The purpose of this study was to develop and describe a model for the enhancement of self-concept of people with oculocutaneous albinism based on the experience of the participants. The need to conduct the study was triggered by the researcher’s long-term interaction with people with oculocutaneous albinism, and observation that they are still stigmatised and marginalised by the community. A purposive sample of fifteen participants, consisting of twelve females and three males with oculocutaneous albinism, aged between 18 and 48, participated in the study. The study was conducted in urban and semi-urban areas around the Gauteng Province in South Africa. The study had two theory generative objectives, namely to identify the main concepts of the model from the findings, and to describe the model structure and process. A theory generative, qualitative, explorative, descriptive and contextual research design was used to achieve these objectives. Chinn and Kramer’s (1995:92) four steps of theory-generation were used, namely concept analysis, construction of theoretical relationships, description of the model, and development of guidelines to operationalise the model.Concept analysis involved identification, definition and classification of the concepts to develop the model. In-depth, phenomenological interviews were conducted to explore the participants’ experience. Data analysis and interpretation revealed three main themes from the findings: the participants’ perception of the self; experience with the external environment, and expression of need for development and growth. The main concepts deducted from the findings were “self-concept” and “enhancement” hence “A model for enhancement of self-concept of people with albinism”. Construction of theoretical relationships entailed using deductive reasoning to describe the interaction between the concepts of the model. Description of the model entailed visually portraying and describing the structure and process of the model, as well as evaluating it. Developing guidelines to operationalise the model entailed describing practical strategies to assist health professionals to enhance the self-concept of people with oculocutaneous albinism. / Health Studies / D. Litt. et Phil. (Health Studies)

BACKGROUND: Mitochondrial complex I deficiency often leads to a devastating neurodegenerative disorder of childhood. In most cases, the underlying genetic defect is unknown. Recessive nuclear gene mutations, rather than mitochondrial DNA mutations, account for the majority of cases. AIM: Our aim was to identify the genetic basis of complex I deficiency in 34 patients with isolated complex I deficiency, by studying six of the 39 nuclear encoded complex I subunit genes (NDUFV1, NDUFS1, NDUFS2, NDUFS4, NDUFS7 and NDUFS8). These genes have been conserved throughout evolution and carry out essential aspects of complex I function. METHODS: RNA was extracted from patient fibroblasts and cDNA made by reverse transcription. Overlapping amplicons that together spanned the entire coding area of each gene were amplified by PCR. The genes were screened for mutations using denaturing High Performance Liquid Chromatography (dHPLC). Patient samples with abnormal dHPLC profiles underwent direct DNA sequencing. RESULTS: Novel mutations were identified in six of 34 (18%) patients with isolated complex I deficiency. Five patients had two mutations identified and one patient had a single mutation in NDUFS4 identified. All patients with mutations had a progressive encephalopathy and five out of six had Leigh syndrome or Leigh like syndrome. Mutations were found in three nuclear encoded subunit genes, NDUFV1, NDUFS2 and NDUFS4. Three novel NDUFV1 mutations were identified (R386H, K111E and P252R). The R386H mutation was found in two apparently unrelated patients. Four novel NDUFS2 mutations were identified (R221X, M292T, R333Q and IVS9+4A&ltG). The novel NDUFS4 mutation c.221delC was found in two patients - one in homozygous form and the other heterozygous. Specific genotype and phenotype correlations were not identified. CONCLUSIONS: Nuclear encoded complex I subunit gene mutations are an important contributor to the aetiology of isolated complex I deficiency in childhood. Screening of these genes is an essential part of the investigation of complex I deficiency.

Includes vita. / Title from PDF of title page. / Document formatted into pages; contains 137 pages. / Thesis (Ph.D.)--University of South Florida, 2003. / Includes bibliographical references. / Text (Electronic thesis) in PDF format. / ABSTRACT: The researcher examined the relationships between tuberous sclerosis, a multi-system genetic disorder, and school functioning through the use of a parent questionnaire and behavior rating scale. Information was gathered on the typical school experiences of children with tuberous sclerosis, including educational placement and services, behavioral functioning, parent involvement, and parent satisfaction. The results indicated that the majority of students with tuberous sclerosis are in special education and receiving related services. Three-quarters received one or more related services through the public school, and 30% received private related services paid for by their parents. Parent involvement was positively correlated with parent satisfaction, and negatively correlated with t-scores on the Withdrawn/Depressed subscale of the CBCL. / ABSTRACT: Parents of children receiving Autism services were generally less satisfied with their children's school experiences than other parents. Parent satisfaction was negatively correlated with the Attention Problems scale of the CBCL. Student age was negatively correlated with time in inclusion and with related services. This information forms the basis for a discussion of school psychologists' roles in the educational success of students with tuberous sclerosis and the critical areas towards which interventions should be directed. / System requirements: World Wide Web browser and PDF reader. / Mode of access: World Wide Web.

