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Efeitos da restrição proteica materna sobre o desenvolvimento do ducto mesonéfrico e do epidídimo nas fases iniciais em ratos wistarSantos, Talita de Mello. January 2019 (has links)
Orientador: Raquel Fantin Domeniconi / Resumo: O ambiente desempenha papel crucial durante o desenvolvimento fetal, podendo influenciar diretamente a saúde da prole. Assim, o estado nutricional materno é essencial para a saúde e bem-estar do feto. Há relatos de alterações em parâmetros relacionados à função epididimária, em animais adultos, cujas mães sofreram restrição de proteína durante as fases de gestação e lactação. A origem das alterações funcionais no epidídimo pode estar relacionada à fatores hormonais, bem como na expressão de seus receptores, e por meio da modulação de moléculas de sinalização como FGFs (Fator de crescimento de Fibroblastos), vias da ERK e Wnt, e à funcionalidade da Src, ou seja, proteínas relacionadas aos processos do desenvolvimento epididimário. No entanto, não há informações que esclareçam as causas dessas alterações ou como a restrição proteica atua ao longo do desenvolvimento pré e pós-natal do epididímo. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o impacto da restrição proteica materna, no ducto mesonéfrico e no epidídimo nas fases iniciais do desenvolvimento. Assim, ratas Wistar prenhes foram divididas em dois grupos experimentais que receberam uma dieta de normoproteica (NP; 17% de proteína; n=19) ou hipoproteica (HP; 6% de proteína; n=19) durante a gestação e a lactação. Cinco ratas prenhes de cada grupo foram eutanasiadas para coleta dos ductos mesonéfricos dos embriões no dia gestacional (DG)17,5 e as demais permaneceram até os dias pós-natais (DPN) 7 ou 14. Os filhotes mach... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The environment plays a crucial role during fetal development and can directly influence the health of the offspring. Thus, maternal nutritional status is essential for fetus' health and well-being. There have been reports of alterations in parameters related to epididymal function in adult animals whose mothers suffered protein restriction during the gestation and lactation. The origin of the functional alterations in the epididymis can be related to the hormonal factors, as well as in the expression of its receptors, and on signaling molecules modulation like FGFs (Fibroblast Growth Factor), ERK and Wnt pathways, and functionality of Src, or proteins related to epididymal development. However, there is no information to clarify the causes of these changes or how protein restriction acts throughout pre and postnatal development. The aim of this study was to evaluate the impact of maternal protein restriction on the mesonephric duct and in the early stages of epididymal development. Pregnant female Wistar rats were divided into two groups that received either normoprotein (17%; NP) or low-protein (6%; LP) diet ad libitum during gestation and lactation. Five pregnant rats from each group were euthanized to collect the mesonephric ducts on gestational day (DG) 17.5 and the others rats remained until the postnatal days (PND) 7 or PND14. The male offspring had their biometric parameters verified and were euthanized. Blood was collected for sex hormones analysis and genital organs... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Estrutura e ultraestrutura do epitélio epididimário de búfalos (Bubalus bubalis) em diferentes idadesSANTOS, Jeannie Nascimento dos 17 February 1995 (has links)
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Previous issue date: 1995-02-17 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A regionalização do epidídimo de búfalos das raças Mediterrânea (Me), Murrah (Mu) e mestiços Me x Mu foi estudada entre as idades de quatro a trinta e seis meses. Os animais foram agrupados em duas faixas etárias: pré e pós-púberes e os epidídimos foram divididos em 7 sub-regiões denominadas de A a G. Cada sub-região foi analisada sob microscopia de luz e eletrônica de transmissão. A microscopia de luz inclui técnica de rotina para coloração com Hematoxilina e Eosina, histoquímica com P AS e análise morfométrica para diâmetros de túbulo e lúmen e alturas de epitélio e estereocílios. À microscopia eletrônica foram analisados os aspectos ultraestruturais