Em condições de normalidade o cemento e o esmalte atuam como barreira protetora da dentina e do tecido pulpar. Entretanto fatores etiológicos mecânicos, químicos e microbianos podem determinar a perda dessa proteção, conseqüentemente expondo a dentina e, eventualmente, o tecido pulpar ao ambiente bucal, viabilizando sua contaminação. O complexo dentino-pulpar pode reagir de diversas formas a presença de microorganismos, entretanto, quando alterações inflamatórias irreversíveis enfim sucedem-se provocam uma desordem tecidual na região periapical denominada de periodontite apical. A terapia das periodontites apicais deriva de um correto diagnóstico, o qual se encontra na dependência do conhecimento da natureza e complexidade das infecções endodônticas. Inúmeras pesquisas delinearam o tipo de microbiota presente em condição de periodontite apical crônica nos dentes completamente formados. Todavia nenhum estudo investigou os tipos de microorganismos presentes em canais radiculares de dentes jovens portadores de periodontite apical crônica, onde diferenças anatômicas, histológicas e morfofuncionais poderiam afetar as características do processo infeccioso. O presente estudo tem por objetivo delinear a característica microbiológica de canais radiculares de dentes permanentes jovens portadores de infecção primária. Foram selecionados 12 pacientes com necessidade de tratamento endodôntico em um ou mais dentes unirradiculares, portadores de rizogênese incompleta, diagnóstico clínico de necrose pulpar, em decorrência de injúria traumática, e condição de infecção endodôntica primária. Após o acesso, dezenove espécimes microbiológicos foram obtidos do interior dos canais radiculares com auxílio de cones de papel, os quais foram transferidos, imediatamente, para frascos contendo 2 mL de meio de transporte pré-reduzido VMGA III. As amostras foram diluídas e semeadas em placas do tipo Petri contendo meios de cultura seletivos para detecção de espécies de enterococos, de espécies de leveduras e para crescimento de bactérias totais. As placas semeadas foram incubadas em tempo e temperatura adequados ao crescimento dos microorganismos alvo. Ao final do período de incubação foi realizada uma análise quantitativa do crescimento microbiano presente segundo a contagem das unidades formadoras de colônias. Microorganismos anaeróbios foram recuperados de todos os canais e o número médio de células por canal foi de 5,7 x 106. Quatro amostras (21,05%) evidenciaram o crescimento de Bacteroides produtores de pigmento negro e número médio de células por canal foi de 6,5 x 105. Um espécime (5,25%) exibiu o crescimento de espécies de enterococos e o número médio de células neste canal foi de 1,5 x 104. / Normally cement and enamel act as protective barrier to the dentin and the pulp. However, mechanical, chemical and microbial factors should destroy this protection and display the dentin and, even the pulp, to the oral environment, making possible their contamination. The pulpo-dentin complex reacts in different forms at the presence of microorganisms. However, when irreversible inflammatory alterations are succeeded, they occasion a tecidual clutter on periradicular region. The therapy of periradicular pathosis results from a correct diagnostic, which depends on the knowledge of the nature and complexity of endodontic infections. Several studies have been conducted to disclose microorganisms in the root canal system and/or to investigate the structure of the root canal microbiota in chronic periodontits in teeth completely formed. However there is no information on the microbiology of primary endodontic infection in young teeth where anatomic, histologic and morfologic differences could affect the characteristics of the infectious process. The aim of the current study was to investigate the microbiological status of the root canals from permanent young teeth with primary endodontic infection. Twelve patients with the need for endodontic treatment participated in the study. The selected teeth (one or more tooth per patient) were uniradicular, containing a single root canal and an incomplete root formation, their pulp chamber was without visual communication with the oral fluid, they presented with untreated necrotic pulp, and showed radiographic evidence of periapical periodontits. After the access, nineteen microbiological samples were obtained from the root canals with sterile paper points. Afterwards, the paper points were pooled in a sterile tube containing 2mL of pre-reduced transport fluid (VMGA III). The samples were diluted and spread onto plates with selective medium for enterococcus (agar m-Enterococcus) and for yeast species (agar Sabouraud-dextrose) and onto plates with nonselective medium (agar Brucellasangue). A quantitative analysis was performed. The mean number of cultivable bacterial cells in the root canals was 5,7 x 106. In four samples (21.05%) Black Pigmented Bacteroides species were recovered and the mean number of cells was 6,5 x 105. One specimen (5.25%) showed the growth of enterococos species and the mean number of cells in this case was of 1,5 x 104.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Enterococcus faecalis (E. faecalis), conhecidamente patógeno oportunista, tem sido frequentemente associado a infecções sistêmicas graves. É também encontrado na cavidade oral, com destaque em infecção endodôntica refratária. O objetivo deste estudo foi avaliar características moleculares de E. faecalis isolados de infecção endodôntica primária no Brasil e comparar com isolados orais e não orais de pacientes do Reino Unido e do Japão, assim como E. faecalis resistentes à vancomicina. O presente estudo também investigou o relacionamento entre E. faecalis de diferentes origens (oral e não oral) e de diferentes áreas geográficas para obter uma melhor compreensão do envolvimento dos diferentes reservatórios no surgimento e propagação de clones virulentos, aqueles que possuem genes que conferem infectividade e virulência, assim como resistência aos antibióticos. Para tal, foram estudados E. faecalis isolados em infecções endodônticas no Brasil (n = 20) e orais no Reino Unido (n = 10), e em infecções não orais no Japão (n = 9). Além disso, 20 E. faecalis isolados ambientais do Hospital Universitário de Gales (Cardiff, Reino Unido), classificados como Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) também foram examinados. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos isolados do Brasil foi obtida pelo método de diluição em agar de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Reação em cadeia da polimerase (inglês - PCR) foi a técnica empregada para detectar os genes de virulência e aqueles associados à resistência aos antibióticos, enquanto Reação de Amplificação Aleatória de DNA Polimórfico (inglês - RAPD-PCR) foi escolhida para a tipagem molecular. Dentre os genes de virulência examinados, o gene que codifica a gelatinase gelE foi o mais prevalente entre os isolados (77-100%). Entre isolados orais, foram detectados os genes agg de substâncias de agregação, esp de proteína de evasão imune, cylB de citolisina, genes de resistência à tetraciclina tetM e tetL e à eritromicina ermB com diferentes prevalências. Os isolados clínicos hospitalares do Japão apresentaram perfil genético similar aos isolados orais, mas com maior prevalência de ermB e cylB. Todas as amostras de VRE foram positivas para os genes gelE, esp, agg, vanA, ermB e tetM, 95% foram positivos para cylB e 17% positivo para tetL. Todas as amostras foram negativas para ermA, asa373, vanB, vanC1 e vanC2/3. RAPD-PCR revelou agrupamento de VRE em comparação com outros isolados. Neste estudo, os isolados de E. faecalis de infecções orais apresentaram genes de resistência à tetraciclina, um antimicrobiano frequentemente usado no tratamento local de infecções dentárias, abrindo um debate muito importante sobre o papel e a eficácia desta droga para infecções orais. Claramente, são necessários mais estudos nesta área principalmente em relação à expressão de fatores de virulência entre isolados endodônticos para melhor nortear as estratégias de tratamento. As pressões externas no microambiente dos canais radiculares podem ser responsáveis pela seleção de espécies mais resistentes e virulentas. Por fim, embora isolados orais apresentem genes de virulência fundamentais para a patogenicidade, estes foram detectados em menor incidência em comparação com os isolados não-orais e VRE. / Enterococcus faecalis is an opportunistic pathogen known to cause serious systemic infection. It is also encountered in the oral cavity and has been implicated in persistent root canal infection. The aim of this study was to evaluate a range of molecular characteristics of E. faecalis isolated from primary endondontic infections in Brazil and compare to isolates from oral and non-oral infections in patients from UK and Japan, as well as isolates of vancomycin resistant E. faecalis, VRE, from a hospital environment. The present study was undertaken to explore the relatedness of E. faecalis from different origins, oral and non oral, and from different geographic areas to gain a better understanding of the involvement of the different reservoirs in the emergence and spread of virulent clones, those that acquired a number of genes conferring infectivity and virulence and in addition antibiotic resistance. To do this, E. faecalis from oral infections in Brazilian (n=20) and UK patients (n=10), and non-oral infection in japanese patients (n=9) were studied. In addition, 20 environmental VRE isolates from the University Hospital of Wales (Cardiff, UK) were also examined. For braziliam isolates, antimicrobial susceptibility was ascertained by agar dilution, using the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). For all isolates, PCR with validated primers was used to detect genes associated with antibiotic resistance and virulence, whilst RAPD-PCR was used to fingerprint isolates. Of the virulence genes examined, gelatinase gene gelE was most prevalent amongst isolates (77-100%). In the case of oral isolates, the genes of aggregation substances agg, immune evasion protein esp, cytolysin cylB, tetracycline resistance tetM and tetL and erythromycin resistance ermB were detected with varying prevalence. Japanese hospital isolates had a similar genetic profile to oral isolates but with higher prevalence of ermB and cylB. All VRE strains were positive for gelE, esp, agg, vanA, ermB and tetM, 95% were positive for cylB and 17% positive for tetL. All isolates were negative for ermA, asa373 vanB, vanC1 and vanC2/3. RAPD-PCR revealed clustering of VRE compared with other isolates. In this study, isolates of E. faecalis from oral infections showed antibiotic resistance genes for tetracycline, an agent used in the local treatment of dental infection. This opens up a much-needed debate on the role and efficacy of this antibiotic for oral infections. Clearly, more research in this area is required particularly in relation to the possession and expression of virulence factors in the root canal environment, to better inform our management strategies. Environmental pressures in root canals may be responsible for the selection of more resistant species and the possession of virulence determinants. This knowledge is important in guiding procedures for controlling the increasing problem of antibiotic resistance amongst clinically relevant bacteria. Furthermore, whilst oral isolates had genes that could contribute to pathogenicity, these were detected at lower incidence compared with non-oral and VRE isolates.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Enterococcus faecalis (E. faecalis), conhecidamente patógeno oportunista, tem sido frequentemente associado a infecções sistêmicas graves. É também encontrado na cavidade oral, com destaque em infecção endodôntica refratária. O objetivo deste estudo foi avaliar características moleculares de E. faecalis isolados de infecção endodôntica primária no Brasil e comparar com isolados orais e não orais de pacientes do Reino Unido e do Japão, assim como E. faecalis resistentes à vancomicina. O presente estudo também investigou o relacionamento entre E. faecalis de diferentes origens (oral e não oral) e de diferentes áreas geográficas para obter uma melhor compreensão do envolvimento dos diferentes reservatórios no surgimento e propagação de clones virulentos, aqueles que possuem genes que conferem infectividade e virulência, assim como resistência aos antibióticos. Para tal, foram estudados E. faecalis isolados em infecções endodônticas no Brasil (n = 20) e orais no Reino Unido (n = 10), e em infecções não orais no Japão (n = 9). Além disso, 20 E. faecalis isolados ambientais do Hospital Universitário de Gales (Cardiff, Reino Unido), classificados como Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) também foram examinados. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos isolados do Brasil foi obtida pelo método de diluição em agar de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Reação em cadeia da polimerase (inglês - PCR) foi a técnica empregada para detectar os genes de virulência e aqueles associados à resistência aos antibióticos, enquanto Reação de Amplificação Aleatória de DNA Polimórfico (inglês - RAPD-PCR) foi escolhida para a tipagem molecular. Dentre os genes de virulência examinados, o gene que codifica a gelatinase gelE foi o mais prevalente entre os isolados (77-100%). Entre isolados orais, foram detectados os genes agg de substâncias de agregação, esp de proteína de evasão imune, cylB de citolisina, genes de resistência à tetraciclina tetM e tetL e à eritromicina ermB com diferentes prevalências. Os isolados clínicos hospitalares do Japão apresentaram perfil genético similar aos isolados orais, mas com maior prevalência de ermB e cylB. Todas as amostras de VRE foram positivas para os genes gelE, esp, agg, vanA, ermB e tetM, 95% foram positivos para cylB e 17% positivo para tetL. Todas as amostras foram negativas para ermA, asa373, vanB, vanC1 e vanC2/3. RAPD-PCR revelou agrupamento de VRE em comparação com outros isolados. Neste estudo, os isolados de E. faecalis de infecções orais apresentaram genes de resistência à tetraciclina, um antimicrobiano frequentemente usado no tratamento local de infecções dentárias, abrindo um debate muito importante sobre o papel e a eficácia desta droga para infecções orais. Claramente, são necessários mais estudos nesta área principalmente em relação à expressão de fatores de virulência entre isolados endodônticos para melhor nortear as estratégias de tratamento. As pressões externas no microambiente dos canais radiculares podem ser responsáveis pela seleção de espécies mais resistentes e virulentas. Por fim, embora isolados orais apresentem genes de virulência fundamentais para a patogenicidade, estes foram detectados em menor incidência em comparação com os isolados não-orais e VRE. / Enterococcus faecalis is an opportunistic pathogen known to cause serious systemic infection. It is also encountered in the oral cavity and has been implicated in persistent root canal infection. The aim of this study was to evaluate a range of molecular characteristics of E. faecalis isolated from primary endondontic infections in Brazil and compare to isolates from oral and non-oral infections in patients from UK and Japan, as well as isolates of vancomycin resistant E. faecalis, VRE, from a hospital environment. The present study was undertaken to explore the relatedness of E. faecalis from different origins, oral and non oral, and from different geographic areas to gain a better understanding of the involvement of the different reservoirs in the emergence and spread of virulent clones, those that acquired a number of genes conferring infectivity and virulence and in addition antibiotic resistance. To do this, E. faecalis from oral infections in Brazilian (n=20) and UK patients (n=10), and non-oral infection in japanese patients (n=9) were studied. In addition, 20 environmental VRE isolates from the University Hospital of Wales (Cardiff, UK) were also examined. For braziliam isolates, antimicrobial susceptibility was ascertained by agar dilution, using the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). For all isolates, PCR with validated primers was used to detect genes associated with antibiotic resistance and virulence, whilst RAPD-PCR was used to fingerprint isolates. Of the virulence genes examined, gelatinase gene gelE was most prevalent amongst isolates (77-100%). In the case of oral isolates, the genes of aggregation substances agg, immune evasion protein esp, cytolysin cylB, tetracycline resistance tetM and tetL and erythromycin resistance ermB were detected with varying prevalence. Japanese hospital isolates had a similar genetic profile to oral isolates but with higher prevalence of ermB and cylB. All VRE strains were positive for gelE, esp, agg, vanA, ermB and tetM, 95% were positive for cylB and 17% positive for tetL. All isolates were negative for ermA, asa373 vanB, vanC1 and vanC2/3. RAPD-PCR revealed clustering of VRE compared with other isolates. In this study, isolates of E. faecalis from oral infections showed antibiotic resistance genes for tetracycline, an agent used in the local treatment of dental infection. This opens up a much-needed debate on the role and efficacy of this antibiotic for oral infections. Clearly, more research in this area is required particularly in relation to the possession and expression of virulence factors in the root canal environment, to better inform our management strategies. Environmental pressures in root canals may be responsible for the selection of more resistant species and the possession of virulence determinants. This knowledge is important in guiding procedures for controlling the increasing problem of antibiotic resistance amongst clinically relevant bacteria. Furthermore, whilst oral isolates had genes that could contribute to pathogenicity, these were detected at lower incidence compared with non-oral and VRE isolates.

Em condições de normalidade o cemento e o esmalte atuam como barreira protetora da dentina e do tecido pulpar. Entretanto fatores etiológicos mecânicos, químicos e microbianos podem determinar a perda dessa proteção, conseqüentemente expondo a dentina e, eventualmente, o tecido pulpar ao ambiente bucal, viabilizando sua contaminação. O complexo dentino-pulpar pode reagir de diversas formas a presença de microorganismos, entretanto, quando alterações inflamatórias irreversíveis enfim sucedem-se provocam uma desordem tecidual na região periapical denominada de periodontite apical. A terapia das periodontites apicais deriva de um correto diagnóstico, o qual se encontra na dependência do conhecimento da natureza e complexidade das infecções endodônticas. Inúmeras pesquisas delinearam o tipo de microbiota presente em condição de periodontite apical crônica nos dentes completamente formados. Todavia nenhum estudo investigou os tipos de microorganismos presentes em canais radiculares de dentes jovens portadores de periodontite apical crônica, onde diferenças anatômicas, histológicas e morfofuncionais poderiam afetar as características do processo infeccioso. O presente estudo tem por objetivo delinear a característica microbiológica de canais radiculares de dentes permanentes jovens portadores de infecção primária. Foram selecionados 12 pacientes com necessidade de tratamento endodôntico em um ou mais dentes unirradiculares, portadores de rizogênese incompleta, diagnóstico clínico de necrose pulpar, em decorrência de injúria traumática, e