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Avaliação in vitro de matriz colágena suína como arcabouço tridimensional para cultivo de fibroblastos gengivais / In vitro evaluation of porcine collagen matrix as a threedimensional scaffold for gingival fibroblasts seeding

Carolina de Moraes Rego Mandetta 03 July 2012 (has links)
Introdução: Fibroblastos gengivais desempenham um importante papel na regeneração de tecidos moles de proteção. Mucograft® (MCS-3D) é um substituto xenógeno novo que vem sendo utilizado na periodontia em técnicas de recobrimento radicular e aumento de tecido queratinizado. O objetivo do presente estudo foi avaliar morfológica e imunohistoquimicamente, se a MCS-3D é uma matriz tridimensional adequada, por meio de sua resposta à cultura de fibroblastos gengivais. Material e Métodos: Fibroblastos gengivais humanos (FGH) foram obtidos pela técnica do explante a partir de tecido conjuntivo gengival de três indivíduos. Os FGH foram cultivados sobre colágeno bovino bidimensional (ColB-2D), colágeno bovino tridimensional (ColB-3D) e matriz colágena suína tridimensional (MCS-3D) por até 10 dias. Em 3, 7 e 10 dias, os seguintes parâmetros foram avaliados: número, morfologia e distribuição de FGH por fluorescência direta; viabilidade celular por MTT; proliferação celular e expressão de proteínas citoesqueléticas: actina e tubulina e proteínas da matriz extracelular não colágena: fibronectina imunofluorescência indireta. Os dados quantitativos foram submetidos aos testes estatísticos de Friedman para comparação intra e intergrupos para as variáveis da análise de expressão das proteínas: fibronectina, actina e tubulina. O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para comparações intra e intergrupos, seguido do teste de Tukey para as variáveis das análises de viabidlidade, proliferação e número total de células. Resultados: A epifluorescência revelou que em 3 dias os FGH apresentavam-se aderidos em todos os grupos experimentais. FGH cultivados sobre ColB-2D exibiram forma menos alongada, ampla e achatada com maior quantidade de projeções e numerosas fibras de estresse em 3, 7 e 10 dias. Por outro lado, os FGH cultivados sobre ColB-3D e MCS-3D demonstraram, em todos os períodos experimentais, fenótipo fusiforme, alongado ou cilíndrico com menor quantidade de projeções do que observado no substrato 2D, com algumas das células cultivadas sobre MCS-3D demonstrando aspecto estrelado. O ensaio de MTT revelou viabilidade celular significantemente superior no ColB-2D e MCS-3D do que no ColB-3D (p<0,001), em todos os períodos experimentais. Em 3 dias, foi observado maior número de FGH cultivados sobre ColB-2D seguido por MCS-3D e ColB-3D respectivamente, havendo diferença estatística entre ColB-2D e MCS-3D (p<0,001) e entre ColB-2D e ColB-3D (p<0,001). No sétimo dia houve redução no número de células no ColB-2D e aumento na MCS-3D e ColB-3D, em que o número de células foi significantemente superior no ColB-2d com relação a MCS-3D (p=0,002). Ao final do período experimental, foi observado aumento no número de células em todos os grupos experimentais, sendo o número de células, mais uma vez, significantemente superior no ColB-2D do que na MCS-3D (p=0,002). Maior porcentagem de FGH no ciclo celular pode ser observado em ColB-2D seguido por ColB-3D e MCS-3D, respectivamente, em todos os períodos experimentais. Na MCS-3D praticamente não houve marcação por Ki-67 e o ColB-2D apresentou redução significativa de FGH ciclando entre o período de 3 e 10 dias (p=0,036). A expressão de proteínas não colágenas e citoesqueléticas foi similar em ambas as matrizes experimentais durante todo o estudo. Conclusão: Podemos concluir que a MCS-3D constitui uma matriz adequada para o cultivo de fibroblastos gengivais humanos, uma vez que, no interior da matriz, importantes propriedades foram verificadas, dentre as quais, morfologia, proliferação, e expressão de proteínas, semelhantes a uma matriz colágena tridimensional já consagrada na literatura. / Introduction: Gingival fibroblasts play a central role in oral soft tissue regeneration. Mucograft® (PCM-3D) is a new xenogeneic substitute that has been used in periodontics in techniques such as root coverage and increasing keratinized tissue. The aim of this investigation was to verify if PCM-3D is a suitable three-dimensional matrix though its in vitro response to the culture of HGF. Methods: Human gingival fibroblasts (HGF) culture was established by the explant technique of gingival connective tissues of three healthy patients. HGF were seeded on bidimensional bovine collagen matrix (BCol-2D), three-dimensional bovine