Submitted by FERNANDA ZANI MANIERI null (fernandamanieri@gmail.com) on 2017-06-05T18:55:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Fernanda Zani Manieri.pdf: 1725459 bytes, checksum: eece7e9f99805d25a8e5ce4b31d531db (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-06T16:47:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 manieri_fz_me_arafcf.pdf: 1725459 bytes, checksum: eece7e9f99805d25a8e5ce4b31d531db (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T16:47:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 manieri_fz_me_arafcf.pdf: 1725459 bytes, checksum: eece7e9f99805d25a8e5ce4b31d531db (MD5) Previous issue date: 2017-05-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Salmonella Typhimurium é um patógeno causador de gastroenterite em humanos e outros mamíferos, e sua habilidade de invadir as células epiteliais e replicar-se dentro de macrófagos a torna um importante modelo de estudo de mecanismos de virulência e interação patógeno-hospedeiro. O estudo desta interação baseia-se na sinalização química via hormônios do hospedeiro e do patógeno, e durante a investigação destes processos foi detectada uma nova proteína denominada VisP, relacionada a funções celulares diversas como manutenção de membrana, metabolismo, virulência bacteriana e resposta ao estresse. A motilidade via flagelos, importante na colonização e exploração de novos nichos, é um dos importantes mecanismos de patogenicidade bacteriana durante o processo de infecção. O objetivo deste trabalho foi investigar a motilidade mediada por flagelos e seu funcionamento em S. Typhimurium, bem como a participação de VisP durante o processo. Para isso, foram feitos ensaios de motilidade, análise da expressão gênica de genes alvos importantes para a patogênese, expressão da flagelina FliC e microscopia em cada um dos mutantes isogênicos comparados à cepa selvagem. Foi evidenciado que a retirada do gene visP afeta a motilidade de S. Typhimurium, bem como promove um desequilíbrio na homeostase da membrana celular, gerando um aumento exacerbado de flagelina através de um mecanismo ainda não elucidado. A compreensão destes processos é essencial para o entendimento da relação patógeno-hospedeiro, e contribui para o desenvolvimento de novas tecnologias e terapias. / Salmonella Typhimurium is a pathogen that promotes gastroenteritis in humans and mammals, and its ability to invade epithelial cells and replicate inside macrophages makes Salmonella an important model for the study of virulence and host-pathogen interactions. This interaction is based on chemical signaling via host and pathogen hormones, and during this investigation a novel protein named VisP was described. This protein is related to diverse cell processes as membrane maintenance, metabolism, virulence and stress response. Flagellar motility, which is important for colonization and exploration of new niches, is one of the bacterial pathogenicity mechanisms that occurs during infection. The aim of the study was to investigate flagellar motility and its operation in S. Typhimurium and verify the participation of VisP protein during this process. Motility assays, gene expression analysis of target genes important for pathogenesis, expression of FliC protein and microscopy were performed with the isogenic mutants comparative to the wild type. The results demonstrated that the visP gene impacts motility in S. Typhimurium, promoting a misbalance in cellular membrane and increasing levels of flagellin via an unknown mechanism. The elucidation of these processes is essential to understanding host-pathogen associations, and contributes to the development of novel technologies and therapies. / FAPESP: 2014/06779-2 / CNPq: 441884/2014-8

Submitted by Erondina Silva (erondinasilva@ufgd.edu.br) on 2010-10-21T16:30:58Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ClaudiaBezerraSilvaGoncalves.pdf: 706995 bytes, checksum: 06a07a0fa6e5cf13359322b97665e4e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Erondina Silva(erondinasilva@ufgd.edu.br) on 2010-10-21T16:32:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ClaudiaBezerraSilvaGoncalves.pdf: 706995 bytes, checksum: 06a07a0fa6e5cf13359322b97665e4e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-21T16:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ClaudiaBezerraSilvaGoncalves.pdf: 706995 bytes, checksum: 06a07a0fa6e5cf13359322b97665e4e6 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / No flagelo antenal se encontra a maior parte de receptores sensoriais externos conhecidos: sensilla placodea (discos olfativos, D.O.), basiconica, trichodea (cerdas), coeloconica, ampullacea e campaniformia. Nas abelhas Apidae, têm sido estudadas sob os mais diversos aspectos, a morfologia externa, sendo que um dos caracteres que tem chamado a atenção pela sua importância é a antena das abelhas. O estudo das antenas e de suas estruturas sensoriais olfativas tem sido realizado com mais intensidade em abelhas altamente sociais, como nos Apina e Meliponina. O objetivo do trabalho foi analisar