A terapêutica de dentes avulsionados e reimplantados tardiamente consiste no tratamento da superfície radicular e na terapia intracanal, procedimentos que têm por objetivos limitar o processo de reabsorção radicular e promover o reparo. Mesmo quando instituídos, muitos casos de insucessos ainda ocorrem. O uso de substâncias que inibem a reabsorção pode ser uma alternativa para a resolução destes casos. Frente a isso, este trabalho tem como objetivo testar soluções intracanais à base de substâncias anti-reabsortivas em dentes reimplantados tardiamente. Para isso, foram utilizados 60 incisivos centrais superiores direitos de ratos, que foram avulsionados e mantidos a seco por trinta minutos. Todos os dentes tiveram os canais radiculares instrumentados e a superfície radicular tratada com hipoclorito de sódio a 1%, seguido de fluoreto de sódio a 2%. Após isso, os dentes foram divididos em quatro grupos de acordo com a medicação intracanal: no grupo I, solução de alendronato; no grupo II, de acetazolamida; no grupo III, de nitrato de gálio; e no grupo IV, foi usado pasta de hidróxido de cálcio. Todos os dentes foram, então, reimplantados em seus respectivos alvéolos. Passados 15, 30 e 60 dias do reimplante, os animais foram mortos e as peças obtidas, processadas em laboratório para análise microscópica e morfométrica. Os resultados mostraram que, tanto as soluções de alendronato e nitrato de gálio e como a pasta de hidróxido de cálcio, limitaram a reabsorção dentária, mas não impediram o aparecimento da mesma. Já com o uso da solução de acetazolamida, a reabsorção radicular esteve ausente aos 60 dias, comprovando a sua eficácia na inibição da reabsorção radicular. / The therapy of avulsed teeth submitted to late reimplantation comprises root surface treatment and root canal treatment, with a view to limit the process of root resorption and promote repair of the avulsed tooth. Even when these procedures are followed, failures still occur. The utilization of substances to inhibit the resorption may be an alternative to solve these cases. Therefore, this study aimed at testing root canal dressings containing anti-resorptive substances in teeth submitted to late reimplantation. For that purpose, 60 right maxillary central incisors of rats were used, which were avulsed and kept in dry environment for thirty minutes. All teeth had their root canals instrumented, and the root surface was treated with 1% sodium hypochlorite followed by 2% sodium fluoride. Thereafter, the teeth were divided into four groups according to the root canal dressing: group I, alendronate solution; group II, acetazolamide solution; group III, gallium nitrate solution; and group IV, calcium hydroxide paste. All teeth were then reimplanted in their respective sockets. At 15, 30 and 60 days after reimplantation, the animals were killed and the specimens achieved were processed in laboratory for microscopic and morphometric analysis. The results demonstrated that the alendronate and gallium nitrate solutions and the calcium hydroxide paste limited the root resorption, yet did not impair its occurrence. However, with utilization of the acetazolamide solution, the root resorption was absent at 60 days, demonstrating its efficacy for inhibition of root resorption.

A terapêutica de dentes avulsionados e reimplantados tardiamente consiste no tratamento da superfície radicular e na terapia intracanal, procedimentos que têm por objetivos limitar o processo de reabsorção radicular e promover o reparo. Mesmo quando instituídos, muitos casos de insucessos ainda ocorrem. O uso de substâncias que inibem a reabsorção pode ser uma alternativa para a resolução destes casos. Frente a isso, este trabalho tem como objetivo testar soluções intracanais à base de substâncias anti-reabsortivas em dentes reimplantados tardiamente. Para isso, foram utilizados 60 incisivos centrais superiores direitos de ratos, que foram avulsionados e mantidos a seco por trinta minutos. Todos os dentes tiveram os canais radiculares instrumentados e a superfície radicular tratada com hipoclorito de sódio a 1%, seguido de fluoreto de sódio a 2%. Após isso, os dentes foram divididos em quatro grupos de acordo com a medicação intracanal: no grupo I, solução de alendronato; no grupo II, de acetazolamida; no grupo III, de nitrato de gálio; e no grupo IV, foi usado pasta de hidróxido de cálcio. Todos os dentes foram, então, reimplantados em seus respectivos alvéolos. Passados 15, 30 e 60 dias do reimplante, os animais foram mortos e as peças obtidas, processadas em laboratório para análise microscópica e morfométrica. Os resultados mostraram que, tanto as soluções de alendronato e nitrato de gálio e como a pasta de hidróxido de cálcio, limitaram a reabsorção dentária, mas não impediram o aparecimento da mesma. Já com o uso da solução de acetazolamida, a reabsorção radicular esteve ausente aos 60 dias, comprovando a sua eficácia na inibição da reabsorção radicular. / The therapy of avulsed teeth submitted to late reimplantation comprises root surface treatment and