O estradiol secretado pelo folículo dominante (DOM) desempenha importante papel na luteólise da vaca. Em adição, o reconhecimento materno da prenhez (MRP) requer um ambiente uterino otimizado, o qual por sua vez depende da função luteínica e de adequadas concentrações de progesterona circulante. Os objetivos do presente estudo foi testar diferentes estratégias para otimizar a função luteínica e prevenir a influência de um DOM durante o período crítico (CP) para o MRP (de D13 a D20 após o estro o estro). Diferentes abordagens foram testadas. No exp.1, 23 vacas Nelore foram tratadas com o protocolo ovsynch para induzir um cio sincronizado (D0). As vacas receberam: Gc (n=7) - nada mais; ThCG (n=5) - 3000 IU de hCG no D5; TE2 (n=6) - 5mg de 17b-estradiol (E2) no D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultra-sonografias e dosagens de progesterona plasmática durante o ciclo estral permitiram determinar que o E2 reprogramou o ciclo ovariano ao prevenir a presença (P⁢0,05) de um DOM durante quase todo CP (0,6±0,7 dias entre D15 e D20), porém o E2 induziu a luteólise. As vacas que receberam a hCG desenvolveram corpo lúteo acessório e tiveram [P4] mais alta até o D13 (P⁢0,05). Portanto, a fase luteínica não foi prolongada No exp.2, os mesmos tratamentos foram impostos a 220 vacas Nelore (55 por grupo) após uma inseminação artificial em tempo fixo (TAI). As taxas de prenhez (PR) à TAI ou às inseminais de repasse durante uma estação com 64 dias de duração foram diminuídas (P⁢0,05) quando o E2 foi usado e a hCG não foi capaz de aumentar aquelas PR. No exp.3, vacas Red Angus no pós-parto tiveram seu estro sincronizado (D0) e receberam: nada mais (GCT, n=5) ou 200mg de gonadorrelina no D5 mais 3000 IU hCG no D13 (GRF, n=5); ou ablação de todos folículos ³7mm através de aspiração folicular em D14, D17 e D20 (GRM, n=5). GRF teve luteólise retardada (18,2±1,0b dias, 23,6&plusmn1,0a dias e 18,7&plusmn1,2b dias para GCT, GRF e GRM, respectivamente) e maior [P4] que os outros grupos. Folículos maiores que 7mm foram observados quando das aspirações. Foi possível concluir que: a) E2 permitiu consistentemente reprogramar o desenvolvimento folicular, porém causou luteólise e o seu uso trouxe efeitos negativos sobre as PR; b) a hCG melhorou a função luteínica mas não aumentou as PR; c) a ablação dos folículos ³7mm não preveniu a presença do DOM no CP para o MRP e d) a associação GnRH/hCG otimizou a função luteínica, retardou a luteólise e prolongou a fase luteínica de modo que todo o CP esteve sob influência da progesterona / Estradiol secreted from the dominant follicle (DOM) plays a key role in triggering luteolysis in the cow. In addition, maternal recognition of pregnancy (MRP) requires an optimum uterine environment, which directly depends on luteal function and adequate levels of circulating progesterone. The aim of this study was to test different strategies to optimize luteal function and prevent the influence of a DOM throughout the critical period (CP) for MRP (from D13 to D20 after estrus). Different approaches were tested. In exp.1, 23 Nelore cows were treated with the ovsync protocol to induce a synchronized estrus (D0). Cows received: Gc (n=7) - nothing else; ThCG (n=5) - 3000 IU of hCG five days (D5) after estrus; TE2 (n=6) - 5mg of 17b-estradiol (E2) on D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultrasound evaluation and plasmatic progesterone concentration ([P4]) throughout estrous cycle allowed to conclude: E2 reprogrammed ovarian cycle by preventing the presence (P⁢.05) of a DOM during almost all CP (0.6±.7 days within the D15 to D20 interval) but induced luteolysis; cows receiving hCG developed accessory corpus luteum and had higher [P4] up to D13 (P⁢.05). Therefore, luteolysis was not delayed and luteal phase was not prolonged. In exp.2, same treatments were imposed to 220 Nelore cows (55 per group) after a timed artificial insemination (TAI). Pregnancy rates (PR) at TAI or at AIs thereafter over a 64-day period were reduced (P⁢0.05) by using E2 and hCG was not capable to improve those PR. In exp.3, postpartum Red Angus cows were estrus synchronized (D0) and received: nothing else (GCT, n=5) or 200mg of gonadorrelin on D5 plus 3000 IU hCG on D13 (GRF, n=5); or ablation of all follicles ³7mm through follicular aspiration on D14, D17 and D20 (GRM, n=5). GRF had delayed luteolysis (18.2±1.0b days, 23.6±1.0a days, 18.7±1.2b days for GCT, GRF, GRM, respectively) and higher [P4] than other groups. Follicles larger than 7mm were observed in all occasions of aspiration. In could be concluded that: a) E2 allowed to consistently reschedule follicular development but caused luteolysis and its use was detrimental to PR; b) hCG improved luteal function but did not increase PR; c) ablation of 7mm follicles did not prevent a DOM throughout CP for MRP and d) GnRH/hCG association optimized luteal function, delayed luteolysis and prolonged luteal phase in such a way that all CP was under progesterone influence