Thesis (MSc)--University of Stellenbosch, 2008. / ENGLISH ABSTRACT: Iron metabolism disorders comprise the most common disorders in humans. Hereditary haemochromatosis (HH) is a common condition resulting from inappropriate iron absorption. The most common form of the disease (Type 1) is associated with mutations in the HFE gene. The C282Y homozygous genotype accounts for approximately 80% of all reported cases of HH within the Caucasian population. A second HFE mutation, H63D, is associated with less severe disease expression. The C282Y mutation is extremely rare in Asian and African populations. The H63D mutation is more prevalent and has been observed in almost all populations. Iron overload resulting from haemochromatosis is predicted to be rare in Asian Indian populations and is not associated with common HFE mutations that are responsible for HH in the Caucasian population. The aberrant genes associated with HH in India have not yet been identified. The present study attempted to identify variants in six iron regulatory genes that were resulting in the Type 1 HH phenotype observed in two Asian Indian probands from a highly consanguineous family. The promoter and coding regions of the HMOX1, HFE, HAMP, SLC40A1, CYBRD1 and HJV genes were subjected to mutation analysis. Gene fragments were amplified employing the polymerase chain reaction (PCR) and subsequently subjected to heteroduplex single-strand conformational polymorphism (HEX-SSCP) analysis. Samples displaying aberrations were then analysed using bi-directional semi-automated DNA sequencing analysis to identify any known or novel variants within the six genes. Variants disrupting restriction enzyme recognition sites were genotyped employing restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis. Mutation analysis of the six genes revealed 24 previously identified variants, five novel variants (HFE: 5’UTR-840T→G, CYBRD1: 5’UTR-1813C→T, 5’UTR-1452T→C, 5’UTR- 1272T→C; HJV: 5’UTR-534G→T, 5’UTR-530G→T), one previously described microsatellite and two novel repeats. Variants identified within the SLC40A1, CYBRD1 and HJV genes do not seem to be associated with the iron overload phenotype. A previously described HAMP variant (5’UTR-335G→T) was observed in the homozygous state in both probands. This variant seems to be the genetic aberration responsible for iron overload in this Indian family. The severe juvenile haemochromatosis phenotype usually associated with HAMP mutations, was not exhibited by the two Indian probands. Their symptoms resembled those observed in classic Type 1 HH. It is suggested that variants identified in the HMOX1 and HFE genes are modifying the effect of the HAMP variant and resulting in the less severe disease phenotype. Although this variant has only been identified in one Indian family, it could shed some light in the hunt for the iron-loading gene in India. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Oorerflike hemochromatose (OH) is ‘n algemene siektetoestand wat ontstaan as gevolg van oneffektiewe opname van yster in die liggaam. Die mees algemene vorm van die siekte (Tipe 1) word geassosieer met mutasies in die HFE-geen. Die C282Y homosigotiese genotipe is verantwoordelik vir ongeveer 80% van alle gerapporteerde gevalle van OH binne die Kaukasiese bevolking. ‘n Tweede HFE mutasie, H63D, word geassosieer met minder ernstige siekte simptome. Die C282Y mutasie is besonder skaars in Asiese en Afrika bevolkings. Daar word bespiegel dat oorerflike ysteroorlading as gevolg van hemochromatose skaars is in Asiese Indiër bevolkings en word nie geassosieer met algemene HFE mutasies wat verantwoordelik is vir OH in Kaukasiese bevolkings nie. Die abnormale gene wat wél geassosieer word met OH in Indië is tot dusver nog nie identifiseer nie. Die doel van hierdie studie was om die variante in ses yster-regulerende gene te identifiseer wat die Tipe 1 OH fenotipe in hierdie familie veroorsaak. Hierdie fenotipe is waargeneem in twee Asies Indiese familielede afkomstig van ‘n bloedverwante familie. Die promotor en koderingsareas van die HMOX1, HFE, HAMP, SLC40A1, CYBRD1 en HJV gene is gesif vir mutasies. Geen fragmente is geamplifiseer met behulp van die polimerase kettingsreaksie (PKR) en daarna aan heterodupleks enkelstring konformasie polimorfisme (HEX-SSCP) analise blootgestel. PKR produkte wat variasies getoon het, is daarna geanaliseer deur tweerigting semi-geoutomatiseerde DNS