Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:46:52Z : No. of bitstreams: 1 000828267.pdf: 980319 bytes, checksum: 04dd3ccb87ec60ced7f9a74edc6eb904 (MD5) / Os objetivos do presente estudo foram: a) quantificar endotoxinas e carga microbiana nas infecções endodônticas primárias, antes e após o preparo biomecânico (PBM) e uso de diferentes medicações intracanais (MIC); b) relacionar níveis de endotoxinas e microrganismos cultiváveis com a volumetria da lesão periapical (VLP), através do uso de tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC), verificando possíveis relações com sinais e sintomas clínicos; c) relacionar os mesmos níveis com a volumetria dos canais radiculares (VCR); d) Comparar medidas das lesões utilizando radiografias periapicais (RP) e tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC). Foram selecionados para o estudo trinta dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foram submetidos a TCFC. Após abertura coronária, foi realizada coleta inicial para verificação da presença de infecção nos canais radiculares. Após, procedeu-se o tratamento endodôntico utilizando solução de NaOCl 2,5% e divididos em 3 grupos de acordo com a MIC: Ca(OH)2 - hidróxido de cálcio P.A. + solução salina fisiológica; Ca(OH)2 + GEN - hidróxido de cálcio P.A. + extrato glicólico de gengibre 20% e Ca(OH)2 + CLX - hidróxido de cálcio P.A. + clorexidina gel 2%. Foram realizadas coletas do canal radicular após o PBM e após 14 dias de ação da MIC. Para todas as coletas foram realizados testes de atividade antimicrobiana por cultura microbiológica e análise da quantificação de endotoxinas pelo lisado de amebócitos de Limulus. Foi realizada a VLP e a VCR através da TCFC; e comparadas medidas de segmentação 2D das lesões periapicais das RP e das TCFC. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram: a) presença de microrganismos na coleta inicial variando de 0 - 8,16 x 106 UFC/mL e níveis de endotoxinas de 1,75 - 149 EU/mL; havendo redução significante de seus níveis de ... / The aims of the present study were: a) quantify endotoxins and bacterial CFU counts in primary endodontic infections before and after biomechanical preparation (BP) and after root canal medication (RCM); b) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of periapical bone destruction (VPBD) determined by Cone Beam Computed Tomography (CBCT) analysis as well as with the development of clinical signs and symptoms; c) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of the lumen of the canal (VLC); d) to correlate the size of periapical lesions determined by periapical radiographs images with the CBCT images. Thirty teeth with pulp necrosis and apical periodontitis were selected and submitted to CBCT analysis. After access to pulp cavity, a first root canal sampling was performed in order to determine the presence of root canal infection. Afterwards, BP was performed using 2.5% NaOCl followed by the placement of RCM according to the selection group: Calcium Hydroxide [Ca(OH)2] - Ca(OH)2 + Saline Solution (SSL); Ca(OH)2 + Ginger - Ca(OH)2 + 20% glycolic Ginger extract ; Ca(OH)2 + Chlorhexidine (CHX). A second collect were made after the BP and then the third after 14-days of RCM. Culture analysis was performed in order to determine antimicrobial activity. The levels of endotoxins were determined by the Limulus Ameboyte Lysate assay. The VPBD and the VLC were determined by CBCT-analysis and compared to periapical radiographs. Data were typed on a spreadsheet and statistical analyzed. At the baseline samples, CFU counts and endotoxins levels ranged from 0 - 8.16 CFU/mL and 1.75 -149 EU/mL, respectively. Both contents were reduced after BP and after RCM. Positive correlations were found between the levels of endotoxins and VPBD as well as with previous episode of pain. Thereby, a positive correlation was found between the bacterial...

