Myrtaceae possui mais de 3000 espécies sendo Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, os gêneros mais representativos pela importância ambiental, econômica, farmacêutica, entre outras. O presente estudo teve como objetivo contribuir no aprimoramento das técnicas de propagação de Psidium cattleianum Sab e Eugenia brasiliensis Lam por estaquia e semeadura em condições in vivo e in vitro. Para P. cattleianum, na propagação in vivo foram testados: Doses de AIB na presença ou ausência de BAP no enraizamento de estacas herbáceas, e indução ao enraizamento de estacas de folha; na propagação in vitro foi testado, para organogênese: Efeito do acido giberélico, do tempo de imersão em NaOCl (2 %) e água 55°C por 10 min na germinação das sementes; Efeito da composição do meio de cultura e da relação entre concentrações de BAP:ANA no desenvolvimento de miniestacas. Para calogênese, para desinfestação de explantes na fase de introdução, foram testados: Pré-tratamento com solução de tiofanato-metílico (49 mg L-1 i.a) misturado com ampicilina (250 mg L-1); efeito do tempo de imersão e do pH da solução de NaOCl. Para desdiferenciação foi testado: Doses de cinetina na indução de calogênese em lâmina foliar e doses de 2,4-D em porções de hipocótilo. Para E. brasiliensis , in vivo, foram testados o efeito da concentração de AIB na indução de enraizamento de estacas e in vitro foi testado o efeito da concentração de AG3 no estabelecimento de miniestacas. Os principais resultados permitem inferir que as duas espécies são passíveis de se propagar por estaquia, sendo que para E. brasiliensis a técnica deve ser aprimorada para aumentar o percentual de enraizamento. Na propagação in vitro de P. cattleianum o meio WPM foi mais adequado para o estabelecimento de miniestacas. A eficiência do NaOCl na desinfestação de sementes e explantes para calogênese é afetada pela concentração da solução, tempo de contato e pH da solução. A desdiferenciação celular e a indução de calo em araçazeiro diferem em função do tipo de explante e concentração de cinetina. Análise histológica evidenciou a participação da região do periciclo vascular e borda dos explantes na calogênese e a diferença na população fenotípica nos explantes foliares. / Myrtaceae has over 3000 species being Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, the most representative genus for environmental, economic, pharmaceutical importance, among others. The present study aimed to contribute to the enhancement of propagation techniques of Psidium cattleianum Sab. and Eugenia brasiliensis Lam. by cuttings and sowing conditions in vivo and in vitro. For P. cattleianum, propagation in vivo were tested: IBA doses in the presence or absence of BAP on rooting herbaceous and inducing rooting of leaf; in vitro propagation was tested for organogenesis: Effect of gibberellic acid, immersion time in NaOCl (2%) and water (55 ° C for 10 min) on seed germination; Effect of culture medium composition and culture concentration ratio BAP: ANA on developing shoots. For callus induction, explants disinfection stage of introduction were tested: Pre-treatment with a solution of thiophanate-methyl (49 mg L-1 a.i) mixed with ampicilin (250 mg L-1); effect of immersion time and pH of NaOCl solution. For dedifferentiation were tested: doses of kinetin to induce callus formation in leaf blade and doses of 2,4-D in portions hypocotyl. In vivo for E. brasiliensis we tested the effect of IBA concentration in inducing rooting; in vitro was tested and the effect of GA3 concentration in establishing cuttings. The main results infer that the two species are likely to propagate by cuttings, and to E. brasiliensis technique should be enhanced to increase the percentage of rooting. For in vitro propagation of P. cattleianum the WPM was more suitable for the establishment of cutings. The efficacy of NaOCl in seed disinfection and explants for callus formation is affected by the solution concentration, dwell time and solution pH. The cellular dedifferentiation and callus induction in strawberry guava differ depending on the explant type and concentration of kinetin. Histological analysis showed the pericycle and vascular edge participation of explants on callus formation and phenotypic difference in population in leaf explants.