condição de infecção endodôntica primária. Após o acesso, dezenove espécimes microbiológicos foram obtidos do interior dos canais radiculares com auxílio de cones de papel, os quais foram transferidos, imediatamente, para frascos contendo 2 mL de meio de transporte pré-reduzido VMGA III. As amostras foram diluídas e semeadas em placas do tipo Petri contendo meios de cultura seletivos para detecção de espécies de enterococos, de espécies de leveduras e para crescimento de bactérias totais. As placas semeadas foram incubadas em tempo e temperatura adequados ao crescimento dos microorganismos alvo. Ao final do período de incubação foi realizada uma análise quantitativa do crescimento microbiano presente segundo a contagem das unidades formadoras de colônias. Microorganismos anaeróbios foram recuperados de todos os canais e o número médio de células por canal foi de 5,7 x 106. Quatro amostras (21,05%) evidenciaram o crescimento de Bacteroides produtores de pigmento negro e número médio de células por canal foi de 6,5 x 105. Um espécime (5,25%) exibiu o crescimento de espécies de enterococos e o número médio de células neste canal foi de 1,5 x 104. / Normally cement and enamel act as protective barrier to the dentin and the pulp. However, mechanical, chemical and microbial factors should destroy this protection and display the dentin and, even the pulp, to the oral environment, making possible their contamination. The pulpo-dentin complex reacts in different forms at the presence of microorganisms. However, when irreversible inflammatory alterations are succeeded, they occasion a tecidual clutter on periradicular region. The therapy of periradicular pathosis results from a correct diagnostic, which depends on the knowledge of the nature and complexity of endodontic infections. Several studies have been conducted to disclose microorganisms in the root canal system and/or to investigate the structure of the root canal microbiota in chronic periodontits in teeth completely formed. However there is no information on the microbiology of primary endodontic infection in young teeth where anatomic, histologic and morfologic differences could affect the characteristics of the infectious process. The aim of the current study was to investigate the microbiological status of the root canals from permanent young teeth with primary endodontic infection. Twelve patients with the need for endodontic treatment participated in the study. The selected teeth (one or more tooth per patient) were uniradicular, containing a single root canal and an incomplete root formation, their pulp chamber was without visual communication with the oral fluid, they presented with untreated necrotic pulp, and showed radiographic evidence of periapical periodontits. After the access, nineteen microbiological samples were obtained from the root canals with sterile paper points. Afterwards, the paper points were pooled in a sterile tube containing 2mL of pre-reduced transport fluid (VMGA III). The samples were diluted and spread onto plates with selective medium for enterococcus (agar m-Enterococcus) and for yeast species (agar Sabouraud-dextrose) and onto plates with nonselective medium (agar Brucellasangue). A quantitative analysis was performed. The mean number of cultivable bacterial cells in the root canals was 5,7 x 106. In four samples (21.05%) Black Pigmented Bacteroides species were recovered and the mean number of cells was 6,5 x 105. One specimen (5.25%) showed the growth of enterococos species and the mean number of cells in this case was of 1,5 x 104.

Submitted by ESTEBAN ISAI FLORES OROZCO null (esteban_cuacua@hotmail.com) on 2017-01-30T12:31:02Z No. of bitstreams: 1 Tese EIF Orozco 2016.pdf: 3857078 bytes, checksum: 8192b396024e2af0be54f979f7662431 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-02T18:44:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 floresorozco_ei_me_sjc.pdf: 3857078 bytes, checksum: 8192b396024e2af0be54f979f7662431 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-02T18:44:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 floresorozco_ei_me_sjc.pdf: 3857078 bytes, checksum: 8192b396024e2af0be54f979f7662431 (MD5) Previous issue date: 2016-12-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os objetivos do presente estudo foram: a) Verificar a carga microbiana e quantificar endotoxinas presentes nos canais radiculares de dentes com infecção endodôntica primária; b) Comparar a efetividade antibacteriana e sobre endotoxinas do preparo biomecânico com dois métodos de irrigação final: com ou sem irrigação ultrassônica passiva; c) Correlacionar sinais e sintomas com a microbiota presente e complexos bacterianos; d) Relacionar níveis de endotoxinas e carga microbiana com sinais e sintomas clinicos. Foram selecionados para o estudo 20 dentes uniradiculares, que apresentavam infecção endodôntica primária e lesão periapical, sendo estes submetidos a TCFC. Os canais foram preparados com sistema reciprocante e irrigação com NaOCl 2.5%, seguido de dois protocolos de irrigação final: com e sem uso de ultrassom. Todos os canais foram preenchidos com MIC com hidróxido de cálcio + soro fisiológico e após 14 dias foram obturados com cones de guta-percha e cimento AH Plus. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal, logo após a abertura coronária (1ª Coleta); após PBM (2ª Coleta) e após limpeza final dos canais com NaOCl seguido de EDTA por 5 min (grupo sem PUI); ou irrigação com NaOCl + PUI e EDTA + PUI (3ª Coleta) (grupo com PUI) . Foram avaliados sinais/sintomas clínicos previo ao tratamento.O conteúdo das coletas foi analisado a partir de sondas de DNA pelo método de hibridização DNA-DNA checkerboard e foi realizado teste de avaliação da atividade antimicrobiana por cultura microbiológica. Alem disso foi realizado quantificação de endotoxinas pelo Lisado de Amebócitos de Limulus (LAL). E a volumetria dos canais foi feita através da TCFC utilizando o software Nemotec®. Os resultados foram submetidos a análise estatístico pelos testes Mann Whitney e teste ANOVA a dois fatores de medidas repetidas (5%). Valor de p < 0.05 foi considerado estatisticamente significante. Houve associação entre dor à percussão e complexos laranja principal e laranja periférico. Fístula foi associada ao complexo laranja principal e laranja periférico. Foi observada redução de bactérias após o tratamento endodôntico. Ao utilizar o método de hibridização DNA-DNA checkerboard, as bactérias mais prevalentes foram S. constellatus, E