dos tipos celulares do epitélio epididimário e duetos eferentes. Ao longo do epidídimo, à microscopia de luz, observou-se em ambas as faixas etárias, células Principais (P), Basais (B), Apicais (A) e leucócitos intraepiteliais (LI). Figuras mitóticas no terço apical do epitélio também estavam presentes, sendo mais numerosas nas sub-regiões B e C, principalmente em búfalos prépúberes. A análise histoquímica revelou a existência de atividade secretória a partir dos 5 meses de idade, principalmente na sub-região A, a qual contém os duetos eferentes e nestes a atividade se torna cada vez maior com o amadurecimento do animal. Através da análise morfométrica, observou-se que os búfalos em pré-puberdade já possuem bem definidas as variações dos diâmetros tubular e lurninal e das alturas de epitélio e estereoecílios, que se mostraram semelhantes ao observado nos animais pós-púberes. Os diâmetros tubular e lurninal são crescentes entre as sub-regiões A e G, enquanto as alturas de epitélio e estreocílios apresentam um comportamento contrário; mais, em ambos os aspectos morfométricos existe uma diferença significativa (p<O,O5), considerando-se as sub-regiões entre as faixas etárias. Os aspectos ultraestruturais do epitélio em pré e pós-púberes, não mostraram diferença entre A e P; as células B se assemelharam a células de reserva enquanto LI se assemelharam a linfócitos e macrófagos. As células P apresentaram características secretórias e absortivas que variaram de intensidade entre as sub-regiões, especialmente nos búfalos pó-spúberes. O animal de quatro meses de idade já apresentou grande atividade epitelial nas sub-regiões da cauda (F e G) e na sub-região G, possui volumosas estruturas paracristalinas intracitoplasmáticas e intranucleares, também observadas nas sub-regiões E, F e G dos animais pós-púberes. Estas estruturas estão associadas possivelmente ao armazenamento de proteínas / The zonation of the buffalo epididymis of Mediterranea (Me), Murrah (mu) breeds and croosbreed Me x Mu was studied in 4 to 36 month old animals. These buffalos were c1assified in two groups, the animals which have not reached puberty (sexually immature) and animals (mature animals) and their epididymis was divided in 7 subregions called A to G. each subregion was analysed with and transmission electron microscopy. Light microscopy inc1uded routine staining with Hematoxilin & Eosin (HE), histochemistry with P AS and morphometric analysis for tubular and luminal diameters and height of epithelium and stereocilia. Throughout the epididymary tubule it was observed with light microscopy that tubules of alI ages have Principal cell (P), basal cell (B), Apical ceeII (A) and intraepithelialleukocytes (LI). Mitotic figures in the apical region of the epithelium are also found and are more numerous in the B and C subregions, specially in buffalos between 5 and 9 months of age. Histochemical analysis revealed the existence of secretory activity from the 5th month of age, principally in the A subregion, where the activity increases with sexual maturation. Morphometric analysis supports the idea that the buffalos which have not reached puberty already havee weell determined diameters and height variations of the tubule, lumen, epithelium and stereocilia. These variations were similar to that observed in buffalos after puberty. Tubular and luminal diameters increase from the A to G subregions while the height of epithelium and stereocilia diminish. However, in both morphometric features a significant difference (p<O.O5) was verified between the subregions of the animals sexually immature and animals after puberty. Ultraestructural features of the epididymary epithelium in both age ranges reveal no differences among the A and P cells; B cells appear to be reserve cells, while LI are similar to lymphocytes and macrophages. In P cells Llltrastructural features suggestive of secretory and absorptive activities were found in varying intensities in alI subregion, specially in buffalos after puberty. The 4 month old mimal already had an accentuated epithelial activity in its caudal subregions (P and G). The G subregion had large cytoplasmic and intranuc1ear paracristalline structures, similar to that Jbserved in E, P and G subregions of buffalos after puberty. These structures are probably !lssociated protein storage.