root canal treatment, with a view to limit the process of root resorption and promote repair of the avulsed tooth. Even when these procedures are followed, failures still occur. The utilization of substances to inhibit the resorption may be an alternative to solve these cases. Therefore, this study aimed at testing root canal dressings containing anti-resorptive substances in teeth submitted to late reimplantation. For that purpose, 60 right maxillary central incisors of rats were used, which were avulsed and kept in dry environment for thirty minutes. All teeth had their root canals instrumented, and the root surface was treated with 1% sodium hypochlorite followed by 2% sodium fluoride. Thereafter, the teeth were divided into four groups according to the root canal dressing: group I, alendronate solution; group II, acetazolamide solution; group III, gallium nitrate solution; and group IV, calcium hydroxide paste. All teeth were then reimplanted in their respective sockets. At 15, 30 and 60 days after reimplantation, the animals were killed and the specimens achieved were processed in laboratory for microscopic and morphometric analysis. The results demonstrated that the alendronate and gallium nitrate solutions and the calcium hydroxide paste limited the root resorption, yet did not impair its occurrence. However, with utilization of the acetazolamide solution, the root resorption was absent at 60 days, demonstrating its efficacy for inhibition of root resorption.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-03-14T18:38:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE DRA SilvLeão BibCCS.pdf: 1116113 bytes, checksum: 09fe5f507d442590886b6093583d8889 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T18:38:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE DRA SilvLeão BibCCS.pdf: 1116113 bytes, checksum: 09fe5f507d442590886b6093583d8889 (MD5) Previous issue date: 2015-08-27 / Facepe / Introdução: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do metotrexato em altas doses na evolução de lesões periapicais induzidas em molares de ratos e na região do periápice. Métodos: 35 ratos Wistar machos foram utilizados. As polpas dos primeiros molares inferiores foram expostas utilizando broca esférica ½ acoplada a motor de alta rotação. Após 30 dias, 7 grupos foram formados contendo 5 animais em cada um: G1- sem indução de lesão periapical e com administração intraperitoneal semanal (AIS) de solução salina (NaCl 0,9%) durante 2 semanas e sacrifício 2 dias após última AIS; os grupos G2, G3 e G4 sofreram indução de LP e AIS de solução salina por 2 semanas sendo sacrificados após 2, 4 e 7 dias, respectivamente. Os grupos G5, G6 e G7 sofreram indução de lesão periapical e AIS de MTX (12mg/kg/sem) por 2 semanas, sendo sacrificados após 2, 4 e 7 dias respectivamente. Para mensurar o tamanho das LP, foram realizadas tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC). Também foi realizada análise histológica para verificar intensidade do infiltrado inflamatório e presença de reabsorção óssea. As análises estatísticas utilizadas foram o teste ANOVA e o Kruskal-Wallis. Resultados: O tamanho das lesões periapicais nos grupos controle e do metotrexato não mostrou diferença estatisticamente significativa. As lesões periapicais apresentaram reação inflamatória crônica variando de leve a moderada, sem diferença significativa entre os grupos (p=0,2). Conclusão: Na presença das LP persistentes associadas ao canal radicular, o tratamento com MTX em altas doses não influenciou na progressão das lesões periapicais crônicas. / Introduction: The aim of this study was to determine the effect of high dose methotrexate in PL induced in rat molars and periapical region. Methods: It was used 35 male Wistar rats. To induce periapical lesions, the pulps of first mandibular molars were exposed using a ½ round bur on a high-speed handpiece. After 30 days, 7 groups were formed with 5 animals in each one. G1: no induction of periapical lesions and with weekly intraperitoneal administration (WIPA) of saline solution (NaCl 0,9%) and sacrifice after 2 days. The groups G2, G3 e G4 suffered periapical induction and WIPA of saline solution for 2 weeks being sacrified 2, 4 and 7 days respectively. The groups G5, G6 e G7 suffered periapical induction and WIPA of MTX (12mg/kg/week) for 2 weeks, being sacrified 2, 4 and 7 days respectively. For measure the size of the PL, CBCT were performed. A histomorphological analysis was also performed to determine the intensity of the inflammatory infiltrate and the presence of bone resorption. Statistical analyzes used were ANOVA and Kruskall-Wallis test. Results: The size of periapical lesions in control and methotrexate groups showed no statistically significant difference(p=0,2).PL were composed by chronic inflammatory reaction ranging from mild to moderate. Conclusions: According to the data obtained, in the presence of persistent PL associated with the root canal, treatment with high doses of MTX did not influence the progression of these lesions.

