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Semiquantificação de RNAm para receptores de gonadotrofinas em folículos de novilhas Nelore (Bos taurus indicus) / Semiquantification of mRNA for gonadotropins receptors in follicles of Nelore heifers (Bos taurus indicus)

Pereira, Fábio Varoni 06 February 2004 (has links)
A identificação de mecanismos moleculares é importante para entender os eventos fisiológicos que ocorrem durante o processo de maturação sexual. O objetivo deste trabalho foi semiquantificar o RNAm para os receptores de gonadotrofinas em células da granulosa de folículos dominantes em crescimento de novilhas Nelore pré-púberes, buscando associação com a fertilidade precoce. As novilhas foram separadas em Precoce (P, n=6) e Não Precoce (NP, n=16), de acordo com o diagnóstico positivo de gestação aos 15 meses de idade. Realizou-se exame ultra-sonográfico dos ovários durante 17 dias para a identificação da onda folicular, o folículo dominante com 8-9 mm foi aspirado via trans-vaginal. O RNA total foi extraído das amostras e convertido a DNA complementar que teve uma região amplificada para a expressão dos genes para os receptores de gonadotrofinas. A semiquantificação foi feita por análise digital onde levou-se em consideração a intensidade média das bandas (unidade arbitrária - UA) em gel de poliacrilamida (8%) corado com uma solução de TBE-brometo de etídio (0,02%). Foi utilizado o RNAm para o gene do GAPDH como controle interno para corrigir a expressão dos receptores de gonadotrofinas em função da quantidade de RNA em cada amostra. Não houve diferença entre P e NP na quantidade de RNAm para o receptor de FSH (FSHr, 1,14±0,07 e 1,19±0,04 UA) e de LH (LHr 0,79±0,12 e 0,78±0,05 UA, respectivamente). Foi detectada a presença de splicing alternativo do RNAm para o receptor de LH (LHrs), pelo aparecimento de banda com peso molecular diferente, em todos os animais do experimento, constatando-se através do sequenciamento que o material apresentava a deleção do exon 10. As novilhas P apresentaram maior percentagem de LHrs em relação ao LHr (LHrs/LHr) (83,66±4,26%) quando comparadas a NP (70,05±3,39%). A quantidade de RNAm para receptores de gonadotrofinas parece não estar relacionada com o aparecimento de fertilidade precoce, mas a maior percentagem de deleção do exon 10 no RNAm para o LHr pode estar envolvida com a fertilidade precoce em novilhas Nelore. / Identification of molecular mechanisms is important to understand the physiological events occurring during the process of sexual maturation. The objective of this work was to semiquantify the mRNA for gonadotropins receptors from granulosa cells of developing dominant follicles in pre-pubertal Nellore heifers and associate the results to precocious fertility. The heifers were sorted in Precocious (P, n=6) and Non Precocious (NP, n=16), according to positive pregnancy at 15 months of age. Ovarian ultrasound examination was performed through 17 days for follicular wave identification, the growing dominant follicle was aspirated at 8-9 mm. Total mRNA was extracted from the granulosa cells samples, converted to complementary DNA and had a region amplified for gene expression for gonadotropins receptors. The semiquantification was performed by digital analysis of intensity average for the bands (arbitrary unit - AU) in poliacrilamida gel (8%) stained with etidio TBE-bromide solution (0,02%). mRNA for GAPDH gene was used as internal control to correct the expression of gonadotropins receptors to the amount of mRNA in each sample. There was no difference between P and NP in the amount of mRNA for FSH receptors (FSHr, 1,14±0,07 and 1,19±0,04 AU) and LH receptors (LHr 0,79±0,12 and 0,78±0,05 AU, respectively). Heifers presented alternative splicing of mRNA for LH receptors (LHrs) evidenced through sequencing, as the absence of exon 10. P heifers presented greater percentage of LHrs in relation to LHr (LHrs/LHr) (83,66±4,26%) when compared the NP (70,05±3,39%). The amount of mRNA for gonadotropins receptors was not related with precocious fertility, but the greater percentage of exon 10 deletion from mRNA for LHr was associate the precocious fertility in Nelore heifers.
