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Análise fisiológica, bioquímica e proteômica de respostas ao estresse salino em plantas de feijão de corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.]Abreu, Carlos Eduardo Braga de January 2012 (has links)
ABREU, C. E. B. de. Análise fisiológica, bioquímica e proteômica de respostas ao estresse salino em plantas de feijão de corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.]. 153 f. 2012. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:10:15Z
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Previous issue date: 2012 / In the present work, an integrated physiological, biochemical and proteomic analysis on cowpea (an economically important species) was carried out in order to understand the responses of plants to salinity. Two experiments were conducted in a greenhouse under hydroponic conditions, using two cultivars of cowpea (Vigna unguiculata) with differential tolerance to salt stress: Pitiuba (tolerant) and TVu 2331 (sensitive). In the first experiment, we evaluated the physiological (growth, gas exchange, relative water content, chlorophyll content, chlorophyll fluorescence) and biochemical (ions and organic solutes accumulations) changes induced by increasing levels of salinity (50, 75 and 100 mM NaCl), as well as the influences of stress two-dimensional (2D) protein patterns in leaves tissues. The results showed the existence of contrasting responses between the cultivars studied, especially with respect to inhibition of shoot growth and the accumulation of compatible solutes, which were higher in TVu. However, salinity did not alter the fluorescence parameters in both genotypes. The global analysis of 2D protein patterns showed that increasing levels of NaCl differentially alter the expression pattern of proteins in leaves, with larger changes in dose 100 mM NaCl. Nevertheless, in the second experiment, the moderate dose of salt with 75 mM NaCl was chosen as the reference dose for the study of changes in the proteome during salt stress and recovery. Salinity altered the expression of 22 protein spots in Pitiuba. Of these spots, the identities of 10 (6 up-regulated and 4 down-regulated) were determined by liquid chromatography electro-spray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). In TVU changes were observed in 27 spots being the identity determined for 9 (5 up-regulated and 4 down-regulated). Besides these, 5 spots that kept their rates expressions in salinity conditions in Pitiúba were also identified. The majority of the identified proteins is related to the process of photosynthesis, performing enzymatic functions or participating in the molecular constitution of photosystems. Proteins with protective role against stress such as chaperones and enzymes of oxidative stress (SOD) were identified, as well as calreticulin, which are probably involved in signal transduction network. In addition, during recovery treatments homeostasis mechanisms of plants to new conditions restored the levels of certain proteins, suggesting their participation in the process of acclimation to salt stress. Overall, results provide some additional information that can lead to a better understanding of the molecular basis of salt tolerance or sensitivity in cowpea plants. / No presente trabalho foi realizado um estudo integrado de fisiologia, bioquímica e proteômica comparativa em feijão de corda, uma cultura de grande valor econômico, com o objetivo de entender respostas de aclimatação das plantas à salinidade. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos em casa de vegetação, sob condições hidropônicas, utilizando dois cultivares de feijão de corda (Vigna unguiculata) com tolerância diferencial ao estresse salino: Pitiúba (tolerante) e TVu 2331 (sensível). No primeiro experimento foram avaliadas as mudanças fisiológicas (crescimento, trocas gasosas, teor relativo de água, teor de clorofila, fluorescência da clorofila) e bioquímicas (acúmulo de íons e solutos orgânicos em folhas e raízes e padrão de expressão protéico foliar) induzidas por concentrações crescentes de salinidade (NaCl a 50, 75 e 100 mM). Os resultados demonstraram a existência de respostas contrastantes entre os cultivares estudados, especialmente com relação à inibição do crescimento da parte aérea e ao acúmulo de solutos compatíveis, os quais foram maiores no TVu. Contudo, a salinidade não alterou os parâmetros de fluorescência da clorofila em ambos os cultivares. Concentrações crescentes de NaCl alteraram de forma diferencial o padrão de expressão de proteínas nas folhas, com maiores alterações na dose 100 mM de NaCl. Apesar disso, no segundo experimento, a concentração moderada de sal com NaCl a 75 mM foi escolhida como referência para o estudo das mudanças no proteoma durante o estresse salino e após um período pós-estresse (recuperação). A salinidade modificou a expressão de 22 “spots” protéicos no Pitiúba, dos quais 10 (6 que aumentaram e 4 que diminuíram) tiveram suas identidades determinadas por espectrometria de massas acoplada a cromatografia líquida (LC-ESI-MS/MS). No TVu foram observadas mudanças em 27 “spots”, sendo determinada a identidade de 9 (5 que aumentaram e 4 que diminuíram). Além destes, 5 “spots” que mantiveram suas taxas de expressões em condições de salinidade no Pitiúba também foram identificados. A maioria das proteínas identificadas está relacionada com o processo de fotossíntese, realizando funções enzimáticas ou participando da constituição molecular dos fotossistemas. Proteínas com papel protetor contra o estresse, como chaperonas e enzimas do estresse oxidativo (SOD) foram identificadas, assim como a calreticulina, que provavelmente está envolvida em processos de transdução de sinal. Em adição, foi possível observar que durante a recuperação das plantas os mecanismos de homeostase às novas condições restabeleceram os níveis de algumas proteínas, o que sugere a participação delas no processo de aclimatação ao estresse salino. No geral, os resultados fornecem informações adicionais que podem levar a uma melhor compreensão das bases moleculares da tolerância ou sensibilidade de plantas de feijão de corda à salinidade.
