Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-16T11:59:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andreia Alves da Costa Silveira - 2015.pdf: 2826814 bytes, checksum: a357e14569e4c8efffc2043f9809d45e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-16T12:02:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andreia Alves da Costa Silveira - 2015.pdf: 2826814 bytes, checksum: a357e14569e4c8efffc2043f9809d45e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T12:02:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andreia Alves da Costa Silveira - 2015.pdf: 2826814 bytes, checksum: a357e14569e4c8efffc2043f9809d45e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conventional micropropagation systems often use culture media supplemented with sucrose and sealed bottles. This system is called heterotófico as exogenous carbohydrates are the only source of energy for the plant. Mixotróficos systems, although still adding sucrose in half, have the differential to allow gas exchange between the internal and external environment of the culture flask. This ventilation brings many benefits to plant growth in vitro. By the constant loss of the Savannah area, it is necessary to improve micropropagation protocols and germplasm conservation of the species within it. Cryopreservation is considered the best for long-term preservation method and the encapsulation-dehydration technique have been promising for tropical species. The objectives were to compare the heterotrophic system in vitro propagation of Eugenia dysenterica (Mart.) DC. mixotrófico with a system, and get a method of germplasm storage dysenterica E. vitro by cryopreservation. Identified Gems' positions in the stem (closer to the root or the apex) were inoculated in tubes with or without gas exchange in WPM medium supplemented with 0,00μΜ, 0,54μM, 2,69μM, and 5,37μM, NAA, and 0,00μM, 4,44μM, 11,10μM and 17,76μM BAP in all possible combinations. For rooting was used WPM medium supplemented with IBA to 0,00μM, 9,84μM, 19,68μM, and 29,52μM. The system of gas exchange was greater in the number of sheets in most analyzed variables. The type of gem had little influence on the variables. The best treatment in heterotrophic and mixotrófico systems was 29.52 mM of IBA, with 33.33% and 16.66% respectively rooting. Acclimatization was performed successfully in both systems. For cryopreservation was used apexes obtained from plants grown in vitro. The apices were initially suspended in MS medium supplemented with 3% solution of sodium alginate, 0.4 M glycerol and 4,44μM BAP and dispensed in MS medium solution (free of calcium) supplemented with 0.1 M calcium chloride, 0.4 M glycerol and 4,44μM BAP. The summits were held in three exposure levels of sucrose (0.25M, 0.5M, and 0.75M) combined will three levels of desiccation (0 h, 1 h, 2 h) before being frozen in liquid nitrogen. There was no regeneration in cryopreserved apexes. The best treatment for non-cryopreserved apices consisted of 0.25M sucrose and 1 h of drying. The null regeneration of cryopreserved apices which indicates that the stress is related to desiccation stress freezing. / Sistemas convencionais de micropropagação, geralmente usam meios de cultura suplementados com sacarose e frascos vedados. Este sistema é denominado heterotófico pois os carboidratos exógenos são a única fonte de energia para o vegetal. Sistemas mixotróficos, embora continuem adicionando sacarose ao meio, possuem o diferencial de permitir trocas gasosas entre o meio interno e externo do frasco de cultura. Esta ventilação traz inúmeras vantagens ao crescimento vegetal in vitro. Pela constante perda de área do Cerrado, torna-se necessário o aprimoramento de protocolos de micropropagação e também de conservação de germoplasma das espécies deste domínio. A criopreservação é o considerada o melhor método de conservação à longo prazo e a técnica de encapsulamento-desidratação têm sido promissora para espécies tropicais. Os objetivos do trabalho foram comparar o sistema heterotrófico de propagação in vitro de Eugenia dysenterica (Mart.) DC. com um sistema mixotrófico, e, obter um método de conservação de germoplasma de E. dysenterica in vitro por criopreservação. Gemas identificadas quanto à posição no caule (mais próximas à raíz ou ao ápice), foram inoculados