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Estudo in vitro da fertilidade de espermatozoides criopreservados obtidos na cauda do epidídimo de tourosALMEIDA, Felipe Costa 26 February 2013 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-08T14:39:09Z
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Previous issue date: 2013-02-26 / This work aimed to study fertility of sperm obtained from epididymis tail of Nelore bulls and subjected to cryopreservation in extenders with three different concentrations of glycerol, and stabilization times at 5 °C and antioxidants addition to semen extender. Epididymides were obtained from slaughterhouse up to one hour after the death of the animal, placed in individual plastic bags and transported in box at room temperature (28 °C). At the laboratory, spermatozoa were recovered from epididymis tail using flotation technique and then diluted in Tris-yolk egg. In experiment 1 three concentrations of glycerol (3%, 5% and 7%) was evaluated at different stabilization times (0h, 2h and 4h). In the second experiment was evaluated the effect of adding enzymatic antioxidants in epididymal spermatozoa cryopreservation, resulting in following experimental groups: (Control; CAT 50 and 100 U/mL, and SOD 50 and 100 U/mL) at a concentration of 60 x 106 sperm/mL, packaged in straws (0.25 mL) and frozen in automated system. In both experiments, semen samples were thawed at 37 °C/30 sec was evaluated for plasma membrane integrity (PMi), acrosomal integrity (Aci), mitochondrial membrane potential (MMP) and sperm kinematics. In Experiment 1, PMi and Aci analyzes demonstrated values lower (P<0.05) for glycerol 3%, at stabilization time at 4h compared to other times. In kinematic evaluation, sperm values were lower (P<0.05) for BCF parameter in glycerol 3% and 7% groups at 2h of stabilization time compared to glycerol 5%; for ALH, glycerol 3% group in stabilization time at 4h demonstrated lowest (P<0.05) compared to other groups. Glycerol 5% group, settling time 0h, showed lower values (P <0.05) for the hPMM and Aci parameters, when compared to other groups. For IVF experiment, only glycerol 5% at stabilization time at 4h was used. Forty percents of embryonic viability were obtained from oocytes used. In experiment 2, parameters of MT, MP, VCL, VSL, VAP, STR, ALH and BFC did not differ (P> 0.05) between control and treated groups. However, significant differences (P <0.05) were observed between groups for Linearity (LIN) and oscillation index (WOB), being less than 100 SOD treatment (P<0.05) than other groups. Addition of SOD 100 determined lower (P<0.001) percentages of blastocysts post-cleavage. Based on results of kinematic and in vitro fertilization, it is possible to conclude that spermatozoa cryopreservation obtained from epididymis tail of bulls should be performed using extender with glycerol at 5% of concentration and stabilization time at 5 °C during 4h. Addition of CAT concentrations of 50 and 100 U/mL and SOD at concentration of 50 U/mL did not affect the sperm quality. Addition of SOD at a concentration of 100 U/mL reduces fertility of epididymal sperm after cryopreservation. However, it is noteworthy that sperm obtained from epididymis tail of bulls can be successfully used in IVF programs. / Este trabalho teve como objetivo estudar a fertilidade de espermatozoides obtidos da cauda do epidídimo de touros da raça Nelore e submetidos à criopreservação em diluentes com três diferentes concentrações de glicerol, tempos de estabilização a 5 °C e adição de antioxidantes ao diluidor de sêmen. Os epidídimos foram obtidos em matadouro, até uma hora após a morte do animal, colocados em sacos plásticos individuais e transportados em caixa térmica em temperatura ambiente (28 ºC). No laboratório, os espermatozoides foram recuperados da cauda do epidídimo utilizando a técnica de flutuação e, a seguir, diluídos em Tris-gema. No experimento 1 foi avaliado diferentes concentrações de glicerol (3%, 5% e 7%) em diferentes tempos de estabilização (0h, 2h e 4h). No experimento 2 foi avaliado o efeito da adição de antioxidantes enzimáticos na criopreservação de espermatozoides epididimários, constituindo os seguintes grupos experimentais: (Controle; CAT 50 e 100 U/mL; SOD 50 e 100 U/mL), na concentração de 60 x 106 espermatozoides/mL, acondicionados em palhetas (0,25 mL) e congelados em método automatizado. Em ambos os experimentos, as amostras de sêmen foram descongeladas a 37 °C/ 30 s e avaliadas quanto a integridade de membrana plasmática (iMP), integridade