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-02. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:03Z : No. of bitstreams: 1 000843914.pdf: 1658836 bytes, checksum: 2abc2c67b74bfe3e90f08338f80c9efc (MD5) / Actigen® (ACT) é um prebiótico contendo frações ativas de mananoproteínas (FAMP) e devido ao seu papel na imunomodulação melhora o desempenho produtivo e a saúde intestinal. As frações ativas de mananoproteínas que são derivadas da parede celular e podem ser facilmente adicionados à dieta dos peixes. A sua administração nos sistemas de produção de peixes têm promovido melhores índices de desempenho além de compensar os efeitos indesejáveis do estresse, comuns na piscicultura. Os estudos dos efeitos da administração de FAMP em dietas para peixes ainda são recentes, principalmente com relação à padronização da forma de administração, dosagem e regime alimentar para cada espécie. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos de diferentes concentrações de ACT sobre o desempenho zootécnico, respostas imunológicas e fisiológicas em tilápia-do-Nilo após desafio com o lipopolissacarídeo (LPS). O experimento foi realizado no Laboratório de Aquicultura da Unesp de Dracena, onde foram utilizados 288 juvenis de tilápias (12 animais/caixa) e foi conduzido em um delineamento inteiramente casualizado com 4 tratamentos (0%; 0,04%; 0,06% e 0,08% de ACT) e 6 repetições. Foram realizados dois experimento, sendo que no primeiro foram realizadas duas biometrias aos 30 e 60 dias de experimento, com coletas de amostras de sangue de dois peixes por caixa em cada período. O segundo experimento foi realizado após os 60 dias, no qual os peixes foram desafiados com injeção intraperitoneal com LPS e após 5 e 12 dias da inoculação, foram coletadas amostras sanguíneas de dois peixes por caixa. Foram avaliados o desempenho zootécnico, parâmetros imunológicos, hematológicos e bioquímicos. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias comparadas pelo teste de Tukey (5%), pelo programa estatístico SAS, versão 9.0. O uso de frações... / Actigen® is a prebiotic containing active fractions of mannan rich proteins and due to its role in immunomodulation improves growth performance and intestinal health. The active fractions of mannan rich proteins are derived from the cell wall of yeast Saccharomyces cerevisiae, easily added to the diet of fish, and their use in fish production systems has promoted better performance indices beyong compensating the common undesirable effects of stress in fish farming. Studies of the effects of active fractions of mannan rich proteins in diets for fish are still recent especially regard the standardization of administration route, dosage and diet for each species. The aim of this study was to evaluate the effects of different concentrations of ACT on the immune responses of livestock, physiological and performance of Nile tilapia after challenge with lipopolysaccharide (LPS). The experiment was carried out in the Aquaculture Laboratory of UNESP, Dracena, where 288 juvenile tilapia (12 animals/box) were used in a completely randomized design with 4 treatments (0%, 0.04%, 0.06% and 0.08% ACT) and 6 replications. Two experiments were conducted, in the first were two biometrics at 30 and 60 days of experiment, with collections of two fish blood samples per box in each period. The second experiment was carried out after 60 days, in which the fish were challenged by intraperitoneal injection with LPS and after 5 and 12 days after inoculation, blood samples were collected from two fish per box. The growth performance, immunological, hematological and biochemical parameters were measured. The results obtained were subjected to analysis of variance (ANOVA) and means compared by Tukey test (5%), using the statistical program SAS, version 9.0. The active fractions of mannan rich proteins administration showed some positive effects on the immune parameters, indicating a possible beneficial action in order to ...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-01T14:41:43Z No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Bacillus thuringiensis é uma bactéria Gram positiva, produtora de cristais protéicos ou δ-endotoxinas (toxinas Cry e Cyt) durante a fase de esporulação. As toxinas. Cry apresentam atividade inseticida específica, e as toxinas Cyt apresentam atividade citolítica inespecífica. Algumas proteínas produzidas por B. thuringiensis durante a fase de esporulação que não apresentam caráter inseticida, mas apresentam-se tóxica para células tumorais foram descritas. Essas proteínas receberam o nome de Parasporinas (PS), devido à capacidade de produzir cristais paraesporais e até o momento são classificadas em seis tipos (PS1-PS6). Baculovírus são vírus de insetos usados no controle biológico de pragas da agricultura, porém também têm sido muito utilizados como vetores de expressão de proteínas heterólogas em células de inseto. No presente trabalho, o gene ps2 foi montado, por meio de PCR, através de fragmentos sintetizados a partir de uma sequência lotada no banco de dados, e o produto de PCR foi clonado em um vetor de transferência para construção de um baculovírus recombinante. Após obtenção do vírus recombinante, observou-se que células SF9 quando infectadas com vAcPS2, morriam em um tempo curto de infecção, quando comparado com células infectadas com o vírus selvagem. Após purificação, solubilização e ativação da toxina PS2 recombinante, ensaios de viabilidade celular foram feitos com linhagens de células tumorais, câncer mamário (MCF-7) e câncer mamário metastático (MDA-MB-231), células não tumorais humanas (fibroblastos) e células de inseto (Sf9), confirmando a atividade tóxica de PS2 apenas para as células tumorais. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacillus thunringiensis is a Gram positive bacterium that produces crystal forming proteins called δ-endotoxins (Cry and Cyt toxins), during sporulation phase. Cry toxins show specific insecticidal activity, and Cyt toxins shows non-specific cytolitic activity. Some proteins of B. thuringiensis produced during sporulation have not shown insecticidal activity, but a specific toxic activity to some cancer cells. These proteins were called Parasporins (PS) due to their ability to form paraporal crystals and they are divided in six groups (PS1-PS6). Baculoviruses are insect viruses that have been widely used as biological control of agricultural pests, but also as expression vectors of heterologous proteins in insect cells. In this work, the gene ps2, constructed by PCR, trough fragments synthetized using a gene sequence from a database and cloned in a transfer vector for recombinant virus construction After recombinant virus construction we observed that SF9 cells died faster than cells infected with the wild-type virus. After purification, solubilization and activation of the heterologous protein, cell viability assays was performed with cancer cell lines, breast cancer (MCF-7), metastatic brest cancer (MDA-MB-231), non-tumor human cells (fibroblasts) and insect cells (Sf9) confirming PS2 toxic activity only to cancer cells.