No sentido de colaborar com o estudo da redução de microrganismos em Endodontia, foi realizada uma análise crítica dos modelos metodológicos in vivo sobre as técnicas moleculares utilizadas na avaliação da microbiota endodôntica e na capacidade de medir a antissepsia que o tratamento endodôntico proporciona. Desta maneira, os trabalhos foram agrupados de acordo com a proposta do presente estudo. Na análise critica e comparativa, pode-se observar uma grande variedade de métodos moleculares aplicados nos estudos, sendo que o mais utilizado nos ensaios para avaliação da microbiota foi o PCR. Havia estudos que utilizavam uma combinação de vários métodos onde foi possível identificar microrganismos ainda não conhecidos. Nos ensaios que utilizam iniciadores universais e que se valem da identificação de microrganismos através do DNA, foram listados de maneira a poder observar que o iniciador universal formado pela seguinte cadeia de oligonucleotídeos: F: 5- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3/R: 5-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3 foi o mais descrito pela literatura. / In order to collaborate with the study of disinfection in Endodontics, was performed a study of critical methodological models in vivo on the molecular techniques used in the evaluation of endodontic microbiota and the ability to measure the disinfection capacity of endodontic treatment. Thus, the studies were grouped according to the purpose of this study. Under in critical and comparative analysis its can be seen a wide variety of molecular techniques used in the studies, and as used in the tests was to evaluate the microbial PCR studies using a combination of various methods which could be identified microorganisms has not known. In assays using universal primers which rely on the identification of microorganisms using the DNA, were listed as to be able to observe that the universal primer chain formed by the following primers: F: 5\'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 \'/ R: 5\'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3\' was as described in the literature.

O presente estudo avaliou ex vivo a permeabilidade das paredes dentinárias de canais radiculares, após a remoção de três diferentes associações de materiais obturadores. Para tanto, 36 pré-molares uni-radiculares extraídos, com comprimento e aspectos anatômicos semelhantes, tiveram a cirurgia de acesso à câmara pulpar realizada, preparo do canal radicular até instrumentos ProTaper F4 e obturação com uma das seguintes associações de materiais: G1 - guta-percha e cimento Fill Canal (n=10); G2 - guta-percha e cimento AH-Plus (n=10); G3 - Resilon e cimento Epiphany (n=10). Seis espécimes tiveram seus canais preparados mas não foram obturados para fins de controle positivo. Após 24 horas em estufa, os canais foram desobturados, com instrumentos rotatórios NRT para retratamento, limas do tipo K #40 e solvente de óleo de casca de laranja. Terminada a desobturação, os espécimes foram impermeabilizados e submetidos ao teste de impregnação de azul de metileno 1% por 24 horas. Os dentes foram então lavados em água corrente por 24 horas, tiveram sua coroas amputadas e as raízes seccionadas horizontalmente em fatias de 1mm. Uma secção de cada terço radicular foi selecionada e fotografada, e o percentual de dentina corada em cada secção foi calculada por meio de um software de análise gráfica. Os resultados demonstraram diferença significativa entre os grupos experimentais e o grupo controle (p<0,05), contudo, não houve diferença estatística entre os grupos experimentais (p>0,05). Concluiu-se assim que o tipo de material obturador utilizado não influencia na permeabilidade dentinária após sua remoção. / The purpose of this study was to evaluate ex vivo the permeability of root canal dentin walls after the removal of three different combinations of filling materials. To this end, 36 extracted human single-rooted premolars, with similar length and anatomy, had surgery access to the pulp chamber, root canal preparation was performed to F4 ProTaper instruments and filling with one of the following associations of filling materials: G1 - gutta-percha and Fill Canal cement (n = 10); G2 - gutta-percha and AH Plus cement (n = 10); G3 - Resilon cones and Epiphany cement (n = 10). Six specimens were prepared but its canals were not filled for positive control. After 24 hours at 37 ° C, the canals were desobturated, making use of NRT rotary instruments , # 40 K-type files and orange oil based solvent. After the removal of the filling material, specimens were sealed and tested for impregnation of dye in 1% methylene blue for 24 hours in the absence of vacuum. The teeth were then washed in running water for 24 hours, had their crowns amputated and the roots sectioned horizontally into 1 mm slices. For each root third , one section was selected and photographed, the images were stored on computer and the percentage of stained dentin in each section was calculated using a graphical analysis software. The results showed a statistically significant difference between experimental groups and control group (p <0.05). However, there was no statistical difference between experimental groups (p> 0.05). Thus, it was concluded that the type of filling material does not influence dentin permeability after its removal.