Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-09T19:14:53Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mariana Cristina de Morais Rodrigues - 2016.pdf: 1662967 bytes, checksum: 21eacb29fa5e6184be947945ff9816a4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-10T11:28:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mariana Cristina de Morais Rodrigues - 2016.pdf: 1662967 bytes, checksum: 21eacb29fa5e6184be947945ff9816a4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T11:28:58Z (GMT). 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They characteristically do not include isolated or highly purified substances in their composition from any source, or are associated with other extracts. One of the main challenges in producing phytotherapic medicine is the complex composition of the medicinal plant that depends on climatic and geographic factors, and cultivation, drying and storage conditions. The objective of this work was to obtain solid pharmaceutical forms containing extract standardized in psoralen and bergapten of B. gaudichaudii, as well as the analyses of these pharmaceutical forms following all the parameters stated by the Normative instruction no 04 of 2014. Chapter 1 is about the vegetal drug characterization and posterior production and standardization of the liquid extract, the analytical method was co-validated by High Efficiency Liquid Chromatography (CLAE) to determine the markers levels in the liquid extract, according to ANVISA norms. The method presented to be selective, linear, precise and exact. The liquid extract was standardized in total furanocoumarins expressed in psoralen and bergapten, and the level was 0.20% (m/v) (20.81 μg/mL of psoralen and bergapten). Chapter 2 describes the development of coated pellets containing the liquid standardized extract, having an average diameter of 0.75±0.08 mm and sphericity of 0.98±0.09. The acquired pellets were encapsulated in hard gelatinous capsules (500 mg of pellets per capsule), the average level of total furanocoumarins per capsule was 641.41 μg. Tablets containing the coated pellets were produced, and it was possible to keep the pellets whole, even after the compression force of 0.5 ton was applied on them. The tablets were tested according to the analyses recommended by the Brazilian Pharmacopeia and presented a total furanocoumarin level of 587.6 μg per tablet. The analytical methodology was co-validated for the quantification of psoralen and bergapten in the coated pellets and the tablets containing them. Chapter 3 describes the obtainment and standardization of the soft extract from B.gaudichaudii and the development of tablets containing the soft extract. The soft extract was characterized according the pharmacopeia tests, and there were 82.02% (m/m) of dry residue, and the total furanocoumarin levels expressed in psoralen and bergapten was 2.93% (m/v) (58.8 μg/g of psoralen and bergapten). Three different formulations of tablets containing soft standardized extract were acquired by humid rout previous granulation. In each formulation the diluents, microcrystalline cellulose (MCC) and starch proportion were variated. The compression was done in a hydraulic press and the process was controlled to establish the compression conditions. The analytical methodology was co-validated to quantify the total furanocoumarins in the tablets and the level were 16,800 μg per tablet. / Brosimum gaudichaudii Trécul. pertencente a família Moraceae é tradicionalmente utilizada como recurso terapêutico para o tratamento de leucodermias .A raiz desta planta é a parte que contém maior concentração de substâncias fotossensibilizantes importantes contra leucodermias, dentre elas o psoraleno e o bergapteno que pertencem à classe de metabólitos secundários denominados furanocumarinas lineares. Por definição, fitoterápico é o produto obtido exclusivamente de matéria prima ativa vegetal com propósito profilático, curativo ou paliativo. Caracterizam-se por não incluir na sua composição substâncias ativas isoladas ou altamente purificadas, de qualquer origem, nem as associações dessas com outros extratos. Um dos principais desafios na produção de um medicamento fitoterápico é a complexidade da composição da planta medicinal, que depende de fatores climátios, geográficos, condições de cultivo, secagem e armazenamento. O presente trabalho teve como objetivo a obtenção de formas farmacêuticas sólidas contendo o extrato padronizado em psoraleno e bergapteno de B. gaudichaudiii, bem como a análise destas formas farmacêuticas seguindo todos os parâmetros exigidos pela Instrução normativa n° 04 de 2014. O capítulo 1 trata da caracterização da droga vegetal e posteriormente a obtenção e padronização do extrato líquido, covalidou-se o método analítico por