comparativamente, em nível de microscopia óptica, o tamanho e forma da antena, o número e a distribuição das estruturas olfativas antenais ou sensilla placodea em abelhas Euglossina e Meliponina com diferentes padrões sociais. Foram usadas antenas de 10 machos e 10 fêmeas de Melipona favosa orbignyi e de Scaptotrigona depilis; 10 machos de Eufriesea violaceae e de Exaerete smaragdina e, 2 machos de Exaerete dentata, totalizando 62 abelhas analisadas para cada espécie estudada. Para cada segmento foi contado o número absoluto de discos olfativos, foram medidos diversos caracteres morfométricos e obtidos os valores AT (área total do segmento), aE (área com D.O. ), a (área sem D.O.), e ainda, calculados os índices D.O./AT e D.O./aE. Verificou-se que as abelhas Euglossina têm mais D.O., em números absolutos, do que as Meliponina. Dentre os Meliponina, os machos e as operárias de M. favosa orbignyi tem maior número absoluto de D.O., e, na comparação entre os sexos, os machos possuem mais D.O. do que as fêmeas. 3 Referente aos caracteres A (largura total do segmento) D e E ( relativos ao comprimento do segmento), os maiores valores são apresentados pelos machos Euglossina, quando comparados com operárias e machos de Meliponina. Quanto às áreas do segmento antenal, os machos Euglossina apresentam a área total AT muito maior do que em Meliponina. Dentre todas as espécies analisadas, os Euglossina mostram a área com estruturas olfativas (aE ) e a área sem esses D.O.(a) com tamanhos semelhantes; enquanto que nos Meliponina, aE > a. Dentre os Meliponina, S. depilis têm mais discos (D.O./AT), com maior concentração no segmento (D.O./aE) – sendo que nos machos, esses valores são maiores do que nas fêmeas. As operárias M. favosa orbignyi mostram esses índices bem maiores do que nos machos, indicando maior quantidade de D.O., com maior concentração no segmento. Dentre todos os Euglossina, os machos de Eufriesea violaceae têm mais D.O. do que E. dentata e E. smaragdina (ambos com valores inferiores aos dos Meliponina). Portanto S. depilis, independente de seu tamanho menor, têm o maior número de discos olfativos; e dentre os Euglossina, Eufriesea violaceae têm maior número de D.O. do que as Exaerete (que são consideradas abelhas de grande porte, e maiores que Eufriesea violaceae). ______________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT - Most part of the external sensory receptaclles known are located in the antennal flagellate: sensilla placodea (olfactory discs, D.O.), basiconica, trichodea (cerdas), coeloconica, ampullaceae and campaniformia. The Apidae bees have been studied on diverse aspects, the external morphology, among which has call the attention for its importance is the bee antennae. The study of the antennae and their sensory olfactive structures has been done more frequently in highly social bees, such as Apina and Meliponina. The purpose of the paper was to analyze comparatively, at microscopic level, the size and the form of the antenna, the number and the distribution of the olfactory antennal structures or sensilla placodea in Euglossina and Meliponina bees with different social standards It was antennae from 10 males of Melipona favosa orbignyi and of Scaptotrigona depilis, 10 males of Eufriesea violaceae and of Exaerete smaragdina and 2 males of Exaerete dentata, totaling 62 bees analyzed for each species studied. For segment was counted the absolute number of the olfactory discs, it was measured diverse morphometric characters and obtained the following values AT (total area of the segment) aE (area with D.O), a (area with D.O.) and it was calculated the indices D.O./AT and D.O/aE. It was the Euglossina bees have more D.O., related to absolute numbers than the Meliponina. Among the Meliponina, the males and the workers the M. favosa orbignyi 5 have more absolute number of D.O., and comparing sex, the males have more D.O. than the females. As for the characters A (width of the segment) D and E (length of the segment), the Euglossina male show more value when compared to the workers and males of the Meliponina. As for the area of the antennal segment, Euglossina males present a total area AT much bigger than Meliponina. Among all the species analyzed, Euglossina show an area with olfactive structure (aE) and an area without theses D.O. (a) with similar sizes; while Meliponina, aE > a. Among the Meliponina, S. depilis have more discs (D.O./AT) with more concentration on the segment (D.O./aE) – among the males, theses values are bigger than the females. The worker, M. favosa orbignyi, show theses indices much bigger than the males, indicating more quantity of D.O. with more concentration in the segment. Among all Euglossina, the males of Eufriesea violaceae have more D.O. than E. dentata and E. smaragdina (both with lower values than the Meliponina). Hence S. depilis, despite its smaller size, have the bigger number of D.O. than the Euglossina, Eufriesea violaceae have bigger number D.O. than the Exaerete (which are considered big bees and bigger than Eufriesea violaceae).