O alumínio e o pH ácido exercem efeitos tóxicos sobre a fauna íctica. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do alumínio e do alumínio em pH ácido na fisiologia reprodutiva de Oreochromis niloticus. Para a condução deste experimento, fêmeas desta espécie foram expostas a concentração de 0,5 mg de Al L-1 em pH neutro (Al N), 0,5 mg de Al L-1 em pH ácido (Al - Ác), somente em pH neutro (CTR N) e somente em pH ácido (CTR Ac) por 96h. Após o período de exposição aguda, os animais foram sacrificados e tecidos como encéfalo, brânquias, fígado, gônadas e músculo, foram retirados para a determinação da concentração de alumínio por espectrofotometria de absorção atômica. A hipófise foi coletada e congelada para a quantificação da expressão da subunidade β dos genes das gonadotropinas, FSH (hormônio folículo estimulante) e LH (hormônio luteinizante) por qRT-PCR. Os resultados mostraram que animais expostos ao alumínio, tanto em pH ácido quanto neutro, acumularam mais alumínio no encéfalo e no músculo esquelético em relação aos grupos controles. Nas brânquias, apenas quando os animais são expostos ao alumínio em pH neutro, acúmulos diferenciados são encontrados e, adicionalmente, fêmeas expostas ao pH ácido, independente da concentração do alumínio na água, acumulam mais metal nos filamentos branquiais. Nos ovários, tanto a presença de maiores concentrações deste metal na água, quanto a acidez da mesma foram determinantes na incorporação do alumínio. Os dados de expressão gênica evidenciam que, animais submetidos ao alumínio em pH 5,5 apresentaram uma redução na expressão do gene do FSH, no entanto em pH neutro esta alteração na expressão deste gene não foi encontrada. Os animais expostos ao alumínio, tanto em pH ácido quanto neutro apresentaram diminuição na expressão de LH. A análise dos resultados de expressão do LH combinada com o perfil dos progestágenos plasmáticos previamente conhecidos para os mesmos animais, mostram que, em condições adversas de pH (ácido) a ação do alumínio como um disruptor endócrino foi traduzida em alterações na fisiologia gonadal, limitando a produção do 17αOHP (hidroxiprogesterona), importante hormônio na ovulação. Por outro lado, quando as condições de pH foram favoráveis (neutro), a diminuição da expressão de LH não levou ao desajuste na produção de 17αOHP, ou seja, os animais de alguma forma, compensaram esta disfunção. / Aluminum and acidic pH are known to be toxic to the ichthyofauna. The main goal of the present study was to evaluate the effects of aluminum and acidic pH in the reproductive physiology of Oreochromis niloticus. To conduct this experiment, females were exposed to aluminum at 0.5 mg of Al L-1 in neutral pH (Al N), 0.5 mg of Al L-1 in acidic pH (Al - Ac), a control group in neutral pH (CTR N) and acidic pH (CTR Ac) for 96h. After the acute exposition period, the animals were killed and the following tissues, brain, gills, liver, gonads and muscle, were frozen for aluminum determination by atomic absorption spectrophotometer. The pituitary was collected and also frozen to quantify the gene expression of the β subunit of the gonadotropins FSH (follicle stimulating hormone) and LH (luteinizing hormone) using qRT-PCR. The results showed that animals exposed to aluminum, even in acidic or neutral pH, accumulated more aluminum in brain and white muscle comparing with their control groups. In the gills, only when the animals were exposed to aluminum in neutral pH, different patterns of accumulation were found and, additionally, females exposed to acidic pH, independent of the water aluminum concentration, accumulated more metal in the gills filament. In the ovaries even the presence of higher aluminum concentration in water and the acidic pH were essential in aluminum deposition. The gene expression data showed that, animals exposed to aluminum in pH 5.5 reduce FSH gene expression, however in neutral pH this alteration was not observed. Animals exposed to aluminum, even in acidic or neutral pH, reduced LH expression. The data analyses of LH gene expression combined with the plasma progestagens, previously known for the same animals, showed that, in adverse pH conditions (acidic), the aluminum role as an endocrine disruptor was translated in alterations in gonad physiology, reducing the production of 17αOHP (hidroxy progesterone), an important hormone in ovulation. On the other hand, when the pH conditions were optimum (neutral), the reduced LH gene expression did not reflect in impairments in the 17αOHP production, which means the animals, somehow, compensated this dysfunction.

A pesquisa desenvolvida no Laboratório de Pesquisa em Suínos, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Campus de Pirassununga, estudou os efeitos de diferentes doses de LH suíno exógeno na indução e sincronização da puberdade em marrãs. Sessenta e sete fêmeas Camborough - 22 Agroceres PIC® com 140 dias de idade e 86 kg de peso vivo foram submetidas aos seguintes tratamentos: controle T1 (n = 21) - emprego de 600 UI de eCG (gonadotrofina coriônica eqüina) (Novormon&reg) e 72 horas depois 5,0 mg de LH (hormônio luteinizante) (Lutropin® - V); tratamento 2 T2(n = 23) - 600 UI de eCG (Novormon®) e, 72 horas depois, 2,5 mg de LH (Lutropin® - V) e tratamento 3 T3(n=23) - 600 UI de eCG (Novormon®) e, 72 horas depois, 1,25 mg de LH (Lutropin® - V). O estímulo com macho adulto era feito duas vezes ao dia, sendo a ovulação detectada pela ultra-sonografia transcutânea e a taxa de ovulação, pela contagem do número de corpos lúteos (CL) ao abate. O percentual de estro foi semelhante entre T1 (42,85%), T2 (60,87%) e T3 (52,18%), não havendo diferença estatística significativa (P=0,418). O percentual de fêmeas com degenerações císticas foi de 33,33% (T1); 39,13%(T2) e 39,13%(T3), não havendo diferença significativa entre os tratamentos (P=0,9057). O melhor intervalo tratamento - ovulação (LH - OV) ocorreu no grupo de fêmeas submetidas ao T2 (38,26 ± 2,84) demonstrado pela menor