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Possíveis efeitos da leptina e IGF-I plasmáticos sobre a puberdade e a precocidade sexual de novilhas Nelore (Bos taurus indicus) / Possible effects of plasmatic leptin and IGF-I on puberty and sexual precocity of Nelore heifers (Bos taurus indicus)

Beltran, Maria Paula 28 January 2008 (has links)
Foram avaliadas as concentrações plasmáticas de leptina e IGF-I do 8° ao 16° mês de idade de 36 novilhas Nelore e comparadas com a idade à primeira ovulação e precocidade sexual. Para a quantificação da leptina, foi validado um radioimunoensaio (RIA) utilizando anticorpo produzido contra leptina recombinante eqüina após inoculação em coelho. A especificidade, estabilidade, taxa de recuperação e efeito matriz indicaram que o ensaio foi adequado para a quantificação de leptina plasmática bovina. O IGF-I foi quantificado por Kit comercial (DSL). As amostras de sangue foram colhidas em intervalos de 4 dias e avaliadas nos 60 dias retrospectivos à primeira ovulação e de amostras mensais do 8° ao 16° mês de idade. A maioria das novilhas (83,3%) ovulou até o final do experimento e foram divididas em prenhes até os 16 meses de idade (33,3%), formando o grupo precoce (P), e não prenhes (50%), formando o grupo Não Precoce (NP) 16,7% das novilhas não ovularam (chamadas de NO) até o final do experimento. Não houve diferença (P > 0,05) na idade à primeira ovulação entre os grupos P (439±27,9 dias) e NP (445±36,8 dias). O peso aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos, não diferiu (P > 0,05) entre as novilhas P e NP durante o experimento, mas as NO apresentaram peso inferior aos outros grupos a partir do 12°mês (P < 0,01). Nos 60 dias que antecederam a primeira ovulação, a concentração de leptina plasmática aumentou (P < 0,01) no grupo P, mas não nos grupos NP e NO (P > 0,5), porém não houve diferença entre os grupos (P > 0,5). Houve correlação entre a concentração de leptina plasmática e o peso corporal nos grupos P (r=0,36; P < 0,01) e NP (r=0,4313; P < 0,01), mas não no grupo NO (r=0,095; P > 0,5). A concentração plasmática de IGF-I aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos do 8° ao 16° mês de idade, mas foi maior no grupo P (P < 0,01) do que nos NP e NO, que não diferiram entre si. Antes da primeira ovulação, não foi verificado aumento (P > 0,1) na concentração de IGF-I em nenhum dos grupos, porém a concentração foi maior no grupo P (P < 0,05). Pode-se concluir que a concentração de leptina, junto com o peso corporal foram importantes na primeira ovulação, enquanto o IGF-I, na determinação da precocidade sexual. / Plasmatic leptin and IGF-I were quantified from 36 Nelore heifers, and compared to age at first ovulation and sexual precocity. For leptin quantification, a radioimmunoassay, using antibody against recombinant equine leptin inoculated in rabbit was validated. The specificity, stability, recuperation tax and matrix effect showed that the assay was able to quantify for plasmatic bovine leptin quantification. The IGF-I was quantified with a commercial Kit (DSL). Blood samples were taken every 4 days and analyzed retrospectively 60 days before first ovulation and from mensal samples from 8th to 16th month of age. Most of the heifers ovulated (83.3%) until the end of experiment, those were divided in heifers that became pregnant until the 16° month of age (33.3%), named Precocious group (P), 50% that did not became pregnant were the non precocious group (NP) 16% of the heifers did not ovulated and were named NO. There was no difference (P > 0.05) in the first ovulation age between P (439±27.9 days) and NP (445±36.8 days) groups. The weight of the 3 groups increased (P < 0.01), but did not differ (P > 0.05) between P and NP heifers but NO showed lower weight (P < 0.01) after the 12th month (P < 0.01). Sixty days before first ovulation, plasmatic leptin concentration increased (P < 0.01) in P group, but did not in NP or NO (P > 0.5), and there were no difference between groups. (P > 0.5). There was correlation between plasmatic leptin and body weight in P (r=0.36; P < 0.01) and NP (r=0.4313; P < 0.01), but did not in NO group (r=0.095; P > 0.5). Plasmatic IGF-I concentration increased (P < 0.01) in the 3 groups, from 8th to 16th month of age, but was higher in P (P < 0.01) than NP and NO, that did not differ among themselves. Before first ovulation there was, no increase (P > 0.1) in IGF-I in none of groups, but concentration was higher in P (P < 0.05) group. It could be concluded that leptin concentration as well as body weight were important in first ovulation, while IGF-I, in the sexual precocity determination.