Orientador: Cláudio Antonio Talge Carvalho / Banca: Eduardo Bresciani / Banca: Luis Gustavo Oliveira de Vasconcellos / Resumo: A lesão endo-periodontal é caracterizada pela associação da doença endodôntica e periodontal no mesmo elemento dentário. A evolução dessa lesão ocorre pela infecção por microrganismos, na sua grande maioria gram-negativas anaeróbias. O presente estudo teve como objetivo, identificar os microrganismos presentes em lesões endo-periodontais pelo método do DNA-DNA checkerboard hybridization, avaliar os níveis de endotoxinas pelo ensaio LAL e correlacionar com sinais e sintomas clínicos de pacientes com lesões endo-periodontais. Dez pacientes com lesões endo-periodontais foram selecionados do ICT-UNESP, foram coletadas 10 amostras endodônticas e 10 periodontais, as amostras foram armazenadas e posteriormente realizado os ensaios laboratoriais(LAL para endotoxinas e Checkerboard para microbiológico). Os resultados mostraram maiores níveis de endotoxinas na bolsa periodontal com média e desvio padrão de 39096 ± 39312. A média e desvio padrão dos valores de endotoxinas no canal radicular foram 3240 ± 4001 (significativamente menores p = 0,002). O teste de correlação de Pearson mostrou correlação moderada, com p = 0,084. A espécie P. nigrescens foi associada com a microbiota periodontal (p = 0,0198) enquanto na microbiota endodôntica as espécies E. faecium(p =0,0031), P. acnes(p= 0,0325), G. morbillorum(p=0,0108), C. sputigena(p = 0,0031) e L. buccalis(p = 0,0055), foram fortemente relacionadas. Os microrganismos P. intermedia, V parvula e P. endodalis tiveram pequena correlação quando associadas as microbiotas endodônticas e periodontais. O estudo concluiu que a bolsa periodontal apresenta maiores níveis de endotoxinas em relação ao canal radicular. O estudo sugere que a microbiota das lesões endo-periodontais parece a mesma presente em lesões endodônticas e periodontais separadamentes. No entanto,devido a sua grande prevalência, o complexo laranja parece exercer um papel importante neste tipo de lesão / Abstract: The endo-periodontal lesion is characterized by the association of endodontic and periodontal disease in the same tooth. The evolution of this lesion occurs by the presence of microorganisms with vast majority gram-negative anaerobes. Therefore this study aims to identify the microorganisms in endo-periodontal lesions by DNA-DNA checkerboard hybridization method, evaluate and compare the levels of endotoxins with clinical signs and symptoms. 10 teeth with endo-periodontal lesions in agree with the inclusion criteria were selected from patients in the ICT-UNESP, 10 endodontic and 10 periodontal samples were collected, stored and subsequently performed the laboratory assays. The results showed higher levels of endotoxin in periodontal pockets with mean and standard deviation of 39096 ± 39312. The mean and standard deviation values of endotoxins in root canals were 3240 ± 4001 (significantly lower p = 0.002). The Pearson correlation test showed moderate correlation, with p = 0.084. P. nigrescens species was associated with periodontal microflora (p = 0.0198) whereas in endodontic microbiota the species E. faecium (p = 0.0031), P. acnes (p = 0.0325), G. morbillorum (p = 0.0108) C. sputigena (p = 0.0031) and L. buccalis (p = 0.0055) were strongly correlated. The species P. intermedia, V parvula and P. endodontalis showed low correlation in endo-periodontal microflora. The study concluded that the periodontal pocket has higher levels of endotoxins in relation to the root canal. The microbiota of endo-periodontal lesions seems to be almost the same in their infections separated. The study suggests that the orange complex must play an important role in this type of infection / Mestre

