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ACIOLI, Porfírio Cezar Passos. Efeitos da acupuntura e da eletroacupuntura sobre o estresse oxidativo e a inflamação decorrentes da torção/distorção do testículo em ratos. 2014. 68 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:51:40Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:52:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-19T13:52:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) Previous issue date: 2014 / The efects of acupuncture (Ac) and Electroacupuncture (EAc) were evaluated using an experimental rat model of ischemia/reperfusion (IR) of the testis. In Traditonal Chinese Medicine, these forms of therapies are used in the promotion of organic equilbrium, through stimulation of specifc neurotransmiters producing nerve pathways, resulting in a analgesic and anti-nflammatory autonomic regulatory. response. In the study, 30 male Wistar rats, 279.6g average weight (230-30 g) were randomly divided into five groups. Al rats received intraperitoneal anesthesia (Ketamine 10 90mgKgXilazina mgKg), at the begining of the experiment, before the detorsion and at the end of the experiment. G1 group was submited to torsion of the testicle (TT), two complete turns (720º) with immediate detorsion (sham). The other groups (G2IR, G3Ac, G4EAc2 and G5EAc10) were submited to TT during 3 hours, folowed by detorsion and reperfusion during 4 hours. Five minutes before the detorsion Ac (G3Ac) or EAc (G4EAc2, G5EAc10) was aplied, under anesthesia, for 5 minutes. Next the testis was detorsioned and reperfused for 4 hours. At the end blod samples the right testicle were colected. Evaluated parameters included determination of reduced Glutathione (GSH), Malonaldehyde (MDA), Myeloperoxidase (MPO) and histopathology of the testicle. EAc (2 and 10 Hz) promoted signifcant increase in concentrations of GSH in plasma and in the rat estis of G4-G5, compared to the control G1. Ac did not alter signifcantly the concentrations of GSH in the G3 group compared to the G1. There was signifcant increase of MDA in tisue in groups G4-G5 and plasma MDA in al groups, compared to the G1. EAc (2 Hz and 10 Hz) signifcantly decreased the activity of MPO in the testis of rats subjected to TT (G4-G5), compared to the control G1. No signifcant diferences were observed in the activity of MPO comparing groups G4-G5 to group G1. It is concluded that EAc stimulation (2 and 10 Hz) atenuates oxidative stres and inflammatory response in rats subjected to testicular torsion/detorsion. / Os efeitos da Acupuntura (Ac) e da Eletroacupuntura (EAc) foram avaliados utilzando um modelo experimental de isquemia/reperfusão (I/R) do testículo em rato. Na Medicina Tradicional Chinesa, esas formas de terapias são utilzadas na promoção do equilíbrio orgânico, mediante estímulo de vias nervosas produtoras de neurotransmisores específicos, resultando em uma resposta anti-nflamatória, analgésica e reguladora autonômica. No experimento, 30 ratos Wistar machos, peso médio 279,6 g (230-30g) foram distribuídos aleatoriamente em cinco grupos. Todos os ratos receberam anestesia intraperitonial (Cetamina 90mg/Kg+Xilazina 10 mg/Kg), no inicio do experimento, antes da destorção e ao término do experimento. O grupo G1 foi submetido à torção do testículo (TT), duas voltas completas (720º) com imediata destorção (sham). Os demais grupos (G2IR, G3Ac, G4EAc2 e G5EAc10) foram submetidos à TT durante 3 horas, seguido de destorção e reperfusão durante 4 horas. Cinco minutos antes da destorção procedeu-se à aplicação da Ac (G3Ac) ou EAc (G4EAc2, G5EAc10), sob anestesia por 5 minutos. Findo ese tempo realizou- se à destorção do testículo e permitu-se a reperfusão por 4 horas. Ao término foram coletadas amostras de sangue arterial e de tecido (testículo direito). Parâmetros avaliados incluíram determinação de Glutationa (GSH) reduzida, Malonaldeído (MDA), Mieloperoxidase (MPO) e histopatologia do testículo. A EAc (2 e 10Hz) promoveu aumento signifcante nas concentrações de GSH no plasma e no testículo dos ratos dos grupos G4-G5, comparados ao controle G1. A Ac não alterou signifcativamente as concentrações de GSH no grupo G3 comparado ao G1. Houve aumento signif cante do MDA tecidual nos grupos G4-G5 e do MDA plasmático em todos os grupos, comparados ao G1. A EAc (2Hz e 10Hz) diminuiu signifcativamente a atividade da MPO no testículo dos ratos submetidos à torção do testículo (grupos G4-G5), comparados ao controle G1. Não foram observadas diferenças signifcantes na atividade da MPO comparando-se os grupos G4-G5 ao grupo G1. Conclui-se que a aplicação de EAc de 2/10Hz promove proteção local e sistêmica sobre o estrese oxidativo e diminuição da resposta inflamatória em ratos sadios submetidos a torção/destorção do testículo.