Myrtaceae possui mais de 3000 espécies sendo Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, os gêneros mais representativos pela importância ambiental, econômica, farmacêutica, entre outras. O presente estudo teve como objetivo contribuir no aprimoramento das técnicas de propagação de Psidium cattleianum Sab e Eugenia brasiliensis Lam por estaquia e semeadura em condições in vivo e in vitro. Para P. cattleianum, na propagação in vivo foram testados: Doses de AIB na presença ou ausência de BAP no enraizamento de estacas herbáceas, e indução ao enraizamento de estacas de folha; na propagação in vitro foi testado, para organogênese: Efeito do acido giberélico, do tempo de imersão em NaOCl (2 %) e água 55°C por 10 min na germinação das sementes; Efeito da composição do meio de cultura e da relação entre concentrações de BAP:ANA no desenvolvimento de miniestacas. Para calogênese, para desinfestação de explantes na fase de introdução, foram testados: Pré-tratamento com solução de tiofanato-metílico (49 mg L-1 i.a) misturado com ampicilina (250 mg L-1); efeito do tempo de imersão e do pH da solução de NaOCl. Para desdiferenciação foi testado: Doses de cinetina na indução de calogênese em lâmina foliar e doses de 2,4-D em porções de hipocótilo. Para E. brasiliensis , in vivo, foram testados o efeito da concentração de AIB na indução de enraizamento de estacas e in vitro foi testado o efeito da concentração de AG3 no estabelecimento de miniestacas. Os principais resultados permitem inferir que as duas espécies são passíveis de se propagar por estaquia, sendo que para E. brasiliensis a técnica deve ser aprimorada para aumentar o percentual de enraizamento. Na propagação in vitro de P. cattleianum o meio WPM foi mais adequado para o estabelecimento de miniestacas. A eficiência do NaOCl na desinfestação de sementes e explantes para calogênese é afetada pela concentração da solução, tempo de contato e pH da solução. A desdiferenciação celular e a indução de calo em araçazeiro diferem em função do tipo de explante e concentração de cinetina. Análise histológica evidenciou a participação da região do periciclo vascular e borda dos explantes na calogênese e a diferença na população fenotípica nos explantes foliares. / Myrtaceae has over 3000 species being Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, the most representative genus for environmental, economic, pharmaceutical importance, among others. The present study aimed to contribute to the enhancement of propagation techniques of Psidium cattleianum Sab. and Eugenia brasiliensis Lam. by cuttings and sowing conditions in vivo and in vitro. For P. cattleianum, propagation in vivo were tested: IBA doses in the presence or absence of BAP on rooting herbaceous and inducing rooting of leaf; in vitro propagation was tested for organogenesis: Effect of gibberellic acid, immersion time in NaOCl (2%) and water (55 ° C for 10 min) on seed germination; Effect of culture medium composition and culture concentration ratio BAP: ANA on developing shoots. For callus induction, explants disinfection stage of introduction were tested: Pre-treatment with a solution of thiophanate-methyl (49 mg L-1 a.i) mixed with ampicilin (250 mg L-1); effect of immersion time and pH of NaOCl solution. For dedifferentiation were tested: doses of kinetin to induce callus formation in leaf blade and doses of 2,4-D in portions hypocotyl. In vivo for E. brasiliensis we tested the effect of IBA concentration in inducing rooting; in vitro was tested and the effect of GA3 concentration in establishing cuttings. The main results infer that the two species are likely to propagate by cuttings, and to E. brasiliensis technique should be enhanced to increase the percentage of rooting. For in vitro propagation of P. cattleianum the WPM was more suitable for the establishment of cutings. The efficacy of NaOCl in seed disinfection and explants for callus formation is affected by the solution concentration, dwell time and solution pH. The cellular dedifferentiation and callus induction in strawberry guava differ depending on the explant type and concentration of kinetin. Histological analysis showed the pericycle and vascular edge participation of explants on callus formation and phenotypic difference in population in leaf explants.