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Gene expression analyses on adipose tissue of Nellore peripubertal heifers reveal genes that have an impact on reproductive physiology / Análise da expressão gênica do tecido adiposo em novilhas Nelore púberes revela interação entre tecidos reprodutivos

Henriques, Paula Suarez 14 February 2017 (has links)
Pubertal development is an outcome of genes\' interaction producing molecular signals that rule physiological mechanisms. Understanding the genetic changes surrounding the peripubertal period in Nellore heifers could unveil certain differences in age at puberty because they reach sexual maturity much later than European heifers. The adipose tissue regulates energy metabolism and is an endocrine organ with active participation in reproductive processes .The present study aimed at understanding the functions of the adipose tissue around pubertal time in Nellore heifers. Our strategy was to search for differences in gene expression between prepubertal and pubertal animals. We quantified gene expression in the adipose tissue for Nellore heifers who reached puberty according to either the early or late pattern. This research was done on 30 Nellore heifers monitored weekly from 230 kg bodyweight until the onset of puberty through gynaecological ultrasound examination. The onset of puberty was defined by the presence of corpus luteum in the ovary and blood progesterone > 1 ng/ml. Adipose tissue was collected through subcutaneous biopsy; the first biopsy was done when heifers reached 230 kilos bodyweight and subsequently once a month until they entered puberty. Biopsies were collected of each heifer that reached puberty alongside its half-sister who had not reached puberty. We analysed samples of six early pubertal heifers and their six late pubertal sisters at two different stages: at the time of ovulation and approximately 50 days before ovulation. The RNA was extracted from the biopsies\' tissue and gene expression quantified through RNA sequencing. There were nine genes differentially expressed in pubertal heifers that have been found previously correlated with reproductive traits and/or processes in mammals on other studies. These genes were APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B and CYP26B1, already found expressed in adipocytes, hypothalamus, ovaries and uterus, corroborating previous knowledge of a link among energy metabolism, reproductive organs and neural influence. By measuring the genetic changes and correlating them with known physiological mechanisms on the nervous system and reproductive organs during puberty, we detected genes expressed here that are related to modifications in the organism as a whole. Therefore the adipose tissue may be regarded as an instrument to indicate what is going on during reproductive processes. The results presented here may aid in a better understanding of genetic changes happening during peripubertal period. / O desenvolvimento púbere é o resultado da interação de genes que produzem sinais moleculares regulando os mecanismos fisiológicos. A compreensão das mudanças genéticas que permeiam o período peripuberal em novilhas Nelore (Bos indicus) poderia desvendar o porquê das diferenças em idade a puberdade, pois elas atingem a maturidade sexual mais tarde que o gado europeu (Bos taurus). O tecido adiposo regula o metabolismo de energia e é um órgão endócrino que tem participação ativa em processos reprodutivos. O presente estudo teve como objetivo entender as funções do tecido adiposo na época peripubertal em novilhas Nelore. Nossa estratégia foi procurar diferenças em expressão gênica entre animais pré-púberes e púberes. Nós quantificamos a expressão gênica no tecido adiposo de novilhas Nelores precoces ou tardias. A pesquisa foi feita em 30 novilhas Nelore, monitoradas semanalmente a partir do momento em que atingiram 230 kg de peso até a manifestação da puberdade por exame de ultrassom ginecológico. O momento