Orientador: Prof. Dr. Ricardo Pasquini / Co-orientadora: Drª. Noemi Farah Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 07/10/2014 / Inclui referências / Resumo: Anemia de Fanconi (AF) é uma doença autossômica recessiva e, em raros casos, ligada ao X, com grande heterogeneidade genética resultante de diferentes mutações em genes cujos produtos estão envolvidos nas vias de reparo do DNA, sendo que 16 subtipos genéticos já foram identificados. A variabilidade fenotípica desta doença dificulta o diagnóstico clínico, sendo necessários testes laboratoriais para sua confirmação. A possível influência do genótipo AF nas manifestações clínicas, como falência progressiva da medula óssea, leucemias e câncer, pode ser melhor definida se a mutação dentro de um subtipo genético for identificada. A pesquisa de mutações é complexa em função do número de genes associados e da variedade de alterações deletérias e não deletérias em cada gene. Os objetivos deste estudo foram identificar o subtipo genético dos pacientes brasileiros com AF, desenvolver uma estratégia de diagnóstico molecular aplicável à rotina clínica e correlacionar os genótipos encontrados com os fenótipos observados. Foram incluídos 255 pacientes AF, atendidos no ambulatório de Anemia de Fanconi do HC/UFPR, entre 1995 e 2012. Foi desenvolvido um teste de triagem para a identificação de 11 mutações frequentes nos genes FANCA, FANCC e FANCG dos pacientes AF brasileiros. Nos casos identificados somente em heterozigose a segunda mutação envolvida foi investigada pela técnica de MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification) e (ou) sequenciamento do DNA. Utilizando o teste de triagem proposto foi possível identificar alterações em 128 dos 255 pacientes (50,2%). Foram encontradas mutações no FANCA em 89/255 pacientes, no FANCC em 11/255 e no FANCG em 28/255. Em 71/128 pacientes foram encontradas mutações em homozigose e em 57/128 em heterozigose composta. Em quatro destes 57 a segunda mutação foi identificada ainda na triagem, em 51/57 foi necessário utilizar o MLPA e sequenciamento, e em dois pacientes não foi identificada a segunda mutação. Um total de 52 mutações diferentes foi encontrado, sendo 22 novas alterações ainda não descritas na literatura. O método proposto foi eficiente, pois permitiu a subtipificação genética de 126/255 (49,4%) pacientes. O uso desta estratégia possibilitou diminuir em 29,4% a necessidade do sequenciamento, além de dirigi-lo para um único gene em 20,0% dos casos heterozigotos. A redução do custo e do tempo torna viável a pesquisa de mutações como ferramenta para diagnóstico molecular da AF entre brasileiros. A análise da associação das mutações c.3788-3790delTCT e c.1077-2A>G com o fenótipo e às manifestações clínicas se restringiu aos dados disponíveis, porém foi limitada pelas dificuldades inerentes ao conteúdo dos prontuários. O uso desta estratégia de tipificação molecular em um maior número de pacientes permitirá a investigação mais ampla do efeito destas mutações na evolução clínica da AF. Palavras-chave: Anemia de Fanconi. Mutação-genética. Genes AF. / Abstract: Fanconi Anemia (FA) is an autosomal recessive or X-linked disease, with wide genetic heterogeneity resulting from different mutations in genes which products are involved in DNA repair pathways and 16 genetic subtypes have been identified. The phenotypic variability makes clinical diagnosis difficult and laboratory tests are necessary for confirmation. The possible influence of genotype in clinical manifestations such as progressive bone marrow failure, leukemia and cancer may be better understood if the mutations within a genetic subtype are identified. The mutation's investigation is complex due to the number of associated genes and the variety of deleterious and non-deleterious mutations in each gene. The aims of this study were to identify genetic subtypes of Brazilian patients with FA, to develop a strategy for molecular diagnosis applicable to clinical routine, and to correlate genotypes with phenotypes. 255 patients from Fanconi Anemia Outpatient Clinic of HC/UFPR, from 1995 to 2012 were included. The initial strategy was a screening test which included eleven frequent mutations in FA Brazilian patients. In the heterozygous cases the second mutation was investigated by MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification), and/or DNA sequencing. Using the proposed screening test, mutations were identified in 128 out of 255 patients (50.2%). FANCA mutations were found in 89/255 patients, FANCC in 11/255 patients and FANCG in 28/255 patients. 