3 – região da casca do ovo (ponta larga, equador, ponta fina) e idades da matriz pesada (29s, 35s e 59s). As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias quantitativas e qualitativas comparadas pelo teste de Tukey (5%) e Kruskal-Wallis (5%) respectivamente, ainda os dados de embriodiagnóstico foram submetidos ao exato de Fisher (5%). No experimento 1 não houve interação entre os tratamentos (P>0,05), verificando-se, entretanto, diferenças (P<0,05) para alguns dos resultados. A máquina de incubar não influenciou a eclosão dos ovos (P>0,05). Matrizes com idade mais avançada (59s) tiveram maiores taxas de infertilidade (6,84%) e menores taxas de eclosão (88,26%). A mortalidade embrionária inicial (0-4 d) foi maior (5,47%) nos ovos de matrizes de 59s. A janela de eclosão foi menor (P<0,05) para os ovos incubados em EU. O peso dos ovos incubados seguiu o padrão etário, influenciando os pesos dos neonatos. Os pintos oriundos de máquinas EU tiveram maiores peso ao nascimento, peso na expedição e peso líquido (P<0,05). Pintos oriundos do EU tiveram maior escore de qualidade física e comprimento. Para os resultados do experimento 2 não houve interação entre a os tratamentos para condutância ou espessura da casca (P>0,05). A idade das matrizes influenciou a condutância sendo maior nos ovos oriundos de matrizes de 59s (0,323 mg d-1 torr-1), a região da casca afetou a condutância sendo que a região da ponta fina foi menor (0,024 mg d-1 torr-1). A espessura da casca foi similar em cascas oriundas de matrizes de 29s ou 35s, sendo superiores (P<0,05) a espessura encontrada nas cascas dos ovos de matrizes de 59s. A maior espessura foi encontrada na região da ponta fina (P<0,05). Houve interação (P<0,05) para a porosidade da casca dos ovos e a condutância da casca. Independente da idade, a região da ponta larga apresenta maior número de poros. Em relação à idade, as regiões da ponta larga e do equador apresentam aumentos significativos (P<0,05) de poros. Foram encontradas correlações fracas entre a condutância média da casca dos ovos e os parâmetros de incubação. Também foram encontradas correlações fracas entre a espessura média da casca do ovo e os parâmetros de incubação. Houve correlação positiva forte (P<0,05) entre a porosidade média da casca dos ovos e alguns parâmetros de incubação. Foi possível concluir que ambas as máquinas oferecem condições para o desenvolvimento embrionário sem afetar a taxa de eclosão, entretanto a qualidade física dos pintos neonatos foi melhor nos pintainhos oriundos da máquina de estágio único. Ainda, a técnica que utiliza os fragmentos de casca dos ovos pode ser utilizada para mensurar a condutância da casca. A porosidade da casca dos ovos foi mais bem correlacionada com os parâmetros de incubação.

This major thesis expands the issue of the bachelor thesis "The issue of raising laying hens considering on introduction of enriched cages" and adds new knowledge relating to the topic feed rations and their influence on the final production. The theoretical part of the thesis analyses the basic theoretical concepts cohering with this topic, focused on creating a comprehensive overview of the structure and quality of the eggs, the basic ingredients in the feed rations, qualitative parameters of grapes as the modified additive provided by us and last but not least there is processed the recent overview of the current state of large-scale farmers in the Czech republic. The practical part of the thesis aims to test the effect of the proposed feed with an additive in the form of the crushed grape seeds, on the strength of the eggshell, by homogeneous samples of the breeds through from us proposed measuring instrument. Subsequently, a statistical evaluation of measured results is realized. In conclusion, the consideration is extended to the economic evaluation of costs and profits in case of the implementation of the suggested feed ration into practice in order to quantify the difference compared to the commonly used feed ration.