da puberdade foi definido pela presença de corpo lúteo no ovário e concentração sanguínea de progesterona maior que > 1 ng/ml. O tecido adiposo foi coletado por biópsia subcutânea; a primeira biópsia foi feita quando as novilhas alcançaram 230 quilos de peso e subsequentemente uma vez por mês ate que elas entrassem em puberdade. As biópsias foram coletadas de cada novilha que atingiu a puberdade e de sua meia-irmã que não tinha atingido a puberdade. Nós analisamos amostras de seis novilhas púberes precoces e de seis novilhas púberes tardias em dois estágios diferentes: no momento da ovulação e aproximadamente 50 dias antes da ovulação. O RNA foi extraído do tecido das biopsias e a expressão genica quantificada através de sequenciamento de RNA. Encontramos nove genes diferencialmente expressos em novilhas púberes que foram previamente relacionados com características e/ou processos reprodutivos de mamíferos em outros estudos. Esses genes foram APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B e CYP26B1, já encontrados expressos em adipócitos, hipotálamo, ovários e útero, comprovando conhecimento prévio da conexão existente entre metabolismo de energia, órgãos reprodutivos e influencia neural. Ao medir as mudanças genéticas e correlacioná-las com mecanismos fisiológicos conhecidos em sistema nervoso e órgãos reprodutivos durante a puberdade, nós conseguimos identificar genes expressos em adiposo que são relacionados a modificações no organismo como um todo. Sendo assim, o tecido adiposo pode ser considerado um instrumento para indicar o que está acontecendo durante os processos reprodutivos. .Os resultados apresentados aqui podem ajudar na melhor compreensão de mudanças genéticas durante o período peripuberal.
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Eficácia do tratamento com antibiótico injetável associado a selante de tetos sobre a saúde do úbere de novilhas com lactações induzidas / Efficacy of injectable antibiotic treatment associated with roof sealant on udder health of heifers with induced lactation

Camylla Pedrosa Monteiro 31 August 2018 (has links)
O estudo teve como objetivos avaliar: 1) produção e composição do leite de novilhas submetidas a protocolo de indução de lactação (PIL); 2) eficácia de antibiótico injetável associado a selante de tetos sobre a prevalência de infecções intramamárias (IIM) e contagem de células somáticas (CCS) e 3) eficácia de GnRH sobre regressão de cistos foliculares (CFs) e taxa de concepção inicial e prenhez acumulada em novilhas tardias. Foram utilizadas 114 novilhas da raça Jersolando (Holandesa x Jersey), com 34,7 &#177; 4,8 (média &#177; desvio padrão) meses de idade, 439 &#177; 56,35 kg de peso corporal e 3,00 &#177; 0,30 de escore de condição corporal (ECC). O utilizado PIL era composto por benzoato de estradiol, progesterona injetável, prostaglandina, dexametasona e somatotropina recombinante bovina. Dezesseis dias antes do PIL as novilhas foram aleatoriamente distribuídas em dois grupos: a) ATBS (n=57, 1mL/kg Norfloxacina injetável Norflomax&reg;, Ourofino Saúde Animal), via intramuscular associado com selante de tetos (4g subnitrato de bismuto Sellat&reg;, Ourofino Saúde Animal), e b) CONT (n=57) sem a aplicação de nenhum medicamento. A lactação iniciou-se no 21º dia do PIL e os animais foram submetidos à duas ordenhas diárias. No 15º dia de lactação (DEL) foi realizado diagnóstico de CFs e mais dois grupos foram criados de acordo com peso corporal, ECC e presença/ausência de CFs: a) GnRH (n=53, 5 mL de GnRH injetável Sincrofort&reg;, Ourofino Saúde Animal) e b) Controle (n=53). Do total (n=104), 91% das novilhas induzidas responderam com sucesso ao PIL com média de produção de leite de 15,19 kg/leite/dia durante as primeiras 22 semanas de lactação. Os tratamentos foram avaliados em fatorial 2x2, sendo o fator 1 correspondente ao tratamento com ATBS e o fator 2 correspondente ao tratamento com GnRH. O ATBS não alterou a produção de leite quando