Orientador: Leonardo Susumu Takahashi / Co-orientador: Jaqueline Dalbello Biller Takahashi / Banca: Urbano dos Santos Ruiz / Banca: Fabiana Pilarski / Resumo: Actigen® (ACT) é um prebiótico contendo frações ativas de mananoproteínas (FAMP) e devido ao seu papel na imunomodulação melhora o desempenho produtivo e a saúde intestinal. As frações ativas de mananoproteínas que são derivadas da parede celular e podem ser facilmente adicionados à dieta dos peixes. A sua administração nos sistemas de produção de peixes têm promovido melhores índices de desempenho além de compensar os efeitos indesejáveis do estresse, comuns na piscicultura. Os estudos dos efeitos da administração de FAMP em dietas para peixes ainda são recentes, principalmente com relação à padronização da forma de administração, dosagem e regime alimentar para cada espécie. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos de diferentes concentrações de ACT sobre o desempenho zootécnico, respostas imunológicas e fisiológicas em tilápia-do-Nilo após desafio com o lipopolissacarídeo (LPS). O experimento foi realizado no Laboratório de Aquicultura da Unesp de Dracena, onde foram utilizados 288 juvenis de tilápias (12 animais/caixa) e foi conduzido em um delineamento inteiramente casualizado com 4 tratamentos (0%; 0,04%; 0,06% e 0,08% de ACT) e 6 repetições. Foram realizados dois experimento, sendo que no primeiro foram realizadas duas biometrias aos 30 e 60 dias de experimento, com coletas de amostras de sangue de dois peixes por caixa em cada período. O segundo experimento foi realizado após os 60 dias, no qual os peixes foram desafiados com injeção intraperitoneal com LPS e após 5 e 12 dias da inoculação, foram coletadas amostras sanguíneas de dois peixes por caixa. Foram avaliados o desempenho zootécnico, parâmetros imunológicos, hematológicos e bioquímicos. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias comparadas pelo teste de Tukey (5%), pelo programa estatístico SAS, versão 9.0. O uso de frações... / Abstract: Actigen® is a prebiotic containing active fractions of mannan rich proteins and due to its role in immunomodulation improves growth performance and intestinal health. The active fractions of mannan rich proteins are derived from the cell wall of yeast Saccharomyces cerevisiae, easily added to the diet of fish, and their use in fish production systems has promoted better performance indices beyong compensating the common undesirable effects of stress in fish farming. Studies of the effects of active fractions of mannan rich proteins in diets for fish are still recent especially regard the standardization of administration route, dosage and diet for each species. The aim of this study was to evaluate the effects of different concentrations of ACT on the immune responses of livestock, physiological and performance of Nile tilapia after challenge with lipopolysaccharide (LPS). The experiment was carried out in the Aquaculture Laboratory of UNESP, Dracena, where 288 juvenile tilapia (12 animals/box) were used in a completely randomized design with 4 treatments (0%, 0.04%, 0.06% and 0.08% ACT) and 6 replications. Two experiments were conducted, in the first were two biometrics at 30 and 60 days of experiment, with collections of two fish blood samples per box in each period. The second experiment was carried out after 60 days, in which the fish were challenged by intraperitoneal injection with LPS and after 5 and 12 days after inoculation, blood samples were collected from two fish per box. The growth performance, immunological, hematological and biochemical parameters were measured. The results obtained were subjected to analysis of variance (ANOVA) and means compared by Tukey test (5%), using the statistical program SAS, version 9.0. The active fractions of mannan rich proteins administration showed some positive effects on the immune parameters, indicating a possible beneficial action in order to ... / Mestre

Orientador: Márcia Carneiro Valera / Co-orientador: Frederico Canato Martinho / Banca: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Banca: Luiz Roberto Coutinho Manhães Júnior / Banca: José Flávio Affonso de Almeida / Banca: Renato Miotto Palo / Resumo: Os objetivos do presente estudo foram: a) quantificar endotoxinas e carga microbiana nas infecções endodônticas primárias, antes e após o preparo biomecânico (PBM) e uso de diferentes medicações intracanais (MIC); b) relacionar níveis de endotoxinas e microrganismos cultiváveis com a volumetria da lesão periapical (VLP), através do uso de tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC), verificando possíveis relações com sinais e sintomas clínicos; c) relacionar os mesmos níveis com a volumetria dos canais radiculares (VCR); d) Comparar medidas das lesões utilizando radiografias periapicais (RP) e tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC). Foram