dispersão dos desvios comparando com T1 (37,17 ± 4,07) e T3 (36,25± 5,69), sendo o valor do desvio padrão diferente estatisticamente do de T3, porém igual ao valor de T1 sendo ainda o valor de T1 igual ao de T3(P<0,05). O intervalo entre a aplicação de eCG e estro do T1(85,33 ± 12,64 horas), T2 (84,40 ±17,50 horas) e T3 (89,14 ± 14,66 horas) foram semelhantes não havendo diferença estatística significativa (P= 0,6954). A duração do estro foi semelhante entre os três tratamentos (P = 0,2653), sendo de 41,44 ± 16,30 horas (T1); 48,57 ± 16,29 horas (T2); 39,33 ± 11,42 horas (T3). O número de Corpos Lúteos em T1 foi de 9,61 ± 5,43 (1-25); em T2 de 9,86 ±3,32 (1-16); em T3 de 8,13 ± 5,52 (0-20), não constatando diferença significativa (P=0,4259). Os menores desvios observados no tratamento T2 sugerem que a combinação de 600 UI de eCG seguida por 2,5 mg de LH após 72 horas, foi a mais efetiva na indução e sincronização do estro e ovulação em fêmeas suínas pré-púberes, considerando a metodologia experimental empregada. Na segunda parte do experimento, foram realizadas inseminações artificiais em tempo fixo em dois esquemas (E) diferentes: O (E1) recebeu uma única dose 36 h após a aplicação de LH e, o (E2) recebeu a primeira dose 24 h e a segunda dose 36 h após a aplicação de LH. As marrãs foram abatidas com 5 dias de gestação e os embriões foram colhidos. Não verificou-se diferença estatística entre os valores obtidos na taxa de recuperação (36,81±5,21 para E1 e 36,91±4,62 para E2), taxa de viabilidade embrionária (TVE) (59,28±6,91 para E1 e 62,25±6,26 para E2), taxa de fecundação (TF) (72,60±7,06 para E1 e 79,33±6,26 para E2) e número de estruturas totais (3,41±0,57 para E1 e 3,77±0,50 para E2) entre E1 e E2. Houve interação significativa entre tratamento e número de doses de sêmen para as variáveis TVE (T1=60,51± 8,18, T2=68,64±7,94 e T3=53,14±7,8) e TF (73,50±8,36 para T1, 89,93±8,11 para T2 e 64,46±8,05 para T3) (P=0,0036). Novos estudos envolvendo aplicação dos hormônios e n° de doses de sêmen, necessitam serem repetidos. / The research carried out at the Swine Research Laboratory, of FMVZ - USP, Campus of Pirassununga, studied the effects of the use of different hormonal doses on the induction and synchronization of puberty in gilts. Sixty-seven Camborough 22 Agroceres PIC® females with 140 days of age and 86kg of body weight were submitted to the following treatments: control T1 (n=21) - use of 600 IU of eCG (equine chorionic gonadotrophin) (Novormon®) and 72 hours later 5,0 mg of LH (Luteinizing hormone) (Lutropin® - V); treatment 2 T2 (n = 23) - 600 UI of eCG (Novormon®) and 72 hours later 2,5mg of LH (Lutropin® - V) and treatment 3 T3 (n = 23) - 600 UI of eCG (Novormon®) and 72 hours later 1,25mg of LH (Lutropin® - V). Adult boar stimulation was implemented twice a day, and ovulation was detected through transcutaneous ultrasonography and ovulation rate by corpora lutea (CL) counting at slaughter. The percentage of estrus was similar in T1 (42,85%), T2 (60,87%) and T3 (52,18%), and there was no significant statistic difference (P=0,418). The percentage of females with cystic degeneration was 33,33% (T1); 39,13%(T2) and 39,13%(T3), being no significant difference between the treatments (P=0,9057). The best interval between treatment and estrus (LH - OV) occurred in the group of females submitted to T2 (38,26 ± 2,84) demonstrated by lesser dispersion of the deviations comparing to T1 (37,17 ± 4,07) and T3 (36,25± 5,69); standard deviation was statistically different from T3, but similar to T1, and T1 was also similar to T3 (P<0,05). The interval between the administration of eCG and estrus in T1 (85,33 ± 12,64 hours), T2 (84,40 ±17,50 hours) and T3 (89,14 ± 14,66 hours) were similar, and there was no significant statistic difference (P= 0,6954). The duration of estrous was similar among the three treatments (P = 0,2653), being 41,44 ± 16,30 hours (T1); 48,57 ± 16,29 hours (T2); 39,33 ± 11,42 hours (T3). The number Corpus Luteum in T1 was 9,61 ± 5,43 (1-25); in T2 was 9,86 ±3,32 (1-16); in T3 was 8,13 ± 5,52 (0-20), and there was no significant difference (P=0,4259). The minor deviations observed in treatment T2 suggest that the association of 600 UI of eCG followed by 2,5 mg of LH after 72 hours, was more effective in the induction and synchronization of estrous and ovulation in pre-puberty female swine, considering the experimental methodology used. In the second part of the experiment, artificial insemination was performed at determined timing following two different programs (E). E1 received a single dose 36 hours after administration of LH and E2 received the first dose after 24 hours and the second dose 36 hours after the administration of LH. The gilts were slaughtered with 5 days of pregnancy and the embryos were collected. No statistic difference was observed among the values obtained for recovery rate (36,81±5,21 for E1 and 36,91±4,62 for E2), embryonary viability rate (TVE) (59,28±6,91 for E1 and 62,25±6,26 for E2), fecundation rate (TF) (72,60±7,06 for E1 and 79,33±6,26 for E2) and number of total structures (3,41±0,57 for E1 and 3,77±0,50 for E2) among E1 and E2. There was significant interaction between treatment and the number of doses of semen for the values TVE (T1=60,51± 8,18, T2=68,64±7,94 and T3=53,14±7,8) and TF (73,50±8,36 for T1, 89,93±8,11 for T2 and 64,46±8,05 for T3) (P=0,0036). New research involving the use of hormones and the number of doses of semen need to be repeated.