volgorde-bepalingsanalise om enige bekende of nuwe variante binne die ses gene te identifiseer. Variante waar restriksie ensiem herkenningsetels teenwoordig is, is verder analiseer met behulp van die restriksie fragment lengte polimorfisme (RFLP) analise sisteem. Mutasie analise van die ses gene het 24 bekende variante, vyf nuwe variante (HFE: 5’UTR- 840T→G, CYBRD1: 5’UTR-1813C→T, 5’UTR-1452T→C, 5’UTR-1272T→C, HJV: 5’UTR-534G→T, 5’UTR-530G→T), een bekende herhaling en twee nuwe herhalings gewys. Variante wat binne die SLC4041, CYBRD1 en HJV gene geïdentifiseer is, blyk nie om by te dra tot die ysteroorladings-fenotipe nie. Die bekende HAMP variant (5’UTR-335G→T) is waargeneem in die homosigotiese toestand in beide van die aangetaste individue. Hierdie variant blyk om die genetiese fout te wees wat verantwoordelik is vir die ysteroorlading in die betrokke Indiese familie. Die erge juvenielehemochromatose fenotipe wat meestal geassosieer word met HAMP-mutasies, is nie waargeneem in hierdie familie nie. Hul simptome kom ooreen met die simptome van die klassieke Tipe 1 OH. Dit blyk moontlik te wees dat die variante identifiseer in die HMOX1 en HFE gene die impak van die HAMP variant modifiseer en die matiger siekte-fenotipe tot gevolg het. Alhoewel hierdie variant slegs in een Indiese familie geïdentifiseer is, kan dit lig werp op die soektog na die veroorsakende ysterladingsgeen in Indië.

The purpose of this study was to develop and describe a model for the enhancement of self-concept of people with oculocutaneous albinism based on the experience of the participants. The need to conduct the study was triggered by the researcher’s long-term interaction with people with oculocutaneous albinism, and observation that they are still stigmatised and marginalised by the community. A purposive sample of fifteen participants, consisting of twelve females and three males with oculocutaneous albinism, aged between 18 and 48, participated in the study. The study was conducted in urban and semi-urban areas around the Gauteng Province in South Africa. The study had two theory generative objectives, namely to identify the main concepts of the model from the findings, and to describe the model structure and process. A theory generative, qualitative, explorative, descriptive and contextual research design was used to achieve these objectives. Chinn and Kramer’s (1995:92) four steps of theory-generation were used, namely concept analysis, construction of theoretical relationships, description of the model, and development of guidelines to operationalise the model.Concept analysis involved identification, definition and classification of the concepts to develop the model. In-depth, phenomenological interviews were conducted to explore the participants’ experience. Data analysis and interpretation revealed three main themes from the findings: the participants’ perception of the self; experience with the external environment, and expression of need for development and growth. The main concepts deducted from the findings were “self-concept” and “enhancement” hence “A model for enhancement of self-concept of people with albinism”. Construction of theoretical relationships entailed using deductive reasoning to describe the interaction between the concepts of the model. Description of the model entailed visually portraying and describing the structure and process of the model, as well as evaluating it. Developing guidelines to operationalise the model entailed describing practical strategies to assist health professionals to enhance the self-concept of people with oculocutaneous albinism. / Health Studies / D. Litt. et Phil. (Health Studies)

Le Médiateur (MED) est un complexe multi-protéique dont le principal rôle est de transmettre à la machinerie transcriptionnelle de base les différents signaux fournis par les facteurs fixés sur des séquences d’ADN spécifique , permettant ainsi une régulation fine de l’expression des gènes. Des mutations dans le MED ou ses partenaires, comme NIPBL, sont à l’origine de diverses maladies telles que des malformations congénitales, des troubles neuro développementaux ou des cancers.A partir de cellules provenant de patients portant différentes mutations dans les sous-unités MED12 ou MED17 du MED ou dans NIPBL, nous avons observé une altération du niveau d’expression de certains gènes qui dépend de la localisation de la mutation et de la nature de leur