collagen matrix (BCol- 3D) and three-dimensional porcine collagen matrix (PCM-3D). HGF were grown for up to 10 days. At 3, 7 and 10 days the following parameters were assessed: HGF number, morphology and distribution by direct fluorescence; cell viability by MTT; cell proliferation and expression of proteins of the extracellular matrix non-collagenous fibronectina and cytoeskeletic - proteins actin and tubulin by indirect immunofluorescence. Quantitative data were submitted to Friedman and Kruskal- Wallis test, and the last one was followed by Tukeys test. Results: Epifluorescence revealed that at 3 days HGF grown on BCol-2D were broader, more flattened and had more cell protrusions and stress fibers in all experimental times. On the other hand, HGF seeded on BCol-3D and PCM-3D displayed a spindle-shaped, elongated, or cylindrical phenotype with fewer protrusions as well as less total cell spread area than on the 2D matrix, with some cells on PCM-3D showing stellate appearance. MTT assay showed cell viability higher in cultures grown on BCol-2D and PCM-3D than in BCol-3D (p<0,001). At 3days a greater number of cells in BCol-2D samples followed by PCM-3D and BCol-3D, respectively, was observed with statistical difference between BCol-2D and PCM-3D and between (p<0,001). At 7 days, there was a decrease in cell number grown on BCol-2D and an increase in BCol-3D and PCM-3D, where the number of cells were significantly higher in BCol-2D in relation to PCM-3D (p=0.002). At the end of the experimental period, there was an increase in total cell number in all of the experimental groups, and it was again significantly greater in BCol-2D than in PCM (p=0.005). Between 3 and 10 days, there was an increase in total cell number in ColB-3D (p<0.001), which showed higher counts within 10 days. Higher percentage of HGF in the cell cycle could be seen in BCol-2D followed by BCol-3D and PCM-3D, respectively, in all of the experimental groups. In PCM-3D there was almost no expression of Ki-67. BCol-2D showed a decrease in HGF cycling between 3 and 10 days (p=0,036). The expression of non-collagenous and cytoskeletal proteins were similar in both matrices during all the period of the study. Conclusion: PCM-3D is suitable for HGF culture, since, within the matrix, important properties were found, among them, morphology, proliferation andprotein expression, similar to those observed in a 3D collagen matrix well established in the literature.
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Avaliação da morbidade pós-operatória e qualidade de vida no recobrimento de retrações gengivais múltiplas através do uso de matriz colágena xenogênica (Mucograft®) comparada ao enxerto de tecido conjuntivo subepitelial: ensaio clínico randomizado cego / Postoperative assessment and quality of life in multiple recession coverage using xenogeneic collagen matrix (Mucograft®) compared to subepithelial connective tissue graft: a randomized clinical trial

Calderero, Luis Marcelo Monteiro 05 December 2016 (has links)
Existem poucos ensaios clínicos aleatórios controlados mencionando o impacto da qualidade de vida (QV) e morbidade no tratamento de retrações gengivais múltiplas. O objetivo deste estudo foi comparar a QV e morbidade em dois grupos de pacientes: A. intervenção cirúrgica com enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS) removido do palato; B. intervenção cirúrgica utilizando matriz de colágeno (MC - sem enxerto do palato) no tratamento de retrações gengivais múltiplas. Foi conduzido um ensaio clínico aleatório de boca dividida. Foram selecionados quinze pacientes com retrações gengivais múltiplas envolvendo caninos e pré-molares na maxila. Qualidade de vida foi avaliada através do questionário \"Oral Health Impact Profile\" (OHIP-14) através de regressão multinível. A morbidade incluiu dor, quantidade de medicamentos, capacidade de escovação e mastigação. Os parâmetros foram avaliados no Baseline, 7, 15, 30, e 180 dias após a intervenção. Resultados: OHIP-14 em 7 e 15 dias apresentou melhor QV no grupo MC comparado ao ETCS (p=0,002 e p=0,001 respectivamente). Correlações foram estabelecidas nos diferentes domínios do OHIP-14 após o tratamento com CM: dor física, desconforto psicológico, incapacidade física, incapacidade psicológica e desvantagem social (p<0,05). Houveram diferenças estatísticas significantes para dor pós-operatória e quantidade de medicamentos, favoráveis ao grupo MC (p<0,05). Conclusão: este estudo mostrou que o tratamento cirúrgico com a MC para retrações gengivais múltiplas Classe I de Miller foi positivamente associado ao impacto físico e psicológico na qualidade de