O estradiol secretado pelo folículo dominante (DOM) desempenha importante papel na luteólise da vaca. Em adição, o reconhecimento materno da prenhez (MRP) requer um ambiente uterino otimizado, o qual por sua vez depende da função luteínica e de adequadas concentrações de progesterona circulante. Os objetivos do presente estudo foi testar diferentes estratégias para otimizar a função luteínica e prevenir a influência de um DOM durante o período crítico (CP) para o MRP (de D13 a D20 após o estro o estro). Diferentes abordagens foram testadas. No exp.1, 23 vacas Nelore foram tratadas com o protocolo ovsynch para induzir um cio sincronizado (D0). As vacas receberam: Gc (n=7) - nada mais; ThCG (n=5) - 3000 IU de hCG no D5; TE2 (n=6) - 5mg de 17b-estradiol (E2) no D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultra-sonografias e dosagens de progesterona plasmática durante o ciclo estral permitiram determinar que o E2 reprogramou o ciclo ovariano ao prevenir a presença (P&it;0,05) de um DOM durante quase todo CP (0,6&plusmn;0,7 dias entre D15 e D20), porém o E2 induziu a luteólise. As vacas que receberam a hCG desenvolveram corpo lúteo acessório e tiveram [P4] mais alta até o D13 (P&it;0,05). Portanto, a fase luteínica não foi prolongada No exp.2, os mesmos tratamentos foram impostos a 220 vacas Nelore (55 por grupo) após uma inseminação artificial em tempo fixo (TAI). As taxas de prenhez (PR) à TAI ou às inseminais de repasse durante uma estação com 64 dias de duração foram diminuídas (P&it;0,05) quando o E2 foi usado e a hCG não foi capaz de aumentar aquelas PR. No exp.3, vacas Red Angus no pós-parto tiveram seu estro sincronizado (D0) e receberam: nada mais (GCT, n=5) ou 200mg de gonadorrelina no D5 mais 3000 IU hCG no D13 (GRF, n=5); ou ablação de todos folículos &sup3;7mm através de aspiração folicular em D14, D17 e D20 (GRM, n=5). GRF teve luteólise retardada (18,2&plusmn;1,0b dias, 23,6&plusmn1,0a dias e 18,7&plusmn1,2b dias para GCT, GRF e GRM, respectivamente) e maior [P4] que os outros grupos. Folículos maiores que 7mm foram observados quando das aspirações. Foi possível concluir que: a) E2 permitiu consistentemente reprogramar o desenvolvimento folicular, porém causou luteólise e o seu uso trouxe efeitos negativos sobre as PR; b) a hCG melhorou a função luteínica mas não aumentou as PR; c) a ablação dos folículos &sup3;7mm não preveniu a presença do DOM no CP para o MRP e d) a associação GnRH/hCG otimizou a função luteínica, retardou a luteólise e prolongou a fase luteínica de modo que todo o CP esteve sob influência da progesterona / Estradiol secreted from the dominant follicle (DOM) plays a key role in triggering luteolysis in the cow. In addition, maternal recognition of pregnancy (MRP) requires an optimum uterine environment, which directly depends on luteal function and adequate levels of circulating progesterone. The aim of this study was to test different strategies to optimize luteal function and prevent the influence of a DOM throughout the critical period (CP) for MRP (from D13 to D20 after estrus). Different approaches were tested. In exp.1, 23 Nelore cows were treated with the ovsync protocol to induce a synchronized estrus (D0). Cows received: Gc (n=7) - nothing else; ThCG (n=5) - 3000 IU of hCG five days (D5) after estrus; TE2 (n=6) - 5mg of 17b-estradiol (E2) on D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultrasound evaluation and plasmatic progesterone concentration ([P4]) throughout estrous cycle allowed to conclude: E2 reprogrammed ovarian cycle by preventing the presence (P&it;.05) of a DOM during almost all CP (0.6±.7 days within the D15 to D20 interval) but induced luteolysis; cows receiving hCG developed accessory corpus luteum and had higher [P4] up to D13 (P&it;.05). Therefore, luteolysis was not delayed and luteal phase was not prolonged. In exp.2, same treatments were imposed to 220 Nelore cows (55 per group) after a timed artificial insemination (TAI). Pregnancy rates (PR) at TAI or at AIs thereafter over a 64-day period were reduced (P&it;0.05) by using E2 and hCG was not capable to improve those PR. In exp.3, postpartum Red Angus cows were estrus synchronized (D0) and received: nothing else (GCT, n=5) or 200mg of gonadorrelin on D5 plus 3000 IU hCG on D13 (GRF, n=5); or ablation of all follicles &sup3;7mm through follicular aspiration on D14, D17 and D20 (GRM, n=5). GRF had delayed luteolysis (18.2&plusmn;1.0b days, 23.6&plusmn;1.0a days, 18.7&plusmn;1.2b days for GCT, GRF, GRM, respectively) and higher [P4] than other groups. Follicles larger than 7mm were observed in all occasions of aspiration. In could be concluded that: a) E2 allowed to consistently reschedule follicular development but caused luteolysis and its use was detrimental to PR; b) hCG improved luteal function but did not increase PR; c) ablation of 7mm follicles did not prevent a DOM throughout CP for MRP and d) GnRH/hCG association optimized luteal function, delayed luteolysis and prolonged luteal phase in such a way that all CP was under progesterone influence