activation. Ces variations de l’expression des gènes sont la conséquence d’un défaut dans la formation du complexe de transcription et du remodelage de la chromatine (modifications post-traductionnelles des histones). Outre une meilleure appréhension du rôle des sous-unités MED12 et MED17 du MED ainsi que NIPBL, sur la transcription des gènes, ma thèse a permis de mieux comprendre l’étiologie des maladies associées à une mutation dans ces protéines. / Mediator (MED) is a multi-protein complex whose main role is to convey to basal transcriptional machinery the different signals from factors bound at specific DNA sequences , allowing thus a fine regulation of gene expression. Mutations in MED or its partners, like NIPBL, cause various diseases, such as congenital malformations, neurodevelopmental disorders or cancers. Using cells from patients carrying different mutations in the MED subunits, MED12 or MED17, or in NIPBL, we observed an alteration of the expression of studied genes which depend on the position of the mutation and on the nature of the activation. These variations of gene expression are the consequence of a defect in transcription complex formation, as well as in chromatin remodeling(post-translational histones modifications). In addition to better comprehend the role of the MED subunits MED12 and MED17, and of NIPBL on gene transcription, my thesis helped to better understand the ethiology of the disorders associated with mutations in these proteins.

Diabetic pregnancy is associated with increased risk of congenital malformations. Previous studies have shown that maternal diabetes can interact with the vitamin A metabolite, all-trans retinoic acid (RA), in increasing embryonic susceptibility to caudal regression and neural tube defects. The aim of this thesis is to investigate the cellular and molecular mechanisms that underlie this interaction. / First hypothesis. RA concentration in the embryo is tightly regulated by the synthesizing enzyme retinaldehyde dehydrogenase type II (RALDH2), and the degrading enzyme CYP26. Alteration in expression levels of these enzymes under maternal diabetes may affect the availability of RA and thus its teratogenicity. / In conclusion, results of this thesis provide insight into the mechanism of how maternal diabetes interacts with RA in enhancing embryonic susceptibility to congenital malformations. This is also the first report to show that maternal diabetes alters RA homeostasis. (Abstract shortened by UMI.) / Second hypothesis. The transfer of RA to the nucleus for molecular action is regulated by cytoplasmic cellular retinoic acid binding proteins CRABP-I and CRABP-II. Alteration in expression levels of these binding proteins under maternal diabetes may affect the amount of RA reaching the nucleus and thus its teratogenicity. / Third hypothesis. The action of RA is mediated via different nuclear retinoic acid receptors (RAR) and retinoid X receptors (RXR). Alteration in expression levels of these receptors under maternal diabetes may affect the efficacy of RA signal transduction and thus its teratogenicity. / Three hypotheses are proposed to explain the underlying mechanism of increased embryonic susceptibility to RA teratogenicity under maternal diabetes: / To investigate these hypotheses, expression levels of various genes in different groups were compared. Result show that there are no significant differences in mRNA expression levels of CRABP-I, CRABP-II, RARgamma, RARgamma and RXRalpha between embryos of diabetic and non-diabetic mice with or without RA treatment. In contrast, expression levels of Raldh2 and CYP26 are significantly reduced in embryos of diabetic mothers, and in embryos of non-diabetic mice cultured in vitro in hyperglycemic conditions. Moreover, embryos of diabetic mice show significantly reduced response to RA-induced up-regulation of CYP26. These findings suggest that the rate of degradation of RA is slower in embryos of diabetic mice and thus the teratogenic effect of RA is enhanced. / Leung Bo Wah. / "July 2005." / Adviser: Alisa S. W. Shum. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 67-07, Section: B, page: 3779. / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2005. / Includes bibliographical references (p. 158-198). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [200-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstracts in English and Chinese. / School code: 1307.