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Papel do peróxido de hdrogênio na interação do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp] com o fungo Colletotrichum gloesporioides (Penz.) Penz. & Sacc. [Teleomorfo Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Von Schrenk] / Hole of hydrogen peroxide on the interaction of [Vigna unguiculata (L.) Walp] with the fungus Colletotrichum gloesporioides (Penz.) Penz. & Sacc. [Teleomorpho Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Von Schrenk]Eloy, Ygor Raphael Gomes January 2007 (has links)
ELOY, Ygor Raphael Gomes. Papel do peróxido de hdrogênio na interação do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp] com o fungo Colletotrichum gloesporioides (Penz.) Penz. & Sacc. [Teleomorfo Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Von Schrenk]. 2007. 158 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-19T11:58:23Z
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Previous issue date: 2007 / Cowpea is an important legume of the Northeast of Brazil and its yield is affected by Colletotrichum fungi. These fungi are known to occur on and cause disease anthracnose on the broad range of plants. In addition, the rapid and transient accumulation of reactive oxygen species, termed ‘oxidative burst’, is one of the earliest observable reaction of plant cells to microbial infection. As plant H2O2 is believed to have direct antimicrobial effects on pathogens it was raised the hypothesis that alteration of H2O2 concentrations by pharmacological compounds could confer differences in susceptibility of the cowpea genotype BR-3-Tracuateua to C. gloeosporioides attack. Thus, seeds were germinated on humid Germitest® paper and after four days seedlings were transferred to hydroponic solution. Eight days later, the primary leaves were excised, infiltrated with glucose oxidase (GO+G), salicylic acid (AS), catalase (CAT) and diphenyleneiodonium chloride (DPI) transferred to Petri dishes and inoculated with 2.0 x 105 spores mL-1 fungal suspension on the adaxial surface. After, leaves were placed in darkness and collected at 12, 24, 48 and 72 hours. By GO+G and SA leaf treatments showed 144.96 and 186.05 nmol H2O2 g-1 fresh mass (FM), respectively, and the fungus presented a subcuticular, intramural necrotrophic strategy, forming secondary hyphae associated with a quick spread and a rapid killing of the host cells. On the leaves treated with SA, it was observed lipid peroxidation and the absence of melanized appresoria. However, CAT and DPI treatment leaves presented 55.50 nmol H2O2 g-1 FM and the fungus showed hemibiotrophic infection-type, with globular vesicles and primary and secondary hyphae formation. All results suggest that despite H2O2 influenced directly the fungal infection process-type it does not confer resistance of cowpea to C. gloeosporioides. / Feijão-de-corda é um importante legume presente na região Nordeste do Brasil e sua produção é afetada por fungos do gênero Colletotrichum. Estes fungos são conhecidos por causar antracnose em uma grande variedade de plantas. Além disso, o acúmulo rápido e transiente de espécies reativas de oxigênio, nomeado de ‘oxidative burst’, é uma das primeiras reações observáveis em células de plantas diante infecção microbiana. Como H2O2 produzido por plantas é considerado por apresentar efeitos antimicrobianos diretos, foi levantada a hipótese que alterações nas concentrações de H2O2 por substâncias farmacológicas poderiam conferir diferenças na susceptibilidade do genótipo de feijão-de-corda, BR-3-Tracuateua, ao ataque do fungo C. gloeosporioides. Deste modo, sementes foram germinadas em papéis Germistest® umedecidos e, depois de 4 dias, plântulas foram transferidas para solução hidropônica. Passados oito dias, as folhas primárias foram cortadas, infiltradas com glucose oxidase (GO+G), ácido salicílico (AS), catalase (CAT) e cloreto de difenilenoiodônio (DPI), transferidas para placas de Petri e inoculadas com suspensão do fungo ajustada para concentração de 2,0 x 105 esporos mL-1. Em seguida, as folhas foram mantidas no escuro e foram coletadas em 12, 24, 48 e 72 horas. Folhas tratadas com GO+G e AS mostraram 144,96 e 186,05 nmol H2O2 g-1 de massa fresca (MF), respectivamente, e o fungo apresentou estratégia subcuticular, intramural necrotrófica, formando hifas secundárias associadas com ágil crescimento e rápida morte das células hospedeiras. Nas folhas tratadas com AS, foi observada peroxidação de lipídios e ausência de apressórios melanizados. Contudo, folhas tratadas com CAT e DPI apresentaram 55,50 nmol H2O2 g-1 MF e, o fungo, mostrou modo de infecção hemibiotrófico, com vesículas globulares e formação de hifas primárias e secundárias. Todos os resultados sugerem que, apesar do H2O2 tenha influenciado diretamente o modo de infecção do fungo, este não conferiu resistência no feijão-de-corda ao C. gloeosporioides.