Cromatografia a Líquido de Alta Eficiência (CLAE) para determinação dos teores dos marcadores no extrato líquido, segundo as normas da ANVISA. O método mostrou-se seletivo, linear, preciso e exato. O extrato líquido foi padronizado em furanocumarinas totais expressas em psoraleno e bergapteno, e obteve-se o teor de 0,20% (m/v) (20,81 μg/mL de psoraleno e bergapteno). O capítulo 2 descreve o desenvolvimento de pellets revestidos contendo o extrato líquido padronizado obtido, tendo um diâmetro médio 0,75+0,08 mm e esfericidade 0,98+0,09. Encapsulou-se os pellets obtidos em cápsulas gelatinosas duras (500mg de pellets por cápsula), o teor médio de furanocumarinas totais por cápsula foi 641,41μg. Obteve-se comprimidos contendo pellets revestidos e foi possível manter os pellets íntegros mesmo após aplicada à força de compressão de 0,5 ton nos mesmos. Os comprimidos foram analisados segundo os testes preconizados pela Farmacopeia Brasileira e apresentaram um teor de furanocumarinas totais de 587,6μg por comprimido. A metodologia analítica foi covalidada para quantificação do psoraleno e bergapteno tanto nos pellets revestidos como nos comprimidos contendo pellets. O capítulo 3 descreve a obtenção e padronização do extrato mole de B.gaudichaudii e o desenvolvimento de comprimidos contendo o extrato mole obtido. O extrato mole foi caracterizado segundo os testes farmacopeicos e obteve 82,02% (m/m) de teor de sólidos, e o teor de furanocumarinas totais expressas em psoraleno e bergapteno que foi 2,93% (m/v) (58,8 μg/g de psoraleno e bergapteno). Obtiveram-se três diferentes formulações de comprimidos por previa granulação por via úmida, contendo o extrato mole padronizado. Em cada formulação variou-se a proporção dos diluentes celulose microcristalina (MCC) e amido. A compressão foi feita por meio de uma prensa hidráulica e efetuou-se o controle do processo para o estabelecimento das condições de compressão. A metodologia analítica foi covalidada para quantificação de furanocumarinas totais nos comprimidos obtidos, e a concentração de furanocumarinas totais para cada comprimido foi 16800 μg por comprimido.

O crescente aumento da tolerância aos fungicidas atualmente utilizados é um dos principais problemas tanto na área clínica quanto na agrícola e tem estimulado o desenvolvimento de estratégias alternativas para o controle de fungos patogênicos, tais como o tratamento fotodinâmico antimicrobiano (TFA), que pode utilizar fotossensibilizadores (FS) de origem natural ou sintética. Alguns FS, como as cumarinas e furanocumarinas, são produzidos por espécies de Citrus como limão Tahiti (Citrus latifolia) e toranjas (Citrus paradisi). O presente estudo investigou o TFA in vitro de conídios do fungo fitopatogênico Colletotrichum acutatum com: (1) o corante fenotiazínico azul de metileno (MB), (2) uma furanocumarina comercial, 8-metoxipsoraleno (8-MOP), (3) uma cumarina comercial, (2H-chromen-2-one), (4) a cumarina 5,7-dimetoxicumarina extraída no presente trabalho a partir de óleo da casca do limão Tahiti, (5) a cumarina 7-hidroxicumarina extraída no presente trabalho a partir de óleo essencial de toranja rubi, (6) duas frações extraídas por De Menezes e colaboradores (2014a) a partir de um resíduo da indústria citrícola, uma delas constituída pela furanocumarina isopimpinelina e outra constituída por uma mistura das cumarinas 7-metoxicumarina e 5,7-dimetoxicumarina (3:1), (7) cinco extratos brutos obtidos a partir de óleos da casca e essencial de limão Tahiti e óleos essenciais de toranjas rubi e branca. Com exceção do extrato bruto obtido do óleo essencial de toranja branca, todos os demais extratos apresentaram cumarinas e/ou furanocumarinas em sua composição. As suspensões de conídios foram tratadas com os diferentes compostos (50 ?M para os compostos comerciais e as frações puras e 12,5 mg L-1 para os extratos e a mistura) e expostas à radiação solar por 1 h. O MB foi exposto à radiação solar por 30 min, 1 e 2 h. Determinou-se o efeito do tratamento fotodinâmico em folhas de mudas de laranja Valencia (Citrus sinensis) com (1) 8-MOP, (2) mistura de cumarinas, (3) 5,7-dimetoxicumarina e (4) o extrato bruto de limão Tahiti. Adicionalmente, experimentos para avaliar a estabilidade do 8-MOP exposto à radiação solar por até 12 h foram realizados. Nesses experimentos, soluções de 8-MOP (50 ?M) foram expostas à radiação solar e alíquotas foram retiradas após os diferentes tempos de exposição. Após as exposições, estudos de espectroscopia de absorção no UV e emissão de fluorescência foram realizados, além da realização de experimentos para avaliar a eficácia do TFA com os FS previamente expostos à radiação solar por 6 e 12 h. Os TFA mais eficazes foram com o MB, 8-MOP (ambos 50 ?M), a mistura de cumarinas e um dos extratos brutos obtidos de