The objective was to evaluate the internal and external quality of hens eggs, classified in eggs with normal eggshell and eggs with vitreous eggshell, produced by hens in three different ages. Forty-five eggs of each eggshell type, normal and vitreous, were sampled at age of 30, 50 and 70 weeks. After the execution of physical and chemical analysis, it was observed that specific gravity, for both eggs with normal eggshell and eggs with vitreous eggshell, had a decrease with the advancing age of the hen. The weight of the egg, in both types of eggshell increased with the advancing age of the hen. Higher concentration of calcium was found on eggs with normal eggshell comparing to eggs with vitreous eggshell. The phosphorus percentage wasn t affected by the eggshell type. The mineral deposition of the eggshell was constant, the thickness of the eggshell in both eggshell types increased throughout the reproductive life of the hen and decreased when the hen got older. The albumen weight increased, showing its relation with the egg size. The percentage of albumen moisture with the advancing age of the hen didn t show any relation with the egg weight. Protein concentration and pH of the albumen decreased along with hen ages. The weight of egg yolk, the moisture percentage and the yolk pH decreased with the advancing age of the hen. Crude protein and ether extract increased with the advancing age of the hen. Eggs with vitreous eggshell showed eggshell with lower quality compared to those with normal eggshell, without, however, compromise the internal quality of albumen and yolk. / Objetivou-se avaliar a qualidade interna e externa de ovos de galinhas de postura classificados em ovos de casca normal e ovos de casca vítrea, produzidos por galinhas em três idades diferentes. Foram amostrados 45 ovos de cada tipo de casca, normal e vítrea, nas idades de 30, 50 e 70 semanas. Após a realização de análises físicas e bromatológicas observou-se que a gravidade específica, tanto para ovos de casca normal quanto para ovos de casca vítrea, diminuiu com o aumento da idade da ave. O peso do ovo em ambos os tipos de casca aumentou com o avanço da idade da galinha. Maior concentração de cálcio foi encontrada nos ovos de casca normal em relação aos de casca vítrea, o teor de fósforo não foi influenciado pelo tipo de casca. A deposição mineral da casca foi constante. A espessura da casca em ambos os tipos de casca aumentou ao longo da vida reprodutiva da galinha e diminuiu quando a ave se tornou mais velha. O percentual de albúmen aumentou, mostrando relação com o tamanho do ovo. A percentagem da umidade do albúmen com o avanço da idade da galinha não mostrou relação com o peso do ovo. A percentagem de proteína e o pH do albúmen diminuíram ao longo das idades. A percentagem da gema, a percentagem de umidade e o pH da gema diminuíram com o aumento da idade da galinha. Proteína bruta e extrato etéreo aumentaram com o aumento da idade da galinha. Os ovos de casca vítrea apresentaram casca de qualidade inferior aqueles de casca normal sem, contudo haver um comprometimento da qualidade interna do albúmen e da gema. / Mestre em Ciências Veterinárias

A oviparidade é o modo reprodutivo ancestral dos répteis e a viviparidade surgiu diversas vezes independentemente nos Squamata. O cenário evolutivo mais aceito para a evolução da viviparidade em répteis Squamata propõe que ela é uma adaptação a baixas temperaturas e que resulta de aumentos graduais e progressivos na quantidade de desenvolvimento embrionário ocorrendo dentro do útero antes da postura dos ovos. Essa transição é frequentemente tida como irreversível. No presente trabalho as cobras-dágua da tribo Hydropsini foram utilizadas como modelo para testar de forma comparativa diversas predições derivadas desse cenário. Especificamente, foi avaliado se a evolução da viviparidade na tribo (1) seria um fenômeno irreversível, (2) se ela seria associada a modificações na morfologia uterina e na espessura da casca do ovo e (3) se ela seria correlacionada a regiões de climas frios. Diferentes métodos de análise não corroboram a suposta irreversibilidade da viviparidade e sugerem que a oviparidade em algumas espécies possa ser resultado de reversões. A aquisição da viviparidade em Hydropsini foi acompanhada de modificações importantes na morfologia uterina que incluem a diminuição das dimensões das glândulas uterinas que secretam o material que compõe a casca de ovo. A hipótese de que os aumentos na retenção uterina são acompanhados por diminuição na espessura da casca do ovo não foi corroborada. Por fim, o teste das predições da hipótese do clima frio não obteve suporte para baixas temperaturas como pressão seletiva favorecendo a origem da viviparidade nos Hydropsini. Hipóteses alternativas para explicar a origem da viviparidade na tribo são exploradas. / Oviparity is the ancestral reproductive mode of reptiles and viviparity evolved multiple times independently in Squamata. The most accepted evolutionary scenario for the evolution of viviparity in squamate reptiles suggests that it is an adaptation to low temperatures and that it arises from progressive and gradual increases in the amount of intrauterine embryonic development before egg-laying. In this study, the water snakes of the tribe Hydropsini were used as model system to test, within a comparative framework, several predictions derived from the gradualist scenario for the evolution of viviparity in Squamata. Specifically, it was evaluated if the evolution of viviparity in the tribe (1) is an irreversible phenomenon, (2) if it is associated with changes in uterine morphology and eggshell thickness and (3) if it is correlated to cold climates. The different analytical methods used did not corroborate the irreversibility of viviparity and suggest that oviparity may be revolved in some species. The evolutionary acquisition of viviparity in Hydropsini was accompanied by important uterine changes, including the reduction of the glands that secrete the shell components. The hypothesis that the increases in egg retention are accompanied by decreasing eggshell thickness was not corroborated. Finally, it was not found support for the test of the predictions derived from the cold climate hypothesis for the evolution of viviparity in Hydropsini. Alternative hypothesis explaining this reproductive mode in the group were explored.