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Enterococcus faecalis (E. faecalis), conhecidamente patógeno oportunista, tem sido frequentemente associado a infecções sistêmicas graves. É também encontrado na cavidade oral, com destaque em infecção endodôntica refratária. O objetivo deste estudo foi avaliar características moleculares de E. faecalis isolados de infecção endodôntica primária no Brasil e comparar com isolados orais e não orais de pacientes do Reino Unido e do Japão, assim como E. faecalis resistentes à vancomicina. O presente estudo também investigou o relacionamento entre E. faecalis de diferentes origens (oral e não oral) e de diferentes áreas geográficas para obter uma melhor compreensão do envolvimento dos diferentes reservatórios no surgimento e propagação de clones virulentos, aqueles que possuem genes que conferem infectividade e virulência, assim como resistência aos antibióticos. Para tal, foram estudados E. faecalis isolados em infecções endodônticas no Brasil (n = 20) e orais no Reino Unido (n = 10), e em infecções não orais no Japão (n = 9). Além disso, 20 E. faecalis isolados ambientais do Hospital Universitário de Gales (Cardiff, Reino Unido), classificados como Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) também foram examinados. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos isolados do Brasil foi obtida pelo método de diluição em agar de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Reação em cadeia da polimerase (inglês - PCR) foi a técnica empregada para detectar os genes de virulência e aqueles associados à resistência aos antibióticos, enquanto Reação de Amplificação Aleatória de DNA Polimórfico (inglês - RAPD-PCR) foi escolhida para a tipagem molecular. Dentre os genes de virulência examinados, o gene que codifica a gelatinase gelE foi o mais prevalente entre os isolados (77-100%). Entre isolados orais, foram detectados os genes agg de substâncias de agregação, esp de proteína de evasão imune, cylB de citolisina, genes de resistência à tetraciclina tetM e tetL e à eritromicina ermB com diferentes prevalências. Os isolados clínicos hospitalares do Japão apresentaram perfil genético similar aos isolados orais, mas com maior prevalência de ermB e cylB. Todas as amostras de VRE foram positivas para os genes gelE, esp, agg, vanA, ermB e tetM, 95% foram positivos para cylB e 17% positivo para tetL. Todas as amostras foram negativas para ermA, asa373, vanB, vanC1 e vanC2/3. RAPD-PCR revelou agrupamento de VRE em comparação com outros isolados. Neste estudo, os isolados de E. faecalis de infecções orais apresentaram genes de resistência à tetraciclina, um antimicrobiano frequentemente usado no tratamento local de infecções dentárias, abrindo um debate muito importante sobre o papel e a eficácia desta droga para infecções orais. Claramente, são necessários mais estudos nesta área principalmente em relação à expressão de fatores de virulência entre isolados endodônticos para melhor nortear as estratégias de tratamento. As pressões externas no microambiente dos canais radiculares podem ser responsáveis pela seleção de espécies mais resistentes e virulentas. Por fim, embora isolados orais apresentem genes de virulência fundamentais para a patogenicidade, estes foram detectados em menor incidência em comparação com os isolados não-orais e VRE. / Enterococcus faecalis is an opportunistic pathogen known to cause serious systemic infection. It is also encountered in the oral cavity and has been implicated in persistent root canal infection. The aim of this study was to evaluate a range of molecular characteristics of E. faecalis isolated from primary endondontic infections in Brazil and compare to isolates from oral and non-oral infections in patients from UK and Japan, as well as isolates of vancomycin resistant E. faecalis, VRE, from a hospital environment. The present study was undertaken to explore the relatedness of E. faecalis from different origins, oral and non oral, and from different geographic areas to gain a better understanding of the involvement of the different reservoirs in the emergence and spread of virulent clones, those that acquired a number of genes conferring infectivity and virulence and in addition antibiotic resistance. To do this, E. faecalis from oral infections in Brazilian (n=20) and UK patients (n=10), and non-oral infection in japanese patients (n=9) were studied. In addition, 20 environmental VRE isolates from the University Hospital of Wales (Cardiff, UK) were also examined. For braziliam isolates, antimicrobial susceptibility was ascertained by agar dilution, using the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). For all isolates, PCR with validated primers was used to detect genes associated with antibiotic resistance and