Orientador: Claudia Maria Bertan Membrive / Banca: Daniel de Jesus Cardoso de Oliveira / Banca: Ricardo da Fonseca / Resumo: Na IATF e TETF o uso da gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) é recomendado com o objetivo de incrementar as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) e as taxas de concepção. A hipótese do presente estudo é que em fêmeas tratadas com eCG maiores concentrações de P4 são observadas no D5 e D7 (D0 = dia da IATF) em fêmeas prenhes após à IATF e no D5 e D7 (D0 = dia esperado para o estro) em receptoras prenhes submetidas à TETF. No Experimento 1, fêmeas bovinas tratadas ou não com 300UI de eCG e submetidas à IATF, tiveram as concentrações de P4 mensuradas nos dias 0, 3, 5, 7 e 10 após a IATF. No Experimento 2, todas as fêmeas foram tratadas com 300UI de eCG e submetidas à IATF, sendo mensuradas as concentrações de P4 nos dias 3, 5, 7, 12 e 17 após a IATF. No Experimento 3, receptoras tratadas com 300UI de eCG, foram submetidas à TETF, após a observação da presença ou não de estro e as concentrações de P4 foram avaliadas nos dias 5 e 7, após o dia esperado do estro. A dosagem de P4 foi realizada pela técnica de radioimunoensaio e o diagnóstico de gestação através da ultrassonografia. No Experimento 1, observou-se que animais tratados com eCG apresentaram maior concentração de P4 nos dias 0, 7 e 10. No Experimento 2, não houve diferença significativa na concentração de P4 nos dias 3, 7 e 12, entre os animais prenhes e não prenhes, entretanto no dia 17 os animais não prenhes tiveram menor concentração de P4. No Experimento 3, maiores concentrações de P4 no D7 foram observadas em animais que não apresentaram estro e maiores concentrações de P4 foram detectadas em animais prenhes no D7. Conclui-se que em fêmeas tratadas com eCG maiores concentrações de P4 não foram observadas no D5 e D7 (D0 = dia da IATF)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In FTET and FTAI the use of eCG is recommended in order to increase the synthesis of P4 and the conception rates. The hypothesis of this study is that females treated with eCG higher concentrations of P4 are observed on the D5 and D7 (D0 = day of FTAI) in pregnant females after the FTAI and on the D5 and D7 (D0 = day of expected estrus) in pregnant recipients submitted to FTET. In Experiment 1, cows treated or not with 300 IU of eCG and submitted to FTAI had the concentration of P4 measured on days 0, 3, 5, 7 and 10 after FTAI. In Experiment 2, all females were treated with 300 IU of eCG and submitted to FTAI, being measured the concentration of P4 on days 3, 5, 7, 12 and 17 after FTAI. In Experiment 3, recipients treated with 300 IU of eCG were submitted to FTET, after observation the presence or absence of estrus and measured the concentration of P4 on days 5 and 7 after the expected day of estrus. The P4 assay was performed by radioimmunoassay and pregnancy diagnosis by ultrasonography. In Experiment 1 was observed that animals treated with eCG showed higher concentration of P4 on days 0, 7 and 10. In Experiment 2 there was no significant difference in the concentration of P4 on days 3, 7 and 12 between non-pregnant and pregnant animals, since the day 17 non-pregnant animals had lower concentration of P4. In Experiment 3 highest concentrations of P4 in D7 were observed in animals that did not show estrus and higher concentrations of P4 were detected in pregnant animals on D7. It is concluded that in females treated with eCG higher concentrations of P4 were not observed in D5 and D7 (D0 = day of FTAI) in the pregnant after FTAI, however, the pregnancy rate in FTET embryos produced in vitro was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-24Bitstream added on 2014-06-13T19:00:05Z : No. of bitstreams: 1 frade_mc_me_araca.pdf: 3688644 bytes, checksum: c67834e95a497639db4eb0f813348b58 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na IATF e TETF o uso da gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) é recomendado com o objetivo de incrementar as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) e as taxas de concepção. A hipótese do presente estudo é que em fêmeas tratadas com eCG maiores concentrações de P4 são observadas no D5 e D7 (D0 = dia da IATF) em fêmeas prenhes após à IATF e no D5 e D7 (D0 = dia esperado para o estro) em receptoras prenhes submetidas à TETF. No Experimento 1, fêmeas bovinas tratadas ou não com 300UI de eCG e submetidas à IATF, tiveram as concentrações de P4 mensuradas nos dias 0, 3, 5, 7 e 10 após a IATF. No Experimento 2, todas as fêmeas foram tratadas com 300UI de eCG e submetidas à IATF, sendo mensuradas as concentrações de P4 nos dias 3, 5, 7, 12 e 17 após a IATF. No Experimento 3, receptoras tratadas com 300UI de eCG, foram submetidas à TETF, após a observação da presença ou não de estro e as concentrações de P4 foram avaliadas nos dias 5 e 7, após o dia esperado do estro. A dosagem de P4 foi realizada pela técnica de radioimunoensaio e o diagnóstico de gestação através da ultrassonografia. No Experimento 1, observou-se que animais tratados com eCG apresentaram maior concentração de P4 nos dias 0, 7 e 10. No Experimento 2, não houve diferença significativa na concentração de P4 nos dias 3, 7 e 12, entre os animais prenhes e não prenhes, entretanto no dia 17 os animais não prenhes tiveram menor concentração de P4. No Experimento 3, maiores concentrações de P4 no D7 foram observadas em animais que não apresentaram estro e maiores concentrações de P4 foram detectadas em animais prenhes no D7. Conclui-se que em fêmeas tratadas com eCG maiores concentrações de P4 não foram observadas no D5 e D7 (D0 = dia da IATF)... / In FTET and FTAI the use of eCG is recommended in order to increase the synthesis of P4 and the conception rates. The hypothesis of this study is that females treated with eCG higher concentrations of P4 are observed on the D5 and D7 (D0 = day of FTAI) in pregnant females after the FTAI and on the D5 and D7 (D0 = day of expected estrus) in pregnant recipients submitted to FTET. In Experiment 1, cows treated or not with 300 IU of eCG and submitted to FTAI had the concentration of P4 measured on days 0, 3, 5, 7 and 10 after FTAI. In Experiment 2, all females were treated with 300 IU of eCG and submitted to FTAI, being measured the concentration of P4 on days 3, 5, 7, 12 and 17 after FTAI. In Experiment 3, recipients treated with 300 IU of eCG were submitted to FTET, after observation the presence or absence of estrus and measured the concentration of P4 on days 5 and 7 after the expected day of estrus. The P4 assay was performed by radioimmunoassay and pregnancy diagnosis by ultrasonography. In Experiment 1 was observed that animals treated with eCG showed higher concentration of P4 on days 0, 7 and 10. In Experiment 2 there was no significant difference in the concentration of P4 on days 3, 7 and 12 between non-pregnant and pregnant animals, since the day 17 non-pregnant animals had lower concentration of P4. In Experiment 3 highest concentrations of P4 in D7 were observed in animals that did not show estrus and higher concentrations of P4 were detected in pregnant animals on D7. It is concluded that in females treated with eCG higher concentrations of P4 were not observed in D5 and D7 (D0 = day of FTAI) in the pregnant after FTAI, however, the pregnancy rate in FTET embryos produced in vitro was... (Complete abstract click electronic access below)