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5237_1.pdf: 1035133 bytes, checksum: 5ec2bfbb8cbff27797cf3b6731903771 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Para avaliar a eficiência da histoquímica com lectinas no mapeamento do perfil de carboidratos do sistema verme-granuloma e vasos sanguíneos em epidídimo e funículo espermático de pacientes infectados com Wuchereria bancrofti foram utilizadas lectinas conjugadas a peroxidase (Concanavalina A, Con A; lectina de germe de trigo, WGA; Lotus tetragonolobus agglutinin, LTA; peanut agglutinin, PNA; Ulex europeus I, UEA I). Os resultados demonstraram que as lectinas utilizadas reconheceram de forma diferenciada o verme, o granuloma e os vasos linfáticos e sanguíneos nos tecidos estudados. UEA I marcou de forma intensa o verme e o granuloma filariais bem como o epitélio dos vasos linfáticos e sanguíneos no epidídimo. No funículo espermático a UEA reconheceu apenas carboidratos no verme. A WGA apresentou, no epidídimo, uma marcação moderada dos vermes e granulomas, marcando fracamente os vasos sanguíneos ao passo que no funículo espermáticoo verme foi moderadamente marcado enquanto que o granuloma e os vasos foram fracamente marcados. Epidídimos marcados com LTA apresentaram marcação de moderada-intensa do verme e o granuloma, não reconhecendo o epitélio dos vasos sanguíneos e linfáticos. Esta mesma lectina marcou fracamente o verme no funículo espermático. Con A marcou fraca apenas o verme, tanto no epidídimo quanto no funículo espermático. Apenas o granuloma no epidídimo foi marcado fracamente pela PNA que não reconheceu nenhuma estrutura no funículo espermático. Os resultados da histoquímica com lectinas evidenciam o perfil de carboidratos do verme e estruturas histológicas do epidídimo e funículo espermático humanos de maneira diferenciada apresentado estas proteínas como sondas auxiliares específicas quanto ao diagnosticados com filariose bancroftiana

El primer objetivo de este estudio fue determinar los mecanismos de utilización energética de diferentes monosacáridos (glucosa, fructosa, manosa y sorbitol), por parte de los espermatozoides de cerdo. Para ello, los espermatozoides fueron incubados sin ningún sustrato energético y con diferentes hexosas. Las concentraciones utilizadas de las hexosas fueron de 10 mM, siempre que se quería determinar el efecto del tiempo de incubación, y de 1mM, 5mM, 10mM, 20 mM, 50mM cuando lo que se pretendía determinar era el efecto de la concentración del sustrato metabolizable. Las incubaciones se realizaron durante 5 min., 15 min., 30 min., y 60 min., para el caso del efecto tiempo, y durante 60 minutos para analizar el efecto concentración. Las incubaciones fueron realizadas en un medio de Krebs-Ringer-Henseleit carente de substratos energéticos. Tras estas incubaciones, se determinaron tanto la viabilidad como el estado de los acrosomas como marcadores funcionales del estado de los espermatozoides. También se determinaron los niveles intracelulares de algunos metabolitos energéticos, como la glucosa 6-fosfato, el glucógeno y el trifosfato de adenosina (ATP). Además, también se midió el ritmo de formación de L-lactato extracelular proveniente de la glucólisis y el de CO2 como producto final del ciclo de Krebs. La conclusión más relevante extraída de este estudio fue que la glucosa es el monosacárido utilizado preferentemente por los espermatozoides de cerdo. Esta glucosa es metabolizada principalmente por la vía glucolítica (en un 99%). Finalmente, el control de la vía de consumo de la glucosa se realiza básicamente en dos puntos, el primero la modulación de la actividad hexoquinasa, y el segundo la modulación de la actividad piruvato quinasa.Como complementación del estudio anterior, también se estudió el comportamiento cinético de las principales actividades enzimáticas que controlan la ruta glucolítica, como son la hexoquinasa, que regula la fosforilación inicial de los monosacáridos, y la piruvato quinasa, que regula la introducción del producto final de la glucólisis en el ciclo de Krebs. Estos estudios mostraron que la hexoquinasa tiene una afinidad muy superior hacia la glucosa cuando la comparamos con los otros monosacáridos estudiados, mientras que la piruvato quinasa muestra una gran dependencia en su actividad del equilibrio intracelular entre los niveles de bifosfato de adenosina (ADP) y de ATP, lo que permite un control muy sensible de la obtención de energía a través del flujo glucolítico. Finalmente, también se evaluó el patrón de fosforilación en residuos de tirosina en los espermatozoides de cerdo. Los extractos celulares mostraron un patrón uniforme, con una banda de fosforilación mayoritaria a 45 Kda de peso. Este patrón no sufrió cambios significativos tras la incubación con cualquiera de los azúcares. Este resultado indica la falta de una acción moduladora específica de los azúcares sobre la