Las enfermedades genéticas se clasifican típicamente en dos grandes grupos: las enfermedades mendelianas y las enfermedades complejas. Mientras que las enfermedades mendelianas se caracterizan por ser de baja frecuencia en la población y estar causadas por mutaciones en un gen particular, las enfermedades complejas son el principal problema sanitario en los países desarrollados y se encuentran producidas por la interacción de factores ambientales y factores genéticos. En este caso no se puede hablar de mutación en un determinado gen, sino de polimorfismo que incrementa en una pequeña fracción el riesgo a padecer la enfermedad. En la presente tesis se ha estudiado la distribución espacial de la variabilidad genética tanto en enfermedades mendelianas (en concreto la fibrosis quística, la fenilcetonuria y la b-talasemia) como en una enfermedad compleja (la enfermedad coronaria) en poblaciones europeas y de todo el mundo. Los resultados obtenidos sugieren que la distribución geográfica de la variabilidad genética de las enfermedades mendelianas depende principalmente de factores demográficos y de la historia de las poblaciones. Ahora bien, este efecto no es independiente de factores selectivos. En particular, fenómenos de selección equilibradora pueden incrementar o disminuir la variabilidad genética en una población dependiendo de el momento en el que se dio el evento selectivo. En el caso de la enfermedad compleja estudiada, la enfermedad coronaria, nuestros resultados indican que la distribución espacial de los polimorfismos de riesgo en poblaciones europeas depende, al igual que sucede con otros marcadores genéticos, principalmente de la historia de poblaciones, especialmente del poblamiento del continente europeo, la posterior reexpansión después del último periodo glacial y de las gran expansión poblacional de los agricultores durante el neolítico.

Malgré l’avancée considérable des connaissances sur le génome humain, de nombreuses maladies génétiques restent mal comprises car nous ignorons encore quel gène porte la mutation responsable d’une pathologie spécifique. Notre travail s’intègre dans le cadre de l’étude des maladies génétiques héréditaires monogéniques récessives, maladies rares mais qui ensemble touchent près d’1% de la population globale.<p>Les maladies récessives sont des maladies génétiques dont le phénotype malade ne se déclare que lorsque les deux allèles d’un gène sont mutés, hérités chacun d’un parent porteur. L’approche que nous utilisons pour localiser le gène causal dans le génome est l’analyse de liaison génétique. Les familles consanguines sont le profil idéal pour ce type d’étude car l’hypothèse peut être faite que les enfants atteints ont hérité deux fois de la même mutation, chaque allèle malade provenant d’un parent porteur et hérité d’un ancêtre commun relativement proche Dans cette optique, nous établissons une cartographie d’homozygotie (homozygosity mapping) du génome des patients, c à d que nous recherchons à travers le génome complet des zones d’homozygotie indiquant une identité par descente à partir d’un ancêtre commun (1) en à testant systématiquement un grand nombre de marqueurs génomiques polymorphes (microsatellites d’ADN et SNPs) répartis sur tous les chromosomes dans l’ADN extrait de tous les membres de la famille, atteints et non atteints. Ensuite nous inspectons la région homozygote à la recherche des meilleures gènes candidats, que nous séquençons jusqu’à trouver une mutation dont le rôle causal de la pathologie soit convaincant.<p>Nous avons étudié une famille constituée de 2 boucles de consanguinité avec plusieurs enfants atteints d’épilepsie myoclonique progressive (PME). <p>Nous avons criblé le génome entier des patients au moyen d’un kit permettant l’analyse de 382 microsatellites et avons confronté ces résultats avec ceux d’une analyse sur puce de 10.000 SNPs. Cela nous a permis de mettre en évidence un nouveau locus de PME s’étalant sur une dizaine de cM sur la région centromérique du chromosome 7. La valeur maximale du LOD score que nous avons calculé atteint 4.0 rendant ce locus significatif. Dans cet intervalle, contenant environ 85 gènes annotés, nous avons séquencé le gène KCTD7 car il s’agit de l’acronyme pour K+ Channel Tetramerization Domain 7, spéculant sur une interaction potentielle avec un canal potassique. Ce séquençage a révélé une mutation non sens homozygote chez les atteints, hétérozygotes chez les parents, et totalement absente dans une série de 100 