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Respostas fisiológicas e bioquímicas do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] submetido ao estresse hídrico, infectado com o vírus do mosaico severo do caupi, e sob pressão dos dois estresses combinados / Hysiological and biochemical responses of cowpea [Vigna unguiculata (l.) walp.] under water stress, infected with cowpea severe mosaic virus, and under pressure of combined stressesSilva, Rodolpho Glauber Guedes January 2016 (has links)
SILVA, Rodolpho Glauber Guedes. Respostas fisiológicas e bioquímicas do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] submetido ao estresse hídrico, infectado com o vírus do mosaico severo do caupi, e sob pressão dos dois estresses combinados. 2016. 137 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2016. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T15:41:58Z
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Previous issue date: 2016 / Cowpea (Vigna unguiculata) is a legume (Fabaceae) with high nutritional value grown in Brazil. However, biotic and abiotic factors are responsible for causing significant losses to the growth and yield of leguminous plants. Cowpea mosaic severe virus (CPSMV) is one of the more severe problems affecting cowpea production in Brazil. Also, cowpea are mainly grown in regions where rainfall is low, thus water deficit is quite common. This stress promotes substantial negative impact on growth and development of plants, resulting in decreased of biomass production. Under field conditions, the stresses mentioned above can occur both individually and simultaneously. Therefore, this work aimed to study the responses of cowpea (CE-31 genotype, syn. Pitiuba) subjected to water deficit, infected with CPSMV and under pressure of the two combined stresses. Under these conditions, enzyme kinetics of antioxidant protein (superoxide dismutase, catalase and ascorbate peroxidase) and PR-proteins (glucanase, chitinase and guaiacol peroxidase) as well as hydrogen peroxide dosage and quantification of CPSMV in cowpea leaves were performed. In addition, differentially accumulated proteins from cowpea leaves subjected to these stresses were identified and quantified by LC-MS/MS. Viral infection did not affect the majority of physiological parameters. Already water deficit contributed to the decrease in net photosynthesis, transpiration and stomatal conductance. At 6 days after CPSMV inoculation, the virus did not worsen the negative effects of drought. The results revealed that the enzyme kinetics of the responses was changed across different ways when the stress imposed individually or simultaneously and the presence of water deficit favored viral infection after 2 days of CPSMV inoculation. The proteomic analysis revealed 117 differentially accumulated proteins belonging to different categories according to the physiological functions: energy and metabolism, photosynthesis, protein metabolism, redox homeostasis, regulation factors and RNA processing, response to stress, plant defense and others. These results are important for understanding the cellular mechanisms that operate in cowpea (CE-31 genotype), when subjected to water deficit, CPSMV infection and both combined stresses. / O feijão-de-corda (Vigna unguiculata) é uma das principais leguminosas cultivadas no Brasil. Entretanto, devido à presença de fatores bióticos e abióticos são geradas perdas significativas na produtividade desta cultura. O Vírus do Mosaico Severo do Caupi (CPSMV) tem atacado com grande frequência os cultivos brasileiros. Além disso, devido o feijão-de-corda ser cultivado em regiões onde os índices pluviométricos são baixos, a deficiência hídrica é bastante comum. Esse estresse promove impacto negativo substancial no crescimento e desenvolvimento das plantas, resultando em diminuição na produção de biomassa. Em condições de campo, os estresses mencionados acima podem ocorrer tanto individualmente quanto simultaneamente. Portanto, o presente estudo teve como objetivo estudar as respostas do feijão-de-corda (genótipo CE-31, sin. Pitiúba) submetido ao estresse hídrico, infectado com o CPSMV e sob pressão dos dois estresses combinados. Sob essas condições, a cinética enzimática de proteínas antioxidantes (superóxido dismutase, catalase e ascorbato peroxidase) e PR-proteínas (glucanase, quitinase e guaiacol peroxidase), bem como a dosagem de peróxido de hidrogênio e quantificação do CPSMV em folhas de feijão-de-corda foram realizadas. Além disso, proteínas diferencialmente acumuladas em folhas de feijão-de-corda submetidas à esses estresses foram quantificadas e identificadas por LC-MS/MS e bancos de dados disponíveis. A infecção viral não alterou a maioria dos parâmetros fisiológicos. Já a deficiência hídrica contribuiu para a diminuição da fotossíntese líquida, transpiração e condutância estomática. Até 6 dias após inoculação do CPSMV, o vírus não agravou os efeitos negativos da seca. Os resultados da cinética enzimática revelaram que as respostas são alteradas de formas diferentes frente aos estresses quando impostos individualmente ou simultaneamente e que a presença do estresse hídrico favoreceu a infecção viral após 2 dias de inoculação. A análise proteômica revelou 117 proteínas diferencialmente acumuladas pertencentes a diferentes categorias de acordo com as funções fisiológicas: energia e metabolismo, fotossíntese, metabolismo de proteínas, homeostase redox, fatores de regulação e processamento de RNA, resposta ao estresse, defesa de plantas e outras. Estes resultados são importantes para a compreensão dos mecanismos celulares que atuam no feijão-de-corda, genótipo CE-31, quando submetido ao estresse hídrico, à infecção pelo CPSMV e a ambos os estresses de forma combinada.
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Preferência do pulgão-preto por feijão-de-corda coletado em estados do Nordeste brasileiro / Preference of the black aphid for cowpea collected in states of northeastern BrazilNere, Daniel Rodrigues January 2016 (has links)
NERE, Daniel Rodrigues. Preferência do pulgão-preto por feijão-de-corda coletado em estados do Nordeste brasileiro. 2016. 51 f. Dissertação (Mestrado em Fitotecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Weslayne Nunes de Sales (weslaynesales@ufc.br) on 2016-08-26T14:40:54Z
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Previous issue date: 2016 / The black aphid stands out as one of the most important pests of cowpea, as it causes direct and indirect damages to the plant. A measure of efficient control and easy to use by producers is resistant varieties, which have the ability to reduce infestation or damage caused by this insect. In this sense, this work had the purpose of seeking new sources of cowpea genotypes resistant to black aphid, preserved by farmers, in two distinct regions of the State of Ceará (Cariri and Curu Valley) and landraces collected sparsely in some states of the Northeast. The experiment was conducted in a greenhouse in the UFC-Fortaleza and IFCE - Umirim with a randomized complete block design with four replications, testing seventy-one genotypes distributed in three tests according to the collection area. For comparison, in each assay, were used four genotypes with known resistance. To evaluate the resistance of genotypes, we used the following variables: number of live adults, number of live nymphs and the effective resistance. The results indicated 10 highly resistant genotypes: Rabo-de-tatu (CCE-115), Corujinha (CCE-055), Leandro-do-monte (CCE-112), Paulistinha (CCE-068) Branco-do-marinheiro (CCE-078), Costela-de-vaca (CCE-046), Recife-marrom (CCE-094) Rabo-de-peba (CCE-118), Moitinha (CCE-077) and Passo II (SCC-091), which represent a source resistance to black aphid and may be used in genetic improvement of the cowpea around the world, through backcrossing. Finally, it was found that in all regions studied, there was found cowpea genotypes resistant to Aphis craccivora and, independent of the area, where they were collected, it was found genetic diversity. The mechanisms involved in genotypes resistance to adult aphids may possible be antibiosis and / or antixenosis and for nymphs the results indicate antibiosis. / O pulgão-preto destaca-se como uma das mais importantes pragas do feijão-de-corda, por causar danos diretos e indiretos às plantas. Uma medida de controle eficiente e de fácil emprego pelo produtor é a utilização de variedades resistentes, que têm a possibilidade de reduzir a infestação ou os danos causados por este inseto. Nesse sentido, esta pesquisa objetiva-se buscar novas fontes de resistência ao pulgão-preto e inferir que mecanismos de resistência poderiam estar envolvidos, em genótipos de feijão-de-corda preservados por agricultores, de duas regiões distintas do Estado do Ceará (região do Cariri e Vale do Curu) e em materiais coletados, dispersamente, por alguns estados do Nordeste. O experimento foi conduzido em telado na UFC-Fortaleza e no IFCE – Umirim, com delineamento em blocos ao acaso, com quatro repetições e setenta e um tratamentos, distribuídos em três ensaios, conforme a região de coleta. Para efeito de comparação, em cada ensaio, foram testados quatro genótipos padrões, com resistência conhecida. Para avaliar a resistência dos genótipos, as seguintes variáveis foram usadas: número de adultos vivos, número de ninfas vivas e Resistencia efetiva. Os resultados indicaram 10 genótipos altamente resistentes, – Rabo-de-tatu (CCE-115), Corujinha (CCE-055), Leandro-do-monte (CCE-112), Paulistinha (CCE-068), Branco-do-marinheiro (CCE-078), Costela-de-vaca (CCE-046), Recife-marrom (CCE-094), Rabo-de-peba (CCE-118), Moitinha (CCE-077) e Passo II (CCE-091), e que representam fonte de resistência ao pulgão-preto e podem ser utilizados para melhoramento genético do feijão-de-corda, em todo o mundo, através de retrocruzamentos. Ao final, verificou-se que, em todas as regiões estudadas, foram encontrados genótipos de feijão-de-corda resistentes ao Aphis craccivora e que, independentemente das regiões de coleta, existe diversidade genética. Os prováveis mecanismos de resistência envolvidos são antibiose e/ou antixenose para adultos e antibiose para ninfas.