funcionalidad espermática porcina.Otro de los objetivos consistió en evaluar la utilización de sustratos no glucolisables, y por lo tanto, no utilizables a través de la glucólisis, para la obtención de energía como el citrato y el lactato por parte de los espermatozoides de cerdo. El diseño experimental sobre concentraciones y tiempos de incubación fue igual al ya descrito para los monosacáridos. Las incubaciones también se realizaron en un medio de Krebs-Ringer-Henseleit carente de azúcares, y los parámetros evaluados fueron los mismos que en la primera fase de este trabajo. Además, en este caso se determinó el comportamiento cinético de la actividad lactato deshidrogenasa (LDH) como punto clave de control de la entrada de substratos hacia el ciclo de Krebs. Este estudió estableció la presencia de un tipo de LDH específico de esperma en el espermatozoide de cerdo, lo que fue evidenciado a través del análisis del Western blot y confirmado por los resultados de inmunocitoquímica, los cuales mostraron una reacción positiva en la pieza principal de la cola, con una débil señal en la pieza intermedia.La conclusión principal que se pudo deducir de los resultados obtenidos con los substratos no glucolisables fue que los espermatozoides de cerdo pueden utilizar eficientemente como única fuente de energía tanto el citrato como el lactato, la utilización de estos sustratos se lleva a cabo a través de vías energéticas controladas por la LDH, es decir, básicamente el ciclo de Krebs, siendo el ritmo de flujo asimismo estrechamente regulado por los niveles intracelulares de ATP.También se evaluó en este caso el efecto de la incubación con citrato o lactato sobre el patrón de fosforilación en residuos de tirosina. En este caso, al incubar con 10 mM de citrato o lactato se observó un aumento notable de la intensidad de todas las bandas, especialmente de la de 45Kda, si bien no aparecían cambios significativos en el patrón de bandas específico de fosforilación, este resultado indica igualmente una falta de acción específica de los sustratos sobre la funcionalidad espermática.El objetivo final de nuestro trabajo fue el diseño de cuatro fórmulas experimentales, que combinaran un monosacárido a diferentes concentraciones con un sustrato no glucolisable (citrato o lactato a diferentes concentraciones), con el objetivo primordial de estudiar el efecto que tiene estos cambios en el tipo específico de suministro energético en la conservación a largo plazo en refrigeración. La finalidad subyacente a este estudio fue la de obtener información para la obtención de un diluyente de conservación de semen refrigerado porcino que lograra sobrepasar los 7 días de conservación entre 15 y 17ºC. Para evaluar la eficacia de estas cuatro formulas en la conservación de semen refrigerado de cerdo se midieron los siguientes parámetros: Los porcentajes de viabilidad y de acrosomas alterados, como indicadores del estado funcional del espermatozoide, el ritmo de formación de lactato, los Tests de Resistencia Osmótica (ORT) y de Resistencia Hiperosmótica (HRT), como las pruebas de mayor significación para evaluar la calidad de los espermatozoides, tal y como ha sido descrito en publicaciones previas. La conclusión final fue que un medio que contenga niveles altos de glucosa (siempre inferiores a los que contienen los diluyentes comerciales más ampliamente utilizados) y niveles relativamente bajos de lactato como fuente alternativa de energía permite una conservación de los espermatozoides porcinos a temperaturas entre 15-17ºC por un tiempo mayor a lo observado incluso en diluyentes comerciales utilizados ampliamente, como el BTS. Por lo tanto, un diseño optimizado de las fuentes energéticas glucolíticas y no glucolíticas es imprescindible para la mejora de los diluyentes de semen porcino en refrigeración. / The first objective study was to determine the mechanisms of energy use of different monosaccharides the (glucose, fructose, mannose y sorbitol), on the part of the pig sperms. For it, the sperms were incubated without any energy substrate and with different hexoses. The used concentrations of the hexoses were of 10 mM, whenever it was wanted to determine the effect of the time of incubation, and of 1 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM, and 50 mM when what was sought to determine was the effect of the concentration of the substrate metabolically. The incubations were carried out during 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes and 60 minutes, for the case of the effect time, and during 60 minutes to analyze the effect concentration. The incubations were carried out in means of lacking Krebs-Ringer-Henseleit of energy substrata. After these incubations, as much the viability as the state of the acrosomes like functional markers of the sperms was determined. The levels intracellular