contrôles. Cette mutation, sur l’exon 2 de KCTD7, substitue une arginine par un codon stop, tronquant deux tiers de la protéine (289aa total). L’ensemble de ces résultats ont été repris dans une première publication au journal Annals of Neurology en 2007 (2). <p>Au début de ce travail, le gène KCTD7 était une simple annotation génomique. Son ADNc avait été cloné dans un effort systématique à haut débit et des ESTs (expressed sequence tag) en avaient été caractérisés. La famille des protéines KCTDs sont de petites protéines solubles caractérisées par un domaine d’interaction protéine-protéine appelé BTB/POZ. Ces protéines sont impliquées dans une grande variété de processus biologiques. Certaines sont des adaptateurs spécifiques du complexe multimèrique E3 Ubiquitine Ligase (2), d’autres sont impliquées dans l’assemblage des récepteurs GABAb (3), d’autres encore sont des protéines nucléaires, stimulant l’activité polymérase de l’ADN polδ2 (4).<p>Nous avons montré, en utilisant la technique du Northern Blot, que l’ARNm du gène KCTD7 était exprimé de manière ubiquitaire (cerveau, cœur, foie, poumon, intestin, colon, reins, rate, yeux, muscle). Ceci a été confirmé par PCR après transcription inverse à partir d’ARNs provenant des mêmes tissus chez la souris adulte. Nous avons également montré que ce gène était déjà exprimé durant la vie fœtale par PCR après transcription inverse à partir d’embryon de souris (E6.5 à E14.5).<p>Nos Western Blots ne nous ayant pas permis d’observer la protéine endogène dans les extraits tissulaires totaux, nous avons pensé que la protéine pouvait être rapidement dégradée. Nous avons donc mesuré la demi-vie de la protéine KCTD7 recombinante en cellules COS-7 traitées pour différents temps par la cyclohéximide comme inhibiteur de la synthèse protéique. Cette demi-vie a été évaluée à 6h, ce qui indique que KCTD7 n’est pas une protéine hyper-labile. <p>Puisque nous avions l’hypothèse que KCTD7 puisse interagir avec les canaux ioniques membranaire, nous avons cherché à comprendre sa distribution intracellulaire. Ainsi, nous avons déterminé par immuno-fluorescence que la protéine recombinant KCTD7, marquée par les tags GFP, HIS ou HA, avait une distribution essentiellement périnucléaire en cellules COS-7. Lors des immuno-détections, nous avons utilisé soit l’anticorps contre KCTD7, soit l’anticorps contre le tag, afin de renforcer la validité du marquage. Un signal à la membrane plasmique n’ayant pas été détecté, nous avons postulé que KCTD7 n’interagit sans doute pas directement à cette membrane, que ce soit avec des canaux ioniques membranaires ou des récepteurs de neurotransmetteurs (GABAb). Un modèle de régulateur direct de canaux potassiques associés au réticulum endoplasmique a déjà été proposé pour KCNRG, un membre des protéines KCTDs capable de réguler négativement l’activité des canaux Kv1.1 et Kv1.4 par un contrôle de leur expression à la membrane grâce à leur rétention dans le réticulum endoplasmique (6). <p>A l’instar d’autres protéines de la famille des KCTDs, nous avons montré, par des expériences de co-immunoprécipitation, que KCTD7 était capable de former des homodimères, très probablement grâce à son module d’interaction BTB/POZ comme cela à été montré pour d’autres protéines de la même famille (7). Nous avons également montré par co-immunoprécipitation que KCTD7 interagi avec la Cullin-3 alors qu’il ne lie pas la Cullin-1. Cette protéine fait partie d’un complexe protéique impliqué dans l’ubiquitination de certains substrats. Nous avons montré que KCTD7 n’est pas sujet à l’ubiquitination en cellules COS-7 co-transfectées par KCTD7 et l’ubiquitine-flag, ce qui n’exclu pas qu’il puisse l’être dans un autre système ou d’autres conditions expérimentales. L’ubiquitination, quand elle ne conduit pas son substrat à la dégradation par le protéasome, est un processus qui permet le contrôle de l’expression de nombreuses protéines, dont certains canaux ioniques membranaires (KCNQ2/3 et KNCQ3/5 (8), Kv1.3 (9), Kv1.5 (10) et KCNH2 (11)) et certaines enzymes métaboliques défectueuses dans certaines PME (dont Laforine et Maline (12), Cystatine B (13), β-hexosaminidase (14)). KCTD7 pourrait donc cibler la Cullin-3 vers son substrat et sans être ubiquitiné lui-même. <p>Nous avons étudié plus en détail l’expression de KCTD7 (ARN et protéine) dans le cerveau de souris adulte. Nous avons déterminé à la fois par des expériences d’hybridation in situ (ARN) et d’immunohistochimie (protéine) sur des coupes coronales de cerveau de souris adultes CD1 que KCTD7 semble être spécifiquement localisé dans trois régions distinctes :la couche de cellules mitrales des bulbes olfactifs, le gyrus denté et les régions CA1 et CA3 de l’hippocampe, et enfin la couche de cellules de Purkinje du cervelet. Il apparait que ces zones sont atteintes dans un modèle murin de la maladie d’Unverricht-Lundborg (15), la forme la plus fréquente d’épilepsie myoclonique progressive et très proche du phénotype de nos patients.