faecalis, F. nucleatum, P. gingivalis, P. melaninogenica e S. intermedius na primeira coleta. Os métodos de irrigação diminuíram número de espécies bacterianas comparado à coleta inicial. A irrigação ultrassônica passiva apresentou diferença estatística significativa sobre bactérias anaeróbias. PUI não apresento diferença significativa sobre bactérias aeróbias nem endotoxinas comparado com irrigação convencional. Concluiu-se que todos os canais apresentaram micro-organismos sendo que anaeróbios estiveram presentes em grande quantidade. Após preparo biomecânico do canal radicular e irrigação com PUI, houve redução significante da carga de micro-organismos anaeróbios. Os micro-organismos mais resistentes ao preparo biomecânico com e sem PUI foram S. constellatus , E. faecalis, S. intermedius e L. bucalis. Houve associação positiva entre sinais e sintomas clínicos com complexo laranja e com micro-organismos. Os níveis de endotoxinas diminuíram após o preparo biomecânico não foram inferenciados por PUI a irrigação convencional. / The objective of this study were: a) to check the microbial load and to quantify endotoxin present in the root canals of teeth with primary endodontic infection; b) to compare the effectiveness of bacteria and endotoxin reduction of the biomechanical preparation with final irrigation methods: with or without passive ultrasonic irrigation (PUI); c) to correlate signs and symptoms with the present microbiota and bacterial complexes; d) to relate endotoxin and microbial load levels with signs and symptoms before biomechanical preparation. Twenty single-root teeth were selected for the study, presenting primary endodontic infections and periapical lesion, which underwent CBCT. The canals were prepared with reciprocating system and irrigation with 2.5% NaOCl, followed by two final irrigation protocols: with and without ultrasound. All canals were filled with MIC with calcium hydroxide + saline and after 14 days were filled with gutta percha and AH Plus. Samples from the content of canal were harvested, after coronal opening (1st Sample); after PBM (2nd Sample) and after final cleaning of the canals with NaOCl followed by EDTA for 5 min (group without PUI); or irrigation with NaOCl + PUI and EDTA + PUI (3rd Sample) (group with PUI). The contents of the samples were analyzed from DNA probes by the DNA-DNA checkerboard hybridization method and a test was performed to evaluate the antimicrobial activity by microbiological culture. In addition, quantification of endotoxins by Limulus Amebocyte Lysate (LAL) was performed. The canal volumetry was assessed through the CBCT using Nemotec® software. The results were submitted to statistical analysis by Mann Whitney and repeated measures two-way ANOVA (5%). Value of p <0.05 was considered statistically significant. There was an association between pain at percussion and main orange and peripheral orange complexes. Fistula was associated with the main orange and peripheral orange complex. A reduction of bacteria was observed after endodontic treatment. When using the DNA-DNA checkerboard hybridization method, the most prevalent bacterias were S. constellatus, E faecalis, F. nucleatum, P. gingivalis, P. melaninogenica and S. intermedius in the first collection. Irrigation methods decreased number of bacterial species compared to initial collection. The passive ultrasonic irrigation presents statistically significant difference on anaerobic bacteria. PUI did not present significant difference on aerobic bacteria or endotoxins compared to conventional irrigation. In conclusion, all canals had microorganisms, and anaerobes were present in large quantities. The most frequent microorganisms were S. constellatus, E. faecalis, F. nucleatum SP, P. gingivalis e S. intermedius. After biomechanical preparation of root canal and irrigation with PUI, there was a significant reduction of the anaerobic microorganism load. The microorganisms most resistant to biomechanical preparation with and without PUI were S. constellatus , E. faecalis, S. intermedius e L. bucalis. There was a positive association between clinical signs and symtoms with orange complex and with microorganisms. Endotoxin levels decreased after biomechanical preparation, while not influenced by PUI in comparison to conventional irrigation.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Genara_Gomes.pdf: 1516015 bytes, checksum: b14990ee71c190c2c2ecea0e68cd8fbf (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Maintaining the integrity and function of primary dentition is one of the main purposes of pediatric dentistry. Bacteria and their products are responsible for the development of endodontic pathologies in primary teeth. This study aimed to identify the presence of specific anaerobic bacteria in infected pulp chambers (PC) and root canals (RC) of necrotic primary teeth by the PCR method and to make an in vivo comparison of the effectiveness between two molar tooth endodontic instrumentation techniques manual and rotary with reference to the time instrumentation and the time to perform the filling. The study consisted in the microbial investigation of primary teeth with pulp necrosis of 15 patients. Samples were collected by using cotton balls (PC) and sterile absorbent paper points (RC). Bacterial DNA was extracted by means of DNA extraction kits. After DNA extraction, PCR reaction was performed through the use of specific primers to detect the occurrence of the following microorganisms: Filifactor alocis, Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis, P. gingivalis, Prevotella intermedia, P. nigrescens, P. tannerae, Tanerella forsythia, Treponema denticola and T. socranskii. PCR products were analized by 1% agarose gel stained by red gel and viewed under ultraviolet transillumination. To compare instrumentation techniques, 8 patients (4 for each technique used) between 6 and 8 years of age were selected. Teeth were prepared by using n. 15 up to 30 K-type files for the manual technique; for the rotary technique, S2, F1 and F2 Pro Taper instruments were used. Filling was performed with iodoform-based paste. Instrumentation and filling duration were recorded. Collected data for each study were typed on Excel spreadsheets and analyzed statistically. A 5% significance level (P<0.05) was adopted for all tests. The results showed that the most frequently detected species were P. nigrescens (12/15), P. gingivalis (11/15) and F. alocis in the PC, and P. gingivalis (15/15) and P. nigrescens (14/15) in the RC. The red complex was not found in the PC, but was