virulence, whilst RAPD-PCR was used to fingerprint isolates. Of the virulence genes examined, gelatinase gene gelE was most prevalent amongst isolates (77-100%). In the case of oral isolates, the genes of aggregation substances agg, immune evasion protein esp, cytolysin cylB, tetracycline resistance tetM and tetL and erythromycin resistance ermB were detected with varying prevalence. Japanese hospital isolates had a similar genetic profile to oral isolates but with higher prevalence of ermB and cylB. All VRE strains were positive for gelE, esp, agg, vanA, ermB and tetM, 95% were positive for cylB and 17% positive for tetL. All isolates were negative for ermA, asa373 vanB, vanC1 and vanC2/3. RAPD-PCR revealed clustering of VRE compared with other isolates. In this study, isolates of E. faecalis from oral infections showed antibiotic resistance genes for tetracycline, an agent used in the local treatment of dental infection. This opens up a much-needed debate on the role and efficacy of this antibiotic for oral infections. Clearly, more research in this area is required particularly in relation to the possession and expression of virulence factors in the root canal environment, to better inform our management strategies. Environmental pressures in root canals may be responsible for the selection of more resistant species and the possession of virulence determinants. This knowledge is important in guiding procedures for controlling the increasing problem of antibiotic resistance amongst clinically relevant bacteria. Furthermore, whilst oral isolates had genes that could contribute to pathogenicity, these were detected at lower incidence compared with non-oral and VRE isolates.

O presente estudo teve por objetivo avaliar comparativamente o emprego de tomografias e cortes transversais na quantificação de material obturador endodôntico remanescente à desobturação e repreparo dos canais radiculares. Para tal, 32 dentes preparados, obturados e após periodo necessário para o ennvelhecimento do cimento obturador foram desobturados e repreparados. Os espécimes tiveram o conteúdo de material obturador remanescente avaliado por diferentes métodos: aferição em tomógrafo computadorizado de múltiplos detectores e aferição em software Leica Qwin. Inicialmente foram medidos os volumes de material obturador remanescente no tomógrafo computadorizado com os espécimes ainda íntegros. Em seqüência, realizou-se nos mesmos cortes transversais com espessura de 1mm permitindo assim aferição: do volume em tomógrafo computadorizado após o corte; das áreas de material remanescente em cada corte com auxílio do software Leica Qwin. Para que fosse possível a comparação dos métodos, os valores de área foram utilizados para cálculo do volume de material remanescente em cada espécime através da fórmula do volume do cone truncado. Os resultados obtidos foram submetidos a análise pelo teste t de Student para dados vinculados, o qual identificou diferença estatisticamente significante em nível de 5% na quantificação de material obturador remanescente quando da comparação dos volumes obtidos com a análise do software Leica Qwin e aplicação da fórmula do volume do cone 11 truncado aos volumes obtidos pelas aferições tomográficas, sendo que a análise dos cortes pelo software Leica Qwin permitiu maior quantificação de material, mostrandose método adequado para análise. Em relação ao método tomográfico não houve diferença estatística significante entre a avaliação do remanescente de material obturador nos cortes ou nos espécimes íntegros. / The aim of the present study was to evaluate the effectiveness of computed tomography and cross section in quantifying the remaining filling material during retreatment. For that, 32 teeth were prepared, filled and after the period necessary to the sealer set, the specimens had their filling material removed and were reprepared. The amount of filling material were evaluate for different methods: computed tomography and Leica Qwin software. First, the volumes of filling material remaining were measured through the computed tomography with the specimens still entire. After, they were cross sectioned with a thickness of 1mm allowing measure of: the volume through computed tomography and the areas of remaining material in which section through the Leica Qwin software. To allow a comparative analysis among methods, the area values were used to calculate the filling material remaining volume using the truncated cone formula. The results were submitted to the t Student test for linked data which identify a significant difference to the level of 5% in the quantification of remaining material when the comparison of the volumes obtained after Leica Qwin analysis and application of truncated cone formula in relation to the results obtained from computed tomography, being the first method that allow the bigger quantification, therefore, most efficient. In relation the tomographic method there was no significant difference between the measured made in the intact specimen or after they were cross-sectioned.