selecionados para o estudo trinta dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foram submetidos a TCFC. Após abertura coronária, foi realizada coleta inicial para verificação da presença de infecção nos canais radiculares. Após, procedeu-se o tratamento endodôntico utilizando solução de NaOCl 2,5% e divididos em 3 grupos de acordo com a MIC: Ca(OH)2 - hidróxido de cálcio P.A. + solução salina fisiológica; Ca(OH)2 + GEN - hidróxido de cálcio P.A. + extrato glicólico de gengibre 20% e Ca(OH)2 + CLX - hidróxido de cálcio P.A. + clorexidina gel 2%. Foram realizadas coletas do canal radicular após o PBM e após 14 dias de ação da MIC. Para todas as coletas foram realizados testes de atividade antimicrobiana por cultura microbiológica e análise da quantificação de endotoxinas pelo lisado de amebócitos de Limulus. Foi realizada a VLP e a VCR através da TCFC; e comparadas medidas de segmentação 2D das lesões periapicais das RP e das TCFC. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram: a) presença de microrganismos na coleta inicial variando de 0 - 8,16 x 106 UFC/mL e níveis de endotoxinas de 1,75 - 149 EU/mL; havendo redução significante de seus níveis de ... / Abstract: The aims of the present study were: a) quantify endotoxins and bacterial CFU counts in primary endodontic infections before and after biomechanical preparation (BP) and after root canal medication (RCM); b) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of periapical bone destruction (VPBD) determined by Cone Beam Computed Tomography (CBCT) analysis as well as with the development of clinical signs and symptoms; c) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of the lumen of the canal (VLC); d) to correlate the size of periapical lesions determined by periapical radiographs images with the CBCT images. Thirty teeth with pulp necrosis and apical periodontitis were selected and submitted to CBCT analysis. After access to pulp cavity, a first root canal sampling was performed in order to determine the presence of root canal infection. Afterwards, BP was performed using 2.5% NaOCl followed by the placement of RCM according to the selection group: Calcium Hydroxide [Ca(OH)2] - Ca(OH)2 + Saline Solution (SSL); Ca(OH)2 + Ginger - Ca(OH)2 + 20% glycolic Ginger extract ; Ca(OH)2 + Chlorhexidine (CHX). A second collect were made after the BP and then the third after 14-days of RCM. Culture analysis was performed in order to determine antimicrobial activity. The levels of endotoxins were determined by the Limulus Ameboyte Lysate assay. The VPBD and the VLC were determined by CBCT-analysis and compared to periapical radiographs. Data were typed on a spreadsheet and statistical analyzed. At the baseline samples, CFU counts and endotoxins levels ranged from 0 - 8.16 CFU/mL and 1.75 -149 EU/mL, respectively. Both contents were reduced after BP and after RCM. Positive correlations were found between the levels of endotoxins and VPBD as well as with previous episode of pain. Thereby, a positive correlation was found between the bacterial... / Doutor

Orientador: Eduardo Bresciani / Co-orientador: Frederico Canato Martinho / Banca: João Maurício Ferraz da Silva / Banca: César Rogério Pucci / Resumo: A cárie é uma doença infectocontagiosa multifatorial. Em cavidades profundas, as lesões cariosas geralmente estão associadas a quadros de sintomatologia pulpar dolorosa. O objetivo deste estudo foi determinar a diversidade bacteriana e a quantidade de endotoxinas e casos de cáries sintomáticas e assintomáticas. Para este estudo foram selecionados 20 pacientes com lesões cariosas profundas com sensibilidade dolorosa compatível com pulpite reversível (n=10) e sem sintomatologia dolorosa (n=10). As amostras de dentina cariada foram obtidas com o auxílio de colheres de dentina estéreis e apirogénicas e foram coletadas em dois momentos: antes e após a remoção convencional do tecido cariado. Estas amostras foram divididas em duas alíquotas, que foram em seguida submetidas ao teste Checkerboard (alíquotas contendo 150 ul de TE e 100 uL de NaOH a 0,5 M) e teste cinético cromogénico LAL (Alíquotas com 1 ml de soro apirogênico) para determinação do perfil microbiano e quantificação de endotoxina, respectivamente. O teste estatístico Mann Whitney não mostrou diferença entre a camada de dentina