Submitted by FERNANDA DE OLIVEIRA BARBOSA null (feobarbosa@hotmail.com) on 2016-04-11T19:18:08Z No. of bitstreams: 1 DIssertação_Fernanda_de_Oliveira_Barbosa.pdf: 3283611 bytes, checksum: 0f6c2b0766490591a0e2a8457d08fef4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-04-13T12:50:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barbosa_fo_me_jabo.pdf: 3283611 bytes, checksum: 0f6c2b0766490591a0e2a8457d08fef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T12:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barbosa_fo_me_jabo.pdf: 3283611 bytes, checksum: 0f6c2b0766490591a0e2a8457d08fef4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Salmonella Enteritidis (SE) causa o paratifo aviário em aves e frequentemente está relacionada aos surtos de infecção alimentar em seres humanos. A contribuição do flagelo versus motilidade na interação patógenohospedeiro requer estudos mais aprofundados. Para melhor entendimento da contribuição individual desses fatores de virulência em aves, pintinhos de um dia de vida foram desafiados oralmente com estirpe selvagem de SE, uma mutante não-móvel mas flagelada (SE ΔmotB) e outra mutante aflagelada (SE ΔfliC). Excreção fecal e colonização de fígado, baço e conteúdo cecal pelas estirpes de SE foram avaliadas. Além disso, também foi realizada a avaliação das alterações macroscópicas e microscópicas. Nos estágios iniciais da infecção, ambos mutantes mostraram menor capacidade de colonizar o ceco, além de menor recuperação no baço por SE ΔfliC comparando a estirpe selvagem SE. Após 7 dpi não havia diferenças na contagem das três estirpes em conteúdo cecal, fígado e baço. Análises histopatológicas demonstraram que estirpes flageladas (SE ΔmotB e SE) induziram reatividade linfóide em inglúvio, ceco, íleo e fígado. No entanto, nos estágios iniciais da infecção a estirpe SE ΔfliC não estimulou a reatividade linfóide em lâmina própria de ceco e íleo mas induziu discretos focos necróticos em fígado. Portanto, neste estudo a presença de estrutura flagelar e motilidade parece exercer um papel nos estágios iniciais da colonização intestinal e infecção sistêmica por SE nas aves. / Salmonella Enteritidis (SE) causes fowl paratyphoid in poultry often related to outbreaks of food-borne diseases in humans. The contribution of flagella and motility in host pathogen interaction require further investigation. To better understand the individual contribution of these virulence factors in poultry, one day old chickens were challenged orally with wildtype strain of SE, a nonmotile but fully flagellated (SE ΔmotB) and aflagellated mutant (SE ΔfliC). Faecal excretion and colonization of liver, spleen and cecal contents by the SE strains were assessed. Additionally, the assessment of gross and microscopic alterations was also performed. At the early stages of infection both mutants showed lower capacity to colonize the ceca, besides the lower recovering in spleen of SE ΔfliC comparing to the wild type of SE. After 7 dpi there were no differences among the counts of the three strains in ceca, liver and spleen. Histopathological analyses demonstrated that flagellated strains (wild type SE and SE ΔmotB) induced lymphoid reactivity in crop, ceca, ileum and liver. On the other hand, in the early stages of infection, SE ΔfliC strain did not stimulate lymphoid reactivity in lamina propria of ceca and ileum but induced discrete necrotic foci in liver. Thus in the present study the flagellar structure and motility seemed to play a role at the early stages of the intestinal colonization and systemic infection by SE in the chicken. / FAPESP: 2014/02014-1