71/128 patients showed homozygous mutations and 57/128 were found in heterozygosis. In four out of 57 heterozygous the second mutation was identified in the screening test, in 51/57 MLPA and sequencing were required. In two patients the second mutation involved was not identified. A total of 52 different mutations were found, 22 of them are new mutations not previously described. The proposed method was effective because it allowed the genetic subtyping of 126/255 (49.4%) patients. Using this strategy a 29.4% decrease in sequencing demand was observed as well as sequencing was driven to a single gene in 20.0% when heterozygous. Cost and time reduction makes it feasible to search for mutations as a tool for molecular diagnosis of FA Brazilian patients. Analysis of association of the mutations c.3788_3790delTCT and c.1077-2A> G with the phenotype and the clinical manifestations was restricted to the available data, but limited by the difficulties relative to the content of the medical records. The use of this molecular typing strategy in a larger number of patients will allow more extensive investigation of the effect of these mutations in the clinical evolution of FA. Keywords: Fanconi Anemia. Genetic Mutation. FA genes.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2004 / Inclui bibliografia / A Anemia de Fanconi (AF) é uma doença genética autossômica recessiva, caracterizada clinicamente pela falência progressiva da medula óssea, malformações congênitas, atraso do crescimento e predisposição à leucemia e tumores sólidos. Existem onze subtipos / Fanconi´s anemia (FA) is a genetic autossomal recessive disorder. It is clinically characterized by progressive bone marrow failure, congenital abnormalities, growth retardation and predisposition to leukemia and solid tumors. There are eleven genetic sub

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, 2004 / Inclui bibliografia / A Anemia de Fanconi e uma desordem genetica de heranca autossomica recessiva, com manifestacao clinica heterogenea, caracterizada por uma falencia medular progressiva, malformacoes congenitas e predisposicao ao desenvolvimento de neoplasias, sobretudo leu / Fanconi¡äs anemia is a rare autossomal recessive disorder with heterogeneous clinics, characterized by progressive bone marrow failure, congenital abnormalities and predisposition to malignancies, especially leukemia and solid tumors. There are eleven gen

Orientador: Prof. Dr. Ricardo Pasquini / Co-orientadora: Profª. Drª. Neiva Isabel Rodrigues Magdalena / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente. Defesa: Curitiba, 27/11/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Hematologia e oncologia pediátrica / Resumo: A anemia de Fanconi (AF) é herdada de maneira autossômica recessiva, excepcionalmente ligada ao cromossomo X e caracterizada por uma falência progressiva de medula óssea, malformações congênitas e uma enorme predisposição ao câncer. O transplante de células-tronco hematopoéticas (TCTH) é a única possibilidade de cura para as complicações hematológicas da AF. Os resultados do transplante são excelentes especialmente nos pacientes jovens, em fase de aplasia e com doadores aparentados compatíveis. No entanto, existem poucos dados na literatura em relação às complicações tardias após o TCTH nestes pacientes. Este estudo compreende a avaliação de 157 pacientes que sobreviveram pelo menos 2 anos após o TCTH, cujo seguimento variou de 2 a 25 anos (Mediana de 8,7 anos) e que foram transplantados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná entre 1988 e 2011. No momento do transplante, 80% dos pacientes encontravam-se em fase de aplasia, 71% foram transplantados com doadores aparentados e 29% com doadores não aparentados. Diversos regimes de condicionamento foram utilizados e a medula óssea foi a fonte de células-tronco em 89% dos casos. Quimerismo completo foi observado em 76% dos casos e a rejeição ocorreu em apenas um paciente após os dois anos. Aos dois anos pós-TCTH, 16 pacientes apresentavam DECH crônica em atividade e 16 estavam em uso de tratamento imunossupressor. A incidência cumulativa do carcinoma espinocelular (CEC) de cavidade oral foi de 8% aos 10 anos e 14% aos 15 anos pós-TCTH. Apenas 2 dos 12 pacientes com CEC estão vivos após 5 anos