Submitted by MARIANE MAFFEI AZUMA null (mariane_azuma@hotmail.com) on 2017-10-17T00:34:59Z No. of bitstreams: 1 16-10-17 TESE-Mariane.pdf: 56309410 bytes, checksum: 029a387b6b6982b449c514285f1d5efc (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-10-18T19:09:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 azuma_mm_dr_araca.pdf: 56309410 bytes, checksum: 029a387b6b6982b449c514285f1d5efc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T19:09:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 azuma_mm_dr_araca.pdf: 56309410 bytes, checksum: 029a387b6b6982b449c514285f1d5efc (MD5) Previous issue date: 2017-08-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da suplementação alimentar com os ácidos graxos ômega-3 no processo inflamatório local e sistêmico de ratos com periodontite apical (PA). Foram utilizados 40 ratos da linhagem Wistar distribuídos em quatro grupos (n= 10): ratos controle (C); ratos suplementados com ômega-3 (C-O); ratos com PA induzida (PA); ratos com PA induzida suplementados com ômega-3 (PA-O). Para a indução da PA, as polpas dentárias foram expostas ao meio bucal durante 30 dias. O ômega-3 foi administrado pelo método gavage, uma vez ao dia, 15 dias antes da exposição pulpar e 30 dias depois da exposição pulpar. Após este período, o sangue foi coletado, por meio de punção cardíaca, para a realização do hemograma e quantificação sérica das citocinas pró-inflamatórias fator de necrose tumoral alfa (TNF-), Interleucina 6 (IL-6) e Interleucina 17 (IL-17), pelo método ELISA. Após a coleta sanguínea, os ratos foram eutanasiados e as maxilas e mandíbulas foram coletadas e submetidas a processamento para análise histológica, em hematoxilina e eosina, bem como análise imunoistoquímica para os marcadores fosfatase ácida resistente ao tartrato (TRAP), osteocalcina (OCN), TNF-, IL-6, IL-17, Interleucina 1 (IL-1) e Interleucina 10 (IL-10). Os resultados foram analisados por testes estatísticos específicos para cada caso (p<0,05). O grupo PA apresentou infiltrado inflamatório mais intenso, bem como maior área de reabsorção óssea na região periapical quando comparado ao grupo PA-O (p<0,05). Além disso, observou-se maior número de osteoclastos e citocinas pró-inflamatórias, representadas por TNF-, IL-1, IL-6 e IL-17, bem como menor número de osteoblastos e da citocina anti-inflamatória IL-10 no grupo PA quando comparado ao grupo PA-O (p<0,05). Em relação às alterações sistêmicas, a presença de quatro focos de PA aumentou os níveis séricos de leucócitos, linfócitos, monócitos, TNF- e IL-6 (p<0,05) e a suplementação alimentar com os ácidos graxos ômega-3 diminuiu os níveis séricos de leucócitos e linfócitos de ratos com PA (p<0,05). Conclui-se que a suplementação alimentar com os ácidos graxos ômega-3 reduz o processo inflamatório e a reabsorção óssea da região periapical, bem como as células inflamatórias do sangue, de ratos com infecção endodôntica. / The aim of this study was to evaluate the effects of the dietary supplement omega 3 polyunsaturated fatty acids on the local and systemic inflammatory response of rats with apical periodontitis (AP). Forty male rats were divided into groups: control untreated rats (C), control rats treated with omega 3 alone (C-O), rats with pulp exposure-induced apical periodontitis (AP), and rats with pulp exposure-induced AP treated with omega 3 (AP-O). The pulps were exposed to the oral environment during 30 days for the development of AP. Omega 3 was administered by gavage method, once a day, for 15 days before pulp exposure and, subsequently, 30 days after pulp exposure. After 30 days, blood samples were collected by cardiac puncture and subjected to blood count and the serum levels of the proinflammatory cytokines tumor necrosis factor alpha (TNF-), Interleukin 6 (IL-6), and Interleukin 17 (IL-17) were measured using ELISA method. Subsequently, rats were killed and maxillae and jaws were collected and subjected to histologic analysis, using hematoxylin and eosin staining. Immunohistochemistry was performed in order to detect TRAP-positive osteoclast cells (TRAP), Osteocalcin-positive osteoblasts cells (OCN), TNF-, IL-6, IL-17, Interleukin 1 (IL-1) and Interleukin 10 (IL-10). Results from the different analysis were subjected to statistical analysis, using specific statistical methods according to each analysis (p<0.05). AP group showed more severe inflammatory infiltrate as well as higher area of bone resorption in the periapical region compared to AP-O group (p<0.05). Moreover, the number of TRAP-positive cells as well as proinflammatory cytokines, such as TNF-, IL-1, IL-6, and IL-17 were higher in AP group compared to AP-O