vida dos pacientes, quando comparado ao ETCS removido do palato. / There are few randomized controlled clinical trials mentioning the oral health-related quality of life (OHRQoL) effect and morbidity in treatments of multiple gingival recession coverage. This study aims to compare the OHRQoL and morbidity in two groups of patients: A. surgical intervention with connective tissue graft (CTG) removed from the palate; B. surgical intervention using a collagen matrix (CM - no graft from the palate) in the treatment of multiple gingival recessions. Methods: A split-mouth randomized clinical trials was conducted. Fifteen patients with bilateral multiple recessions in maxillary canines and pre-molars were selected. Quality-of-life was assessed by the Oral Health Impact Profile-14 (OHIP-14) questionnaire through multinível regression. The morbidity included pain, quantify of medication, healing and inflammation/edema. Parameters were evaluated at baseline, 7, 15, 30, and 180 days. Results: OHIP-14 in 7 and 15 days showed better OHRQoL in CM group when compared with CTG (p=0,002 and p=0,001 respectively). Correlation was stablished in OHIP-14 subscales after treatment with CM: physical pain, psychological discomfort, physical disability, psychological disability, and handicap (p<0,05). There were statistically significant differences for pain and amount of medication, favoring CM group (p<0,05). Conclusion: This study shows that surgical treatment with CM for multiple gingival recessions Miller Class I was positively associated with psychological and physical impacts on patient\'s quality of life, when compared with CTG removed from the palate.
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Tratamento de retrações gengivais múltiplas adjacentes com a matriz colágena xenogênica comparado ao enxerto de tecido conjuntivo subepitelial: ensaio clínico aleatório de não-inferioridade / Treatment of multiple adjacent gingival recessions with collagen matrix compared with subephitelial connective tissue graft: non-inferiority randomized clinical trial

Rodrigo Carlos Nahás de Castro Pinto 16 September 2016 (has links)
O objetivo deste estudo foi comparar em 6 meses os resultados do recobrimento radicular, hipersensibilidade dentinária, dor pós-operatória e estética utilizando o retalho avançado coronalmente modificado (RACm) associado ao enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS) ou a matriz de colágeno suíno (MC) no tratamento de retrações gengivais (RG). Neste ensaio clínico aleatório cego de não-inferioridade, desenho de boca dividida, quinze pacientes com RG superiores múltiplas adjacentes, classe I de Miller, localizadas em caninos e pré-molares, com pelo menos uma RG >= 3 mm foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em grupo controle (RACm+ETCS) e grupo de teste (RACm+MC). A altura da RG residual (desfecho primário) foi menor para o grupo controle (0,3 ± 0,6 mm) comparado ao grupo teste (0,6 ± 1,0 mm) (p = 0,008). A porcentagem de recobrimento radicular foi de 89,3% para o grupo controle e 77,7% para o grupo teste. Ambos os grupos demonstraram ganho em largura do TQ em 6 meses (p < 0,05) com diferença entre os grupos (p = 0,031). A profundidade de sondagem e o ganho de nível clínico de inserção foram similares entre os grupos e em todos os períodos avaliados. Ambos os grupos foram eficazes na redução da hipersensibilidade dentinária. A dor pósoperatória foi maior no grupo controle comparada ao grupo teste. A satisfação estética do paciente e do periodontista foi alta independente do grupo sem diferença estatística e a formação de cicatriz nas papilas e as diferenças visuais nas áreas enxertadas foram maiores no RACm+ETCS. Quando equilibrados os resultados clínicos de cobertura radicular, os resultados centrados no paciente e a satisfação estética, a associação RACm+MC é uma alternativa viável ao RACm+ETCS para o tratamento das RG múltiplas. / The aim of this study was to compare the 6 months outcome of root coverage, dentin hypersensitive, pain after surgery and aesthetics using the modified coronal advanced flap (mCAF) associate with connective tissue graft (CTG) or collagen matrix (CM) in the treatment of gingival recession (GR). Fifteen patients with superior multiple recessions in canines and pre-molars were selected for this non-inferority randomized clinical trial, which was divided in control group (mCAF+CTG) and test group (mCAF+CM). The residual GR (primary outcome) was lower for control group (0,3 ± 0,6 mm) comparing with test group (0,6 ± 1,0 mm) (p = 0,008). The root coverage percentage was 89,3% for control group and 77,7% for test