Myrtaceae possui mais de 3000 espécies sendo Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, os gêneros mais representativos pela importância ambiental, econômica, farmacêutica, entre outras. O presente estudo teve como objetivo contribuir no aprimoramento das técnicas de propagação de Psidium cattleianum Sab e Eugenia brasiliensis Lam por estaquia e semeadura em condições in vivo e in vitro. Para P. cattleianum, na propagação in vivo foram testados: Doses de AIB na presença ou ausência de BAP no enraizamento de estacas herbáceas, e indução ao enraizamento de estacas de folha; na propagação in vitro foi testado, para organogênese: Efeito do acido giberélico, do tempo de imersão em NaOCl (2 %) e água 55°C por 10 min na germinação das sementes; Efeito da composição do meio de cultura e da relação entre concentrações de BAP:ANA no desenvolvimento de miniestacas. Para calogênese, para desinfestação de explantes na fase de introdução, foram testados: Pré-tratamento com solução de tiofanato-metílico (49 mg L-1 i.a) misturado com ampicilina (250 mg L-1); efeito do tempo de imersão e do pH da solução de NaOCl. Para desdiferenciação foi testado: Doses de cinetina na indução de calogênese em lâmina foliar e doses de 2,4-D em porções de hipocótilo. Para E. brasiliensis , in vivo, foram testados o efeito da concentração de AIB na indução de enraizamento de estacas e in vitro foi testado o efeito da concentração de AG3 no estabelecimento de miniestacas. Os principais resultados permitem inferir que as duas espécies são passíveis de se propagar por estaquia, sendo que para E. brasiliensis a técnica deve ser aprimorada para aumentar o percentual de enraizamento. Na propagação in vitro de P. cattleianum o meio WPM foi mais adequado para o estabelecimento de miniestacas. A eficiência do NaOCl na desinfestação de sementes e explantes para calogênese é afetada pela concentração da solução, tempo de contato e pH da solução. A desdiferenciação celular e a indução de calo em araçazeiro diferem em função do tipo de explante e concentração de cinetina. Análise histológica evidenciou a participação da região do periciclo vascular e borda dos explantes na calogênese e a diferença na população fenotípica nos explantes foliares. / Myrtaceae has over 3000 species being Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, the most representative genus for environmental, economic, pharmaceutical importance, among others. The present study aimed to contribute to the enhancement of propagation techniques of Psidium cattleianum Sab. and Eugenia brasiliensis Lam. by cuttings and sowing conditions in vivo and in vitro. For P. cattleianum, propagation in vivo were tested: IBA doses in the presence or absence of BAP on rooting herbaceous and inducing rooting of leaf; in vitro propagation was tested for organogenesis: Effect of gibberellic acid, immersion time in NaOCl (2%) and water (55 ° C for 10 min) on seed germination; Effect of culture medium composition and culture concentration ratio BAP: ANA on developing shoots. For callus induction, explants disinfection stage of introduction were tested: Pre-treatment with a solution of thiophanate-methyl (49 mg L-1 a.i) mixed with ampicilin (250 mg L-1); effect of immersion time and pH of NaOCl solution. For dedifferentiation were tested: doses of kinetin to induce callus formation in leaf blade and doses of 2,4-D in portions hypocotyl. In vivo for E. brasiliensis we tested the effect of IBA concentration in inducing rooting; in vitro was tested and the effect of GA3 concentration in establishing cuttings. The main results infer that the two species are likely to propagate by cuttings, and to E. brasiliensis technique should be enhanced to increase the percentage of rooting. For in vitro propagation of P. cattleianum the WPM was more suitable for the establishment of cutings. The efficacy of NaOCl in seed disinfection and explants for callus formation is affected by the solution concentration, dwell time and solution pH. The cellular dedifferentiation and callus induction in strawberry guava differ depending on the explant type and concentration of kinetin. Histological analysis showed the pericycle and vascular edge participation of explants on callus formation and phenotypic difference in population in leaf explants.

O consumo de frutas e verduras na dieta está associado à redução da incidência de doenças crônicas não transmissíveis entre eles câncer, síndrome metabólica e doenças cardiovasculares. A atividade biológica atribuída à ingestão desses alimentos é relacionada principalmente à presença de compostos bioativos, entre eles os compostos fenólicos, tais como flavonoides e elagitaninos. Contudo, a biodisponibilidade e a influência destes compostos no metabolismo humano não estão estabelecidas. Assim, o objetivo geral do presente estudo foi investigar as alterações no metaboloma humano decorrente da ingestão de uma fonte rica em compostos fenólicos, o suco da grumixama roxa (Eugenia brasiliensis Lam.), buscando identificar possíveis pontos de regulação do metabolismo. Para isto, a grumixama, variedades amarela e roxa, foram caracterizadas quanto ao seu perfil de compostos