limão Tahiti (ambos 12,5 mg L-1), que mataram 99,998%, 99,378%, 99,336% e 65,049% dos conídios, respectivamente, após 1 h de exposição à radiação solar. Nenhum dano nas folhas de laranja foi observado após o TFA com os compostos. Os espectros de absorção e emissão de fluorescência das soluções de 8-MOP expostas à radiação solar mostraram fotodegradação do composto após 12 h de exposição. Entretanto, as soluções de 8-MOP expostas por 6 e por 12 h ainda foram capazes de matar 99,978% e 95,591% dos conídios de C. acutatum, respectivamente / Increasing tolerance to currently used fungicides is a major problem both in clinical and agricultural areas and has stimulated the development of alternative strategies to control pathogenic fungi such as the antimicrobial photodynamic treatment (APDT), that can use natural or synthetic photosensitizers (PS). Some PS, such as coumarins and furocoumarins are produced by Citrus species such Tahiti acid lime (Citrus latifolia) and grapefruit (Citrus paradisi). This study investigated the in vitro APDT of conidia of the plant-pathogenic fungi C. acutatum with: (1) the phenothiazinium dye methylene blue (MB), (2) commercial furocoumarin, 8-methoxypsoralen (8-MOP), (3) commercial coumarin (2H-chromen-2-one), (4) coumarin 5,7-dimethoxycoumarin, extracted in this study from Tahiti lime peel oil, (5) coumarin 7-hidroxycoumarina, extracted in this study from ruby grapefruit essential oil, (6) two fractions extracted by De Menezes et al (2014a) from a Citrus industry residue, one of them constituted by the furocoumarin isopimpinellin, and the other constituted by the mixture of coumarins 7-methoxycoumarin and 5,7-dimethoxycoumarin (3:1), (7) five crude extracts obtained from Tahiti lime peel or essential oil and ruby and white grapefruit essential oil. Except the extract from the white grapefruit, all the others presented coumarins and/or furocoumarins in their composition. Conidial suspentions were treated with the different PS (50 ?M for commercial and pure compounds and 12.5 mg L-1 for the extracts and the mixture) and exposed to solar radiation for 1 h. The MB was exposed to solar radiation for 30 min, 1 and 2 h. The APDT effect on the leaves of Valencia orange trees (Citrus sinensis) with (1) 8-MOP, (2) the mixture of coumarins, (3) 5,7-dimethoxycoumarin, and (4) the most efective extract from Tahiti lime were determined. Additionally, experiments to assess the 8-MOP stability after exposure to solar radiation for 12 h were realized. 8-MOP solutions (50 ?M) were exposed under solar radiation and rates were removed after different times of exposition. After the expositions, absorption spectroscopic studies in UV and fluorescence emission were realized, as well as holding the realization of experiments of APDT efficacy evaluation after 6 and 12 h to exposure under solar radiation. The more effective treatments were with MB, 8-MOP (both 50 ?M), the coumarins mixture and one of the extracts from Tahiti lime (both 12.5 mg L-1), killing at least 99,998%, 99,378%, 99,336% and 65,049% of the conidia, respectively after 1 h under solar radiation. No damage to orange tree leaves was observed after APDT with any of the compounds. The absorption and fluorescence intensity spectra showed the 8-MOP photodegradation after 12 h of exposition, although the 8-MOP solutions exposed under solar radiation for 6 and 12 h still killed at least 99,978% and 95,591% of the C. acutatum conidia, respectively

O crescente aumento da tolerância aos fungicidas atualmente utilizados é um dos principais problemas tanto na área clínica quanto na agrícola e tem estimulado o desenvolvimento de estratégias alternativas para o controle de fungos patogênicos, tais como o tratamento fotodinâmico antimicrobiano (TFA), que pode utilizar fotossensibilizadores (FS) de origem natural ou sintética. Alguns FS, como as cumarinas e furanocumarinas, são produzidos por espécies de Citrus como limão Tahiti (Citrus latifolia) e toranjas (Citrus paradisi). O presente estudo investigou o TFA in vitro de conídios do fungo fitopatogênico Colletotrichum acutatum com: (1) o corante fenotiazínico azul de metileno (MB), (2) uma furanocumarina comercial, 8-metoxipsoraleno (8-MOP), (3) uma cumarina comercial, (2H-chromen-2-one), (4) a cumarina 5,7-dimetoxicumarina extraída no presente trabalho a partir de óleo da casca do limão Tahiti, (5) a cumarina 7-hidroxicumarina extraída no presente trabalho a partir de óleo essencial de toranja rubi, (6) duas frações extraídas por De Menezes e colaboradores (2014a) a partir de um resíduo da indústria citrícola, uma delas constituída pela furanocumarina isopimpinelina e outra constituída por uma mistura das cumarinas 7-metoxicumarina e 5,7-dimetoxicumarina (3:1), (7) cinco extratos brutos obtidos a partir de óleos