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Resumo: Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium causam infecções em seres humanos e animais que são frequentemente associadas à extensa colonização intestinal e excreção fecal. A presença de estrutura flagelar no patógeno está relacionada à indução de inflamação intestinal e atenuação de infecção sistêmica no hospedeiro. Por outro lado, a infecção por estirpes aflageladas resulta em pouca inflamação e consequente infecção sistêmica grave. No presente estudo, foi avaliada a hipótese de que a síntese de maior quantidade de flagelina em estirpes de Salmonella geneticamente modificadas poderia levar a infecção sistêmica menos intensa em aves. Para investigar as conseqüências da superprodução de flagelina, foram construídas estirpes de Salmonella Enteritidis e Typhimurium contendo deleções nos genes clpP e fliD (que levam à superexpressão de flagelina) e patogenicidade e imunogenicidade foram comparadas com as respectivas estirpes selvagens em aves infectadas. Os resultados indicaram que o aumento da síntese de flagelina por SE ΔclpPΔfliD e STM ΔclpPΔfliD culmina em déficit da taxa de multiplicação bacteriana. Porém, tais alterações não interferiram na capacidade de colonização cecal e excreção fecal das estirpes mutantes. O mesmo foi observado em fígado e baço, mas após 14 dpi as estirpes mutantes tendem a serem eliminadas destes órgãos. Mesmo com síntese mais elevada de flagelina, as estirpes mutantes recrutaram quantidades semelhantes de linfócitos e macrófagos em tonsila cecal... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Salmonella Enteritidis and Salmonella Typhimurium cause infections in humans and animals that are often associated with extensive intestinal colonization and faecal shedding. The presence of flagellar structure in the pathogen is related to the induction of intestinal inflammation and attenuation of systemic infection in the host. On the other hand, the absence of flagellin results in severe systemic infection as a result of mild inflammatory intestinal responses provoked by aflagellated strains. The hypothesis that higher flagellin production by Salmonella strains could induce immunogenic response during infection in chickens was evaluated in the present study. To investigate the consequences of flagellin overproduction, strains of Salmonella Enteritidis and Typhimurium containing clpP and fliD deletions (which lead to flagellin overexpression) were constructed, and pathogenicity and immunogenicity were compared with their respective wild-type strains in infected chickens. The results suggested that the increase in flagellin synthesis by SE ΔclpPΔfliD and STM ΔclpPΔfliD culminates in a deficit in the bacterial multiplication rate. However, that changes did not interfere with the capacity for caecal colonization and faecal excretion of mutant strains. The same was observed in the liver and spleen, but after 14 dpi, mutant strains tend to be eliminated from these organs. Even with higher flagellin synthesis, the mutant strains recruited similar amounts of lymphocytes and macro... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2016-02-26T14:53:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ClaudiaBezerraSGoncalves.pdf: 706994 bytes, checksum: 7b1a77a7f4ff1c1b643ddf918c282667 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Most part of the external sensory receptaclles known are located in the antennal flagellate: sensilla placodea (olfactory discs, D.O.), basiconica, trichodea (cerdas), coeloconica, ampullaceae and campaniformia. The Apidae bees have been studied on diverse aspects, the external morphology, among which has call the attention for its importance is the bee antennae. The study of the antennae and their sensory olfactive structures has been done more frequently in highly social bees, such as Apina and Meliponina. The purpose of the paper was to analyze comparatively, at microscopic level, the size and the form of the antenna, the number and the distribution of the olfactory antennal structures or sensilla placodea in Euglossina and Meliponina bees with different social standards It was antennae from 10 males of Melipona favosa orbignyi and of Scaptotrigona depilis, 10 males of Eufriesea violaceae and of Exaerete smaragdina and 2 males of Exaerete dentata, totaling 62 bees analyzed for each species studied. For segment was counted the absolute number of the olfactory discs, it was measured diverse morphometric characters and obtained the following values AT (total area of the segment) aE (area with D.O), a (area with D.O.) and it was calculated the indices D.O./AT and D.O/aE. It was the Euglossina bees have more D.O., related to absolute numbers than the Meliponina. Among the