found in the RC in three cases. Only the simultaneous presence of P. nigrescens in the PC and in the RC was statistically associated (p=0.04). There were no significant statistical differences in instrumentation and filling duration between the techniques used, and differences in the quality of fillings were not observed. Thus, strict anaerobic bacteria were often detected in PC and RC samples. RC preparation with rotary instrumentation may be an alternative to manual instrumentation; however, it does not decrease the time of pediatric dentistry work in a significant way / A manutenção da integridade e função da dentição decídua, até a esfoliação fisiológica, constitui um dos principais objetivos da odontopediatria. Bactérias e seus produtos são os responsáveis pelo desenvolvimento de patologias endodônticas nos dentes decíduos. O objetivo deste estudo foi identificar a presença de bactérias anaeróbias específicas na câmara pulpar (CP) e nos canais radiculares (CR) de dentes decíduos necrosados através do método de PCR e comparar, in vivo, a eficácia de duas técnicas de instrumentação endodôntica em molares decíduos, manual e rotatória, em relação ao tempo de instrumentação e ao tempo para realização da obturação. A amostra foi constituída de 15 pacientes, que apresentavam dentes decíduos com necrose pulpar, para a investigação microbiana. As amostras foram coletadas usando bolinhas de algodão (CP) e pontas de papel absorvente estéreis (CR). O DNA bacteriano foi extraído através de um kit próprio para extração de DNA. Após a extração do DNA, a reação de PCR foi realizada utilizando primers específicos para detectar a presença das seguintes espécies de microrganismos: Filifactor alocis, Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis, P. gingivalis, Prevotella intermedia, P. nigrescens, P. tannerae, Tanerella forsythia, Treponema denticola e T. socranskii. Os produtos de PCR foram analisados por gel de agarose 1%, corados com gel red e visualizados sob transiluminação de luz ultravioleta. Para a comparação entre as técnicas de instrumentação, foram selecionados oito pacientes, entre seis e oito anos de idade, com molares decíduos inferiores que necessitavam de tratamento endodôntico (quatro para cada técnica utilizada). Para técnica manual, os dentes foram preparados com limas tipo K e a técnica rotatória foi realizada com limas de Ni-Ti Pro Taper. Todos os canais foram preparados da lima #20 até a #30, para a técnica manual. Para a técnica rotatória foram utilizados instrumentos Pro Taper S2 F1 e F2. A obturação foi ralizada com pasta iodoformada. Os tempos de instrumentação e de obturação foram coletados através de um cronômetro digital. Os dados de cada estudo foram digitados numa planilha Excel e analisados estatisticamente. Para todos os testes foi adotado nível de significância de 5% (p<0.05). Os resultados mostraram que as espécies mais frequentemente detectadas na CP foram P. nigrescens (12/15), P. gingivalis (11/15) e F. alocis (11/15) e nos CR foram P. gingivalis (15/15) e P. nigrescens (14/15). O "complexo vermelho", não foi encontrado na CP, mas foi encontrado no CR de três casos. Apenas a presença simultânea de P. nigrescens na CP e no CR foi estatisticamente associada (p = 0.04). Não houve diferença estatística significante entre os tempos de instrumentação das técnicas utilizadas e também entre os tempos de obturação analisados. Assim, bactérias anaeróbias estritas foram frequentemente detectadas em amostras de CP e CR e o preparo dos CR com instrumentação rotatória pode ser uma alternativa à instrumentação manual, entretanto não diminui, significativamente, o tempo de trabalho do odontopediatra

The efficacy of the sodium hypochlorite and chlorhexidine over the Enterococcus faecalis present in endodontic infections was evaluated in longitudinal studies through a systematic review. Bibliographic catalogue sources, electronically identified as MEDLINE (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed), from 1966 until January 1st, and Cochrane Library on the same period, were used. On the searching strategy, the following combination of keywords were used faecalis and sodium hypochlorite or faecalis and chlorhexidine or faecalis and root canal infections or faecalis and endodontics infections or faecalis and root canal irrigants or faecalis and irrigant solution or faecalis and endodontics irrigants or faecalis and intracanal irrigant. The studies were selected by two independent reviewers that determined the inclusion and exclusion criteria. The search presented 229 related articles, with 6 of these as literature review articles, 39 articles were related with in vivo studies (humans or animals), and 189 included in vitro studies. From the 39 in vivo studies, 5 studies satisfied the inclusion criteria. The methodological structure of the included studies prohibited the combination of results. The efficacy of the sodium hypochlorite and chlorhexidine over the E. faecalis was demonstrated in vitro by direct contact test. On the studies involving contaminated dentin, either the sodium hypochlorite or the chlorhexidine were inefficient. On the 5 studies included, from the total of 159 teeth with endodontic infections primary or secundary, the E. faecalis was detected initially in 16 teeth by PCR and 42 by culture, and after the sanitization process in 11 teeth by PCR and 12 by culture. It was observed the absence of longitudinal studies in humans about the efficacy of chlorhexidine over the E. faecalis. The sanitization process with the emptying, enlargement and action of the sodium hypochlorite reduces the remaining endodontic microbiota, what certainly potentiates the action of the intracanal dressing and favors a higher level of success of the endodontic treatment. / Avaliou-se em estudos longitudinais a eficácia do hipoclorito de sódio e da clorexidina sobre o Enterococcus faecalis presente em infecções endodônticas, através de revisão sistemática. Fontes de catalogação bibliográfica identificadas eletronicamente por MEDLINE (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed), a partir de 1966 até 01 de janeiro de 2007 e Cochrane Library no mesmo período. Na estratégia de busca empregou-se a combinação dos unitermos faecalis and sodium hypochlorite ou faecalis and chlorhexidine ou faecalis and root canal infections ou faecalis and endodontics infections ou faecalis and root canal irrigants ou faecalis and irrigant solution ou faecalis and endodontics irrigants ou faecalis and intracanal irrigant. Os estudos foram