acrossomal (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM) e cinética espermática. No experimento 1, as análises de iMP e iAc apresentaram valores inferiores (P<0,05) para o glicerol 3%, no tempo de 4h em comparação aos demais tempos de estabilização. Na avaliação da cinética espermática, foram encontrados valores inferiores (P<0,05) para o parâmetro BCF nos tratamentos glicerol 3% e 7%, no tempo de 2h em comparação ao do glicerol 5%; para ALH, o grupo glicerol 3%, no tempo 4h de estabilização apresentou menor valor (P<0,05) em relação aos demais grupos. O grupo glicerol 5%, no tempo de estabilização 0h, apresentou valores inferiores (P<0,05) para os parâmetros de aPMM e iAc, quando comparado aos demais grupos. Para a FIV foi utilizado o grupo glicerol 5%, no tempo de estabilização 4h. Foram obtidos 40% de viabilidade embrionária dos oócitos utilizados. No experimento 2, os parâmetros de MT, MP, VCL, VSL, VAP, STR, ALH e BFC não diferiram (P>0,05) entre o grupo controle e os grupos tratados. Todavia, diferenças significativas (P<0,05) foram observadas entre os grupos para Linearidade (LIN) e no índice de oscilação (WOB), sendo o tratamento SOD 100 inferior (P<0,05) aos demais grupos. A adição de SOD 100 determinou ainda menores (P<0,001) porcentagens de blastocistos pós-clivagem. Com base nos resultados de cinética e fertilização in vitro, é possível concluir que a criopreservação de espermatozoides obtidos da cauda do epidídimo de touros deve ser realizada utilizando diluidor com glicerol na concentração de 5% e tempo de estabilização a 5 °C de 4h. A adição de CAT nas concentrações de 50 e 100 U/mL e SOD na concentração de 50 U/mL não influencia na qualidade espermática. A adição de SOD na concentração de 100 U/mL reduz a fertilidade dos espermatozoides epididimários pós-criopreservação. Todavia, ressalta-se que espermatozoides obtidos da cauda do
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Influência da dieta de cafeteria sobre a morfologia e expressão de il6 e aquaporinas 1 e 9 no epidídimo de ratos Wistar / Influence of cafeteria diet on the morphology and expression of IL6 and aquaporins 1 and 9 in the epididymis of Wistar ratsMata, Patricia Terron Ghezzi da 16 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-16 / The increase of fat tissue, in obesity, can be associated to physiological alterations, including important modifications in the concentration of circulating hormones, including the sexual steroid hormones. The epididymis, organ of the male genital system, is androgynous-dependent, therefore, susceptible to resulting modifications of sexual steroids hormones concentrations, which can compromise its main functions: transport, maturation, maintenance, protection and storage of the spermatozoids. The water transporting, in the epididymis, is essential to form the adequate luminal environment so the epididymal and spermatozoid related functions can happen; thus, alterations in aquaporins (AQPs), may intervene in the homeostasis of the duct and, consequently, negatively affect fertility. The accumulation of fat may increase the local temperature and alter the epididymal functions and, even, influence in the synthesis and secretion of cytokines such as the interleukin-6 (IL6), due to the chronicle inflammatory estate of low intensity as a consequence of obesity. The objective of this study was to evaluate the influence of the cafeteria diet over the morphology of the coating epithelium of the epididymal duct of rats and about the expression of IL6 and AQPs 1 and 9 in the mentioned epithelium. The analysis were made using tissue samples of the epididymis of Wistar rats of the groups control (CON, animals fed with the pattern diet) and cafeteria (CAF, animals fed with a cafeteria diet) treated throughout the experimental period of 24 weeks. The samples were submitted to a histological routine and immunohistochemical reactions for morphological, morphometric and the expression of IL6 and AQPs 1 and 9 analysis. The analysis evidenced a modification in the relative cellular distribution, with decrease of basal cells in the region of the epididymal body, and a significant increase of halo cells in the epididymal segments initial, head and tail of the CAF animals. The luminal diameter and the epithelial height didn t show significant differences between the animals. The intense