fenólicos e administradas na forma de suco, em dose única, a voluntários saudáveis. A grumixama roxa se mostrou rica em antocianinas e elagitaninos, principalmente cianidina 3-O-glicosídeo e a strictinina, respectivamente. Para o ensaio clínico, 15 voluntários saudáveis consumiram, em dose única, suco de grumixama roxa (10 ml de suco/kg de peso corporal). Amostras de plasma e urina foram coletadas em diferentes tempos durante 24 h após ingestão e analisados por CG-MS e LC-ESI-MS/MS. Os metabólitos exógenos excretados na urina foram identificados como urolitinas e ácidos fenólicos, derivados da degradação, principalmente, pela microbiota dos elagitaninos e das antocianinas, respectivamente. Quatro urolitinas (A, B, C e D) foram encontradas na urina, principalmente como metabólitos de fase II, detectados a partir de 4 h após a ingestão do suco com aumento na concentração observado até 24h. Além disso, quatro ácidos fenólicos foram identificados, destes o ácido hipúrico como majoritário. 114 metabólitos, entre eles, 17 aminoácidos, 47 ácidos orgânicos, 7 outras classes de compostos e 43 compostos desconhecidos foram identificados por CG-MS, para os tempos de coleta de urina antes da ingestão de suco de grumixama (T0) e para os períodos de 1-2 h e 2-4 h após a ingestão. A OPLS-DA foi utilizada para descriminar os metabólitos alterados pela ingestão de suco de grumixama. A análise das vias metabólicas mostrou que a ingestão do suco de grumixama influenciou principalmente em três vias metabólicas: metabolismo do glioxilato e dicarboxilato (up-regulated), da beta-alanina (down-regulated) e da fenilalanina (up-regulated), sendo essas direcionadas ao metabolismo energético. Além disso, os extratos de grumixama roxa e amarela também foram testados em modelo animal (camundongo C57BL/6J) de obesidade e resistência à insulina induzido por uma dieta rica em lipídeos e açúcares. O tratamento com os extratos, concomitante à dieta e durante 8 semanas, promoveu modulação significativa do metabolismo lipídico. Como conclusões, a grumixama roxa mostrou ser uma boa fonte de antocianinas e elagitaninos, e a interação entre metabólitos oriundos da ingestão do fruto e dos metabólitos endógenos podem estar relacionados com alterações nos metabolismos de aminoácidos e energético. No entanto, mais estudos são necessários para elucidar e validar as hipóteses geradas. / The fruits and vegetables intake has been associated to the reduction of chronic non-communicable disease incidence, such as cancer, metabolic syndrome and cardiovascular diseases. The biological activities attribute to them has been related mainly to the phenolic compounds, such as flavonoids and ellagitannins, presents in their composition. However, the bioavailability and influence of these compounds under human metabolism still unclear. Thus, the objective of the present study was investigate changes in human metaboloma as a result of the acute intake of the polyphenol-rich source from purple grumixama juice (Eugenia brasiliensis Lam.), searching to identify possible sites of metabolic regulation. In this way, purple and yellow grumixama varieties were characterized to polyphenol profile, and a single dose of the purple grumixama juice was administered to healthy human. The purple grumixama showed be a good source of anthocyanins and ellagitannins, mainly cyanidin 3-O-glucoside and strictinin, respectively. In the clinical trial, 15 healthy subjects intake a single dose of purple grumixama juice (10 ml of juice/kg of body mass). Plasma and urine samples were collected, before and after intake (over 24 h), and analyzed by GC-MS and LC-MS. The exogenous metabolites excreted and identified in urine samples by LC-MS were identified as urolithins and phenolic acids, gut microbiota catabolites of ellagitannins and anthocyanins, respectively. Four urolithins were detected beginning excretion 4 h after juice intake, increasing over 24 h. Furthermore, four phenolic acids were identified, being the hippuric acid the majority of them. 114 metabolites were identified to urine collection points before and after intake (1-2 h and 2-4 h) by CG-MS, being 17 amino acids, 7 other classes, 47 organic acids and 43 unknown compounds. A OPLS-DA discriminated the metabolites changed by the grumixama juice intake. The pathway analysis showed that juice intake influenced mainly three metabolic pathways: glyoxylate and dicarboxylate metabolism (up-regulated), beta-alanine metabolism (down-regulated), and phenylalanine metabolism (up-regulated), being these pathways related to energetic metabolism. Furthermore, the purple and yellow grumixama fruits extracts were evaluated in animal model of obesity and insulin resistance (C57BL/6J mice) induced by high fatty and high sugar diet. The treatment, during 8 weeks, promoted lipid metabolism modulation. As conclusions, purple grumixama showed to be a good source of anthocyanins and ellagitannins, and the interaction among the metabolites from fruits and endogenous metabolites can be related to changes in energetic metabolism and amino acid metabolism. However, more studies are necessary to elucidate and validate these hypotheses.

