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Detecção da expressão gênica de enzimas da gliconeogênese na placenta de fêmeas bovinas / Detection of gene expression of enzymes of gluconeogenesis in the placenta of jamale cattleZanardi, Geila Maria 18 December 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-12-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A singular feature during mammalian development is the provision of nutrients from the
maternal system to the conceptus through the placenta. To the fetus, the placenta consists of a
multi-functional organ with an intense metabolism, characterized in an adult as separated
functions in multiple organs. This study aimed to verify the presence of key enzymes in the
bovine placenta responsible for glyconeogenesis, which is a metabolic pathway used for Dglucose
synthesis from non-carbohydrate compounds. Such pathway is common to the liver
metabolism used to maintain glucose homeostasis in plasma, especially during fasting or postprandial
absorption. No studies on the occurrence of glyconeogenesis in the bovine placenta
have been reported thus far. In this study, a qualitative gene expression analysis was carried
out for three key glyconeogenic enzymes: fructose-1,6-bisphosphatase (F1,6B), glucose-6-
phosphatase (G6-P) e phosphoenolpyruvate carboxikinase (PEP-CK) in the bovine placental
tissue at three distinct gestation periods. For that, placentome fragments from 5 pregnant
females from each period were used for the detection of transcripts for the three enzymes
above by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Amplified PCR products
obtained for each enzyme from the placenta and adult liver (positive control) were analyzed in
1% agarose gel, followed by purification, DNA cloning e sequencing for confirmation of
amplification specificity. The RT-PCR analysis followed by DNA sequencing revealed the
presence of all three glyconeogenic enzymes in the bovine placenta from all three gestational
periods. Based on our results, the glyconeogenic pathway may occur in the placental tissue in
cattle during pregnancy. However, more studies are still needed for the confirmation of the
occurrence and temporal importance of the glyconeogenesis in the bovine placenta / Uma característica singular do desenvolvimento dos mamíferos é a provisão de nutrientes do
organismo materno por intermédio da placenta. Para o feto, a placenta consiste na
combinação, em apenas um órgão, de muitas atividades funcionais, que no adulto são
separadas e, além disso, possui um intenso metabolismo. Este trabalho teve como objetivo
verificar a expressão de enzimas chave na placenta bovina para a gliconeogênese, que
consiste em uma via metabólica capaz de sintetizar D-glicose, utilizando-se compostos que
não são carboidratos. Essa via se processa no fígado e é utilizada pelo organismo para manter
os níveis glicêmicos normais em condições de jejum e de pós-absorsão. Atualmente não
existem estudos sobre a gliconeogênese na placenta bovina. Neste estudo foi avaliada a
expressão gênica na placenta bovina de três enzimas gliconeogênicas: frutose-1,6-bisfosfatase
(F1,6B), glicose-6-fosfatase (G6-P) e fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEP-CK) nos três
trimestres gestacionais. Para tanto, foram utilizados fragmentos de placentônios de 5 fêmeas
bovinas para cada terço de gestação para a avaliação da expressão gênica das três enzimas
gliconeogênicas após a transcripção reversa e reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Os
produtos de PCR amplificados obtidos para cada enzima na placenta bem como para o fígado
de animal adulto, que foi utilizado como controle positivo, foram analisados em gel de
agarose a 1%, purificados, clonados e seqüenciados para a confirmação da especificidade de
amplificação. A análise da expressão gênica através do RT-PCR e o sequenciamento
demonstrou a presença de mRNA para as três enzimas gliconeogênicas na placenta bovina
nos três períodos gestacionais. Baseado em nossos resultados, é possível que a rota
gliconeogênica ocorra no tecido placentário de bovinos durante a gestação. Porém, ainda são
necessários mais estudos para a confirmação da ocorrência e importância temporal da
gliconeogênese na placenta bovina
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