selecionados por dois revisores, independentes, que, determinaram os critérios de inclusão e exclusão. A busca apresentou 229 artigos relacionados, sendo que destes 6 artigos eram de revisão de literatura, 39 artigos relacionavam-se com estudos in vivo (humanos ou animais), e 189 incluíam estudos in vitro. Dos 39 estudos in vivo 5 estudos satisfizeram os critérios de inclusão. A estruturação metodológica dos estudos incluídos inviabilizou a combinação de resultados. A eficácia do hipoclorito de sódio e da clorexidina sobre o E. faecalis foi demonstrada in vitro por teste de contato direto. Nos estudos envolvendo dentina contaminada, tanto o hipoclorito de sódio quanto a clorexidina mostram-se ineficazes. Nos 5 estudos icluídos, do total de 159 dentes com infecções endodônticas primárias ou secundárias, detectou-se o E. faecalis no início do tratamento em 16 dentes por PCR e 42 por cultura; e após o processo de sanificação em 11 por PCR e 12 por cultura. Observou-se ausência de estudos longitudinais em humanos da eficácia da clorexidina sobre o E. faecalis. O processo de sanificação coadjuvado pelo esvaziamento, alargamento e ação do hipoclorito de sódio reduz a microbiota endodôntica remanescente, o que certamente potencializa a ação da medicação intracanal e favorece um maior nível de sucesso do tratamento endodôntico. / Mestre em Odontologia

Submitted by Daniela Maria de Toledo Ungaro (danielamt_ungaro@yahoo.com.br) on 2018-09-27T12:43:41Z No. of bitstreams: 1 Daniela Ungaro Finalizado para impressão.pdf: 3219565 bytes, checksum: 8ee8e24e21d6105d1be4113a492c91f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-09-27T14:48:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ungaro_dmt_me_sjc.pdf: 3219565 bytes, checksum: 8ee8e24e21d6105d1be4113a492c91f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T14:48:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ungaro_dmt_me_sjc.pdf: 3219565 bytes, checksum: 8ee8e24e21d6105d1be4113a492c91f5 (MD5) Previous issue date: 2018-08-15 / Os objetivos deste estudo foram avaliar, com a ajuda de um modelo matemático, o tempo estimado para ocorrer reparo ósseo em dentes com lesão periapical tratados endodonticamente e comparar o volume da lesão periapical (em mm3) após a utilização de dois tipos de medicação intracanal. Para isso, foram selecionados 34 dentes unirradiculares com lesão periapical de pacientes da Disciplina de Endodontia do ICT/SJC-UNESP que necessitavam de tratamento endodôntico. Após a seleção dos dentes, foram obtidas radiografias periapicais (RP) e tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC) antes de iniciar o tratamento endodôntico (T0). Os dentes foram divididos em dois grupos de acordo com a medicação intracanal utilizada (n=17): G1 – Hidróxido de cálcio associado à Clorexidina Gel 2% e G2 – Ultracal XS®. Foram obtidas novas radiografias periapicais e tomografias (TCFC) após o término do tratamento endodôntico (T1), sendo outras após 3 meses (T2) e também após 6 meses (T3). Os arquivos das tomografias foram exportados no formato DICOM (Digital Imaging and Communications in Medicine) para avaliar a volumetria das lesões pré e pós tratamento (em voxel/mm3) pelo processo de segmentação semiautomático em todos os períodos de tempo pré-estabelecidos (T0, T1, T2 e T3), por meio do software de livre acesso ITK-SNAP1.4.1 (University of North Carolina, Chapel Hill, NC, USA). Após a análise da volumetria das lesões periapicais em todos os períodos de tempo, os dados obtidos foram utilizados para construir um modelo matemático que foi empregado para estimar o tempo de reparo ósseo das lesões. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Teste t - Student de amostras independentes (p<0,05). Houve diminuição do volume da lesão periapical nos casos tratados endodonticamente e a medicação intracanal utilizada, seja Hidróxido de cálcio + Clorexidina gel 2% ou Ultracal®, não apresentou diferença significativa no tempo de reparo ósseo nem no volume da lesão periapical nos períodos pré-determinados. Não houve diferença na estimativa de tempo de reparo ósseo entre os grupos avaliados, sendo, em média, 249 dias para o G1 e 245 dias para o G2. A utilização de um modelo matemático para estimativa de reparo ósseo pode ser uma alternativa viável na previsão do tempo de reparo dos casos tratados endodonticamente. / The objectives of this study were to evaluate the estimated time for bone repair in teeth with periapical lesions treated endodontically and to compare the volume of the periapical lesion (in mm3) with the help of a mathematical model after the use of two types of intracanal medication. For this, 34 single rooted teeth with periapical lesion were selected from patients of the Endodontic Discipline of the ICT/SJC-UNESP who needed endodontic treatment. After the teeth were selected, periapical radiography (RP) and cone-beam computed tomography (CBCT) were obtained before starting the endodontic treatment. The teeth were divided into two groups according to the intracanal medications used (n=17): G1 - Calcium hydroxide associated with 2% chlorhexidine gel and G2 – Ultracal XS®. New periapical radiographs and tomographys (CBCT) were obtained after endodontic treatment (T1), others after 3 months (T2) and after 6 months (T3). The files of CBCT were exported in DICOM (Digital Imaging and Communications in Medicine) format to evaluate the volumetry of pre and post-treatment lesions (voxel/mm3) by the semi-automatic segmentation process at all the pre-established time periods (T0, T1, T2, T3) through the free access software ITK SNAP-1.4.1 (University of North Carolina, Chapel Hill, NC, USA). After the analysis of the periapical lesion volume in all time periods, the data were used to construct a mathematical model that was used to estimate the bone repair time of the lesion. The data obtained were statistically analyzed by Student's t - test of independent samples (p <0.05). ). There was a decrease in the volume of the periapical lesion in endodontically treated cases and the intracanal medication used, whether calcium hydroxide + chlorhexidine gel 2% or Ultracal®, did not present a significant difference in bone repair time nor in the periapical lesion volume in the predetermined periods. There was no difference in the estimated bone repair time between the groups evaluated, being, on average, 249 days for G1 and 245 days for G2. The use of a mathematical model for estimation of bone repair may be a viable alternative in predicting the repair time of endodontically treated cases.