da casca e essencial de limão Tahiti e óleos essenciais de toranjas rubi e branca. Com exceção do extrato bruto obtido do óleo essencial de toranja branca, todos os demais extratos apresentaram cumarinas e/ou furanocumarinas em sua composição. As suspensões de conídios foram tratadas com os diferentes compostos (50 ?M para os compostos comerciais e as frações puras e 12,5 mg L-1 para os extratos e a mistura) e expostas à radiação solar por 1 h. O MB foi exposto à radiação solar por 30 min, 1 e 2 h. Determinou-se o efeito do tratamento fotodinâmico em folhas de mudas de laranja Valencia (Citrus sinensis) com (1) 8-MOP, (2) mistura de cumarinas, (3) 5,7-dimetoxicumarina e (4) o extrato bruto de limão Tahiti. Adicionalmente, experimentos para avaliar a estabilidade do 8-MOP exposto à radiação solar por até 12 h foram realizados. Nesses experimentos, soluções de 8-MOP (50 ?M) foram expostas à radiação solar e alíquotas foram retiradas após os diferentes tempos de exposição. Após as exposições, estudos de espectroscopia de absorção no UV e emissão de fluorescência foram realizados, além da realização de experimentos para avaliar a eficácia do TFA com os FS previamente expostos à radiação solar por 6 e 12 h. Os TFA mais eficazes foram com o MB, 8-MOP (ambos 50 ?M), a mistura de cumarinas e um dos extratos brutos obtidos de limão Tahiti (ambos 12,5 mg L-1), que mataram 99,998%, 99,378%, 99,336% e 65,049% dos conídios, respectivamente, após 1 h de exposição à radiação solar. Nenhum dano nas folhas de laranja foi observado após o TFA com os compostos. Os espectros de absorção e emissão de fluorescência das soluções de 8-MOP expostas à radiação solar mostraram fotodegradação do composto após 12 h de exposição. Entretanto, as soluções de 8-MOP expostas por 6 e por 12 h ainda foram capazes de matar 99,978% e 95,591% dos conídios de C. acutatum, respectivamente / Increasing tolerance to currently used fungicides is a major problem both in clinical and agricultural areas and has stimulated the development of alternative strategies to control pathogenic fungi such as the antimicrobial photodynamic treatment (APDT), that can use natural or synthetic photosensitizers (PS). Some PS, such as coumarins and furocoumarins are produced by Citrus species such Tahiti acid lime (Citrus latifolia) and grapefruit (Citrus paradisi). This study investigated the in vitro APDT of conidia of the plant-pathogenic fungi C. acutatum with: (1) the phenothiazinium dye methylene blue (MB), (2) commercial furocoumarin, 8-methoxypsoralen (8-MOP), (3) commercial coumarin (2H-chromen-2-one), (4) coumarin 5,7-dimethoxycoumarin, extracted in this study from Tahiti lime peel oil, (5) coumarin 7-hidroxycoumarina, extracted in this study from ruby grapefruit essential oil, (6) two fractions extracted by De Menezes et al (2014a) from a Citrus industry residue, one of them constituted by the furocoumarin isopimpinellin, and the other constituted by the mixture of coumarins 7-methoxycoumarin and 5,7-dimethoxycoumarin (3:1), (7) five crude extracts obtained from Tahiti lime peel or essential oil and ruby and white grapefruit essential oil. Except the extract from the white grapefruit, all the others presented coumarins and/or furocoumarins in their composition. Conidial suspentions were treated with the different PS (50 ?M for commercial and pure compounds and 12.5 mg L-1 for the extracts and the mixture) and exposed to solar radiation for 1 h. The MB was exposed to solar radiation for 30 min, 1 and 2 h. The APDT effect on the leaves of Valencia orange trees (Citrus sinensis) with (1) 8-MOP, (2) the mixture of coumarins, (3) 5,7-dimethoxycoumarin, and (4) the most efective extract from Tahiti lime were determined. Additionally, experiments to assess the 8-MOP stability after exposure to solar radiation for 12 h were realized. 8-MOP solutions (50 ?M) were exposed under solar radiation and rates were removed after different times of exposition. After the expositions, absorption spectroscopic studies in UV and fluorescence emission were realized, as well as holding the realization of experiments of APDT efficacy evaluation after 6 and 12 h to exposure under solar radiation. The more effective treatments were with MB, 8-MOP (both 50 ?M), the coumarins mixture and one of the extracts from Tahiti lime (both 12.5 mg L-1), killing at least 99,998%, 99,378%, 99,336% and 65,049% of the conidia, respectively after 1 h under solar radiation. No damage to orange tree leaves was observed after APDT with any of the compounds. The absorption and fluorescence intensity spectra showed the 8-MOP photodegradation after 12 h of exposition, although the 8-MOP solutions exposed under solar radiation for 6 and 12 h still killed at least 99,978% and 95,591% of the C. acutatum conidia, respectively