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Resistência de genótipos de Vigna unguiculata (L.) Walp.à Aphis craccivora Koch e Crinocerus sanctus Fabricius. / Genotypes of Vigna unguiculata (L.) Walp. resistance to Aphis craccivora Koch and Crinocerus sanctus Fabricius.Silva, Jefté Ferreira da January 2008 (has links)
SILVA, J. F. Resistência de genótipos de Vigna unguiculata (L.) Walp.à Aphis craccivora Koch e Crinocerus sanctus Fabricius. 2008. 67 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, 2008. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-16T19:24:37Z
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Previous issue date: 2008 / The cowpea black aphid (Aphis craccivora Koch, 1854) is the most important insect pest of cowpea beans (Vigna unguiculata (L.) Walp.) and is cited as a key pest of this crop. One of the easiest way for its control is by the use of plant resistance to this pest being those natural or induced resistance. The objective of this research was evaluate natural resistance of Vigna unguiculata (L.) Walp. genotypes against black aphid and observe the effect of an resistance inductor, the cis-jasmone on cowpea to control aphid and a true bug and the effects of this material on production parameters. In green house were realized choice and no choice essays to search among 20 genotypes whose would have natural resistance and preference after cis jamone spray at a rate of 50g/ha on the Vita 7 cultivar. It also was realized one bioassay to determine the length of one generation on EPACE 10 and Vita 7 genotypes. The field work was done at Quixada, Ceará State (Brazil) by applying cis-jasmone at the dosage of 39.06 g/ha and 78.13 g/ha using EPACE 10 variety and observe the infestation of Aphis craccivora and bugs and a possible effect on production. The genotypes TVu 408P2, TVu 410, TVu 36 and TVu 1037 presented natural resistance being less susceptible to the aphid. Cis-jasmine had no effect, as resistance is concerned, on aphid population when compared to untreated control plants. O mean generation time of aphid on Vita 7 cultivar was five days and nineteen hours. No insect completed its life cycle on EPACE 10. In field the low insect level, is believed to be due to the natural resistance of genotype used, so no treatment differences were observed. There was also no difference for bug in the evaluation done. Cis-jamone had no effect on production parameters. / O pulgão-preto-do-feijoeiro (Aphis craccivora Koch, 1854) é uma das mais importantes pragas do feijão-de-corda (Vigna unguiculata (L.) Walp.) e é citada como praga chave desta cultura. Uma das formas mais simples de controle é a resistência da planta a esta praga podendo ser esta resistência natural ou induzida. Objetivou-se com este trabalho avaliar genótipos de Vigna unguiculata (L.) Walp. quanto a resistência genética natural ao pulgão-preto e observar o efeito de um indutor de resistência, a cis-jasmona, sobre o feijão-de-corda para o controle do pulgão e do percevejo e os efeitos deste indutor sobre a produção. Em casa de vegetação foram realizados experimentos de preferência com e sem chance de escolha para definir quais dos vinte genótipos testados possuíam resistência natural e de preferência após a aplicação de cis-jasmona na concentração de 50 g/ha no genótipo Vita 7. Também foi realizado experimento para mensurar o tempo de uma geração de Aphis craccivora nos genótipos EPACE 10 e Vita 7. O experimento de campo foi realizado em Quixadá, Ceará, onde foi aplicado a cis-jasmona na concentração de 39,06 g/ha e 78,13 g/ha no genótipo EPACE 10 para observar a infestação de Aphis craccivora, percevejos e um possível efeito do indutor sobre a produção. Os genótipos TVu 408P2, TVu 410, TVu 36 e TVu 1037 apresentaram resistência natural sendo os menos preferidos pelo pulgão. A cis-jasmona não influenciou na resistência ao pulgão uma vez que o tratamento com o produto não diferiu da testemunha sem aplicação. O tempo médio para uma geração de pulgão no genótipo Vita 7 foi, em média, cinco dias e dezenove horas. No genótipo EPACE 10 nenhum pulgão completou o ciclo. Em campo a infestação por pulgão foi baixa devido à resistência natural do genótipo utilizado não apresentando diferença entre os tratamentos. Também não houve diferença estatística entre os tratamentos para o ataque dos percevejos que surgiram na área do experimento. A cis-jasmona não influenciou a produção do feijão-de-corda.