of some energy metabolites were also determined, as the glucose 6-phophate, the glycogen and ATP. Also, the rhythm of formation of L-lactate extra cellular coming from the glycolysis was also measured and that of CO2 as final product of the cycle of Krebs. The extracted more excellent conclusion of this study was that the glucose is the monosaccharide used preferably by the pig sperms.As complementation of the previous study, the kinetic behaviour of the main enzymatic activities was also studied that they control the route glycolytic, like they are the hexokinase, and piruvato kinase. Finally, the phosphorilation pattern of tyrosine was also evaluated in residuals sperms of pig. The cellular extracts showed a uniform pattern, with a band of majority phosphorilation to 45 Kda of weight. This pattern did not suffer significant changes after the incubation with anyone of the sugars.Another of the objectives consisted on evaluating the use of substrates non glycolitics, and therefore, not usable through the glycolysis, for the energy obtaining like the citrate and the lactate n the part of the pig sperms. The experimental design about concentrations and times of incubation already went similar to the described for the monosaccharide. The incubations were also carried out in a means of lacking Krebs-Ringer-Henseleit of sugars, and the evaluated parameters were the same ones that in the first phase of this work. Also, in this case the kinetic behaviour of the activity lactate deshidrogenasa was determined as key point of control of the entrance of substrata toward the cycle of Krebs. This studied it established the presence of a type of specific LDH of sperm in the pig sperm, what was evidenced through the analysis of the Western blot and confirmed by the immunocytochemistry results, which showed a positive reaction in the main piece of the line, with a weak sing in the intermediate piece.The main conclusion that one could deduce from the results obtained with the substrata non glycolizables was that the pig sperms can use efficiently as only energy source as much the citrate as the lactate, the use of these substrates is carried out through energy roads controlled by the LDH, that is to say, basically the cycle of Krebs, being also the rhythm of flow closely regulated by the levels intracellular of ATP.It was also evaluated in this case the effect of the incubation with citrate or lactate on the phosphorilitation pattern in tyrosine residuals. In this case, when incubating with 10 mM of citrate or lactate a remarkable increase of the intensity of all the bands it was observed, especially of that of 45 Kda, although significant changes did not appear in the specific band in pattern of phosphorilation, this results indicates a lack of specific action of the substrates equally about the spermatic functionality.The final objective of our work was the design of four experimental formulas that combined a monosaccharide to different concentrations with a substrate non glycolizable (citrate or lactate to different concentrations), with the primordial objective of studying the effect that has these changes in the specific type of energy supply in the long term conservation in refrigeration. The underlying purpose to this study was the one of obtaining information for the obtaining of a diluter of conservation of swinish refrigerated semen that was able to surpass the 7 days of conservation between 15 and 17ºC. To evaluate the effectiveness of four experimental formulas in the conservation of refrigerated semen of pig the following parameters they were measured: The percentages of viability and of altered acrosomes, as indicators of the functional state of the sperm, the rhythm of lactate formation, the Tests of Osmotic Resistance (ORT) y Tests of Resistance Hiperosmotic (HRT). The final conclusion was that a means that contains high levels of glucose (always inferior to those that contain the broadly used commercial diluters) y even relatively low of lactate like alternative source of energy allows a conservation from the swinish sperms to temperatures among 15-17ºC for a while bigger to that even observed in commercial diluters used thoroughly. Therefore, an optimized design of the sources energy glucolityc and non glucolityc are indispensable for the improvement of the diluters of swinish semen in refrigeration.

Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-06-16T12:18:45Z No. of bitstreams: 1 2002_dis_sbguimarães.pdf: 1245764 bytes, checksum: 8f6645fd467dfa4821efed89286f96a9 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-06-16T12:41:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2002_dis_sbguimarães.pdf: 1245764 bytes, checksum: 8f6645fd467dfa4821efed89286f96a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-16T12:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2002_dis_sbguimarães.pdf: 1245764 bytes, checksum: 8f6645fd467dfa4821efed89286f96a9 (MD5) Previous issue date: 2002 / Spematic cord torsion is one of the more common surgical urological emergencies in childhood. An experimental study has been conducted to investigate acute changes in testicular concentrations of ATP and glucose following one-hour unilateral 720º testicular torsion. Sixty prepubertal male Wistar rats were distributed into two groups: Group 2(Ischemia) and Group 1(Sham operated). Each group(n=30) was divided into 5 subgroups (n=6). All animals were subjected to right testicular torsion of 720º. The testicular torsion of animals from Group 1 was immediately corrected. Group 2 animals had their testicular torsion lasting one hour followed by detorsion. Testicles were collected and arterial blood samples taken from abdominal aorta of each animal subgroup at the and of ischemic period or one hour after sham operation and 0.5, 1,6 and 24 hours later. ATP and glucose concentrations were significantly decreased (p<0,05) in ischemia group as compared to sham group at the end of ischemic period. There was no difference in glycemia when comparing ischemic versus sham-operated rats. Glucose concentrations were significantly increase (p<0,05) in ipsilateral testis of sham-operated rats No significant change in ATP and glucose concentrations were found in the left testicle in comparasion to the ones measured in the rigth testicle of the same animal. The decrease in ATP and glucose concentrations may be explained by the reduction in blood flow to the torted testis imposed by torsion. The absence of significant contralateral alterations in the concentrations of ATP and glucose could be related to the limited time of isquemia imposed to the right testis. It is concluded that unilateral one-hour testicular torsion causes a decrease in ipsilateral testicular perfusion resulting in decresead testicular concentrations of glucose and ATP in the ipstelial (right) testicles and no alterations in the concentrations of glucose and ATP in the contraleral testicles. Simple testicle manipulation (Sham Operation) causes a signficant increase in glucose concentrations in the ipsilateral(right)testis. / A torção do cordão espermático é a emergência geniturinária mais comum na idade pediátrica. Foram estudadas as alterações metabólicas agudas nas concentrações testiculares de ATP e glicose após uma hora de isquemia induzida por torção do cordão espermático. Sessenta ratos wistar machos pré-púberes, foram distribuídos em 2 grupos de 30 animais cada e cada grupo em 5 subgrupos de 6 ratos. Os ratos do grupo 1 foram submetidos à torção seguida por distorção imediata (cirurgia simulada) do testículo direito. Os animais do grupo 2 foram submetidos à torção do testículo direito (720o) durante uma hora. Os animais dos diferentes subgrupos foram sacrificados 30 minutos, 1 hora, 6 horas e 24 horas após a distorção ou realização da cirurgia simulada para a remoção dos testículos e coleta de amostra de sangue arterial. As alterações das concentrações de glicose e ATP foram determinadas por métodos enzimáticos. Ocorreu queda significante (p<0,05) da concentração de glicose e ATP no tempo 0 h, nos testiculos isquemiados. Não ocorreram alterações na glicemia nem nas concentrações de glicose e ATP nos testículos contralaterais. Os animais submetidos à cirurgia simulada apresentaram aumento significante (p< 0,05) da concentração de glicose no testículo ipsilateral quando comparada à concentração de glicose no testículo esquerdo dos mesmos animais nos tempos 0 h e 24h. A diminuição do fluxo sangüíneo em decorrência da torção explica a redução das concentrações de ATP e glicose nos testículos isquemiados. A ausência de alterações nas concentrações de ATP e glicose nos testículos contralaterais (esquerdos) poderia ser uma decorrência do reduzido tempo de isquemia imposto ao testículo ipsilateral (direito). Concluiu-se que a torção testicular unilateral de 720o, por uma hora, induz uma redução significante (p < 0,05) das concentraçôes testiculares de ATP e de glicose no testículo isquemiado sem alterações correspondentes da glicemia. A simples manipulação do testículo direito (cirurgia simulada) induz um aumento da concentração de glicose testicular.