A maturação in vitro do oócito é um dos fatores limitantes na produção in vitro de embriões. In vivo, esta maturação é um processo altamente orquestrado no qual a meiose é retomada pela onda de gonadotrofina que antecede a ovulação e que induz à queda dos níveis de AMPc no oócito. No entanto, os oócitos aspirados ao serem retirados dos folículos ovarianos retomam espontaneamente a maturação comprometendo a competência de seu desenvolvimento. O AMPc é sintetizado pela adenilato ciclase (AC) e degradado pelas fosfodiesterases (PDE), existindo algumas relacionadas à degradação do AMPc e outras do GMPc. Sendo assim, a proposição deste trabalho foi averiguar a contribuição de diferentes isoformas de fosfodiesterases na retomada da meiose e nos níveis de GMPc, AMPc e ainda, determinar quando há manutenção de AMPc em níveis elevados observando sua influência na competência oocitária e ativação da MAPK. Para isso, os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram maturados in vitro na ausência, presença ou associação de inibidores de PDEs-AMPc e GMPc específicas e FSHr. As amostras foram avaliadas em relação a: 1) taxa de maturação; 2) níveis intracelulares de AMPc e GMPc nos CCOs; 3) taxa de desenvolvimento de blastocistos ; 4) ativação da MAPK em oócitos e células do cumulus. Os resultados obtidos no primeiro experimento indiaram que o inibidor da PDE3 foi o mais eficaz (p&lt;0,05) em atrasar a retomada da meiose, às nove horas de maturação, porém, isolado ou em associação com o inibidor da PDE8, não foi capaz de alterar (p&gt;0,05) os níveis de AMPc. No experimento dois, o inibidor da PDE5 isolado não influenciou a retomada da meiose (p&gt;0,05), porém, quando associado aos inibidores da PDE3 e 8 houve atraso na retomada (p&lt;0,05) e ainda alteraram os níveis de GMPc e AMPc (p&lt;0,05) nas primeiras horas de maturação. O experimento três mostrou a influencia do FSHr durante a MIV, o qual estimulou a retomada da meiose, mas em associação com inibidores da PDE5 e 8 atrasa a retomada (p&lt;0,05). Além disso, o FSHr provoca aumento do nível de AMPc e sua associação com inibidores de PDE5 e PDE8 ocasionou elevação adicional (p&lt;0,05). As condições de cultivo estudadas no experimento quatro mostraram que a maturação induzida (pré-MIV de duas horas com agentes para elevar AMPc seguindo de 22 horas de MIV com FSH associado a inibidores de PDEs) atrasaram a retomada da meiose às nove horas de maturação, mas não afetaram progressão da meiose às 24, 28 e 30 horas. Os tratamentos, porém, não melhoraram a competência oocitária após a fertilização in vitro e ocasionaram pequenas variações na ativação da MAPK em oócitos e células do cumulus. / In vitro maturation of oocytes is a limiting factor in the in vitro production of bovine embryos. In vivo, this maturation is a highly orchestrated process in which meiosis resumption by the gonadotropin surge that precedes ovulation induces the decrease in cAMP levels in the oocyte. However, when oocytes are removed from follicles, they spontaneously resume maturation compromising the competence for its development. cAMP is synthesized by adenylyl cyclase (AC) and degraded by phosphodiesterases (PDE), and there are some PDEs related to degradation of cAMP and/or cGMP. Thus, the purpose of this work was to investigate the contribution of different isoforms of phosphodiesterases in the resumption of meiosis and levels of cAMP and, also, to determine differences in signaling pathways when maintaining high levels of cAMP and its influence on oocyte competence. For this purpose, cumulus-oocyte complexes (COC) were matured in vitro in the presence, absence or combination of inhibitors of cAMP- and cGMP-specific PDEs and FSH. Samples be were evaluated in relation to: 1) maturation rate, 2) intracellular levels of cAMP and cGMP in COCs, 3) rate of blastocyst development and 4) activation of MAPK in oocytes and cumulus cells. The results of the first experiment showed that the PDE3 inhibitor is more effective (p &lt;0.05) in delaying meiosis resumption, at nine hours of maturation, but was not capable of altering cAMP levels (p&gt; 0.05) either alone or in combination with the PDE8 inhibitor. In experiment two, the PDE5 inhibitor alone did not affect the meiosis resumption (p&gt; 0.05), however, when associated with PDE3 and PDE8 inhibitors it delayed their resumption (p &lt;0.05) and also altered cGMP and cAMP levels of (p &lt;0.05) in the early hours of maturation. The third experiments showed the influence of FSHr during IVM, which stimulated the resumption of meiosis, but in combination with PDE5 and PDE8 inhibitors meiosis was delayed (p &lt;0.05). Furthermore, FSHr causes increased levels of cAMP and its association with PDE5 and PDE8 inhibitors caused an additional increase (p &lt;0.05). Culture conditions studied in experiment four showed that induced maturation (pre-IVM for two hours with agents to elevate cAMP followed by 22 hours IVM with FSH associated with PDE inhibitors) delayed the resumption of meiotic maturation at nine hours, but has no effect on meiosis progression at 24, 28 and 30 hours. The treatments, however, did not improve oocyte competence after in vitro fertilization and caused minor variations in the activation of MAPK in oocytes and cumulus cells.