group (p <0.05). In addition, the number of OCN-positive cells and the anti-inflammatory cytokine IL-10 decreased in AP group compared to AP-O group (p<0.05). Regarding systemic alterations, the presence of four AP focus increased the serum levels of leukocytes, lymphocytes, monocytes, TNF-, and IL-6 (p<0.05). The dietary supplement with omega 3 decreased the serum levels of leukocytes and lymphocytes of rats with AP (p<0.05). It may be concluded that the dietary supplement with omega 3 fatty acids decrease the inflammatory process and the pathological bone resorption in the periapical region, as well as serum inflammatory cells of rats with apical periodontitis. / FAPESP: 2013/26390-0 / FAPESP: 2015/07107-0

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Enterococcus faecalis (E. faecalis), conhecidamente patógeno oportunista, tem sido frequentemente associado a infecções sistêmicas graves. É também encontrado na cavidade oral, com destaque em infecção endodôntica refratária. O objetivo deste estudo foi avaliar características moleculares de E. faecalis isolados de infecção endodôntica primária no Brasil e comparar com isolados orais e não orais de pacientes do Reino Unido e do Japão, assim como E. faecalis resistentes à vancomicina. O presente estudo também investigou o relacionamento entre E. faecalis de diferentes origens (oral e não oral) e de diferentes áreas geográficas para obter uma melhor compreensão do envolvimento dos diferentes reservatórios no surgimento e propagação de clones virulentos, aqueles que possuem genes que conferem infectividade e virulência, assim como resistência aos antibióticos. Para tal, foram estudados E. faecalis isolados em infecções endodônticas no Brasil (n = 20) e orais no Reino Unido (n = 10), e em infecções não orais no Japão (n = 9). Além disso, 20 E. faecalis isolados ambientais do Hospital Universitário de Gales (Cardiff, Reino Unido), classificados como Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) também foram examinados. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos isolados do Brasil foi obtida pelo método de diluição em agar de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Reação em cadeia da polimerase (inglês - PCR) foi a técnica empregada para detectar os genes de virulência e aqueles associados à resistência aos antibióticos, enquanto Reação de Amplificação Aleatória de DNA Polimórfico (inglês - RAPD-PCR) foi escolhida para a tipagem molecular. Dentre os genes de virulência examinados, o gene que codifica a gelatinase gelE foi o mais prevalente entre os isolados (77-100%). Entre isolados orais, foram detectados os genes agg de substâncias de agregação, esp de proteína de evasão imune, cylB de citolisina, genes de resistência à tetraciclina tetM e tetL e à eritromicina ermB com diferentes prevalências. Os isolados clínicos hospitalares do Japão apresentaram perfil genético similar aos isolados orais, mas com maior prevalência de ermB e cylB. Todas as amostras de VRE foram positivas para os genes gelE, esp, agg, vanA, ermB e tetM, 95% foram positivos para cylB e 17% positivo para tetL. Todas as amostras foram negativas para ermA, asa373, vanB, vanC1 e vanC2/3. RAPD-PCR revelou agrupamento de VRE em comparação com outros isolados. Neste estudo, os isolados de E. faecalis de infecções orais apresentaram genes de resistência à tetraciclina, um antimicrobiano frequentemente usado no tratamento local de infecções dentárias, abrindo um debate muito importante sobre o papel e a eficácia desta droga para infecções orais. Claramente, são necessários mais estudos nesta área principalmente em relação à expressão de fatores de virulência entre isolados endodônticos para melhor nortear as estratégias de tratamento. As pressões externas no microambiente dos canais radiculares podem ser responsáveis pela seleção de espécies mais resistentes e virulentas. Por fim, embora isolados orais apresentem genes de virulência fundamentais para a patogenicidade, estes foram detectados em menor incidência em comparação com os isolados não-orais e VRE. / Enterococcus faecalis is an opportunistic pathogen known to cause serious systemic infection. It is also encountered in the oral cavity and has been implicated in persistent root canal infection. The aim of this study was to evaluate a range of molecular characteristics of E. faecalis isolated from primary endondontic infections in Brazil and compare to isolates from oral and non-oral infections in patients from UK and Japan, as well as isolates of vancomycin resistant E. faecalis, VRE, from a hospital environment. The present study was undertaken to explore the relatedness of E. faecalis from