do diagnóstico do câncer, sem evidência de doença. Os pacientes com DECH crônica desenvolveram o CEC mais jovens e numa fase mais precoce após o TCTH do que aqueles sem DECH crônica. Nos patientes avaliáveis, o hipotireoidismo foi detectado em 25% e o hipogonadismo em 40%. Ao todo, 4 mulheres tiveram gestações normais com fetos saudáveis. Outras complicações neurológicas, auditivas, visuais, pulmonares, hepáticas e renais relacionadas ao procedimento do transplante ou à doença básica também foram descritas em menor frequência. A probabilidade de sobrevida aos cinco anos foi de 95%, aos 10 anos de 90% e aos 15 anos de 79%. A sobrevida global foi influenciada de maneira negativa pela realização de transplantes antes de 2003, pela presença de DECH crônica e pelo diagnóstico do CEC. A maior causa de óbito foi o CEC de cavidade oral seguida pela DECH crônica e suas complicações infecciosas. Esta análise confirma que o TCTH é um tratamento eficaz para os pacientes com AF. A sobrevida foi melhor para os pacientes transplantados recentemente e para aqueles que não tinham DECH ou câncer. A maioria dos pacientes que sobreviveram mais do que 2 anos tinham uma vida normal e com um quimerismo completo. Mais esforços são necessários para diminuir o impacto das complicações tardias relacionadas a doença ou ao procedimento do transplante. A prevenção ou detecção precoce do CEC pode levar a um aumento na sobrevida no futuro. Palavras-chave: Anemia de Fanconi. Complicações tardias. Câncer. Doença do enxerto contra o hospedeiro. / Abstract: Fanconi Anemia (FA) is an autosomal recessive disorder rarely X-linked, characterized by progressive bone marrow failure, congenital abnormalities and a striking predisposition to cancer. Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is the only treatment able to cure the hematological complications associated with FA. Survival after transplant is excellent especially in young patients with aplastic anemia and matched related donors. However, only limited data are available regarding late complications after HSCT for these patients. This study evaluated late effects among 157 patients followed between 2 and 25 years (median 8.7 years) who survived for at least 2 years after transplant. These patients were transplanted at the Hospital de Clínicas - Federal University of Parana between 1988 and 2011. At the time of transplant, 80% of patients were in aplastic phase, 71% received transplants from related donors while 29% were transplanted using unrelated donors. Several preparatory regimens were used and bone marrow was the stem cell source in 89% of patients. Full donor chimerism was observed in 76% of patients and only one patient rejected after 2 years. At the time of study entry, 16 patients had active chronic GVHD and 16 patients were still receiving immunosuppressive therapy. The probability of survival was 95% at 5 years, 90% at 10 years and 79% at 15 years. Overall survival was negatively impacted by transplants performed before 2003, presence of chronic GVHD and diagnosis of squamous cell carcinoma (SCC). The cumulative incidence of SCC of the mouth at 10 years was 8% and at 15 years was 14%. Only 2 patients with SCC are alive, disease free, 5 years after diagnosis. Patients with GVHD developed this complication at a younger age and earlier after transplant when compared to patients who did not have GVHD. In evaluable patients, 25% had hypothyroidism and 40% had the diagnosis of hypogonadism. Normal pregnancies occurred in 4 females with normal offsprings. Other neurological, auditory, visual, pulmonary, hepatic and renal complications related to the disease or to the transplant procedure were also described in a lower frequency. SCC of the mouth was the major cause of death followed by GVHD and its infectious complications. In summary, this analysis confirms that HSCT is an effective treatment for paients with FA. Survival was better for patients transplanted more recently and without chronic GVHD or SCC. The majority of patients who survived beyond 2 years after transplantation had normal lives and full donor chimerism. Further efforts are needed to reduce the burden of late complications related to the disease or to the transplant procedure. Prevention or early detection of SCC may yield further improvement in survival in the future. Keywords: Fanconi anemia. Late complications. Graft versus Host Disease. Cancer. Long term follow up.