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Análise fisiológica, bioquímica e proteômica de respostas ao estresse salino em plantas de feijão de corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.]. / Physiologic, biochemistry and proteomic analysis of responses to salt stress in plants of cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.].Abreu, Carlos Eduardo Braga de January 2012 (has links)
ABREU, C. E. B. Análise fisiológica, bioquímica e proteômica de respostas ao estresse salino em plantas de feijão de corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.]. 2012. 151 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-04T22:57:25Z
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Previous issue date: 2012 / In the present work, an integrated physiological, biochemical and proteomic analysis on cowpea (an economically important species) was carried out in order to understand the responses of plants to salinity. Two experiments were conducted in a greenhouse under hydroponic conditions, using two cultivars of cowpea (Vigna unguiculata) with differential tolerance to salt stress: Pitiuba (tolerant) and TVu 2331 (sensitive). In the first experiment, we evaluated the physiological (growth, gas exchange, relative water content, chlorophyll content, chlorophyll fluorescence) and biochemical (ions and organic solutes accumulations) changes induced by increasing levels of salinity (50, 75 and 100 mM NaCl), as well as the influences of stress two-dimensional (2D) protein patterns in leaves tissues. The results showed the existence of contrasting responses between the cultivars studied, especially with respect to inhibition of shoot growth and the accumulation of compatible solutes, which were higher in TVu. However, salinity did not alter the fluorescence parameters in both genotypes. The global analysis of 2D protein patterns showed that increasing levels of NaCl differentially alter the expression pattern of proteins in leaves, with larger changes in dose 100 mM NaCl. Nevertheless, in the second experiment, the moderate dose of salt with 75 mM NaCl was chosen as the reference dose for the study of changes in the proteome during salt stress and recovery. Salinity altered the expression of 22 protein spots in Pitiuba. Of these spots, the identities of 10 (6 up-regulated and 4 down-regulated) were determined by liquid chromatography electro-spray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). In TVU changes were observed in 27 spots being the identity determined for 9 (5 up-regulated and 4 down-regulated). Besides these, 5 spots that kept their rates expressions in salinity conditions in Pitiúba were also identified. The majority of the identified proteins is related to the process of photosynthesis, performing enzymatic functions or participating in the molecular constitution of photosystems. Proteins with protective role against stress such as chaperones and enzymes of oxidative stress (SOD) were identified, as well as calreticulin, which are probably involved in signal transduction network. In addition, during recovery treatments homeostasis mechanisms of plants to new conditions restored the levels of certain proteins, suggesting their participation in the process of acclimation to salt stress. Overall, results provide some additional information that can lead to a better understanding of the molecular basis of salt tolerance or sensitivity in cowpea plants. / No presente trabalho foi realizado um estudo integrado de fisiologia, bioquímica e proteômica comparativa em feijão de corda, uma cultura de grande valor econômico, com o objetivo de entender respostas de aclimatação das plantas à salinidade. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos em casa de vegetação, sob condições hidropônicas, utilizando dois cultivares de feijão de corda (Vigna unguiculata) com tolerância diferencial ao estresse salino: Pitiúba (tolerante) e TVu 2331 (sensível). No primeiro experimento foram avaliadas as mudanças fisiológicas (crescimento, trocas gasosas, teor relativo de água, teor de clorofila, fluorescência da clorofila) e bioquímicas (acúmulo de íons e solutos orgânicos em folhas e raízes e padrão de expressão protéico foliar) induzidas por concentrações crescentes de salinidade (NaCl a 50, 75 e 100 mM). Os resultados demonstraram a existência de respostas contrastantes entre os cultivares estudados, especialmente com relação à inibição do crescimento da parte aérea e ao acúmulo de solutos compatíveis, os quais foram maiores no TVu. Contudo, a salinidade não alterou os parâmetros de fluorescência da clorofila em ambos os cultivares. Concentrações crescentes de NaCl alteraram de forma diferencial o padrão de expressão de proteínas nas folhas, com maiores alterações na dose 100 mM de NaCl. Apesar disso, no segundo experimento, a concentração moderada de sal com NaCl a 75 mM foi escolhida como referência para o estudo das mudanças no proteoma durante o estresse salino e após um período pós-estresse (recuperação). A salinidade modificou a expressão de 22 “spots” protéicos no Pitiúba, dos quais 10 (6 que aumentaram e 4 que diminuíram) tiveram suas identidades determinadas por espectrometria de massas acoplada a cromatografia líquida (LC-ESI-MS/MS). No TVu foram observadas mudanças em 27 “spots”, sendo determinada a identidade de 9 (5 que aumentaram e 4 que diminuíram). Além destes, 5 “spots” que mantiveram suas taxas de expressões em condições de salinidade no Pitiúba também foram identificados. A maioria das proteínas identificadas está relacionada com o processo de fotossíntese, realizando funções enzimáticas ou participando da constituição molecular dos fotossistemas. Proteínas com papel protetor contra o estresse, como chaperonas e enzimas do estresse oxidativo (SOD) foram identificadas, assim como a calreticulina, que provavelmente está envolvida em processos de transdução de sinal. Em adição, foi possível observar que durante a recuperação das plantas os mecanismos de homeostase às novas condições restabeleceram os níveis de algumas proteínas, o que sugere a participação delas no processo de aclimatação ao estresse salino. No geral, os resultados fornecem informações adicionais que podem levar a uma melhor compreensão das bases moleculares da tolerância ou sensibilidade de plantas de feijão de corda à salinidade.