superficial e profunda para as bactérias estudadas. Em relação ao fator sensibilidade as bactérias Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia buccalis e Lactobacillus species foram as que apresentaram diferenças estatisticas significantes, sendo mais presente em pacientes com sintomatologia. Para as endotoxinas, os dentes sintomáticos resultaram em maiores quantidades de endotoxinas (p = 0,047). Dentes sintomáticos apresentaram 4,13 log 10 EU / mg dentina, enquanto o nível de endotoxinas para os dentes dentes assintomáticos foi de 3,45 log 10 EU / mg dentina. Dentinas coletadas em diferentes áreas apresentaram quantidades similares de endotoxinas (p = 0,139). A quantidade de bactérias não parece estar relacionada com a sintomatologia de lesões cariosas profunda, enquanto a quantidade de... / Abstract: Caries is a multifactorial infectious disease. In deep cavities, carious lesions are usually associated with scenarios of pulp painful symptoms. The objective is to determine bacterial diversity and endotoxin levels in cases of sintomatic and assintomatic caries. Twenty patients with deep carious lesions with soreness compatible with reversible pulpitis (n = 10) and without pain symptoms (n = 10). Carious dentine samples were obtained with the aid of sterile dentine and apyrogenic spoons and harvested in two steps: before and after conventional caries removal. These samples were divided into two aliquots, which were then subjected to the checkerboard(aliquots contained in 150µl of TE and 100µl of 0.5 M NaOH) and kinetic chromogenic LAL test(aliquots with 1 ml of apirogenic serum) for determination of microbial profile and quantitation of endotoxin, respectively. By Mann Whitney test showed no difference between the superficial and deep dentin layer for the studied bacteria. In relation to factor sensitivity bacteria Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia buccalis e Lactobacillus species were the ones that showed statistically significant differences, being more present in patients with symptoms. For the endotoxins, symptomatic teeth resulted in greater quantity of endotoxins (p=0.047). Symptomatic teeth presented 4.13 log10 EU/mg dentin, while endotoxin level for no symptomatic teeth was 3.45 log10 EU/mg dentin. Dentin collected in different areas presented similar amount of endotoxins (p=0.139). The amount of bacteria does not seem to be related to symptomatology of deep carious lesions, while endotoxins quantity is greater in symptomatic scenarios / Mestre

Orientador : Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T02:17:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_RomiLamb_M.pdf: 3093253 bytes, checksum: 4f20326cbb9b0af4dab6d00f6bd2178e (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A contaminação por endotoxinas (ET) em produtos para injeção parenteral é um problema para a indústria farmacéutica devido à dificuldade de remoção destas moléculas e sua alta toxicidade. Diversas técnicas têm sido estudadas visando a despirogenação (remoção de ET) de soluções protéicas, dentre as quais a cromatografia em membranas apresenta-se como promissora. Neste trabalho, membranas porosas de quito sana reticuladas com epic1oridrina foram obtidas com boa característica de vazão, visando a despirogenação de soluções tampão, de soro fisiológico e de soluções de IgG. Experimentos de filtração com solução de IgG humana diluída em tampão foram realizados para verificar a existência de adsorção da IgG na membrana, sendo que as soluções tamponantes que favoreceram uma menor adsorção foram fosfato de sódio pH 8,0 e Tris-HCl pH 7,0 (0,49 mg/cm3 e 0,73 mg/cm3, respectivamente). Os resultados dos experimentos de adsorção com soluções tampão contaminadas artificialmente com ET revelaram que a solução tamponante Tris-HCl pH 7,0 favorecia uma maior adsorção de ET na membrana de quito sana, obtendo valores de concentração no filtrado de 0,58 EU/mL e 8,36 EU/mL para alimentações, respectivamente, de 18,63 EU/mL e 541,40 EU/mL. Testou-se a influência da presença de sal no meio através da remoção de ET de soro fisiológico contaminado artificialmente, resultando em uma adsorção, das ET alimentadas à membrana, de 50,68% em baixa concentração de ET (42,49 EU/mL) e de 92,23% em alta concentração (889,61 EU/mL). A presença de IgG (1 mg/roL) em solução