expression of IL6 in the initial segment of the CAF animals was the outstanding result for this interleukin. The expression of AQP1 was altered in the CAF group animals, in general, with bigger expression in the vascular channels, mainly, the initial segment and the head; besides the bigger expression in the peritubular cells in the initial segment. The expression of AQP9 was altered only in the initial segment of the CAF group, which reactivity was average, while the reactivity was intense in this segment in the animals of the CON group. The results obtained indicate that the cafeteria diet promoted segment-specific alterations in the distribution of basal cell and halo and expression of IL6 and AQPs 1 and 9. These results allow us to deduce that the increase of body mass, induced by a cafeteria diet may promote alterations in the epididymal luminal environment with possible damage in the transport, maturation, maintenance, protection and storage of the spermatozoids. In order to enlighten the extension of the damage caused by the alterations resulting from the cafeteria diet, new studies such as epididymal biochemical alterations, ultrastructural analysis of the epididymal cell types and morphology and motility of the spermatozoids are necessary / O aumento de tecido adiposo, na obesidade, pode ser associado a alterações fisiológicas, incluindo modificações importantes nas concentrações circulantes de hormônios, inclusive dos hormônios esteroides sexuais. O epidídimo, órgão do sistema genital masculino, é andrógeno-dependente, portanto, susceptível a modificações resultantes das alterações nas concentrações de hormônios esteroides sexuais, as quais podem comprometer suas principais funções: transporte, maturação, manutenção, proteção e armazenamento dos espermatozoides. O transporte de água, no epidídimo, é essencial para formar o ambiente luminal adequado para que as funções epididimárias e relativas aos espermatozoides sejam realizadas; assim, alterações das, aquaporinas (AQPs), podem intervir na homeostase do ducto e, consequentemente, afetar negativamente a fertilidade. O acúmulo de gorduras pode aumentar a temperatura local e alterar as funções epididimárias e, ainda, influenciar na síntese e secreção de citocinas como a interleucina-6 (IL6), em razão do estado inflamatório crônico de baixa intensidade em consequência da obesidade. O objetivo este estudo foi avaliar a influência da dieta de cafeteria sobre a morfologia do epitélio de revestimento do ducto epididimário de ratos e sobre a expressão de IL6 e de AQPs 1 e 9 no referido epitélio. As análises foram realizadas utilizando amostras teciduais do epidídimo de ratos Wistar dos grupos controle (CON, animais alimentados com dieta padrão) e cafeteria (CAF, animais alimentados com dieta de cafeteria), tratados pelo período experimental de 24 semanas. As amostras foram submetidas à rotina histológica e reações imunohistoquímicas para análises morfológica, morfométrica e da expressão de IL6 e AQPs 1 e 9. As análises evidenciaram uma modificação na distribuição celular relativa, com diminuição de células basais na região de corpo epididimário, e aumento significativo de células halo no segmento inicial, cabeça e cauda epididimária dos animais CAF. O diâmetro luminal e altura epitelial não
apresentaram diferenças significativas entre os grupos experimentais. Houve aumento na expressão de IL6 no segmento inicial do epidídimo dos animais CAF. A expressão de AQP1 foi alterada nos animais do grupo CAF, em geral, com maior expressão nos canais vasculares, principalmente, do segmento inicial e cabeça; além de maior expressão nas células peritubulares do segmento inicial. A expressão de AQP9 foi diminuída apenas no segmento inicial do grupo CAF, cuja reatividade foi média, enquanto a reatividade foi intensa neste segmento dos animais do grupo CON. Os resultados obtidos indicam que a dieta de cafeteria promoveu alterações segmento-específicas na distribuição de células basais e halo e na expressão de IL6 e de AQPs 1 e 9. Estes resultados permitem inferir que o aumento de massa corpórea, induzido por dieta de cafeteria, pode promover alterações no ambiente luminal epididimário com possível prejuízo das funções de transporte, maturação, manutenção, armazenamento e proteção dos espermatozoides. A fim de esclarecer a extensão do prejuízo causado pelas alterações resultantes da dieta de cafeteria, novos estudos tais como alterações bioquímicas epididimárias, análises ultraestruturais dos tipos celulares epididimários; capacidade reprodutiva e morfologia e motilidade dos espermatozoides são necessários