Meliponina, the males and the workers the M. favosa orbignyi 5 have more absolute number of D.O., and comparing sex, the males have more D.O. than the females. As for the characters A (width of the segment) D and E (length of the segment), the Euglossina male show more value when compared to the workers and males of the Meliponina. As for the area of the antennal segment, Euglossina males present a total area AT much bigger than Meliponina. Among all the species analyzed, Euglossina show an area with olfactive structure (aE) and an area without theses D.O. (a) with similar sizes; while Meliponina, aE > a. Among the Meliponina, S. depilis have more discs (D.O./AT) with more concentration on the segment (D.O./aE) among the males, theses values are bigger than the females. The worker, M. favosa orbignyi, show theses indices much bigger than the males, indicating more quantity of D.O. with more concentration in the segment. Among all Euglossina, the males of Eufriesea violaceae have more D.O. than E. dentata and E. smaragdina (both with lower values than the Meliponina). Hence S. depilis, despite its smaller size, have the bigger number of D.O. than the Euglossina, Eufriesea violaceae have bigger number D.O. than the Exaerete (which are considered big bees and bigger than Eufriesea violaceae) / No flagelo antenal se encontra a maior parte de receptores sensoriais externos conhecidos: sensilla placodea (discos olfativos, D.O.), basiconica, trichodea (cerdas), coeloconica, ampullacea e campaniformia. Nas abelhas Apidae, têm sido estudadas sob os mais diversos aspectos, a morfologia externa, sendo que um dos caracteres que tem chamado a atenção pela sua importância é a antena das abelhas. O estudo das antenas e de suas estruturas sensoriais olfativas tem sido realizado com mais intensidade em abelhas altamente sociais, como nos Apina e Meliponina. O objetivo do trabalho foi analisar comparativamente, em nível de microscopia óptica, o tamanho e forma da antena, o número e a distribuição das estruturas olfativas antenais ou sensilla placodea em abelhas Euglossina e Meliponina com diferentes padrões sociais. Foram usadas antenas de 10 machos e 10 fêmeas de Melipona favosa orbignyi e de Scaptotrigona depilis; 10 machos de Eufriesea violaceae e de Exaerete smaragdina e, 2 machos de Exaerete dentata, totalizando 62 abelhas analisadas para cada espécie estudada. Para cada segmento foi contado o número absoluto de discos olfativos, foram medidos diversos caracteres morfométricos e obtidos os valores AT (área total do segmento), aE (área com D.O. ), a (área sem D.O.), e ainda, calculados os índices D.O./AT e D.O./aE. Verificou-se que as abelhas Euglossina têm mais D.O., em números absolutos, do que as Meliponina. Dentre os Meliponina, os machos e as operárias de M. favosa orbignyi tem maior número absoluto de D.O., e, na comparação entre os sexos, os machos possuem mais D.O. do que as fêmeas. 3 Referente aos caracteres A (largura total do segmento) D e E ( relativos ao comprimento do segmento), os maiores valores são apresentados pelos machos Euglossina, quando comparados com operárias e machos de Meliponina. Quanto às áreas do segmento antenal, os machos Euglossina apresentam a área total AT muito maior do que em Meliponina. Dentre todas as espécies analisadas, os Euglossina mostram a área com estruturas olfativas (aE ) e a área sem esses D.O.(a) com tamanhos semelhantes; enquanto que nos Meliponina, aE > a. Dentre os Meliponina, S. depilis têm mais discos (D.O./AT), com maior concentração no segmento (D.O./aE) sendo que nos machos, esses valores são maiores do que nas fêmeas. As operárias M. favosa orbignyi mostram esses índices bem maiores do que nos machos, indicando maior quantidade de D.O., com maior concentração no segmento. Dentre todos os Euglossina, os machos de Eufriesea violaceae têm mais D.O. do que E. dentata e E. smaragdina (ambos com valores inferiores aos dos Meliponina). Portanto S. depilis, independente de seu tamanho menor, têm o maior número de discos olfativos; e dentre os Euglossina, Eufriesea violaceae têm maior número de D.O. do que as Exaerete (que são consideradas abelhas de grande porte, e maiores que Eufriesea violaceae)