different origins, oral and non oral, and from different geographic areas to gain a better understanding of the involvement of the different reservoirs in the emergence and spread of virulent clones, those that acquired a number of genes conferring infectivity and virulence and in addition antibiotic resistance. To do this, E. faecalis from oral infections in Brazilian (n=20) and UK patients (n=10), and non-oral infection in japanese patients (n=9) were studied. In addition, 20 environmental VRE isolates from the University Hospital of Wales (Cardiff, UK) were also examined. For braziliam isolates, antimicrobial susceptibility was ascertained by agar dilution, using the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). For all isolates, PCR with validated primers was used to detect genes associated with antibiotic resistance and virulence, whilst RAPD-PCR was used to fingerprint isolates. Of the virulence genes examined, gelatinase gene gelE was most prevalent amongst isolates (77-100%). In the case of oral isolates, the genes of aggregation substances agg, immune evasion protein esp, cytolysin cylB, tetracycline resistance tetM and tetL and erythromycin resistance ermB were detected with varying prevalence. Japanese hospital isolates had a similar genetic profile to oral isolates but with higher prevalence of ermB and cylB. All VRE strains were positive for gelE, esp, agg, vanA, ermB and tetM, 95% were positive for cylB and 17% positive for tetL. All isolates were negative for ermA, asa373 vanB, vanC1 and vanC2/3. RAPD-PCR revealed clustering of VRE compared with other isolates. In this study, isolates of E. faecalis from oral infections showed antibiotic resistance genes for tetracycline, an agent used in the local treatment of dental infection. This opens up a much-needed debate on the role and efficacy of this antibiotic for oral infections. Clearly, more research in this area is required particularly in relation to the possession and expression of virulence factors in the root canal environment, to better inform our management strategies. Environmental pressures in root canals may be responsible for the selection of more resistant species and the possession of virulence determinants. This knowledge is important in guiding procedures for controlling the increasing problem of antibiotic resistance amongst clinically relevant bacteria. Furthermore, whilst oral isolates had genes that could contribute to pathogenicity, these were detected at lower incidence compared with non-oral and VRE isolates.

No sentido de colaborar com o estudo da redução de microrganismos em Endodontia, foi realizada uma análise crítica dos modelos metodológicos in vivo sobre as técnicas moleculares utilizadas na avaliação da microbiota endodôntica e na capacidade de medir a antissepsia que o tratamento endodôntico proporciona. Desta maneira, os trabalhos foram agrupados de acordo com a proposta do presente estudo. Na análise critica e comparativa, pode-se observar uma grande variedade de métodos moleculares aplicados nos estudos, sendo que o mais utilizado nos ensaios para avaliação da microbiota foi o PCR. Havia estudos que utilizavam uma combinação de vários métodos onde foi possível identificar microrganismos ainda não conhecidos. Nos ensaios que utilizam iniciadores universais e que se valem da identificação de microrganismos através do DNA, foram listados de maneira a poder observar que o iniciador universal formado pela seguinte cadeia de oligonucleotídeos: F: 5- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3/R: 5-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3 foi o mais descrito pela literatura. / In order to collaborate with the study of disinfection in Endodontics, was performed a study of critical methodological models in vivo on the molecular techniques used in the evaluation of endodontic microbiota and the ability to measure the disinfection capacity of endodontic treatment. Thus, the studies were grouped according to the purpose of this study. Under in critical and comparative analysis its can be seen a wide variety of molecular techniques used in the studies, and as used in the tests was to evaluate the microbial PCR studies using a combination of various methods which could be identified microorganisms has not known. In assays using universal primers which rely on the identification of microorganisms using the DNA, were listed as to be able to observe that the universal primer chain formed by the following primers: F: 5\'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 \'/ R: 5\'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3\' was as described in the literature.