Submitted by KARINE CUSTÓDIO GARCIA null (kak_garcia@hotmail.com) on 2016-12-21T11:55:53Z No. of bitstreams: 1 Dissertação repositorio.pdf: 3376488 bytes, checksum: 8bc9d4cb78c9af3b01d3dc21a7312a4d (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-22T12:00:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 garcia_kc_me_arafcf.pdf: 3376488 bytes, checksum: 8bc9d4cb78c9af3b01d3dc21a7312a4d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-22T12:00:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 garcia_kc_me_arafcf.pdf: 3376488 bytes, checksum: 8bc9d4cb78c9af3b01d3dc21a7312a4d (MD5) Previous issue date: 2016-10-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As infecções do trato urinário (ITU) são afecções comuns, que podem resultar em níveis significantes de morbidade. Os agentes etiológicos associados a ITU são bactérias Gram-negativas e Gram-positivas, além do fungo comensal Candida albicans. Além dos parâmetros clássicos associados à infecção, as ITU proporcionam o aumento na formação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, o que também acarreta injúria tecidual, bem como, também ocorre um alto índice de micro-organismos resistentes aos fármacos disponíveis na clínica médica, o que demanda na prospecção por novas abordagens terapêuticas complementares. No Brasil, a espécie Eugenia brasiliensis Lam. é conhecida como “berry brasileira” ou grumixama, e existem poucos relatos na literatura demonstrando sua atividade biológica. Este fator associados à escassez de estudos sobre a espécie brasileira E. brasiliensis, despertou o interesse em novos estudos relacionados à sua ação sobre microrganismos relacionados a ITU e atividade antioxidante. Os extratos utilizados neste estudo foram obtidos a partir da polpa do fruto liofilizado de E. brasiliensis com diferentes solventes, com objetivo de obter dados de sua composição fitoquímica, avaliar suas atividades antioxidantes, antimicrobianas e citotóxicas. Foram utilizados como padrões para os ensaios de atividade antioxidante o ácido elágico, quercetina, ácido gálico, ácido cafeico e trolox. Na caracterização química dos extratos foram determinados, os teores de flavonoides totais, compostos fenólicos totais, antocianinas totais e açúcares totais e realizados testes de identificação para taninos; além disso, um perfil cromatográfico por CLAE-UV foi obtido. O extrato etanólico apresentou atividade antimicrobiana para cepas de Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus e Candida albicans ATCC18804, enquanto o extrato aquoso demonstrou atividade antimicrobiana apenas frente ao S. aureus. Em relação à atividade antioxidante observou-se que os “padrões” ácido elágico, ácido gálico, ácido cafeico e quercetina foram mais eficientes do que as amostras para todos os ensaios, e entre os extratos de E. brasiliensis, o extrato etanólico demonstrou ter maior eficiência para a capturadas espécies reativas O2•-, ABTS•+, HOCl/OCl- e TauCl; enquanto que o extrato aquoso apresentou maior eficiência para o ensaio de clareamento da crocina na captura do radical ROO• e maior potencial redutor do íon férrico. Para o ensaio do NO•e H2O2 nenhum dos extratos apresentou atividade. Quanto ao potencial citotóxico, os extratos de E. brasiliensis não apresentaram citotoxicidade frente as linhagens celulares de origem não tumoral (macrófagos, linfócitos e células VERO). / The urinary tract infections (UTI) are common disorders, which may result in significant levels of morbidity. The etiological agents associated with UTI are Gram-negative and Gram-positive, plus commensal Candida albicans fungus. In addition to the classics associated with infection parameters, the ITU provide increased formation of reactive oxygen and nitrogen species, which also causes tissue damage, as well as a high rate of resistant microorganisms to drugs available in clinical practice, which requires the prospecting for new medicinal approaches. In Brazil, the specie Eugenia brasiliensis Lam. are known as “brazilian berry” or grumixama, and there are few reports in the literature demonstrating your biologic activity. This factor associated with the lack of studies on the brazilian specie E .brasiliensis stir up interest in new research related to the activities of microorganisms related to ITU and antioxidant activity. The extracts used in this study were obtained from the fruit pulp lyophilized of E. brasiliensis with different solvents in order to get data from their phytochemical composition, evaluate their antioxidant activity, antimicrobial and cytotoxicity. For the evaluation of antioxidant activity it was used like standards acid elagic, quercetina, acid gallic, acid cafeico and trolox. In the chemical characterization of the extracts were determined, the contents of total flavonoids, total phenolics, total anthocyanins and total sugars were determined and were performed to tannins; moreover, a profile by HPLC-UV chromatogram was obtained. The ethanol extract showed activity antimicrobial for the strains of Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus and Candida albicans ATCC18804, while the aqueous extract only demonstrated activity antimicrobial for S. aureus. In relation to the antioxidant activity it is observed that the “standards” ellagic acid, gallic acid, caffeic acid and quercetin were more efficient and among extracts of E. brasiliensis ethanolic extract showed greater efficiency for capture of reactive species O2•-, ABTS•+, HOCl/OCl- and TauCl; while the aqueous extract was more efficient for crocina bleaching assay in capturing the radical ROO• and higher potential reducer of ferric ion. For the test of NO• and H2O2 none of the extracts showed activity. As to the cytotoxic potential, E. brasiliensis extracts showed no cytotoxicity on cell lines of non-tumor origin (macrophages, lymphocytes and VERO).