O presente estudo teve por objetivo avaliar in vivo a eficácia do preparo de canais radiculares na redução bacteriana em dentes portadores de periodontite apical primária, com auxílio do sistema EndoVac de irrigação e aspiração. Foram coletadas amostras dos canais radiculares de 20 pacientes, antes (S1) e após (S2) o preparo com instrumentos rotatórios Protaper, variando somente a técnica utilizada para irrigação e aspiração: Grupo A (irrigação convencional n=10) e Grupo B (irrigação com auxílio do sistema EndoVac n=10). Após a extração do DNA presente nas amostras, este foi quantificado através da reação de PCR em tempo real, pelo método SYBR Green, identificando o número de cópias do gene 16SrRNA. Em todas as amostras, com exceção de uma pós-preparo com EndoVac, foram identificadas cópias do gene alvo. A média para todos os casos foi de 1,6 X 108 e 8,8 X 105 cópias do 16SrRNA, antes e após o preparo, respectivamente. Para os grupos isoladamente, os mesmos valores foram: 2,0 X 108 e 5,5 X 105 (convencional), e 1,1 X 108 e 1,2 X 106 (EndoVac). O percentual médio de redução foi de 97,52% (97,02% para convencional e 98,04% para o EndoVac). O teste de Mann-Whitney permitiu concluir que ambas as técnicas reduziram significativamente os microrganismos presentes antes do preparo (p<0,0001), sem haver diferença entre as mesmas (p=0,9705). Nenhuma das técnicas foi efetiva na eliminação completa de bactérias sob a metodologia utilizada. A eficácia antibacteriana do sistema EndoVac, sob esta metodologia, foi semelhante a obtida com a irrigação e aspiração convencional. / The present study aimed to analyze in vivo the effectiveness of root canal preparation on bacterial reduction in patientss teeth with primary apical periodontitis. Samples were collected from 20 patients before (S1) and after (S2) preparation with ProTaper rotary files, varying only the technique used for irrigation and aspiration: Group A (conventional irrigation - n = 10) and Group B (with the aid of EndoVac system - n = 10). After extraction, the DNA present in the samples was quantified by real-time PCR with the SYBR Green method, identifying the number of 16SrRNA gene copies. In all samples, except for a post-preparation case with EndoVac, copies of the target gene were identified. Average for all cases was 1,6 X 108 and 8,8 X 105 copies of the 16SrRNA, before and after preparation, respectively. For the groups separately, the same values were 2,0 X 108 and 5,5 X 105 (conventional) and 1,1 X 108 and 1,2 X 106 (EndoVac). The mean percentage of reduction was 97.52% (97.02% for the conventional and 98.04% for the EndoVac). The Mann-Whitney test concluded that both techniques significantly reduced the microrganisms after preparation (p<0,0001), with no differences between them (p=0,9705). None of the techniques were effective in the complete elimination of bacteria under this methodology. The antibacterial efficacy of the EndoVac system under this methodology was similar to that obtained with conventional irrigation and aspiration.

O presente estudo teve por objetivo avaliar in vivo a eficácia do preparo de canais radiculares na redução bacteriana em dentes portadores de periodontite apical primária, com auxílio do sistema EndoVac de irrigação e aspiração. Foram coletadas amostras dos canais radiculares de 20 pacientes, antes (S1) e após (S2) o preparo com instrumentos rotatórios Protaper, variando somente a técnica utilizada para irrigação e aspiração: Grupo A (irrigação convencional n=10) e Grupo B (irrigação com auxílio do sistema EndoVac n=10). Após a extração do DNA presente nas amostras, este foi quantificado através da reação de PCR em tempo real, pelo método SYBR Green, identificando o número de cópias do gene 16SrRNA. Em todas as amostras, com exceção de uma pós-preparo com EndoVac, foram identificadas cópias do gene alvo. A média para todos os casos foi de 1,6 X 108 e 8,8 X 105 cópias do 16SrRNA, antes e após o preparo, respectivamente. Para os grupos isoladamente, os mesmos valores foram: 2,0 X 108 e 5,5 X 105 (convencional), e 1,1 X 108 e 1,2 X 106 (EndoVac). O percentual médio de redução foi de 97,52% (97,02% para convencional e 98,04% para o EndoVac). O teste de Mann-Whitney permitiu concluir que ambas as técnicas reduziram significativamente os microrganismos presentes antes do preparo (p<0,0001), sem haver diferença entre as mesmas (p=0,9705). Nenhuma das técnicas foi efetiva na eliminação completa de bactérias sob a metodologia utilizada. A eficácia antibacteriana do sistema EndoVac, sob esta metodologia, foi semelhante a obtida com a irrigação e aspiração convencional. / The present study aimed to analyze in vivo the effectiveness of root canal preparation on bacterial reduction in patientss teeth with primary apical periodontitis. Samples were collected from 20 patients before (S1) and after (S2) preparation with ProTaper rotary files, varying only the technique used for irrigation and aspiration: Group A (conventional irrigation - n = 10) and Group B (with the aid of EndoVac system - n = 10). After extraction, the DNA present in the samples was quantified by real-time PCR with the SYBR Green method, identifying the number of 16SrRNA gene copies. In all samples, except for a post-preparation case with EndoVac, copies of the target gene were identified. Average for all cases was 1,6 X 108 and 8,8 X 105 copies of the 16SrRNA, before and after preparation, respectively. For the groups separately, the same values were 2,0 X 108 and 5,5 X 105 (conventional) and 1,1 X 108 and 1,2 X 106 (EndoVac). The mean percentage of reduction was 97.52% (97.02% for the conventional and 98.04% for the EndoVac). The Mann-Whitney test concluded that both techniques significantly reduced the microrganisms after preparation (p<0,0001), with no differences between them (p=0,9705). None of the techniques were effective in the complete elimination of bacteria under this methodology. The antibacterial efficacy of the EndoVac system under this methodology was similar to that obtained with conventional irrigation and aspiration.