em tubos de ensaio com ou sem troca gasosa em meio WPM suplementado com 0,00μΜ, 0,54μM, 2,69μM, e 5,37μM, de ANA, e, 0,00μM, 4,44μM, 11,10μM, e 17,76μM de BAP em todas as combinações possíveis. Para o enraizamento utilizou-se meio WPM suplementado com AIB à 0,00μM, 9,84μM, 19,68μM, e 29,52μM. O sistema de trocas gasosas foi superior quanto ao número de folhas na maioria das variáveis analizadas. O tipo de gema pouco influenciou nas variáveis. O melhor tratamento nos sistemas heterotrófico e mixotrófico foi de 29,52 μM de AIB, com 33,33% e 16,66% de enraizamento respectivamente. A aclimatização foi procedida com sucesso em ambos os sistemas. Para a criopreservação utilizou-se ápices caulinares obtidos de plantas desenvolvidas in vitro. Os ápices foram inicialmente suspendidos em solução de meio MS suplementado com 3% de alginato de sódio, 0,4M de glicerol, e 4,44μM de BAP e dispensados em solução de meio MS (livre de cálcio) suplementado com 0,1 M de cloreto de cálcio, 0,4M de glicerol, e 4,44μM de BAP. Os ápices foram mantidos sob três níveis de exposição de sacarose (0,25M, 0,5M, e 0,75M) combinados á três níveis de dessecação (0 h, 1 h e 2 h) antes de serem congelados em nitrogênio líquido. Não se observou regeneração em ápices criopreservados. O melhor tratamento para ápices não criopreservados constituiu de 0,25M de sacarose e 1 h de dessecação. A taxa de regeneração nula de ápices criopreservados o que indica que o estress de dessecação está relacionado ao stress de congelamento.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV15MA150.pdf: 821511 bytes, checksum: 342265f1c5a506595b83f7a903d958b0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / New plantings of vineyards bump in low productivity and poor quality of the grapes produced, due to the action of complex factors that are not well understood. Among these, the viruses are a major barrier to the development and highly profitable production in viticulture. By in vitro techniques it is possible to produce plants and multiply matrices of high quality vine plant. Cryotherapy, based cryopreservation methods, it is a promising tool for obtaining high frequency regenerating plants free of viruses in a short time. The paper proposes the development of a protocol for efficient recovery viruses vine plants through cryotherapy methods. The experiments were conducted in Biotechnology EPAGRI Laboratory, Experimental Station of Lages. The selection of genotypes was through the presence of different viral species (GLRaV-1, GLRaV-3, GFKV; GFLV and GVA) by serological ELISA test. The study is divided into two complementary chapters with information that follows the chronological order. The first aims to assess the establishment and multiplication in vitro and ex vitro acclimatization of grape genotypes through nodal segments cultivated in five formulations of culture media without added growth regulators. In Chapter I, in addition to selecting the best saline formulation that will be used in Chapter II for the grape varieties, is apreserntada an updated review of the topics covered at work, with information available to the present. In the second chapter, cryotherapy different methods investigated for vitis were applied, with the objective of defining a standard protocol for the eradication of viruses in potential genotypes. In vitro propagation of the rootstock IAC 571-6 and cultivars Poloskei Muskotaly and Bordô through nodal segments provide high rates of regeneration and rooting, suggesting no need to use growth regulators that promote rooting or specific phase for rooting. Percentage of high survival were obtained in the acclimatization of IAC 571-6 rootstock and cvs. Poloskei Muskotaly and Bordô. Considering all variables, the formulation that provided the best growth and development of root and shoot better and in vitro multiplication of IAC 571-6 vine rootstock and cv. Poloskei Muskotaly was Roubelakis composition and for the cv. Bordô were to Roubelakis and Zlenko formulations. The results of cryotherapy experiments to cultivars in question reaffirm the specificity of genotypic responses to cryogenic procedures. Rates between 6% and 10% were achieved for regenerating rootstock IAC 571-6 through encapsulation methodologies, dehydration and vitrification, respectively. Propagules regenerating