O alumínio e o pH ácido exercem efeitos tóxicos sobre a fauna íctica. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do alumínio e do alumínio em pH ácido na fisiologia reprodutiva de Oreochromis niloticus. Para a condução deste experimento, fêmeas desta espécie foram expostas a concentração de 0,5 mg de Al L-1 em pH neutro (Al N), 0,5 mg de Al L-1 em pH ácido (Al - Ác), somente em pH neutro (CTR N) e somente em pH ácido (CTR Ac) por 96h. Após o período de exposição aguda, os animais foram sacrificados e tecidos como encéfalo, brânquias, fígado, gônadas e músculo, foram retirados para a determinação da concentração de alumínio por espectrofotometria de absorção atômica. A hipófise foi coletada e congelada para a quantificação da expressão da subunidade &#946; dos genes das gonadotropinas, FSH (hormônio folículo estimulante) e LH (hormônio luteinizante) por qRT-PCR. Os resultados mostraram que animais expostos ao alumínio, tanto em pH ácido quanto neutro, acumularam mais alumínio no encéfalo e no músculo esquelético em relação aos grupos controles. Nas brânquias, apenas quando os animais são expostos ao alumínio em pH neutro, acúmulos diferenciados são encontrados e, adicionalmente, fêmeas expostas ao pH ácido, independente da concentração do alumínio na água, acumulam mais metal nos filamentos branquiais. Nos ovários, tanto a presença de maiores concentrações deste metal na água, quanto a acidez da mesma foram determinantes na incorporação do alumínio. Os dados de expressão gênica evidenciam que, animais submetidos ao alumínio em pH 5,5 apresentaram uma redução na expressão do gene do FSH, no entanto em pH neutro esta alteração na expressão deste gene não foi encontrada. Os animais expostos ao alumínio, tanto em pH ácido quanto neutro apresentaram diminuição na expressão de LH. A análise dos resultados de expressão do LH combinada com o perfil dos progestágenos plasmáticos previamente conhecidos para os mesmos animais, mostram que, em condições adversas de pH (ácido) a ação do alumínio como um disruptor endócrino foi traduzida em alterações na fisiologia gonadal, limitando a produção do 17&#945;OHP (hidroxiprogesterona), importante hormônio na ovulação. Por outro lado, quando as condições de pH foram favoráveis (neutro), a diminuição da expressão de LH não levou ao desajuste na produção de 17&#945;OHP, ou seja, os animais de alguma forma, compensaram esta disfunção. / Aluminum and acidic pH are known to be toxic to the ichthyofauna. The main goal of the present study was to evaluate the effects of aluminum and acidic pH in the reproductive physiology of Oreochromis niloticus. To conduct this experiment, females were exposed to aluminum at 0.5 mg of Al L-1 in neutral pH (Al N), 0.5 mg of Al L-1 in acidic pH (Al - Ac), a control group in neutral pH (CTR N) and acidic pH (CTR Ac) for 96h. After the acute exposition period, the animals were killed and the following tissues, brain, gills, liver, gonads and muscle, were frozen for aluminum determination by atomic absorption spectrophotometer. The pituitary was collected and also frozen to quantify the gene expression of the &#946; subunit of the gonadotropins FSH (follicle stimulating hormone) and LH (luteinizing hormone) using qRT-PCR. The results showed that animals exposed to aluminum, even in acidic or neutral pH, accumulated more aluminum in brain and white muscle comparing with their control groups. In the gills, only when the animals were exposed to aluminum in neutral pH, different patterns of accumulation were found and, additionally, females exposed to acidic pH, independent of the water aluminum concentration, accumulated more metal in the gills filament. In the ovaries even the presence of higher aluminum concentration in water and the acidic pH were essential in aluminum deposition. The gene expression data showed that, animals exposed to aluminum in pH 5.5 reduce FSH gene expression, however in neutral pH this alteration was not observed. Animals exposed to aluminum, even in acidic or neutral pH, reduced LH expression. The data analyses of LH gene expression combined with the plasma progestagens, previously known for the same animals, showed that, in adverse pH conditions (acidic), the aluminum role as an endocrine disruptor was translated in alterations in gonad physiology, reducing the production of 17&#945;OHP (hidroxy progesterone), an important hormone in ovulation. On the other hand, when the pH conditions were optimum (neutral), the reduced LH gene expression did not reflect in impairments in the 17&#945;OHP production, which means the animals, somehow, compensated this dysfunction.