Orientador: Helena Zerlotti Wolf Grotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:39:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_LaudiceiaRodriguesde_M.pdf: 1702960 bytes, checksum: 3ba7c0babaf3b3aaba833310422371ed (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O papel da inflamação na fisiopatologia da anemia falciforme tem sido alvo de recentes investigações. O processo obstrutivo que ocorre na microcirculação, causado pelo acúmulo de células falcizadas, leva à lesão do endotélio, com migração e adesão de leucócitos, liberação de radicais oxigênio, liberação e ativação de citocinas inflamatórias. É reconhecida a participação de diversas citocinas na eritropoiese, estimulando ou inibindo a produção de células eritróides pela medula óssea, em especial na anemia que acompanha as doenças inflamatórias/infecciosas crônicas. É reconhecida a ação inibitória do interferon gama (IFN-?) sobre as células progenitoras da medula óssea, além de sua participação nos distúrbios do metabolismo do ferro (Fe), presentes na anemia de doença crônica. A Neopterina (NP) é um marcador associado à imunidade celular produzido pelos monócitos/macrófagos quando estimulados pelo IFN-?. Os dados sobre a participação do IFN-? no processo inflamatório que acompanha a Doença Falciforme são contraditórios e se restringem à Anemia Falciforme (Hb SS). O objetivo deste trabalho foi estudar a participação da Interleucina-3 (IL-3), do IFN -? e da NP em pacientes com Hb SS e hemoglobinopatia SC (Hb SC) na fase estável da doença, a fim de verificar a possível ação dessas citocinas e da NP sobre o metabolismo do Fe e da hematopoiese. Nossos resultados mostraram que as concentrações de IL-3 foram mais altas nos grupos SS e SC em relação ao controle, enquanto as determinações de IFN-? não mostraram diferenças entre os grupos. Pacientes SS com hemoglobina Fetal (Hb F) > 8,5% mostraram valores de IL-3 significativamente mais elevados do que aqueles com Hb F < 8,5% (p= 0,0338). Não foi observada correlação entre os parâmetros inflamatórios e do metabolismo do Fe. Uma correlação direta foi observada somente nos pacientes SS entre os níveis de IL-3 e hemoglobina (Hb) (r= 0,4633, p= 0,0457), IL-3 e Hb F (r= 0,6011, p= 0,0065). Os níveis de NP foram significativamente mais elevados nos pacientes SS e SC do que nos controles, mas não houve diferença entre os 2 grupos de pacientes. Não houve correlação entre NP e os parâmetros relacionados ao metabolismo de Fe. Esses dados sugerem que a IL-3 tem ação estimulante sobre a produção de Hb F e que pacientes com Hb SS, mesmo na fase estável da doença apresentam um certo grau de ativação do sistema monócito/macrófago, representado pelos altos níveis de NP, o que provavelmente contribui para a condição inflamatória crônica desses pacientes / Abstract: Sickle cell disease (SCD) has been recognized as a chronic inflammatory condition. Cytokines are released in response to stress or pathological situations and have influence on hematopoiesis. The aim of this study was to evaluate Interleukin-3 (IL-3), Interferon-? (IFN-?) and neopterin (NP) levels in steady state patients with sickle cell anemia (SS) (n= 38) and SC hemoglobinopathy (n= 17), in order to verify the possible action of those cytokines and NP on iron metabolism and hematopoiesis. Serum IL-3 concentration was higher in SS and SC groups than in controls, whereas IFN-? determinations were not different among groups. SS patients presenting HbF= 8.5% showed IL-3 levels significantly higher than those with HbF< 8.5% (p= 0.0167). No correlation was observed among inflammatory and iron metabolism parameters. It was observed a significant correlation between IL-3 and Hb levels (r= 0.4201, p= 0.0086) and a negative correlation between IL-3 and reticulocyte counting (r= - 0.4019, p= 0.0124) only in SS group. NP levels were significantly higher in SS group than in control (p< 0.0001), but not different between SSxSC and SCxControl. No correlation was observed between NP and iron metabolism parameters. In conclusion, it was confirmed that IL-3 stimulates hematopoiesis and that SS patients, even in steady-state, presenting macrophage/monocyte activation, represented by high levels of NP, that probably contributes to chronic inflammatory condition / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Kazunori Yoshikiyo, Katja Kratz, Kouji Hirota, Kana Nishihara, Minoru Takata, Hitoshi Kurumizaka, Satoshi Horimoto, Shunichi Takeda, and Josef Jiricny "KIAA1018/FAN1 nuclease protects cells against genomic instability induced by interstrand cross-linking agents" PNAS 2010 107 (50) 21553-21557; published ahead of print November 29, 2010, doi:10.1073/pnas.1011081107 / 京都大学 / 0048 / 新制・論文博士 / 博士(医学) / 乙第12772号 / 論医博第2063号 / 新制||医||1000(附属図書館) / 30755 / (主査)教授 小松 賢志, 教授 小川 誠司, 教授 松本 智裕 / 学位規則第4条第2項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

京都大学 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第23372号 / 医博第4741号 / 新制||医||1051(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 滝田 順子, 教授 髙折 晃史, 教授 江藤 浩之 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

Background: Fanconi anaemia (FA) is a rare genetic disorder associated with bone marrow failure (BMF), congenital anomalies and cancer susceptibility. Stem cell transplantation (SCT) offers a potential cure for BMF or leukaemia, but incurs substantial risks. Little is known about factors influencing SCT decision making. Objective: The study objective was to explore factors influencing patients' with FA and family members' decision making about SCT. Design: Using a mixed-methods exploratory design, we surveyed US and Canadian patients with FA and family members who were offered SCT. Main variables studied: Closed-ended survey items measured respondents' beliefs about the necessity, risks and concerns regarding SCT; multivariable logistic regression was used to examine the association between these factors and the decision to undergo SCT. Open-ended survey items measured respondents' perceptions of factors important to the SCT decision; qualitative analysis was used to identify emergent themes. Results: The decision to undergo SCT was significantly associated with greater perceived necessity (OR = 2.81, P = 0.004) and lower concern about harms of SCT (OR = 0.31, P = 0.03). Qualitative analysis revealed a perceived lack of choice among respondents regarding the use of SCT, which was related to physician influence and respondent concerns about patients' quality of life. Conclusions: Overall, study results emphasize the importance of the delicate interplay between provider recommendation of a medical procedure and patient/parental perceptions and decision making. Findings can help providers understand the need to acknowledge family members' perceptions of SCT decision making and offer a comprehensive discussion of the necessity, risks, benefits and potential outcomes.

Background. Clinical management of families with autosomal recessive genetic disorders focuses almost exclusively on the affected family members. However, clinically unaffected members of such families may also be severely troubled by the serious illness in a family member. The purpose of this study was to explore the experiences of healthy siblings of patients with a chronic genetic disease, Fanconi Anemia (FA). Procedure. We used a qualitative, descriptive design, which consisted of in-depth, semi-structured interviews. A convenience sample of nine siblings of patients with FA was recruited from a National Cancer Institute clinical research protocol, which targets families with inherited bone marrow failure syndromes. NVivo 2.0 software facilitated qualitative content analysis of the data. Results. Siblings' rich descriptions provided novel insights into the intricate hardships of living within a family in which a rare, life-threatening, chronic genetic illness in one member is the focus of daily life. Four major themes of the sibling experience emerged from the interview data: (1) containment, (2) invisibility, (3) worry, and (4) despair. Conclusions. Our data suggest that unrecognized psychosocial issues exist for the apparently healthy siblings of patients with FA. This study explores the psychosocial consequences of living in a family with FA and one of only a few studies to explore the sibling experience of chronic illness using a contemporaneous approach. These findings support the need for an increased awareness among health care providers; future hypothesis driven investigation, and improved assessment of problems with potential psychological morbidity.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Fanconi Anemia (FA), a chromosomal instability syndrome, is characterized by bone marrow failure, genetic malformations, and predisposition to malignancies like acute myeloid leukemia (AML) and solid tumors. FA is caused by germline bi-allelic mutations in one of 21 known FA pathway genes and somatic mutations in FA genes are also found in a variety of sporadic cancers. Recently, numerous reports have discovered that the protective function of the FA pathway extends beyond its canonical role in regulation of DNA repair in interphase. In particular, the FA pathway has been shown to function in essential mitotic processes including spindle assembly checkpoint (SAC), cytokinesis, and centrosome maintenance. Understanding of the mechanistic origins of genomic instability leading to carcinogenesis and bone marrow failure has important scientific and clinical implications. To this end, using a micronucleus assay, we showed that both interphase DNA damage and mitotic errors contribute to genomic instability in FA ex vivo and in vivo. Functional studies of primary FA patient cells coupled with super-resolution microscopy revealed that FANCA is important for centrosome dependent spindle assembly supporting the protective role of FA pathway in mitotic processes. Furthermore, we dissected the interactions between the FA pathway and cellular kinase networks by employing a synthetic lethality sh-RNA screen targeting all human kinases. We mapped kinases that were synthetically lethal upon loss of FANCA, particularly those involved in highly conserved signal transduction pathways governing proliferation and cell cycle homeostasis. We mechanistically show that loss of FANCA, the most abundant FA subtype, results in in premature degradation of the mitotic kinase BUBR1 and faster mitotic exit. We further demonstrate that FANCA is important for PCAF-dependent acetylation of BUBR1 to prevent its premature degradation. Our results deepen our understanding of the molecular functions of the FA pathway in mitosis and uncover a mechanistic connection between FANCA and SAC phosphosignaling networks. These findings support the notion that further weakening the SAC through targeting kinases like BUBR1 in FA-deficient cancers may prove to be a rational therapeutic strategy.