group. Both groups demonstrated gain of keratinized tissue in 6 months (p < 0,05) statically different between groups (p = 0,031). The probing depth and gain of clinical attachment level were similar between the groups in all evaluated periods. Dentin hypersensitive was reduced in all groups. The pain after surgery was higher in control group comparing with test group. Aesthetic satisfaction evaluated by patient and periodontist was high independently of group with no statistical difference, however, the scar formation at papillae base and visual differences were visually higher using mCAF+CTG. Considering the clinical outcomes balanced with patient related outcomes and aesthetic satisfaction, the use of mCAF+CM is a alternative to mCAF+CTG in the treatment of multiple gingival recession.
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Avaliação da morbidade pós-operatória e qualidade de vida no recobrimento de retrações gengivais múltiplas através do uso de matriz colágena xenogênica (Mucograft®) comparada ao enxerto de tecido conjuntivo subepitelial: ensaio clínico randomizado cego / Postoperative assessment and quality of life in multiple recession coverage using xenogeneic collagen matrix (Mucograft®) compared to subepithelial connective tissue graft: a randomized clinical trial

Luis Marcelo Monteiro Calderero 05 December 2016 (has links)
Existem poucos ensaios clínicos aleatórios controlados mencionando o impacto da qualidade de vida (QV) e morbidade no tratamento de retrações gengivais múltiplas. O objetivo deste estudo foi comparar a QV e morbidade em dois grupos de pacientes: A. intervenção cirúrgica com enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS) removido do palato; B. intervenção cirúrgica utilizando matriz de colágeno (MC - sem enxerto do palato) no tratamento de retrações gengivais múltiplas. Foi conduzido um ensaio clínico aleatório de boca dividida. Foram selecionados quinze pacientes com retrações gengivais múltiplas envolvendo caninos e pré-molares na maxila. Qualidade de vida foi avaliada através do questionário \"Oral Health Impact Profile\" (OHIP-14) através de regressão multinível. A morbidade incluiu dor, quantidade de medicamentos, capacidade de escovação e mastigação. Os parâmetros foram avaliados no Baseline, 7, 15, 30, e 180 dias após a intervenção. Resultados: OHIP-14 em 7 e 15 dias apresentou melhor QV no grupo MC comparado ao ETCS (p=0,002 e p=0,001 respectivamente). Correlações foram estabelecidas nos diferentes domínios do OHIP-14 após o tratamento com CM: dor física, desconforto psicológico, incapacidade física, incapacidade psicológica e desvantagem social (p<0,05). Houveram diferenças estatísticas significantes para dor pós-operatória e quantidade de medicamentos, favoráveis ao grupo MC (p<0,05). Conclusão: este estudo mostrou que o tratamento cirúrgico com a MC para retrações gengivais múltiplas Classe I de Miller foi positivamente associado ao impacto físico e psicológico na qualidade de vida dos pacientes, quando comparado ao ETCS removido do palato. / There are few randomized controlled clinical trials mentioning the oral health-related quality of life (OHRQoL) effect and morbidity in treatments of multiple gingival recession coverage. This study aims to compare the OHRQoL and morbidity in two groups of patients: A. surgical intervention with connective tissue graft (CTG) removed from the palate; B. surgical intervention using a collagen matrix (CM - no graft from the palate) in the treatment of multiple gingival recessions. Methods: A split-mouth randomized clinical trials was conducted. Fifteen patients with bilateral multiple recessions in maxillary canines and pre-molars were selected. Quality-of-life was assessed by the Oral Health Impact Profile-14 (OHIP-14) questionnaire through multinível regression. The morbidity included pain, quantify of medication, healing and inflammation/edema. Parameters were evaluated at baseline, 7, 15, 30, and 180 days. Results: OHIP-14 in 7 and 15 days showed better OHRQoL in CM group when compared with CTG (p=0,002 and p=0,001 respectively). Correlation was stablished in OHIP-14 subscales after treatment with CM: physical pain, psychological discomfort, physical disability, psychological disability, and handicap (p<0,05). There were statistically significant differences for pain and amount of medication, favoring CM group (p<0,05). Conclusion: This study shows that surgical treatment with CM for multiple gingival recessions Miller Class I was positively associated with psychological and physical impacts on patient\'s quality of life, when compared with CTG removed from the palate.