<p>Enfin, nous avons montré en collaboration avec le laboratoire du professeur Schiffmann par des mesures électrophysiologiques (Patch Clamp en cellule entière) que KCTD7 diminue le potentiel de repos (accroît la polarisation) de la membrane cellulaire de neurones corticaux embryonnaires de souris en cultures primaires, diminuant l’excitabilité neuronale en augmentant la conductance de la membrane plasmique. Ces résultats sont compatibles avec l’idée qu’une perte de fonction de la protéine entraîne une augmentation de l’excitabilité neuronale qui est caractéristique de l’épilepsie. Ces données fonctionnelles sur KCTD7 ont fait l’objet d’un manuscrit actuellement en cours de soumission au journal Molecular and Cellular Neuroscience.<p>Les données que nous avons récoltées sur KCTD7 ont précisé un mécanisme probable d’action de la protéine. Malgré les limitations de nos modèles expérimentaux, nous postulons que le défaut de KCTD7 cause l’épilepsie en modifiant la conductance potassique et par là, le potentiel de repos et l’excitabilité de la membrane plasmique des neurones, peut-être par ubiquitination, via la Culline-3, d’un canal potassique. À notre connaissance, il s’agirait de la première PME dont le défaut primaire serait au niveau du potentiel membranaire. Cette hypothèse cadre bien avec l’observation clinique que les patients les plus atteints étaient ceux dont l’épilepsie était la moins bien contrôlée par le traitement, suggérant une dégénérescence secondaire excito-toxique. <p>La suite logique de notre travail serait la définition plus précise de l’expression sub-cellulaire de KCTD7 en microscopie confocale à fluorescence, de son expression spatiale et temporelle chez la souris et si possible chez l’homme, l’étude de l’ubiquitination de sous-unités de canaux potassiques, et le développement d’un modèle animal, poisson zèbre ou souris, afin, entre autres, d’y tester l’hypothèse que la sévérité de l’hyperexcitabilité neuronale elle-même aggrave le phénotype. <p> / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished

La découverte du défaut moléculaire en cause dans les maladies rares est une étape importante en vue d'un traitement spécifique ainsi que d'un meilleur diagnostic, ce qui permet de réduire le délai diagnostique, de mieux connaître l'histoire naturelle de la maladie, et ainsi d'améliorer les traitements symptomatiques et la prévention secondaire. Les gènes de plus de 1500 maladies rares monogéniques restent à découvrir. Beaucoup de maladies rares qui frappent les enfants de parents en bonne santé correspondent à des maladies génétiques récessives autosomiques. Certaines paraissent extrêmement rares mais, une fois le gène identifié dans une famille princeps, beaucoup d'autres cas s'avèrent dus à des défauts du même gène. Les patients que nous étudions sont issus de familles consanguines comptant souvent de nombreux sujets atteints. Une seule famille de ce type peut permettre l'identification du gène par cartographie d'homozygotie et clonage positionnel.<p>Nous avons recruté dans ce travail des cas familiaux ou sporadiques de six maladies autosomiques récessives rares de gène inconnu. <p>La stratégie de cartographie par homozygotie nous a permis de mettre en évidence de nouveaux loci morbides dans quatre de ces maladies (épilepsie myoclonique progressive EPM3 ;syndrome marfanoïde avec microsphérophakie ;atrophie optique isolée ;et syndrome de microcéphalie et diabète précoce) ou de réduire la taille de loci déjà connus (microcéphalies primaires MCPH2 et MCPH4 ;et syndrome de Harboyan CDPD1). Nous avons pu caractériser de nouvelles mutations dans les gènes déjà connus ASPM (microcéphalie primaire MCPH5) et SLC4A11 (syndrome de Harboyan) et corréler celles-ci aux données cliniques. Enfin nous avons identifié les gènes KCTD7 et LTBP2 comme responsables respectivement des maladies EPM3 et syndrome marfanoïde avec microsphérophakie, en y découvrant des mutations chez les malades.<p> / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished