β-glicosidases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações β-glicosídicas, e diversas aplicações biotecnológicas são postuladas para β-glicosidases microbianas. Este estudo apresenta a triagem de substratos para a produção de uma β-glicosidase extracelular por Monascus purpureus NRRL1992 em cultivo submerso, bem como a purificação parcial e a caracterização da enzima. A produção da enzima demonstrou ser indutível e controlada por repressão catabólica. A maior produção de β-glicosidase foi observada com a utilização de resíduo de uva e peptona como substratos. A purificação parcial da β-glicosidase envolveu a precipitação com acetona e etapas de cromatografia líquida (gel-filtração e interação hidrofóbica), resultando em fator de purificação de 92 vezes e recuperação de 23% a partir do extrato bruto. A enzima apresentou atividade ótima em amplas faixas de temperaturas e pHs frente ao substrato p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNPβG), sendo selecionadas as condições de 50 °C e pH 5,5. A β-glicosidase demonstrou ser moderadamente termoestável, apresentando atividade residual de 78% após 120 minutos a 60 °C. Os íons Hg2+ e Cr3+ inibiram a atividade β-glicolítica, provavelmente através de modificações estruturais da enzima. β-mercaptoetanol, SDS, entre outros reagentes não afetaram a catálise. Etanol ou metanol em baixas concentrações estimularam a atividade enzimática, possivelmente devido à atuação da enzima como glicosiltransferase; contudo, o aumento na concentração destes álcoois reduziu a atividade enzimática. A hidrólise de pNPβG, celobiose, maltose, salicina e n-octil-β-D-glicopiranosídeo indica a ampla especificidade da enzima frente à diferentes substratos. As constantes cinéticas Km e Vmax foram definidas para pNPβG, celobiose e maltose, sendo observados valores intermediários para β-glicosidases. Glicose e celobiose inibiram competitivamente a hidrólise de pNPβG. / β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis. β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis.

β-glicosidases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações β-glicosídicas, e diversas aplicações biotecnológicas são postuladas para β-glicosidases microbianas. Este estudo apresenta a triagem de substratos para a produção de uma β-glicosidase extracelular por Monascus purpureus NRRL1992 em cultivo submerso, bem como a purificação parcial e a caracterização da enzima. A produção da enzima demonstrou ser indutível e controlada por repressão catabólica. A maior produção de β-glicosidase foi observada com a utilização de resíduo de uva e peptona como substratos. A purificação parcial da β-glicosidase envolveu a precipitação com acetona e etapas de cromatografia líquida (gel-filtração e interação hidrofóbica), resultando em fator de purificação de 92 vezes e recuperação de 23% a partir do extrato bruto. A enzima apresentou atividade ótima em amplas faixas de temperaturas e pHs frente ao substrato p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNPβG), sendo selecionadas as condições de 50 °C e pH 5,5. A β-glicosidase demonstrou ser moderadamente termoestável, apresentando atividade residual de 78% após 120 minutos a 60 °C. Os íons Hg2+ e Cr3+ inibiram a atividade β-glicolítica, provavelmente através de modificações estruturais da enzima. β-mercaptoetanol, SDS, entre outros reagentes não afetaram a catálise. Etanol ou metanol em baixas concentrações estimularam a atividade enzimática, possivelmente devido à atuação da enzima como glicosiltransferase; contudo, o aumento na concentração destes álcoois reduziu a atividade enzimática. A hidrólise de pNPβG, celobiose, maltose, salicina e n-octil-β-D-glicopiranosídeo indica a ampla especificidade da enzima frente à diferentes substratos. As constantes cinéticas Km e Vmax foram definidas para pNPβG, celobiose e maltose, sendo observados valores intermediários para β-glicosidases. Glicose e celobiose inibiram competitivamente a hidrólise de pNPβG. / β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis. β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis.

β-glicosidases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações β-glicosídicas, e diversas aplicações biotecnológicas são postuladas para β-glicosidases microbianas. Este estudo apresenta a triagem de substratos para a produção de uma β-glicosidase extracelular por Monascus purpureus NRRL1992 em cultivo submerso, bem como a purificação parcial e a caracterização da enzima. A produção da enzima demonstrou ser indutível e controlada por repressão catabólica. A maior produção de β-glicosidase foi observada com a utilização de resíduo de uva e peptona como substratos. A purificação parcial da β-glicosidase envolveu a precipitação com acetona e etapas de cromatografia líquida (gel-filtração e interação hidrofóbica), resultando em fator de purificação de 92 vezes e recuperação de 23% a partir do extrato bruto. A enzima apresentou atividade ótima em amplas faixas de temperaturas e pHs frente ao substrato p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNPβG), sendo selecionadas as condições de 50 °C e pH 5,5. A β-glicosidase demonstrou ser moderadamente termoestável, apresentando atividade residual de 78% após 120 minutos a 60 °C. Os íons Hg2+ e Cr3+ inibiram a atividade β-glicolítica, provavelmente através de modificações estruturais da enzima. β-mercaptoetanol, SDS, entre outros reagentes não afetaram a catálise. Etanol ou metanol em baixas concentrações estimularam a atividade enzimática, possivelmente devido à atuação da enzima como glicosiltransferase; contudo, o aumento na concentração destes álcoois reduziu a atividade enzimática. A hidrólise de pNPβG, celobiose, maltose, salicina e n-octil-β-D-glicopiranosídeo indica a ampla especificidade da enzima frente à diferentes substratos. As constantes cinéticas Km e Vmax foram definidas para pNPβG, celobiose e maltose, sendo observados valores intermediários para β-glicosidases. Glicose e celobiose inibiram competitivamente a hidrólise de pNPβG. / β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis. β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo902_1.pdf: 650323 bytes, checksum: be5ceb89d7f1e3c6db7dfc8287955f93 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Por possuir a capacidade de crescer e se reproduzir mais rapidamente, determinadas leveduras apresentam importância biotecnológica, como capacidade de fermentação alcoólica e floculação através de características física, química, biológica e produção de enzimas. ß-glicosidases e pectinases possuem ampla aplicação em diversos processos industriais, destacando-se na produção de etanol e clarificação de sucos. Com o objetivo de selecionar e caracterizar quanto à produção de ß-glicosidase e pectinase leveduras estocadas na Coleção de Culturas-Micoteca URM, foram realizados testes de viabilidade e perfil taxonômico em 16 isolados pertencentes às espécies Candida lipolytica, C. peltata, Kluyveromyces marxianus, K. polysporus, Pichia barkeri, P. minuta, P. ohmeri, Rhodotorula glutinis e Saccharomyces cerevisiae. Para verificação da capacidade de produzir ß-glicosidase e pectinase foram utilizados, p-nitrofenil-ß-Dglicopiranosideo e pectina cítrica, respectivamente, como substratos. Todas as culturas testadas mantiveram-se viáveis e preservaram seus aspectos taxonômicos. Produziram ß-glicosidase, os isolados de C. lypolytica URM1120, C. peltata URM4681, K. marxianus URM4404, K. polysporus URM1283, P. ohmeri URM4417, R. glutinis URM5092 e S. cerevisiae URM1460, URM5107 e pectinase, os isolados de K. marxianus URM4405, P. ohmeri URM4417 e S. cerevisiae URM1460. C. peltata URM4681, S. cerevisiae URM5107 e K. marxianus URM4405 se destacam como bons produtores de ß-glicosidase, pectina liase e poligalacturonase respectivamente. O estudo e caracterização dessas enzimas de origem fúngica tornam-se relevantes para aplicações na indústria de alimentos

Orientadores: Francisco Maugeri Filho, Renato de Azevedo Moreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-21T19:53:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_Gilcenara_M.pdf: 1974223 bytes, checksum: 647b7e3918cb207ca7de16931074a977 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A celulose é um material amplamente encontrado na natureza. A hidrólise deste material é resultado de um complexo enzimático que age em sinergismo, denominado celulase. Neste complexo a enzima ß-glicosidase (EC 3.2.1.21) é responsável pelo passo final da hidrólise para formação do produto glicose. Esta enzima tem várias aplicações nos diversos setores industriais, atuando principalmente de forma suplementar, ou seja, é acrescida ao sistema enzimático assim aumentando a cinética da hidrólise. Na indústria alimentícia pode-se destacar a extração e clarificação de sucos, a hidrólise de vegetais para preparação de pures, para alimentação infantil ou geriátrica. Este trabalho se propõe a determinar os parâmetros envolvidos no processo de separação e purificação da ß-glicosidase, a partir de um complexo enzimático, Celulase Tr (Cellumax), para então aplicá-los ao sistema CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction). No processo de purificação foram utilizadas técnicas cromatográficas. Iniciou-se com cromatografia de filtração em gel, seguida de cromatografia de troca iônica. Obtiveram-se melhores resultados com o uso de CM-Sephadex C-50. As frações correspondentes aos picos obtidos nesta cromatografia foram concentradas e aplicadas em coluna de Superose 12 R acoplada ao sistema de FPLC (Faster Performance Liquid Chromatography) a fim de confirmar a pureza da enzima ß-glicosidase. O material obtido foi submetido a análise de eletroforese em gel de poliacrilamida/dodecil sulfeto de Sódio (PAGE/SDS), garantindo desta forma que a enzima estava realmente pura. Os resultados obtidos mostram que é possível a aplicação do processo CARE para separar e purificar a ß-glicosidase. Como continuidade a este trabalho, sugere-se a determinação das constantes cinéticas envolvidas na adsorção-dessorção da resina usada no sistema CARE / Abstract: Cellulose is a very common natural substance. The hydrolysis of this material is caused by an enzyme complex, acting synergistically, known as cellulase. In such a complex, the enzyme ß-glucosidase (EC 3.2.1.21) is responsible for the final step of hydrolysis to form glucose. This enzyme has numerous industrial applications. Particularly important among applications in the food industry we may include the lightening of juices and the hydrolysis of vegetables for production of purees, for infants and elderly. This work was carried out to try to find the parameters involved in the separation and purification of , ß-glucosidase, from an enzymatic complex called Cellulase Tr (Cellumax), and then, to apply them in the CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction) system. The purification process began with gel filtration chromatography and followed by ion-exchange chromatography. The best results were obtained using CM-Sephadex C-50. The peak fractions obtained with ion-exchange cromatography were concentrated and applied to a Superose 12 R column in a FPLC system to confirm the purity of the , Abstract: Cellulose is a very common natural substance. The hydrolysis of this material is caused by an enzyme complex, acting synergistically, known as cellulase. In such a complex, the enzyme Abstract: Cellulose is a very common natural substance. The hydrolysis of this material is caused by an enzyme complex, acting synergistically, known as cellulase. In such a complex, the enzyme ß-glucosidase (EC 3.2.1.21) is responsible for the final step of hydrolysis to form glucose. This enzyme has numerous industrial applications. Particularly important among applications in the food industry we may include the lightening of juices and the hydrolysis of vegetables for production of purees, for infants and elderly. This work was carried out to try to find the parameters involved in the separation and purification of , ß-glucosidase, from an enzymatic complex called Cellulase Tr (Cellumax), and then, to apply them in the CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction) system. The purification process began with gel filtration chromatography and followed by ion-exchange chromatography. The best results were obtained using CM-Sephadex C-50. The peak fractions obtained with ion-exchange cromatography were concentrated and applied to a Superose 12 R column in a FPLC system to confirm the purity of the , ß-glucosidase. For the material obtained with Superose, a PAGE/SDS analysis was undertaken to garantee the purity of the enzime. The results obtained make possible the application of CARE process to the separation and purification of ß-glucosidase. In addition, from the results it is possible to calculate the kinetic constants involved in the resin adsorption-desorption used in the CARE system. ß-glucosidase (EC 3.2.1.21) is responsible for the final step of hydrolysis to form glucose. This enzyme has numerous industrial applications. Particularly important among applications in the food industry we may include the lightening of juices and the hydrolysis of vegetables for production of purees, for infants and elderly. This work was carried out to try to find the parameters involved in the separation and purification of , ß-glucosidase, from an enzymatic complex called Cellulase Tr (Cellumax), and then, to apply them in the CARE (Continuous Affinity Recycle Extraction) system. The purification process began with gel filtration chromatography and followed by ion-exchange chromatography. The best results were obtained using CM-Sephadex C-50. The peak fractions obtained with ion-exchange cromatography were concentrated and applied to a Superose 12 R column in a FPLC system to confirm the purity of the , ß-glucosidase. For the material obtained with Superose, a PAGE/SDS analysis was undertaken to garantee the purity of the enzime. The results obtained make possible the application of CARE process to the separation and purification of ?-glucosidase. In addition, from the results it is possible to calculate the kinetic constants involved in the resin adsorption-desorption used in the CARE system.-glucosidase. For the material obtained with Superose, a PAGE/SDS analysis was undertaken to garantee the purity of the enzime. The results obtained make possible the application of CARE process to the separation and purification of ß-glucosidase. In addition, from the results it is possible to calculate the kinetic constants involved in the resin adsorption-desorption used in the CARE system. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Yong Kun Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aguiar_ClaudioLimade_D.pdf: 3633403 bytes, checksum: a077bdb4a30340781da556e96aa2116b (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As isoflavonas são conhecidas por suas atividades biológicas tais como, atividades estrogênica, antifúngica, antioxidante e antitumoral (mama e próstata), além de inibir a atividade de enzimas ligadas à divisão celular, sendo estas atividades biológicas mais acentuadas nas formas agliconas que glicosiladas. Sua presença em produtos de soja, tem sido relatada como importante para a saúde humana, além do que o Brasil é o maior exportador de soja no mundo a partir de 2003. O presente trabalho de tese teve como objetivos, avaliar os teores de isoflavonas e seus conjugados presentes em cultivares de soja brasileiros e em alguns produtos à base de soja, bem como, discutir os efeitos associados à presença de isoflavonas, em suas diferentes formas, nas propriedades biológicas (antioxidante, antiinflamatória e antimicrobiana) encontradas em extratos alcoólicos de soja. Analisou-se os teores de isoflavonas em cultivares de soja (Glycine max L.) provenientes de diferentes órgãos estaduais e federais de pesquisa em soja e o efeito da temperatura na extração de isoflavonas de soja. As concentrações mais elevadas de isoflavonas foram obtidas principalmente por extração alcoólica em solução 80 ou 90% de metanol e solução 60 ou 70% de etanol. Foi avaliada a composição de isoflavonas presentes em soja, após tratamento térmico e por radiação gama. A farinha de soja foi tratada por aquecimento a 100 e 121°C por 20, 40 e 60 min; a 121°C por 40 e 60 min, alonil-isoflavonas em farinha de soja foram completamente transformadas a glicosil-isoflavonas. A radiação gama também promoveu a redução no conteúdo de isoflavonas. O extrato metanólico de soja tratado por radiação gama apresentou uma perda gradual no conteúdo de isoflavonas totais (perda de 33,5%), mas em farinha de soja, rica em fibras, a radiação gama teve pouco efeito (perda de 9,96%). Por outro lado, o fungo filamentoso Aspergillus onJzae ATCC 22786 produziu alta atividade de 13-glicosidase, a qual foi capaz de converter glicosil-isoflavonas em agliconas presentes em farinha de soja. Glicosil-isoflavonas (daidzina, glicitina e genistina) foram eficientemente transformadas às suas formas agliconas (daidzeína, gliciteína e genisteína) por fermentação em estado sólido por 48 h a 30°C com esporos (107 esporosjmL) ou pela l3-glicosidase de A. oryzae, após 30 min a 40°C. Após o tratamento da farinha de soja com P-glicosidase, 85,5% das glicosil-isoflavonas foram hidrolisadas às formas agliconas. O tratamento térmico a 121°C seguido da reação enzimática, produziu grande quantidade de isoflavonas agliconas. Portanto, o tratamento combinado de aquecimento a 121°C e reação com p-glicosidase de A. oryzae ATCC 22786 pode transformar eficientemente malonil-isoflavonas a glicosil-conjugados e, posteriormente, a agliconas. Além disso, os extratos metanólicos de farinha de soja tratada com aquecimento e P-glicosidase demonstraram elevadas atividades antioxidantes. No entanto, o tratamento com aquecimento e reação enzimática não mostrou claramente um aumento nas atividades antimicrobiana e antiinflamatória. / Abstract: The isoflavones from soybean are known to have several biological properties such as estrogenic, antimicrobial and antitumoral (breast and prostate) activities, besides inhibiting the activity of enzymes linked to the cellular division. These properties are shown to be more accentuated in the aglycone than glycoside forms. Their presence in soy products have been reported with a number of beneficial health effects. In addition, Brazil is a major soybean producer in the World. The main objectives of this work of Thesis was to evaluate the isoflavone contents, and its conjugate forms, present in different Brazilian soybean cultivars, as well as, in some soy products. Other objective of this work, was to discuss the effects associated to the presence of isoflavones with some biological properties (antioxidant, anti-inflammatory, and antimicrobial) into alcoholic extracts of soybean. The isoflavone contents was analyzed in different soybean cultivars donated by State and Federal Organization on Soy Research, and the effect of the temperature in the extraction of soybean isoflavones. The high isoflavone concentrations were obtained mainly by alcoholic extraction using 80% methanol and 60% ethanol solutions. As a major soybean producer, Brazil finds important to characterize the isoflavone composition of the some Brazilian soybean cultivars, which were treated with heat processing and gamma irradiation. Soybean flour was treated by heating at 100 and 121°C for 20, 40, and 60 mino At 121°C for 40 and 60 min, the isoflavone malonate into defatted soybean flour was completely converted to their glycoside conjugates. Gamma irradiation also promoted some reduction in isofIavone profiles. The methanolic extract of soybean treated by y-radiation had a gradual decreasing in their isofIavone contents (loss of 33.5%), but on soybean fIour, rich in fiber, the y-radiation had a little effect (loss of 9.96%). On the other hand, the filamentous fungus Aspergillus oryzae ATCC 22786 a high f3-glucosidase producer, was found to be able to convert glycoside isofIavones to aglycones forms present into soybean fIour. It was observed that the glycoside isofIavones extracted such as, daidzin, glycitin and genistin, were efficiently transformed into their aglycones forms (daidzein, glycitein and genistein) by solidstate fermentation after 48 h at 30°C with A. oryzae spores (107 sporesjmL) or f3-glucosidase after 30 min at 40°C. After treatment of the methanolic extracts with f3-glucosidase, 85.5% of glycoside isofIavones were hydrolyzed by this enzyme to form aglycones. The enzymatic reaction on the methanolic extract from the soybean sample treated at 121°C indicated that the glycoside isoflavones were efficiently transformed into aglycones. Therefore, combined application of heat treatment at 121°C and the fungal p-glucosidase could transform efficiently malonylglycoside isoflavones and glycoside isoflavones to aglycones. Furthermore, methanolic extracts of soybean sample treated by heating and with P-glucosidase demonstrated higher antioxidant activity. However, the treatment by heating and enzyme reaction do not show an increasing in the antimicrobial and anti-inflammatory activities. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Glicoconjugados são abundantes na superfície de Trypanosoma cruzi e têm sido bastante estudados por diferentes grupos. A degradação dessas moléculas, no entanto, tem sido alvo de pouco interesse. O objetivo deste trabalho foi determinar a atividade de alfa-L-fucosidase em T.cruzi uma vez que trabalhos anteriores haviam concluído que várias hidrolases, entre elas a alfa-L-fucosidase estavam ausentes em epimastigota (AVILA, et al., 1979). Empregando-se p-nitrofenilfucopiranosídeo como substrato e extrato de formas epimastigotas, verificou-se que a enzima apresenta praticamente a mesma atividade em um intervalo de pH entre 6,0 e 7,5, caindo drasticamente em pHs mais ácidos. A incubação prévia da enzima a 28°C em pH 7,0 leva à perda de aproximadamente 30% de sua atividade após 1h 30mim e à perda de 100% após 4 horas de incubação. O efeito de íons na atividade da enzima foi estudado,verificando-se que Zn +2 inibe 90% sua atividade, enquanto que outros, como o Ca +2 praticamente não tem efeito. A enzima é parcialmente encontrada na fração particulada, podendo ser solubilizada parcialmente com 1% de Triton X-100 ou com NaCl 1 M. As tentativas feitas de purificar a enzima foram infrutíferas, uma vez que não se encontraram condições para manter a proteína ativa por longos períodos de tempo. A alfa-L-fucosidase está presente não só em pimastigotas, mas também em tripomastigotas, embora parentemente com diferentes atividades específicas, sendo maior em epimastigotas. Mesmo nos epimastigotas, grandes variações de atividade específica foram detectadas ao longo deste trabalho (de 0,03 a 0,23 unidades). Anticorpos preparados contra alfa-L-fucosidase comercial de epidídimo bovino imunoprecipitaram de extratos de epimastigotas previamente marcados com 35 S-metionina, um polipeptídeo em torno de 50 kDa após eletroforese em gel desnaturante e uma banda de 130-150 kDa em gel não desnaturante, sugerindo que a enzima em T.cruzi pode ser dimérica, a exemplo de outras alfa-L-fucosidases descritas na literatura. A imunoprecipitação de extrato de epimastigotas marcados com 35 S-metionina na presença de tunicamicina, com o anticorpo anti-alfa-L-fucosidase revelou um polipeptídeo de 45 kDa, mostrando que a enzima é glicosilada. A glicosilação daenzima também foi observada pelo emprego de corantes comerciais. Além disso, os anticorpos anti-alfa-L-fucosidase imunoprecipitam moléculas com atividade de alfa-L-fucosidase,embora não se tenha observado aumento da atividade, possivelmente devido à perda de atividade da enzima nas condições empregadas durante a imunoprecipitação. Os anticorpos anti-alfa-L-fucosidase reconhecem, por imunofluorescência indireta, tanto as formas epimastigotas como tripomastigotas de cultura de tecido. A análise por microscopia de transmissão mostra a reatividade intensa do anticorpo com uma região membranar localizada na região posterior do epimastigota. No caso do tripomastigota, a reatividade é menos pronunciada mostrando uma leve marcação no interior do parasita. / Alpha-L-fucose is a component of glycoproteins, inc1uding glycoproteins isolated from Tcruzi. a-L fucosidases have been isolated from different sources, but earlier studies were unable to detect this enzyme in T. cruzi epimastigotes (AVILA et al., 1979). In this work immunocytochemical and biochemical techniques have been used to localize and characterize a membrane-associated, neutral-pH-optimum alpha-L fucosidase from Trypanosoma cruzi epimastigotes. Light and electron microscopy specifically localized the alpha-L fucosidase on membranes in the posterior region of the epimastigotes and on the parasite surface. Immunoreactivity for alpha-L-fucosidase, a1though less intense, was also detected on the surface of trypomastigotes. Fractionation of epimastigotes homogenates indicated that over 50% of the a-Lfucosidase activity was associated with the 80 000 g pellet. This pellet-associated activity could be solubilized with 1 M NaCl or with 1% Triton X-I 00, suggesting that alpha-L-fucosidase is peripherally associated with membranes. Analysis of alpha-L-fucosidase on epimastigote extracts indicated that the enzyme had a pH-activity curve (with an optimum near 7) which was comparable to other alpha-L-fucosidases reported in the literature. A higher specific activity (in units/mg) was found in epimastigotes as compared to the other differentiation stages of the parasite: 0.028 for epimastigotes, 0.002 for metacyc1ic trypomastigotes and 0.015 for tissue - cultured trypomastigotes. SDS/PAGE and Westem blotting analysis indicated that epimastigotes have a protein band of 50 kDa which was immunoreactive with anti-alpha-L-fucosidase antibodies.

Glicoconjugados são abundantes na superfície de Trypanosoma cruzi e têm sido bastante estudados por diferentes grupos. A degradação dessas moléculas, no entanto, tem sido alvo de pouco interesse. O objetivo deste trabalho foi determinar a atividade de alfa-L-fucosidase em T.cruzi uma vez que trabalhos anteriores haviam concluído que várias hidrolases, entre elas a alfa-L-fucosidase estavam ausentes em epimastigota (AVILA, et al., 1979). Empregando-se p-nitrofenilfucopiranosídeo como substrato e extrato de formas epimastigotas, verificou-se que a enzima apresenta praticamente a mesma atividade em um intervalo de pH entre 6,0 e 7,5, caindo drasticamente em pHs mais ácidos. A incubação prévia da enzima a 28°C em pH 7,0 leva à perda de aproximadamente 30% de sua atividade após 1h 30mim e à perda de 100% após 4 horas de incubação. O efeito de íons na atividade da enzima foi estudado,verificando-se que Zn +2 inibe 90% sua atividade, enquanto que outros, como o Ca +2 praticamente não tem efeito. A enzima é parcialmente encontrada na fração particulada, podendo ser solubilizada parcialmente com 1% de Triton X-100 ou com NaCl 1 M. As tentativas feitas de purificar a enzima foram infrutíferas, uma vez que não se encontraram condições para manter a proteína ativa por longos períodos de tempo. A alfa-L-fucosidase está presente não só em pimastigotas, mas também em tripomastigotas, embora parentemente com diferentes atividades específicas, sendo maior em epimastigotas. Mesmo nos epimastigotas, grandes variações de atividade específica foram detectadas ao longo deste trabalho (de 0,03 a 0,23 unidades). Anticorpos preparados contra alfa-L-fucosidase comercial de epidídimo bovino imunoprecipitaram de extratos de epimastigotas previamente marcados com 35 S-metionina, um polipeptídeo em torno de 50 kDa após eletroforese em gel desnaturante e uma banda de 130-150 kDa em gel não desnaturante, sugerindo que a enzima em T.cruzi pode ser dimérica, a exemplo de outras alfa-L-fucosidases descritas na literatura. A imunoprecipitação de extrato de epimastigotas marcados com 35 S-metionina na presença de tunicamicina, com o anticorpo anti-alfa-L-fucosidase revelou um polipeptídeo de 45 kDa, mostrando que a enzima é glicosilada. A glicosilação daenzima também foi observada pelo emprego de corantes comerciais. Além disso, os anticorpos anti-alfa-L-fucosidase imunoprecipitam moléculas com atividade de alfa-L-fucosidase,embora não se tenha observado aumento da atividade, possivelmente devido à perda de atividade da enzima nas condições empregadas durante a imunoprecipitação. Os anticorpos anti-alfa-L-fucosidase reconhecem, por imunofluorescência indireta, tanto as formas epimastigotas como tripomastigotas de cultura de tecido. A análise por microscopia de transmissão mostra a reatividade intensa do anticorpo com uma região membranar localizada na região posterior do epimastigota. No caso do tripomastigota, a reatividade é menos pronunciada mostrando uma leve marcação no interior do parasita. / Alpha-L-fucose is a component of glycoproteins, inc1uding glycoproteins isolated from Tcruzi. a-L fucosidases have been isolated from different sources, but earlier studies were unable to detect this enzyme in T. cruzi epimastigotes (AVILA et al., 1979). In this work immunocytochemical and biochemical techniques have been used to localize and characterize a membrane-associated, neutral-pH-optimum alpha-L fucosidase from Trypanosoma cruzi epimastigotes. Light and electron microscopy specifically localized the alpha-L fucosidase on membranes in the posterior region of the epimastigotes and on the parasite surface. Immunoreactivity for alpha-L-fucosidase, a1though less intense, was also detected on the surface of trypomastigotes. Fractionation of epimastigotes homogenates indicated that over 50% of the a-Lfucosidase activity was associated with the 80 000 g pellet. This pellet-associated activity could be solubilized with 1 M NaCl or with 1% Triton X-I 00, suggesting that alpha-L-fucosidase is peripherally associated with membranes. Analysis of alpha-L-fucosidase on epimastigote extracts indicated that the enzyme had a pH-activity curve (with an optimum near 7) which was comparable to other alpha-L-fucosidases reported in the literature. A higher specific activity (in units/mg) was found in epimastigotes as compared to the other differentiation stages of the parasite: 0.028 for epimastigotes, 0.002 for metacyc1ic trypomastigotes and 0.015 for tissue - cultured trypomastigotes. SDS/PAGE and Westem blotting analysis indicated that epimastigotes have a protein band of 50 kDa which was immunoreactive with anti-alpha-L-fucosidase antibodies.

A celulose é a mais abundante fonte de carbono presente na madeira e nos resíduos agrícolas, e a sua hidrólise completa é realizada pela ação sinergística de diferentes enzimas, como: as endo-1,4-ß-D-glucanase, exo-1,4-ß-glucanase e ß-glucosidase ou celobiase. O presente trabalho descreve algumas propriedades fisiológicas e bioquímicas do sistema ß-glucosidásico do fungo termofílico Scytalidium thermophilum. Tal fungo foi isolado originalmente do solo da Índia e gentilmente cedido pelo Dr. G. Straastma (Holanda). O meio M8 favoreceu a produção das ß-glucosidases. Entre os açúcares testados como fonte de carbono, avicel e celobiose foram os melhores indutores das ß-glucosidases extracelular e micelial. Quando o fungo foi crescido em dois estágios, observou-se inicialmente a repressão da síntese por glicose e a indução por avicel ou celobiose. Utilizando-se ciclo-heximida, observou-se a síntese \"de novo\" das proteínas. A ß-glucosidase extracelular foi purificada utilizando-se um fracionamento protéico e uma coluna de troca-iônica DEAE-celulose, de onde foram obtidos duas atividades enzimáticas denominadas ß-glucosidases I e II. A ß-glucosidase I foi aplicada em coluna de troca iônica CM-celulose, enquanto que a ß-glucosidase II foi aplicada em Sephadex G-100. A ß-glucosidase I foi purificada 2 vezes com 4.0% de recuperação, ao passo que a ß-glucosidase II foi purificada 2,4 vezes com 2.0% de recuperação. A ß-glucosidase micelial foi purificada utilizando-se um choque térmico, fracionamento protéico, coluna de filtração Sephadex G-100 e uma coluna troca-iônica DEAE-celulose. Foi purificada 23 vezes com recuperação de 25%. A ß-glucosidases extracelular I e micelial apresentaram um temperatura ótima aparente de 70 e 60°C e um pH de 5.5 e 6.0, respectivamente. Ambas enzimas foram inibidas por Ag+2 e Hg+2. A ß-glucosidases extracelular I e micelial possuem um peso molecular de 40.7 kDa e 39kda (SDS-Page) e 57 kDa e 33,8 kda (Sephadex G-100), respectivamente. A ß-glucosidase extracelular I foi capaz de hidrolisar PNP-glu, PNP-xil, celobiose, xilana e CMC, enquanto que a ß-glucosidase micelial hidrolisou PNP-glu, PNP-fuc, PNP-xil, PNPgal, ONPG e lactose. Ambas enzimas foram ativadas por glicerol a 1M. A ß-glucosidase extracelular I foi ativada por xilose, frutose e lactose, e se mostrou resistente a glicose 50mM, enquanto que a ß-glucosidase micelial foi ativada por glicose e xilose. ß-glucosidases extracelular I e micelial apresentaram um PI de 4.0 e 6.5, respectivamente. Os parâmetros cinéticos estimados para a ß-glucosidase extracelular I foram de Km 4,33 e 0,342mM e Vmáx de 5,37 e 2,0µmoles/min/mg prot. para celobiose e PNP-glu, respectivamente. O valor de Ki (Constante de Inibição) foi de 71mM para glicose. Para a ß-glucosidase micelial, os valores de Km e Vmáx foram de 0,29mM e 13,27µmoles/min/mg prot; 0,5 mM e 7,25µmoles/min/mg prot e 1,61 mM e 4,12µmoles/min/mg prot para os substratos PNP-glu, PNP-fuc e celobiose, respectivamente. Na presença de glicose e xilose os valores de Km e Vmáx foram de 1,26mM e 40,04 µmoles/min/mg.prot, e 1,33mM, e 30,49 µmoles/min/mg prot, respectivamente para o PNP-glu. O valor de Ki (Constante de Inibição) foi de 1,32mM para celobiose. A análise dos produtos de hidrólise das ß-glucosidases extracelular I e micelial foram anlisadas em TLC, e revelaram que ambas enzimas realizam hidrólise quando celobiose foi utilizada a 10mM, e transglicosilação quando celobiose foi utilizada a 250mM. Os resultados aqui apresentados demonstram importante papel importante do Scytalidium como produtor de ß-glucosidase com potencial na sacarificação enzimática da celulose. / Cellulose is the most abundant carbon source found in woods and waste residues. In nature the complete hidrolysis of cellulose occurs by the sinergistic action of several enzymes such endo-1,4-ß-D-glucanase, exo-1,4-ß-glucanase e ß-glucosidase or cellobiase. The present work describe some physiological and biochemical properties of ß-glucosidase system from thermophilic fungus Scytalidium thermophilum. The fungus was gift to Dr. Straastma (Mushroom Experimental Station, The Netherlands). The culture medium M8 enhance the production of ß-glucosidase. Among carbohydrates tested as carbon source, avicel and cellobiose were the best inducers of ß-glucosidase extracellular and mycelial. When the fungus was grown in two stages, observed the repression by glucose, and induction by avicel or cellobiose. The presence of cycloheximide inhibited the syntesis of ß-glucosidase, suggesting that the enzyme produced in the presence of indutors required \"de novo\" synthesis. Extracellular ß-glucosidase was purified using the precipitation with 75% amonium sulfate, ion exchange cromatography column DEAE-cellulose, and were obtained two activities: ß-glucosidase extracellular I and II. The ß-glucosidase I was applied to a CM-cellulose colunm, while ß-glucosidase II was applied to a Sephadex G-100 colunm. The ß-glucosidase II was purified two times and 4% yield, and the ß-glucosidase II was purified 2,4 times and 2% yield. The mycelial ß-glucosidase was purified using the termic treatment, a precipitation with 75% amonium sulfate followed by Sephadex G-100 and DEAEcellulose. The enzyme was purified 23 time with 23% yield. The ß-glucosidase extracellular II and mycelial shown optima of temperature and pH of 60°C and 70°C, 4.4 and 6.0, respectively. Hg+2 and Ag+2 ions were strong inhibitors of ß-glucosidase extracellular I and mycelial. The molecular weight of ß-glucosidase extracellular I and mycelial was stimated as 40.7 KDa and 39KDa (SDS-PAGE) and 57kDa and 33.8 kDa (Sephadex G-100). The ß-glucosidase extracellular I hydrolyzed PNP-glu, PNP-xyl, cellobiose,xylan and CMC, while ß-glucosidase mycelial hydrolyzed PNP-fuc, PNP-xyl, PNP-gal, ONPG and lactose. Both enzymes were activeted by glycerol 1M. The ß-glucosidase extracellular I was activeted by xylose, fructose and lactose, and show strong at glucose 50mM. The ß-glucosidase mycelial was activeted by glucose and xylose. ß-glucosidase extracellular I and mycelial shows PI 4.0 and 6.5, respectively. The kinects studies reveled for ß-glucosidase extracellular I a Km of 4,33 and 0,342mM and Vmáx of 5,37 and 2,0µmoles/min/mg prot for cellobiose and PNP-glu, respectively. The Ki values obtained from Dixon plots was 71mM for glucose. To ß-glucosidase mycelial the Km and and Vmáx were 0,29mM e 13,27µmoles/min/mg prot; 0,5 mM e 7,25µmoles/min/mg prot and 1,61 mM and 4,12µmoles/min/mg prot for PNP-glu, PNPfuc and cellobiose, respectively. Using xylose or glucose the Km and Vmáx was 1,26mM e 40,04 µmoles/min/mg.prot, and 1,33mM, e 30,49 µmoles/min/mg prot, respectively for PNP-glu. The Ki values obtained from Dixon plots was 1,32mM using cellobiose. The products of hydrolisis of cellobiose by the action of purified enzymes glucosidase extracellular I and mycelial were analised in thin-layer-cromatography, and show hydrolisis of cellobiose at 10mM,and transglycosilation reaction when cellobiose was using at 250mM. The intrinsic biochemical and regulatory properties the ß-glucosidase system of Scytalidium support the idea that organism may be useful for biotechnological applications.

A celulose é a mais abundante fonte de carbono presente na madeira e nos resíduos agrícolas, e a sua hidrólise completa é realizada pela ação sinergística de diferentes enzimas, como: as endo-1,4-ß-D-glucanase, exo-1,4-ß-glucanase e ß-glucosidase ou celobiase. O presente trabalho descreve algumas propriedades fisiológicas e bioquímicas do sistema ß-glucosidásico do fungo termofílico Scytalidium thermophilum. Tal fungo foi isolado originalmente do solo da Índia e gentilmente cedido pelo Dr. G. Straastma (Holanda). O meio M8 favoreceu a produção das ß-glucosidases. Entre os açúcares testados como fonte de carbono, avicel e celobiose foram os melhores indutores das ß-glucosidases extracelular e micelial. Quando o fungo foi crescido em dois estágios, observou-se inicialmente a repressão da síntese por glicose e a indução por avicel ou celobiose. Utilizando-se ciclo-heximida, observou-se a síntese \"de novo\" das proteínas. A ß-glucosidase extracelular foi purificada utilizando-se um fracionamento protéico e uma coluna de troca-iônica DEAE-celulose, de onde foram obtidos duas atividades enzimáticas denominadas ß-glucosidases I e II. A ß-glucosidase I foi aplicada em coluna de troca iônica CM-celulose, enquanto que a ß-glucosidase II foi aplicada em Sephadex G-100. A ß-glucosidase I foi purificada 2 vezes com 4.0% de recuperação, ao passo que a ß-glucosidase II foi purificada 2,4 vezes com 2.0% de recuperação. A ß-glucosidase micelial foi purificada utilizando-se um choque térmico, fracionamento protéico, coluna de filtração Sephadex G-100 e uma coluna troca-iônica DEAE-celulose. Foi purificada 23 vezes com recuperação de 25%. A ß-glucosidases extracelular I e micelial apresentaram um temperatura ótima aparente de 70 e 60°C e um pH de 5.5 e 6.0, respectivamente. Ambas enzimas foram inibidas por Ag+2 e Hg+2. A ß-glucosidases extracelular I e micelial possuem um peso molecular de 40.7 kDa e 39kda (SDS-Page) e 57 kDa e 33,8 kda (Sephadex G-100), respectivamente. A ß-glucosidase extracelular I foi capaz de hidrolisar PNP-glu, PNP-xil, celobiose, xilana e CMC, enquanto que a ß-glucosidase micelial hidrolisou PNP-glu, PNP-fuc, PNP-xil, PNPgal, ONPG e lactose. Ambas enzimas foram ativadas por glicerol a 1M. A ß-glucosidase extracelular I foi ativada por xilose, frutose e lactose, e se mostrou resistente a glicose 50mM, enquanto que a ß-glucosidase micelial foi ativada por glicose e xilose. ß-glucosidases extracelular I e micelial apresentaram um PI de 4.0 e 6.5, respectivamente. Os parâmetros cinéticos estimados para a ß-glucosidase extracelular I foram de Km 4,33 e 0,342mM e Vmáx de 5,37 e 2,0µmoles/min/mg prot. para celobiose e PNP-glu, respectivamente. O valor de Ki (Constante de Inibição) foi de 71mM para glicose. Para a ß-glucosidase micelial, os valores de Km e Vmáx foram de 0,29mM e 13,27µmoles/min/mg prot; 0,5 mM e 7,25µmoles/min/mg prot e 1,61 mM e 4,12µmoles/min/mg prot para os substratos PNP-glu, PNP-fuc e celobiose, respectivamente. Na presença de glicose e xilose os valores de Km e Vmáx foram de 1,26mM e 40,04 µmoles/min/mg.prot, e 1,33mM, e 30,49 µmoles/min/mg prot, respectivamente para o PNP-glu. O valor de Ki (Constante de Inibição) foi de 1,32mM para celobiose. A análise dos produtos de hidrólise das ß-glucosidases extracelular I e micelial foram anlisadas em TLC, e revelaram que ambas enzimas realizam hidrólise quando celobiose foi utilizada a 10mM, e transglicosilação quando celobiose foi utilizada a 250mM. Os resultados aqui apresentados demonstram importante papel importante do Scytalidium como produtor de ß-glucosidase com potencial na sacarificação enzimática da celulose. / Cellulose is the most abundant carbon source found in woods and waste residues. In nature the complete hidrolysis of cellulose occurs by the sinergistic action of several enzymes such endo-1,4-ß-D-glucanase, exo-1,4-ß-glucanase e ß-glucosidase or cellobiase. The present work describe some physiological and biochemical properties of ß-glucosidase system from thermophilic fungus Scytalidium thermophilum. The fungus was gift to Dr. Straastma (Mushroom Experimental Station, The Netherlands). The culture medium M8 enhance the production of ß-glucosidase. Among carbohydrates tested as carbon source, avicel and cellobiose were the best inducers of ß-glucosidase extracellular and mycelial. When the fungus was grown in two stages, observed the repression by glucose, and induction by avicel or cellobiose. The presence of cycloheximide inhibited the syntesis of ß-glucosidase, suggesting that the enzyme produced in the presence of indutors required \"de novo\" synthesis. Extracellular ß-glucosidase was purified using the precipitation with 75% amonium sulfate, ion exchange cromatography column DEAE-cellulose, and were obtained two activities: ß-glucosidase extracellular I and II. The ß-glucosidase I was applied to a CM-cellulose colunm, while ß-glucosidase II was applied to a Sephadex G-100 colunm. The ß-glucosidase II was purified two times and 4% yield, and the ß-glucosidase II was purified 2,4 times and 2% yield. The mycelial ß-glucosidase was purified using the termic treatment, a precipitation with 75% amonium sulfate followed by Sephadex G-100 and DEAEcellulose. The enzyme was purified 23 time with 23% yield. The ß-glucosidase extracellular II and mycelial shown optima of temperature and pH of 60°C and 70°C, 4.4 and 6.0, respectively. Hg+2 and Ag+2 ions were strong inhibitors of ß-glucosidase extracellular I and mycelial. The molecular weight of ß-glucosidase extracellular I and mycelial was stimated as 40.7 KDa and 39KDa (SDS-PAGE) and 57kDa and 33.8 kDa (Sephadex G-100). The ß-glucosidase extracellular I hydrolyzed PNP-glu, PNP-xyl, cellobiose,xylan and CMC, while ß-glucosidase mycelial hydrolyzed PNP-fuc, PNP-xyl, PNP-gal, ONPG and lactose. Both enzymes were activeted by glycerol 1M. The ß-glucosidase extracellular I was activeted by xylose, fructose and lactose, and show strong at glucose 50mM. The ß-glucosidase mycelial was activeted by glucose and xylose. ß-glucosidase extracellular I and mycelial shows PI 4.0 and 6.5, respectively. The kinects studies reveled for ß-glucosidase extracellular I a Km of 4,33 and 0,342mM and Vmáx of 5,37 and 2,0µmoles/min/mg prot for cellobiose and PNP-glu, respectively. The Ki values obtained from Dixon plots was 71mM for glucose. To ß-glucosidase mycelial the Km and and Vmáx were 0,29mM e 13,27µmoles/min/mg prot; 0,5 mM e 7,25µmoles/min/mg prot and 1,61 mM and 4,12µmoles/min/mg prot for PNP-glu, PNPfuc and cellobiose, respectively. Using xylose or glucose the Km and Vmáx was 1,26mM e 40,04 µmoles/min/mg.prot, and 1,33mM, e 30,49 µmoles/min/mg prot, respectively for PNP-glu. The Ki values obtained from Dixon plots was 1,32mM using cellobiose. The products of hydrolisis of cellobiose by the action of purified enzymes glucosidase extracellular I and mycelial were analised in thin-layer-cromatography, and show hydrolisis of cellobiose at 10mM,and transglycosilation reaction when cellobiose was using at 250mM. The intrinsic biochemical and regulatory properties the ß-glucosidase system of Scytalidium support the idea that organism may be useful for biotechnological applications.