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Caracterização da Proteína desacopladora mitocondrial (pUCP) de Vigna unguiculata (L.) Walp. / Characterization of plant uncoupling protein (pUCP) of Vigna unguiculata (L.) WALPGarantizado, Francisco Edson Alves January 2007 (has links)
GARANTIZADO, F. E. A. Caracterização da Proteína desacopladora mitocondrial (pUCP) de Vigna unguiculata (L.) Walp. 2007. 121 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-22T20:26:23Z
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Previous issue date: 2007 / The uncoupling proteins of plants (pUCPs) are integral proteins of membrane, located in the mitochondrial inner membrane, belong the Mitochondrial Anion Carrier Family (MACF). They are responsible for the dissipation as heat of the electrochemical gradient of protons, generated during respiration. In the presence of free fatty acid acids (FFA), the UCPs facilitate the re-entry of protons from intermembrane space for the matrix and these protons are deviated from the influence of the ATP sintase what leads to the inhibition the oxidative phosphorilation. The function of these enzymes completely is still not elucidated, but literature suggests its participation in processes of fruit maturation, in the adaptation to stress conditions and in cell protection by avoiding the production of reactive species of oxygen (EROS). The involvement of this enzyme in adaptive thermogenesis is questionable. The objective of the present work was to characterize the enzymatic activity of pUCP of mitochondria from hypocotyls of Vigna unguiculata (L.) Walp through polarographic assays and to identify the(s) gene(s) of pUCPs, through its expression in different conditions of abiotic stress. The activity of pUCP was evaluated in the presence of fatty acids (palmitic, linoleic, myristic and lauric) and BSA, having succinate and malate as oxidizable substrates at different pHs (6,5, 7,2 and 7,8). The higuest activities were obtained in the presence of linoleic acid, succinate as substrate and with more alkaline pHs (7,2 and 7,8). Degenerate primers, obtained from ten different pUCPs, called pump1 and pump2, has been designed for amplification of the gene fragments through RT-PCR and PCR. The total RNA was isolated from plants leaves of V. unguiculata submitted to different stress conditions (100 mM NaCl, 1 mM H2O2 and 200,67 g/L PEG) and cDNAs fragments amplified by RT-PCR had been purified and cloned in the plasmid PCR4-TOPO. Seven cDNA fragments of approximately 760 pb had been sequenced and presented 100% of identity among themselves. The comparison of the deduced amino acid sequence of this cDNA fragment with those of soybean disclosed 94% of identity with the gene GmUCP1a and 90% of identity GmUCP1b soybean gene. These results suggest that the pUCP gene identified in V. unguiculata (VuUCP1a) is ortologous to the GmUCP1a gene from soybean (Glycine max). The expression of genes of pUCP in beans, under abiotic stress conditions (salinity, oxidative and osmotic conditions) analyzed through RT-PCR disclosed a differential profile what suggests induction of expression of VuUCP1a only in response to salt stress. The genomic DNA of V. unguiculata was isolated and two gene fragments (1700 and 1900 pb) had been amplified by PCR. The amplification of two fragments from the genomic DNA suggests the existence of at least two pUCPs genes in beans what leads to the conclusion of a pUCP multigenic family. / As proteínas desacopladoras de planta (pUCPs) são proteínas integrais de membrana, localizadas na membrana mitocondrial interna, pertencentes a Família de Carreadores de Ânions Mitocondriais (FCAM), responsáveis pela dissipação do gradiente eletroquímico de prótons, gerado pela respiração, como calor. Na presença de ácidos graxos livres (AGL), as pUCPs facilitam a reentrada de prótons do espaço intermembranar para a matriz, desviando-os da ATP Sintase, inibindo assim a fosforilação oxidativa. A função dessas enzimas ainda não está completamente elucidada, mas a literatura sugere a sua participação em processos de amadurecimento de frutos, adaptação a situações de estresses bióticos e abióticos e proteção da célula evitando a produção de espécies reativas de oxigênio (EROS). Sua participação na termogênese adaptativa é questionável. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar a atividade enzimática da pUCP de mitocôndrias de hipocótilos de Vigna unguiculata (L.) Walp através de ensaios polarográficos, identificar o(s) gene(s) das pUCPs, estudando a sua expressão em diferentes situações de estresses abióticos. A atividade da pUCP foi avaliada em presença de ácidos graxos (palmítico, linoléico, mirístico e láurico) e BSA tendo succinato e malato como substratos e distintos pHs (6,5, 7,2 e 7,8). As maiores atividades foram obtidas com ácido linoleico na presença de succinato em pHs mais alcalinos (7,2 e 7,8). Primers degenerados a partir de dez diferentes pUCPs, denominados pump1 e pump2, foram desenhados para a amplificação dos fragmentos gênicos por RT-PCR e PCR. Isolou-se o RNA total de folhas de plântulas de V. unguiculata submetidas a diferentes condições de estresses (NaCl 100mM, H2O2 1mM e PEG 200,67g/L) que foram amplificados por RT-PCR, purificados e clonados no plasmídio pCR4-TOPO. Sete fragmentos gênicos de aproximadamente 760 pb foram seqüenciados, apresentando 100% de identidade entre si. A comparação da seqüência deduzida de aminoácidos desse fragmento de cDNA com a soja revelou 94% de homologia com GmUCP1a e 90% de homologia com GmUCP1b. Os resultados sugerem que o gene do feijão identificado em V. unguiculata (VuUCP1a) é ortólogo ao gene GmUCP1a de soja (Glycine max). A expressão de VuUCP1a em feijão em condições de estresses abióticos (salino, oxidativo e osmótico) através de análise por RT-PCR revelou um perfil diferencial, sugerindo indução de expressão de VuUCP1a apenas em resposta ao estresse salino. Isolou-se o DNA genômico de V. unguiculata e dois fragmentos gênicos (1700 e 1900pb) foram amplificados por PCR. A amplificação de dois fragmentos distintos a partir do DNA genômico sugere a existência de pelo menos dois genes codificando pUCPs em feijão, sendo assim, a pUCP é codificada por uma família multigênica.
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Análise proteômica de raízes de feijão-de-corda (Vigna unguiculata), CV. CE-31, inoculadas com o nematóide das galhas (Meloydogine incognita) / Proteomics analysis of cowpea roots (Vigna unguiculata), CV. CE-31, inoculated with root-knot nematode (Meloydogine incognita)Araújo Filho, José Hélio de January 2011 (has links)
ARAÚJO FILHO, J. H. Análise proteômica de raízes de feijão-de-corda (Vigna unguiculata), CV. CE-31, inoculadas com o nematóide das galhas (Meloydogine incognita). 2011. 131 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-22T18:54:37Z
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Previous issue date: 2011 / The cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] is an important leguminous used as food, being cultivated, mostly in arid African savannas , Asia and south of America, covering more over 12 millions of hectares, with annual production about 3 millions of tons. The cowpea it’s a culture greatly important in tropics zones characterized by low pluviometric precipitation, high temperature , gravely soils and poor fertility. Among the pathogenic organism that cause plant disease, the nematode, mainly Meloydogine sp. generate annual losses about several billions of dollars all over the world and the Meloidogyne incognita and Meloidogyne javanica species be the most damagers. One of the main cultures attacked by nematodes is the cowpea. Regard it, there is always needs to improve the knowledge about the relationship between host and pathogens aimed develop novels strategies to diminish eventual losses. The present work aimed identify the differential expression of proteins in Meloidogyne incognita resistant cowpea total roots and mitochondria roots cv Pitiúba (CE-31), inoculated and mock inoculated, using 2D electrophoresis assay associated with MS identification and gene expression analyses by semi-quantitative PCR. The results obtained showed at least 22 altered proteins in inoculated total roots and more 22 proteins of mitochondria roots, when compared with their respective controls and the top of alterations occurred next to 6° day after inoculation with pathogen. Mitochondria proteins cannot be identified reliability. Among the total roots proteins we can emphasize PR-1, 2 and 3, recognized as defense proteins, ascorbate peroxidase and superoxide dismutase (anti-oxidative brush enzymes) and a leghemoglobin, which can be the first report about this protein in this pathosystem. The gene expression analyses coincided with proteomics finds. / O feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] é uma importante leguminosa usada como alimento, sendo cultivada, primariamente, nas savanas secas do Continente Africano, na Ásia e na América do Sul, cobrindo mais de 12 milhões de hectares, com produção anual de cerca de 3 milhões de toneladas. O feijão-de-corda se constitui numa cultura de extrema importância em zonas semi-áridas dos trópicos, caracterizadas por baixa precipitação pluviométrica, altas temperaturas, solos arenosos e de baixa fertilidade. Dentre os organismos que causam doenças nos vegetais, os nematóides geram prejuízos anuais de, aproximadamente, vários bilhões de dólares na agricultura mundial e as espécies Meloidogyne incognita e Meloidogyne javanica são as mais danosas. Uma das principais culturas atacadas pelos nematóides é o feijão-de-corda. Em função disso, existe sempre demanda para se buscar melhorar a compreensão dessa relação entre hospedeiros e patógenos objetivando criar novas estratégias para minimizar eventuais perdas. O presente trabalho teve como objetivo identificar as proteínas que têm sua expressão diferenciada em raízes de feijão-de-corda resistente ao Meloidogyne incognita (inoculadas e não inoculadas) usando eletroforese bidimensional (2D) associada à espectrometria de massas de proteínas extraídas da raiz total e de mitocôndrias de raiz do cv Pitiúba (CE-31), resistente ao nematóide, inoculada com este patógeno, em comparação com plantas não-inoculadas (controle) em conjunto com análise de expressão gênica semi-quantitativa (PCR semi-quantitativa). Os resultados aqui obtidos demonstraram que houve alteração de pelo menos 22 proteínas nas amostras de raízes inoculadas e mais 22 proteínas de mitocôndrias de raízes, quando comparados com seus respectivos controles e que o ápice das suas alterações ocorriam por volta do 6° dia após a inoculação do patógeno. As proteínas de mitocôndrias não puderam ser identificadas com confiabilidade. Dentre as proteínas de raízes totais identificadas podemos destacar as PR-1, 2 e 3, que são reconhecidamente proteínas de defesa, ascorbato peroxidase e superóxido dismutase (enzimas anti-estresse oxidativo) e uma leghemoglobina, que pode ser o primeiro relato dessa proteína nesse patossistema. As análises de expressão gênica concordaram perfeitamente com os achados proteômicos.