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Efeito da adição de plasma seminal e de sua composição bioquimica sobre os espermatozóides epididimários de caprinos / Effect of the seminal addition of plasma and its composition biochemist on the epididimários spermatozoa of goatSilva, Katiane Queiroz da January 2009 (has links)
SILVA, Katiane Queiroz da. Efeito da adição de plasma seminal e de sua composição bioquimica sobre os espermatozóides epididimários de caprinos. 2009. 43 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Zootecnia, Fortaleza-CE, 2009 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-02T14:51:18Z
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Previous issue date: 2009 / The objective of this study was to verify the effect of the addition and of the composition of the seminal plasma (SP) on the characteristics of the epididymal spermatozoa (ES) of goat. Eight goat males were used for obtaining of the biological material so that, the SP it was obtained in previous collections and stored at -18 oC until that proceeded to the addition to ES and the biochemical analyses. ES were obtained of the tail of the epididymal by the method of surgical castration. Four sample of 100 μL were removed from the "pool" of ES, and in two of them 120 μL were added of SP. Two sample, one with and other without SP, were diluted in a concentration of 200 x 106 sptz /mL, in the extender citrate-yolk (CY) and in the extender tris-yolk (TY). The samples were evaluated the vigor, motility and motility degradation rate (TDM) in fresh state and for the test of slow thermoresistence, after two and 24 hours of conservation. For the determination of fructose levels and total proteins were used specific kits of In Vitro Diagnóstico S/A®. The determination of activity of the phospholipase A2 was realized by the technique of the pH-stat. For the analysis of the data was used the statistical program SAS@. The results demonstrated that the addition of SP to ES reduced seminal parameters significantly, except in the extender TY when the animals were to grouped in function of concentration of total proteins of SP. Besides, the TY, when used to conserve the ES added of SP with low fructose concentration (540 mg/dL) preserved the seminal characteristics better. It follows that the initial concentration of fructose in the seminal plasma influenced the quality of conservation of the epididymal spermatozoa; as for the total proteins just affected the conservation in the citrate-yolk and the intensity of activity of the phospholipase A2 did not interfere in the conservation at 5 ºC of the epididymal spermatozoa of goat / O objetivo deste estudo foi verificar o efeito da adição e da composição do plasma seminal (PS) sobre as características dos espermatozóides epididimários (EEP) de caprinos. Utilizaram-se oito machos caprinos para obtenção do PS, que foi obtido em coletas prévias e armazenado a -18o C até que se procedessem a sua adição aos EEP e as análises bioquímicas. Os EEP foram obtidos da cauda do epidídimo pelo método de castração cirúrgica. Do “pool” de EEP foram retiradas quatro alíquotas de 100 μL, sendo que em duas delas foram adicionados 120 μL de PS e nas outras duas não. Duas alíquotas, uma com e outra sem PS, foram diluídas a uma concentração de 200 x 106 sptz/ mL, no diluidor citrato-gema (CG) e no diluidor tris-gema (TG). As amostras foram avaliadas quanto ao vigor, à motilidade e à taxa de degradação da motilidade (TDM) no seu estado fresco e pelo teste de termorresistência lento, após duas e 24 horas de conservação. Para a determinação dos níveis de frutose e de proteínas totais foram utilizados os kits específicos da In Vitro Diagnóstico S/A®. A determinação da atividade da fosfolipase A2 foi realizada pela técnica do pH-stat. Para a análise dos dados foi utilizado o programa estatístico SAS@. Os resultados demonstraram que a adição de PS aos EEP diminuiu significativamente os parâmetros seminais avaliados, exceto no diluidor TG quando os animais foram agrupados em função da concentração de proteínas totais do PS. Além disso, o TG, quando utilizado para conservar os EEP adicionados de PS de baixa concentração de frutose (540 mg/dL) preservou melhor as características seminais avaliadas. Concluiu-se que a concentração inicial de frutose no PS influenciou positivamente a qualidade de conservação dos espermatozóides epididimários; já a de proteínas totais afetou apenas a conservação no CG e a intensidade de atividade da fosfolipase A2 não interferiu na conservação a 5 ºC dos espermatozóides epididimários de caprinos
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