tampão Trís-HCl pH 7,0 reduziu a adsorção das endotoxinas permitindo obter filtrados com concentração de 4,05 e 71,15 EU/mL de uma alimentação de 116,43 e 796,93 EU/mL, respectivamente, e recuperação protéica, na ordem, de 100 e 96,37%. Em face destes dados, percebe-se que a membrana de quito sana tem potencial para o uso como matriz de adsorção visando a remoção de ET de soluções, embora na presença de proteína, no processo proposto, não se tenha alcançado valores que permitam uma injeção parenteral / Abstract: Endotoxin (ET) contamination in intravascular injection products is a problem for the pharmaceutical industry due to the difficulty of its removal and elevated toxicity. Many techniques have been studied aiming the depyrogenation (ET removal) of protein solutions, among them the membrane chromatography seems to be a promising one. In this work, cross-linked macroporous chitosan membranes were obtained having a good flow dynamics, focusing the depyrogenation of buffering solutions, physiologic serum and human IgG solutions. Filtration experiments with human IgG diluted in buffering solution were conducted to verify the IgG adsorption on the membrane. The buffering solutions that resulted a lower IgG adsorption were sodium phosphate pH 8.0 and Tris-HCl pH 7.0 (0.49 mg/cm3 and 0.73 mg/cm3 , respectively). The adsorption experiments results using buffer solutions artificially contaminated with ET showed that the Tris-HCl pH 7.0 buffering solution favoured a higher ET adsorption on the chitosan membrane being the filtrated concentrations 0.58 EU/mL and 8.36 EU/mL to the feed flow of 18.63 EU/mL and 541.4 EU/mL, respectively. The influence of salt presence in the solution was tested for the ET removal of artificially contaminated physiologic serum resulting in a 50.68% adsorption at a low ET concentration (42.49 EU/mL) and 92.23% at a high ET concentration (889.61 EU/mL). The IgG presence (1 mg/mL) in Tris-HCl pH 7.0 buffer reduced the ET adsorption so that a filtrated concentration of 4.05 and 71.15 EU/mL were obtained from a 116.43 and 796.93 EU/mL feed, respectively, and a protein recovery of 100% and 96.37%. These results showed that chitosan membrane has a potential to be used as an adsorption matrix for ET removal in solutions, eventhought safety concentration values that allows a parenteral injection have not been achieved in samples containing proteins / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Submitted by Nayara Passos (nayara.passos@ufpe.br) on 2015-03-05T12:28:50Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Jordana da Silva.pdf: 1368489 bytes, checksum: 7de425e62adee4cedfd1e0797cac1e78 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:28:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Jordana da Silva.pdf: 1368489 bytes, checksum: 7de425e62adee4cedfd1e0797cac1e78 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES / Neste trabalho, relatamos o desenvolvimento de um novo biossensor eletroquímico com base na interação de Concanavalina A (ConA) e filmes finos de polianilina (PANI) para detecção de lipopolissacarídeos (LPS) de Escherichia coli e ácido lipoteicóico de Staphylococcus aureus. O biossensor impedimétrico foi fabricado por automontagem da lectina ConA em eletrodo de aço modificado com PANI por meio de ligação covalente através do glutaraldeído. Espectroscopia de impedância elétrica (EIE), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia Raman foram utilizadas para caracterizar o processo de montagem do eletrodo modificado e demonstraram que a ConA foi capaz de interagir com o LPS e ácido lipoteicóico testados. Em adição, medidas de EIE revelaram que a resistência à transferência de carga (RCT) aumenta consideravelmente após a reação da lectina com açúcares específicos presentes na molécula de LPS e ácido lipoteicóico. Os resultados mostraram que a lectina ConA manteve a sua atividade biológica e mudou a resposta eletroquímica. O bioeletrodo exibe uma resposta de impedância eletroquímica a lectina-lipopolissacarídeo/ácido lipoteicóico, num intervalo linear, com valores máximos de RCT em 200 μg/mL para E. coli (1,50 kΩ) e S. aureus (1,80 kΩ). Assim, o sistema de reconhecimento proporciona uma interface biomimética adequada para a detecção de componentes de bactérias gram-positivas e gram-negativas.