Estudos têm demonstrado a importância da mitocôndria para a funcionalidade do espermatozoide, referindo-a como a principal fonte de energia para a motilidade e a homeostase celular. No entanto, para algumas espécies animais, estudos recentes indicam que a glicólise parece ser o principal mecanismo de produção de ATP para a motilidade espermática, superior à fosforilação oxidativa. Em ovinos estudos envolvendo o metabolismo energético do espermatozoide são necessários não apenas pelo seu interesse zootécnico, mas também como modelo experimental para bovino, espécie na qual este mecanismo é também pouco conhecido. Apesar da importância da mitocôndria para o metabolismo celular durante a fosforilação oxidativa, são produzidos metabólitos denominados Espécies Reativas de Oxigênio, as quais possuem um papel fundamental em diversos processos fisiológicos. No entanto, um eventual desequilíbrio entre a produção de EROs e os mecanismos antioxidantes caracteriza o estresse oxidativo, que pode ser letal para as células espermáticas. Ademais, estudos anteriores relacionam as disfunções mitocondriais causadas pela criopreservação espermática ao estresse oxidativo e a diminuição da atividade mitocondrial. Desta forma, acreditamos que injúrias mitocondriais durante a criopreservação são a origem da produção excessiva de fatores pró-oxidativos e, em última análise, causadores dos danos espermáticos pós-descongelação e diminuição da motilidade. Em face do exposto, a hipótese central do presente experimento é que o espermatozoide ovino, após despolarização mitocondrial por desacoplamento da fosforilazação oxidativa e suplementação para a glicólise, é capaz de manter a produção de ATP e, consequentemente, a motilidade espermática. Ainda, um leve desacoplamento mitocondrial é benéfico para os espermatozoides durante a criopreservação por diminuir as crioinjúrias mediadas por disrupções mitocondriais. Em relação aos nossos estudos de fisiologia, observamos no experimento 1 que os espermatozoides ovinos, mesmo apresentando suas mitocôndrias despolarizadas são capazes de manter a motilidade total. Este resultado nos sugere que a via glicolítica possivelmente é capaz de manter a motilidade espermática. Por outro lado, o desacolpamento mitocondrial alterou os padrões do movimento espermático, nos sugerindo que a mitocôndria possui um papel mais importante na qualidade do movimento espermático do que na motilidade total. Ainda, no experimento 2 observamos que a via glicolítica, após ser estimulada, é capaz de manter os níveis de ATP, os padrões de cinética espermática e a homeostase oxidativa dos espermatozoides epididimários bovinos submetidos ao desacoplamento mitocondrial. Em relação ao nosso estudo aplicado (experimento 3), observamos que os espermatozoides ovinos criopreservados submetidos à um leve desacoplamento mitocondrial concomitantemente à estimulação da via glicolítica apresentaram maior motilidade, menor peroxidação lipídica, menor susceptibilidade da cromatina à denaturação ácida e maior potencial de membrana mitocondrial. Estes resultados nos indicam que um leve desacoplamento mitocondrial durante a criopreservação espermática é capaz de proteger as mitocôndrias contra as crioinjúrias e consequentemente melhorar a qualidade espermática pós-descongelação. / Studies have demonstrated the importance of mitochondria in the sperm functionality, referring to it as the main source of energy for motility and cellular homeostasis. However, for some animal species, recent studies indicate that glycolysis seems to be the main mechanism ATP production for sperm motility, higher than the oxidative phosphorylation. In ovine studies involving energy metabolism of sperm are required not only for their livestock interest, but also as an experimental model for bovine species in which this mechanism is also unknown. Despite the importance of mitochondria for cellular metabolism during oxidative phosphorylation, they are produced metabolites called reactive oxygen species, which have a key role in many physiological processes. However, any imbalance between ROS and antioxidant mechanisms characterizes oxidative stress, which may be lethal for the sperm cells. Moreover, previous studies relate to mitochondrial dysfunction caused by oxidative stress on sperm cryopreservation and decreased mitochondrial activity. Thus, we believe that mitochondrial injury during cryopreservation are the source of excessive production of pro-oxidative factors and ultimately, causing the post-thaw sperm damage and decrease in motility. In view of the above, the central hypothesis of this experiment is that the ovine sperm after mitochondrial depolarization by uncoupling of oxidative phosphorylation and glycolysis supplementation is capable of maintaining the ATP production and consequently sperm motility. Additionally, a mild mitochondrial uncoupling is beneficial for spermatozoa during cryopreservation by decreasing the cryoinjuries mediated by mitochondrial disruption. Regarding our physiology studies, we observed in experiment 1 that the ovine sperm, even with their depolarized mitochondria are able to maintain total motility. This result suggests that the glycolytic pathway is possibly able to maintain motility. Moreover, the fact that mitochondrial uncoupling altered sperm movement patterns suggests that mitochondria has a more important