Sendo o GnRH a molécula capaz de iniciar a cascata hormonal reprodutiva, realizamos a clonagem, analisamos os efeitos da indução à reprodução e as funções dos GnRHs de A. altiparanae. Como resultados, obtivemos as sequências dos cDNAs do GnRH2 e GnRH3. Quando induzidos à reprodução, a desova foi às 20 h pós-estímulo (hpe) em fêmeas e às 16 hpe em machos, o aumento da expressão do mRNA de GnRH3 ocorreu às 8 hpe em fêmeas, e o aumento da expressão do mRNA de GnRH2 foi às 0 hpe em machos. Com relação ao efeito dos GnRHs, todos estimularam a expressão do mRNA de &beta;LH, mas não de &beta;FSH, e só o GnRH2 foi capaz de elevar o MIS e causar a desova. Como conclusão, temos que as sequências dos cDNAs dos GnRHs se mostraram conservadas; a indução à reprodução por redução do nível da água foi eficaz; em cativeiro, a espécie teve desenvolvimento assincrônico; o GnRH2 provavelmente está ligado ao comportamento reprodutivo, e o GnRH3 é a possível forma hipofisiotrópica. Por fim, só o GnRH2 desencadeou toda a cascata hormonal. / The study on reproduction in fish has been acquired great importance in last years, mainly for the benefit of threatened species. During the reproductive process, the hypothalamic neurons synthesize and release GnRH that stimulates the pituitary cells to release FSH and LH, which, in turn, promote the gonadal maturation. In fact, the morphological changes in gonads are the result of the endocrine action of the reproductive axis, in which the GnRH is the key molecule to starting the reproductive axis control. Thus, the knowledge about the GnRH, as well as about the gonadal morphological changes in the spawning might contribute to effectiveness of reproduction. Therefore, in this work, with Astyanax altiparanae as a model, we made the molecular characterization of the GnRHs, and we analyzed the gonadal morphological changes during the reproductive stimulus. In addition, we evaluated the role of injected GnRHs in vivo. As results, we obtain the cDNA complete sequence of preproGnRH2 (612bp) and preproGnRH3 (407bp) of A. altiparanae. Regarding the induction of reproduction by water level drawdown, the released of gametes occurred at 20 hours after stimulus in female and at 16 hours after stimulus in males, the mRNA expression of GnRH3 increased at 8 hours after stimulus in female and the mRNA expression of GnRH2 increased at 0 hours in males. Regarding the effects of injected GnRH, all of them stimulated the &beta;LH but not &beta;FSH mRNA expression, and only the GnRH2 was able to rise the MIS and stimulate the released of gametes. We conclude that the cDNAs sequences of preproGnRH2 and preproGnRH3 were conserved, although there is a change in the amino acid at the position 8 of the GnRH3 decapeptide of A. altiparanae. Furthermore, the induced reproduction by water level drawdown was effective, and in captivity, the A. altiparanae has an asynchronous development with splitted spawning during the breeding season. The analysis of the animals submitted to the reproductive stimulus allowed us to suggest that in A. altiparanae, the GnRH2 probably has a role in sexual behavior and the GnRH3 possibly is the hypophysiotropic form. Finally, analyzing the GnRH effects, we observed that only the GnRH2 was able to start the entire reproductive hormonal cascade, leading the animal to spawning.

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Fernanda Saules Ignácio / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Resumo: A indução da ovulação após o tratamento com hCG e análogos de GnRH, como a deslorelina, ocorrem por mecanismos distintos. Por sua vez, é possível que estes tratamentos acarretem alterações na perfusão vascular folicular durante o período pré-ovulatório. Desta forma, a ultrassonografia colorida Doppler apresenta potencial para ser utilizada como ferramenta na avaliação em tempo real do potencial ovulatório de folículos em éguas. Os objetivos principais deste trabalho foram avaliar as alterações na perfusão vascular folicular (PVF) após o uso de hormônios indutores da ovulação e sua relação temporal com o perfil plasmático de LH. Além de avaliar se a PVF pode ser utilizada para indicar a proximidade da ovulação. Ciclos estrais de éguas foram aleatoriamente divididos em três grupos experimentais: grupo GnRH, grupo hCG e grupo controle (n=10 éguas/grupo). Tratamentos foram realizados na presença de folículo com diâmetro ≥35mm associado à edema uterino. O momento imediatamente antes do tratamento foi considerado H0. Colheita de sangue e exame ultrassonográfico Doppler função power-flow do folículo dominante foram realizados para avaliar, respectivamente, a concentração plasmática de LH e a perfusão vascular folicular (PVF). Os parâmetros foram avaliados de hora em hora entre os intervalos H0-H12 e a cada seis horas da H12 até H30. Adicionalmente, os grupos GnRH e hCG foram acompanhados a cada hora a partir da H30 até a detecção da ovulação ou até H48. Já no grupo controle, foi realizada ultrassonografia modo-B a cada seis horas após H30 e ao se detectar características indicativas da proximidade de ovulação a US Doppler foi realizada de hora em hora até detecção da ovulação. O grupo controle apresentou um intervalo mais longo até à ovulação (P < 0,0001). Efeito de grupo (P < 0.05) foi detectado para PVF. Animais do grupo GnRH apresentaram maior PVF (P < 0.05) média quando ... / Abstract: Ovulation induction after treatment with hCG and GnRH analogs, such as deslorelin, occur through distinct mechanism. Meanwhile, it is possible that these treatments entail changes in follicular vascular perfusion during the pre-ovulatory period. Thus, color Doppler ultrasound presents a potential to be used as a tool for real-time assessment of follicles ovulatory potential in mares. The main purposes of this paper were to evaluate follicular vascular perfusion (FVP) after the use of ovulation induction hormones and the relationship with the plasmatic profile of LH. Additionally, evaluate if FVP can be used to indicate proximity to ovulation. Estrous cycles of mares were randomly divided in three experimental groups: GnRH group, hCG group and control group (n=10 mares/group). Treatments were done in the presence of a follicle with ≥35mm diameter associated with uterine edema. The moment immediately before treatment was considered H0. Blood collection and Doppler ultrasound exam with power-flow mode of the dominant follicle were done to evaluate, respectively, plasmatic concentration of LH and FVP. Parameters were evaluated every hour between H0-H12 and every six hours from H12 until H30. Additionally, GnRH and hCG groups were evaluated every hour from H30 until ovulation detection or until H48. In the control group, B-mode ultrasonography was completed every six hours after H30 and when detection of characteristics indicative of imminent ovulation Doppler ultrasonography was done every hour until ovulation detection. Control group presented a longer interval until ovulation (P < 0,0001). Group effect (P < 0.05) was detected for FVP. Animals from the GnRH group presented higher mean FVP (P < 0.05) when compared to the hCG and control groups since H0 until the moment of ovulation. No moment effect and interaction group:moment was found between experimental groups. Mean LH concentration between H1 and ... / Mestre