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Tratamento de retrações gengivais múltiplas adjacentes com a matriz colágena xenogênica comparado ao enxerto de tecido conjuntivo subepitelial: ensaio clínico aleatório de não-inferioridade / Treatment of multiple adjacent gingival recessions with collagen matrix compared with subephitelial connective tissue graft: non-inferiority randomized clinical trial

Pinto, Rodrigo Carlos Nahás de Castro 16 September 2016 (has links)
O objetivo deste estudo foi comparar em 6 meses os resultados do recobrimento radicular, hipersensibilidade dentinária, dor pós-operatória e estética utilizando o retalho avançado coronalmente modificado (RACm) associado ao enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS) ou a matriz de colágeno suíno (MC) no tratamento de retrações gengivais (RG). Neste ensaio clínico aleatório cego de não-inferioridade, desenho de boca dividida, quinze pacientes com RG superiores múltiplas adjacentes, classe I de Miller, localizadas em caninos e pré-molares, com pelo menos uma RG >= 3 mm foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em grupo controle (RACm+ETCS) e grupo de teste (RACm+MC). A altura da RG residual (desfecho primário) foi menor para o grupo controle (0,3 ± 0,6 mm) comparado ao grupo teste (0,6 ± 1,0 mm) (p = 0,008). A porcentagem de recobrimento radicular foi de 89,3% para o grupo controle e 77,7% para o grupo teste. Ambos os grupos demonstraram ganho em largura do TQ em 6 meses (p < 0,05) com diferença entre os grupos (p = 0,031). A profundidade de sondagem e o ganho de nível clínico de inserção foram similares entre os grupos e em todos os períodos avaliados. Ambos os grupos foram eficazes na redução da hipersensibilidade dentinária. A dor pósoperatória foi maior no grupo controle comparada ao grupo teste. A satisfação estética do paciente e do periodontista foi alta independente do grupo sem diferença estatística e a formação de cicatriz nas papilas e as diferenças visuais nas áreas enxertadas foram maiores no RACm+ETCS. Quando equilibrados os resultados clínicos de cobertura radicular, os resultados centrados no paciente e a satisfação estética, a associação RACm+MC é uma alternativa viável ao RACm+ETCS para o tratamento das RG múltiplas. / The aim of this study was to compare the 6 months outcome of root coverage, dentin hypersensitive, pain after surgery and aesthetics using the modified coronal advanced flap (mCAF) associate with connective tissue graft (CTG) or collagen matrix (CM) in the treatment of gingival recession (GR). Fifteen patients with superior multiple recessions in canines and pre-molars were selected for this non-inferority randomized clinical trial, which was divided in control group (mCAF+CTG) and test group (mCAF+CM). The residual GR (primary outcome) was lower for control group (0,3 ± 0,6 mm) comparing with test group (0,6 ± 1,0 mm) (p = 0,008). The root coverage percentage was 89,3% for control group and 77,7% for test group. Both groups demonstrated gain of keratinized tissue in 6 months (p < 0,05) statically different between groups (p = 0,031). The probing depth and gain of clinical attachment level were similar between the groups in all evaluated periods. Dentin hypersensitive was reduced in all groups. The pain after surgery was higher in control group comparing with test group. Aesthetic satisfaction evaluated by patient and periodontist was high independently of group with no statistical difference, however, the scar formation at papillae base and visual differences were visually higher using mCAF+CTG. Considering the clinical outcomes balanced with patient related outcomes and aesthetic satisfaction, the use of mCAF+CM is a alternative to mCAF+CTG in the treatment of multiple gingival recession.

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