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Épocas de semeadura e populações de plantas para Cultivares de feijão-caupi no outono-inverno em Botucatu-SP / Sowing times and plant population to cowpea cultivars grown in fall-winter in Botucatu-spMatoso, Aline de Oliveira [UNESP] 21 July 2014 (has links) (PDF)
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000842891.pdf: 1970242 bytes, checksum: 3ffaca69bc9986345d99d30cf6750fa1 (MD5) / O feijão-caupi [Vigna unguiculata L. Walp.] está se tornando uma opção para os produtores de diferentes regiões do Brasil, pela maior tolerância ao estresse hídrico, ciclo rápido, adaptação a solos de menor fertilidade e menor custo de produção. A cultura apresenta crescente expansão, em especial para o cultivo na segunda safra (safrinha), nas regiões Centro-Oeste e Sudeste do país, e aumento da demanda pelos mercados interno e externo. Porém, são praticamente inexistentes informações sobre esta cultura no estado de São Paulo. Objetivou-se com este trabalho avaliar o desempenho produtivo de cultivares de feijão-caupi, de porte semiereto e semiprostrado, em diferentes épocas de semeadura e populações de plantas, no período de outono-inverno, na região central do estado de São Paulo. Foram conduzidos dois experimentos, durante os anos de 2011, 2012 e 2013, em um Latossolo Vermelho distroférrico, em Botucatu-SP. No Experimento I, o delineamento foi o de blocos casualizados, em esquema de parcela subdivididas e quatro repetições. Em 2011, as parcelas foram compostas por quatro épocas de semeadura: 1a quinzena de março; 2a quinzena de março; 1a quinzena de abril e 2a quinzena de abril. Em 2012, por seis épocas: 1a quinzena de fevereiro; 2a quinzena de fevereiro; 1a quinzena de março; 2a quinzena de março; 1a quinzena de abril e 2a quinzena de abril. E no ano de 2013, por cinco épocas: 1a quinzena de fevereiro; 2a quinzena de fevereiro; 1a quinzena de março; 2a quinzena de março e 1a quinzena de abril. Em 2011, as subparcelas foram compostas pelas cultivares: BRS Cauamé, BRS Guariba, BRS Itaim, BRS Novaera e BRS Tumucumaque. Em 2012, por BRS Cauamé, BRS Guariba, BRS Novaera, BRS Potengi e BRS Xiquexique. Em 2013, utilizou-se a BRS Cauamé, BRS Guariba, BRS Novaera, BRS Potengi e BRS Tumucumaque. Foi utilizada a população ... / The cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] is becoming an option for farmers in different regions of the Brazil, for greater tolerance to water stress, short cycle, adaptation to soils with lower fertility and lower production cost. The cowpea crop has increased expansion, especially for growth the in second cropping season (out-ofseason) in the Midwest and Southeast regions of the country, and demand increase for domestic and foreign markets. However, there are not information and research on cowpea crop for the São Paulo state. The objective of this study was to evaluate the agronomic performance of semi-erect and semi-prostrate cowpea cultivars, at different sowing dates and plant populations, during the fall-winter, in the central region of the São Paulo state, Brazil. Two experiments were carried during the years 2011, 2012, and 2013, grown in a Typic Haplorthox (dystroferric Red Latosol) in Botucatu, São Paulo state. In the Experiment I, the randomized complete block design was used, in a split-plot arrangement, with four replications. In 2011, the plots consisted of four sowing dates: first half of and second half of March, and April. In 2012, of six sowing dates: first half of and second half of February, March, and April. And in 2013, of five sowing dates: first half of and second half of February, March, and first half of April. In the 2011, the subplots were composed by cowpea cultivars: BRS Cauamé, BRS Guariba, BRS Itaim, BRS Novaera, and BRS Tumucumaque. In 2012, by BRS Cauamé, BRS Guariba, BRS Novaera, BRS Potengi, and BRS Xiquexique. In 2013, has used the BRS Cauamé, BRS Guariba, BRS Novaera, BRS Potengi, and BRS Tumucumaque. The initial plant densities were 200.000 plants ha-1. In the Experiment II, the experimental design was a randomized complete blocks in a 2 x 5 factorial scheme, with four replications. The treatments of the factorial consisted of the ...
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Desempenho agronômico e qualidade tecnológica de cultivares de feijão-caupi em função da época de semeadura em Uberaba-MGAlmeida, Fernando da Silva [UNESP] 18 July 2014 (has links) (PDF)
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000800414.pdf: 877025 bytes, checksum: 5ff1bb7a13d80ab8c6a77bcf8f669adc (MD5) / Mesmo estando em franca expansão para outras regiões do país, a maioria das cultivares de feijão-caupi foram desenvolvidas para as condições das regiões norte e nordeste do Brasil. Assim, existe a necessidade da seleção de cultivares mais adaptadas às condições edafoclimáticas do cerrado, mas também as melhores épocas de semeadura em termos de produtividade e qualidade tecnológica dos grãos da espécie. O objetivo do trabalho foi avaliar o desempenho agronômico e a qualidade tecnológica de cultivares de feijão-caupi de porte ereto e semiereto em função da época de semeadura em condições de sequeiro em Uberaba-MG. O delineamento experimental foi de blocos casualizados, com parcelas subdivididas e quatro repetições. As parcelas foram representadas por três épocas de semeadura (14/12/2012, 14/01/2013 e 14/02/2013). As subparcelas foram constituídas por seis cultivares (BRS Guariba, BRS Potengi, BRS Cauamé, BRS Novaera, BRS Itaim e BRS Tumucumaque). A subparcela experimental foi formada por quatro fileiras de cinco metros de comprimento espaçadas em 0,40 metros, sendo considerada como área útil as duas fileiras centrais. O desempenho agronômico e a qualidade tecnológica dos grãos das cultivares de feijão-caupi foram influenciados pelas condições edafoclimáticas das épocas de semeadura. Na semeadura em dezembro ocorreu um desenvolvimento vegetativo expressivo das cultivares de feijão-caupi acarretando uma menor produtividade de grãos. A cultivar BRS Tumucumaque foi a mais produtiva na semeadura realizada em janeiro. Na semeadura realizada em fevereiro, todas as cultivares obtiveram maiores produtividades de grãos, com destaque para a BRS Itaim e BRS Novaera, com produtividade de 3.439 e 3.435 kg ha-1 respectivamente / Even in expanding to other regions of the country, most of cowpea cultivars were developed for the conditions of the northern and northeastern regions of Brazil. Thus, it is necessary to select cultivars which are more adapted to the environmental conditions of the cerrado, and also the best sowing dates in terms of productivity and technological quality of grain crops. The aim of this study was to evaluate the agronomic performance and technological quality of erect and semi-erect cowpea cultivars depending on sowing under rainfed conditions in Uberaba-MG. The experimental design was randomized blocks, in split plots with four replications. The plots were represented by three sowing dates (12/14/2012, 01/14/2013 and 02/14/2013). The subplots consisted on six cultivars (BRS Guariba Potengi BRS, BRS Cauamé, Novaera BRS, BRS Itaim Tumucumaque and BRS). The experimental subplot consisted on four five feet rows in length, spaced 0.40 meters, and the considered floor area was the two central rows. The agronomic performance and technologic quality of cowpea grain cultivars were influenced by environmental conditions of sowing dates. At sowing in December there was a significant vegetative growth of cowpea cultivars resulting in a lower yield. BRS Tumucumaque was the most productive in sowing done in January. In February, all cultivars had higher grain yields, especially for BRS and BRS Novaera Itaim, with productivity of 3,439 and 3,435 kg ha-1 respectively
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