Em países industrializados, as doenças pulmonares são as que mais se destacam quando o assunto é doença ocupacional. Entre os técnicos, cuidadores de animais, médicos e cientistas, as doenças respiratórias e alérgicas a animais de laboratório representam a principal doença ocupacional. Entre os agentes presentes na sujeira orgânica, as endotoxinas são as mais relacionadas às respostas inflamatórias e causadoras de uma série de doenças respiratórias. As endotoxinas, componentes externos das bactérias gram-negativas, são encontradas em várias concentrações em suspensão no ar ou depositadas na poeira do chão, em materiais e equipamentos, no ambiente domiciliar, urbano, rural e em alguns estabelecimentos. É inevitável a exposição à endotoxina, no entanto, o nível de exposição das vias aéreas pode ser muito variado. Alguns estudos mostraram a correlação dos sintomas apresentados pelos trabalhadores de laboratórios ou biotérios com o nível de exposição às endotoxinas. OBJETIVOS: Avaliar a exposição às endotoxinas, presentes na poeira de laboratórios e biotérios e a sua relação com asma, rinite e atopia apresentadas pelos trabalhadores. MÉTODOS: Trata-se de um estudo transversal, realizado na Universidade de São Paulo, campus Ribeirão Preto (USP-RP) e na Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Foram coletadas amostras de poeira do chão de laboratórios e biotérios que continham rato, camundongo, cobaia, coelho ou hamster; e em laboratórios e salas administrativas que não tinham contato algum com esses animais. As amostras de poeira foram analisadas e a quantidade de endotoxina foi dosada pelo método Limulus amebocyte lysate (LAL). Esta quantidade foi relacionada com variáveis clínicas dos trabalhadores destes locais (sintomas, reatividade brônquica, espirometria e testes alérgicos). RESULTADOS: Foram coletadas amostras de poeira de 145 locais de trabalho. Destes, 74 (51%) da USP-RP e 71 (49%) da UNICAMP. Noventa e dois (63%) locais de trabalho continham animais de laboratório (57 da USP-RP e 35 da UNICAMP) e 53 não os continham (17 da USP-RP e 36 da UNICAMP). Foram utilizados os dados de 751 trabalhadores, 412 formaram o grupo exposto a animais de laboratório e 339 o grupo não exposto. O grupo exposto a animais de laboratório apresentou maior quantidade de endotoxina, 55 ± 79 UE por mg de poeira, quando comparado com o grupo não exposto, 19 ± 27 UE/mg (p < 0,001 pelo teste t de Student). Quando estratificada, a quantidade de endotoxina em elevada e baixa quantidade, a alta concentração (acima de 20,4 UE/mg) de endotoxina se associou ao relato de sibilos nos últimos 12 meses. Ou seja, 27% dos trabalhores expostos a elevadas concentrações relataram sibilos (p < 0,01 pelo teste do qui-quadrado). Porém, a quantidade de endotoxina não se associou com sintomas de rinite, com atopia, com o teste de hiperreatividade brônquica positiva. CONCLUSÃO: A exposição à endotoxina apresenta efeito no sistema respiratório dos trabalhadores mesmo não tendo se associado à asma. A alta concentração de endotoxina se associou com a presença de sibilos, ou seja, os trabalhadores de biotérios e de laboratórios que tem contato direto com animais de laboratório estão mais susceptíveis a apresentarem sibilos ao longo do ano, sendo necessárias medidas de prevenção para estes trabalhadores. / Respiratory diseases are the most common occupational illnesses in industrialized countries and, among them, asthma and allergies are highly prevalent. Respiratory diseases and laboratory animal allergies represent a major occupational illness among technicians, animal caretakers, doctors and scientists whose work requires such exposure. Among particles present on organic dust, endotoxin is the most related to the inflammation witch cause a numerous respiratory diseases. Endotoxin from gram-negative bacterias are airborne and found in different concentrations in dust and on the ground of home and rural environment, indoor or outdoor living areas. Exposure to endotoxin is unpreventable, but the degree of exposure may vary. Some studies have shown correlation between workers symptoms with degree of exposure. AIMS: Our aim was to evaluate amount of endotoxin exposure in laboratories and animal facilities and to test its association with asthma, rhinitis, and atopy presented by workers. METHODS: This is a cross-sectional study performed in the University of São Paulo, campus of Ribeirão Preto (USP-RP) and in the State University of Campinas (Unicamp). Dust samples were collected from laboratories and animal facilities with rat, mouse, guinea pig, rabbit or hamster. We also sampled workplaces without animals. These samples were analyzed by the method of Limulus amebocyte lysate (LAL). The concentration of endotoxin detected in those workplaces were tested for association with symptoms, bronchial hyperresponsiveness, spirometry data and skin prick test results. RESULTS: One hundred, forty-five workplaces had their dust sampled: 74 (51%) in USP-RP and 71 (49%) in Unicamp. Among those, 92 (63%) workplaces had laboratory animals (57 in USP-RP and 35 in UNICAMP) and 53 (37%) did not have animals. These workplaces had 751 workers or students, 412 were animal handlers and 339 were nonhandlers. Animal handlers workplaces were exposed to higher concentrations of endotoxin 55 ± 79 UE/mg as compared with the non-handlers group 19 ± 27 UE/mg (p < 0.001, Studentst test). We divided endotoxin concentration into two leves: high (> 20.4 UE/mg) and low concentration. The high concentration associated with wheezing prevalence, i.e. 27% of animal handlers exposed to high concentration reported wheezing in the last 12 months (p < 001, chi-squared test). The concentration of endotoxin was not associated with symptoms of rhinitis, atopy or bronchial hyperresponsiveness. CONCLUSION: Exposure to endotoxin has effect on workers respiratory system, although it is not associated with asthma. Higher endotoxin concentration is associated with wheezing. Therefore, animal handlers are prone to present wheezing and preventive measures are necessary for these workers.