role in the quality of sperm kinetic than the total motility. Furthermore, in the experiment 2 we observed that glycolytic pathway, after being stimulated, is able to maintain ATP levels, sperm kinetics patterns and oxidative homeostasis of bovine epididymal spermatozoa submitted to mitochondrial uncoupling. Regarding our applied study (Experiment 3), we observed that cryopreserved ovine sperm submitted to mild mitochondrial uncoupling concurrently with glycolysis stimulation showed increased motility, lower lipid peroxidation, lower susceptibility of chromatin to acid denaturation and higher mitochondrial membrane potential. These results indicate that a slight mitochondrial uncoupling during sperm cryopreservation can protect mitochondria against cryoinjuries and hence improve the post-thaw spermatozoa quality.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-17Bitstream added on 2014-06-13T19:24:36Z : No. of bitstreams: 1 sousa_db_dr_botfmvz.pdf: 488884 bytes, checksum: cee00747e11c814a32c18443659e8194 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Várias pesquisas foram desenvolvidas visando a melhoria da congelabilidade do sêmen ovino. Contudo, ainda não houve progressos significativos na fertilidade do sêmen congelado após a inseminação artificial cervical. Diversos sistemas de análise computadorizada do movimento espermático (CASA) têm sido propostos e aplicados na tentativa de quantificar características específicas do movimento espermático, podendo ainda determinar a presença e a cinética das subpopulações de espermatozóides. Muitos testes para avaliar a função espermática foram desenvolvidos, permitindo analisar simultaneamente diferentes aspectos da função espermática. Análise da função mitocondrial oferece uma maneira de acessar a motilidade espermática. Foram objetivos otimizar o sistema CASA na avaliação do sêmen congelado; determinar parâmetros da cinética espermática que expressem analogia com as características da avaliação das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial (IP, FITC-PSA e JC-1; MITO; R-123) e utilizar conjuntamente os parâmetros fornecidos pelo sistema CASA e pelas sondas fluorescentes para agrupar as amostras de maneira qualitativa. Vinte e seis amostras de sêmen congelado de diferentes carneiros foram estudadas pelo CASA obtendo-se para os parâmetros VCL, VAP, VSL, ALH, BCF, LIN, STR, ELONG dados médios e individuais para cada espermatozóide e por sondas fluorescentes para a avaliação simultânea da integridade de membrana plasmática, reação acrossomal e potencial de membrana mitocondrial. Estatisticamente aplicou-se a análise exploratória de técnicas multivariadas obtendo-se três fatoriais sendo o primeiro fator F1 positivo e alto para as variáveis VAP, VSL, STR e LIN, que é interpretado com um fator relacionado à progressividade. Para o segundo fator F2, associam as variáveis VCL, ALH e MT, que representam um fator de deslocamento... / Many researches were developed to improve the ram semen criopreservation. However, no significant advances in the fertility rates with the frozen semen were observed with cervical artificial insemination. Several computer-assisted motility assessments (CASA) systems have been considered and applied in the attempt to quantify specific characteristics of the sperm motion and still them being able to determine the spermatozoa presence and subpopulations kinematics. A large number of sperm functions evaluation had been developed, making it possible to analyze different aspects of the sperm function simultaneously. Analysis of the mitochondrial function offers a way to have access the sperm motility. The aim of this study was to optimize the CASA system in the evaluation of the ram frozen semen; determine parameters of the sperm kinematics that express analogy with the characteristics of the evaluation of plasmatic, acrossomal and mitochondrial membranes (PI, FITC-PSA and JC-1; MITO; R-123) and use CASA parameters together with the fluorescent probes to group samples in a qualitative way. Twenty and six frozen semen samples of different rams were evaluated by CASA system for mean and individual sperm motion parameters VCL, VAP, VSL, ALH, BCF, LIN, STR, ELONG and for fluorescent probes leads for the simultaneous evaluation of the integrity of plasmatic, acrossomal membranes and membrane mitochondrial potential. The statistic applied was multivariate analysis getting to three different factorials. The first factor was positive and high (F1 factor) for variables VAP, VSL, STR and LIN, that were interpreted with the forward displacement. For F2 factor, there were associate variables VCL, ALH and MT that represent the displacement. The F3 factor, whose interpretation has to do with available energy, was associated with variables BCF, MITO and ELONG...(Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:13:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mauricio Spagnolo Adames.pdf: 2594661 bytes, checksum: 4bbc4710428addfb51d141108a994f72 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the effects of fructose as a modulator of sperm movement on the optimization of the sperm: oocyte in artificial reproduction procedures with the use of cryopreserved semen in Rhamdia quelen. Through the Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) were evaluated in four replicas the motility rates, speed and time of sperm activation of the cryopreserved semen after thawing (10 seconds after activation) into six activating solutions containing fructose, concentrated at 0.0; 0.9; 1.8; 2.7; 3.6 and 4.5%. For the testing of fertilization an factorial experimental design (5 x 6) composed of five sperm:oocyte ratio (1x104, 3x104, 5x104, 7x104 e 9x104), six activating solutions containing fructose (0.0; 0.9; 1.8; 2.7; 3.6 and 4.5%) and three replicas or experimental blocks ("pools" of oocytes from three female groups). The effects were evaluated over variable rates of fertilization, hatching and larval normality. In the evaluation of sperm variables a regression analysis showed effect (p<0,05) of the solutions in motility, speed and duration of sperm activation. It was also verified effect (p<0,05) in the index obtained from clustering of such variables called index of sperm movement, with results of theoretical peak performance when 2.85% of fructose in solutions was employed. In the fertilization assay the analysis of response surface showed interactive effect (p<0.05) between sperm:oocyte ratio and fructose concentrations in activating solutions, on the fertilization and hatching rates and of the clustering index of two variables called index of reproductive success. According to the statistical model, sperm:oocyte ratio can be reduced keeping up the rates of fertilization and hatching. The inclusion of fructose in activating solutions has promoted similar theoretical maximum levels for fertilization and hatching when compared to fertilization only in distilled water, however with a saving of 17.77% of mobile spermatozoa: oocyte. The larval normality showed effect (p<0.05) just for the block. It is concluded that the sperm:oocyte ratio can be reduced through the employment of fructose-based activating solutions, without affecting the fertilization, hatching rates and larval normality. / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da frutose como modulador do movimento espermático sobre a otimização da relação espermatozoide:ovócito em procedimentos de reprodução artificial com o uso do sêmen do Rhamdia quelen criopreservado. Através do Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) foram avaliadas em quatro réplicas a motilidade, a velocidade e o tempo de duração da ativação espermática do sêmen criopreservado após o descongelamento (10 segundos após a ativação) em seis soluções ativadoras contendo frutose na concentração de 0,0; 0,9; 1,8; 2,7; 3,6 e 4,5%. Para o ensaio de fertilização foi aplicado um delineamento experimental em esquema fatorial (5 x 6) composto de cinco relações espermatozoides:ovocito (1x104, 3x104, 5x104, 7x104 e 9x104), seis soluções ativadoras contendo frutose (0; 0,9; 1,8; 2,7; 3,6 e 4,5%) e três replicas ou blocos experimentais ( pools de ovócitos provenientes de três grupos fêmeas). Os efeitos foram avaliados sobre as taxas de fertilização, eclosão e normalidade larval. Na avaliação das variáveis espermáticas, a análise de regressão mostrou efeito (p<0,05) das soluções na motilidade, velocidade e tempo de duração da ativação espermática. Também foi verificado efeito (p<0,05) no índice obtido pelo agrupamento destas variáveis, denominado de índice de movimento espermático, com resultados de máximo desempenho teórico quando empregado 2,85% de frutose na solução ativadora. No ensaio de fertilização a analise de superfície de resposta mostrou efeito interativo (p<0,05) entre a relação espermatozoides:ovócito e as concentrações de frutose das soluções ativadoras, sobre as taxas de fertilização e de eclosão e do índice de agrupamento das duas variáveis denominado índice de sucesso reprodutivo. De acordo com o modelo estatístico a relação espermatozoides:ovócito foi reduzida mantendo-se as taxas de fertilização e eclosão. A inclusão de frutose nas soluções ativadoras promoveu níveis máximos teóricos semelhantes para fertilização e eclosão quando comparada à fertilização apenas em água destilada, porém com uma economia de 17,77% de espermatozoides móveis. A normalidade larval apresentou efeito (p<0,05) apenas do bloco. Conclui-se que a relação espermatozóides:ovócito pode ser reduzida através do emprego de soluções ativadoras a base de frutose, sem causar prejuízos ás taxas de fertilização e eclosão e normalidade larval.