after freezing in liquid nitrogen are anomalous and after small seedling growth from corrosion of tissues and lack of evolution cresmimento. Oxidative damage observed in the investigated protocols may be unfeasible cryopreserved tissues, even if part of the exposed tissues are viable in apparent liquid nitrogen is low or no regeneration of tissues. Understanding the degree of sensitivity of materials to vitrificantes solutions is the first step towards optimization of vitrification protocols in this study dehydration for 15 minutes in ½ PVS2 solution followed by 30 minutes PVS2 showed the best results for the rootstock IAC 571-6 / Novos plantios de vinhedos esbarram na baixa produtividade e na má qualidade das uvas produzidas, devido à ação de fatores complexos que ainda não estão bem esclarecidos. Dentre esses, as viroses constituem um importante obstáculo para o desenvolvimento e a produção altamente rentável na viticultura. Por meio de técnicas in vitro é possível produzir e multiplicar plantas matrizes de videira de alta qualidade fitossanitária. A crioterapia, baseada em métodos de criopreservação, torna-se uma ferramenta promissora para obtenção de alta frequência de plantas regenerantes livres de viroses, em curto espaço de tempo. O trabalho propõe o desenvolvimento de um protocolo eficaz para recuperação de plantas de videira virosadas através de métodos de crioterapia. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Biotecnologia da EPAGRI, Estação Experimental de Lages. A seleção de genótipos foi por meio da presença de diferentes espécies virais (GLRAV-1; GLRAV-3; GFKV; GFLV e GVA), através do teste sorológico ELISA. O estudo foi dividido em dois capítulos complementares, com informações que seguem a ordem cronológica. O capítulo I tem por objetivo avaliar o estabelecimento e multiplicação in vitro e a aclimatização ex vitro de genótipos de videira, por meio de segmentos nodais cultivados em cinco formulações de meios de cultura sem adição de reguladores de crescimento. Esse capítulo, além da seleção da melhor formulação salina que será utilizada no capítulo II para as cultivares de videira, é apresentada uma revisão atualizada dos temas abordados no trabalho, com informações disponíveis até o presente. No segundo capítulo, diferentes métodos de crioterapia investigados para Vitis foram aplicados, com o objetivo de definir um protocolo padrão para a erradicação de viroses em genótipos potenciais. A propagação in vitro do porta-enxerto IAC 571-6 e das cultivares Poloskei Muskotaly e Bordô por meio de segmentos nodais proporcionam elevadas taxas de regeneração e enraizamento, sugerindo que não há necessidade de utilização de reguladores de crescimento que promovam o enraizamento ou de fase específica para o enraizamento. Elevados percentuais de sobrevivências foram obtidas na aclimatização do porta-enxerto IAC 571-6 e das cvs. Poloskei Muskotaly e Bordô. Considerando todas as variáveis analisadas, a formulação que proporcionou o melhor crescimento e desenvolvimento da parte aérea e radicular e melhor multiplicação in vitro do porta-enxerto de videira IAC 571-6 e da cv. copa Poloskei Muskotaly foi a composição Roubelakis e, para a cv. Bordô foram às formulações Roubelakis e Zlenko. Os resultados dos experimentos de crioterapia para as cultivares em questão reafirmam a especificidade das respostas dos genótipos aos procedimentos criogênicos. Taxas entre 6 % a 10 % de regenerantes foram atingidas para o porta-enxerto IAC 571-6 por meio das metodologias de encapsulamento-desidratação e vitrificação, respectivamente. Propágulos regenerantes após o congelamento em nitrogênio líquido são anômalos e após pequeno crescimento da plântula apresentam oxidação dos tecidos e não possuem evolução de crescimento. Os danos oxidativos observados nos protocolos investigados podem ter inviabilizado os tecidos criopreservados, mesmo que parte dos tecidos expostos em nitrogênio líquido aparente viabilidade, ocorre baixa ou nula regeneração de tecidos. A compreensão do grau de sensibilidade de materiais para soluções vitrificantes é o primeiro passo para otimização dos protocolos de vitrificação, no presente estudo a desidratação por 15 minutos em solução ½ PVS2 seguido de 30 minutos em PVS2 apresentou os melhores resultados para o porta-enxerto IAC 571-6