comparado com o GnRH. A prevalência de IIM nas duas primeiras semanas de lactação foi de 18% com o ATBS e 28% nas não tratadas, e Staphylococcuscoagulase negativa (SCN) foi o patógeno mais frequentemente isolado no 7º (20,95%) e 14º (17,11%) DEL. Os quartos mamários tratados com ATBS tiveram 0,56 vezes menos risco de IIM e diminuíram a CCS em relação aos controles. A aplicação de GnRH não influenciou na cura dos CFs em relação aos controles. A ciclicidade aos 45 dias de lactação foi de 68% e 35% para os animais tratados com ATBS e controle, respectivamente. Já para os tratados com GnRH, a ciclicidade foi de 57% e 46% para o controle. No tratamento com ATBS houve taxa de prenhez acumulada de 60% contra 89% no controle, enquanto que o tratamento com GnRH não influenciou esta variável. A indução de lactação foi eficaz em novilhas e o tratamento com ATBS diminuiu a prevalência de IIM nas duas primeiras semanas de lactação. / The present study aimed to evaluate: 1) the milk production and composition of heifers submitted to lactation induction protocol (PIL), 2) the effectiveness of injectable antibiotic treatment associated with teat sealant on the prevalence of intramammary infections (IMI) and somatic cell count (SCC), and 3) the effectiveness of GnRH treatment on follicular cyst (FC) regression and optimization of the accumulated pregnancy rate in late heifers. Thus, 114 heifers of Jersolando breed (Holstein x Jersey) were used, with 34.7 &#177; 4.8 (mean &#177; standard deviation) months of age, 439 &#177; 56.35 kg of body weight and 3.00 &#177; 0.30 body condition score (BCS). The heifers were housed in Compost bedded-pack barns shed and submitted to the PIL consisting of estradiol benzoate, injectable progesterone, prostaglandin, dexamethasone and bovine recombinant somatotropin. Sixteen days prior to initiation of PIL, heifers were randomly assigned to two groups: a) ATBS (n = 57, 1mL/kg Norfloxacin injectable Norflomax&reg;, Ourofino Animal Health), intramuscularly, associated with internal teat sealant (4g bismuth subnitrate Sellat&reg;, Ourofino Animal Health), and b) CONT (n=57) without the application of any medication. Lactation began on the 21stday of the PIL and the animals were submitted to two daily milking. On the 15th day in milk (DIM) a diagnosis of FC was performed and two other groups were created according to body weight, BCS and presence / absence of CFs: a) GnRH (n = 53, 5 mL of Sincrofort&reg; injectable GnRH, Ourofino Animal Health) and b) Control (n = 53). From 104 induced heifers, 91% responded successfully to PIL, with a mean milk yield of 15.19 kg/milk/day during the first 22 weeks of lactation. The treatments were evaluated in a 2x2 factorial, with factor 1 corresponding to the ATBS treatment and factor 2 corresponding to GnRH treatment. The ATBS treatment did not change the milk production when compared to those treated with GnRH. The prevalence of IMI during the first two weeks of lactation was 18% for ATBS-heifers and 28% for untreated heifers. Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the most frequently isolated pathogen in the 7th (20.95 %) and 14th (17.11%) DIM. The ATBS-treated mammary quarters had a 0,56lower times risk of infection and decreased the SCC compared to controls, with or without GnRH. The GnRH application did not influence on the cure of FCs in relation to control. Cyclicity at 45 days of lactation was 68% for the animals treated with ATBS and 35% for the control, while the animals treated with GnRH had a cyclicity of 57% and 46% for the control. The ATBS had cumulative pregnancy rate of 60%, in the control was 89% and the GnRH treatment did not influence this variable. Induction of lactation was effective in heifers and treatment with ATBS decreased the prevalence of IMI in the first two weeks of lactation.
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Eficiência da área de sombreamento artificial no bem-estar de novilhas leiteiras criadas a pasto / Artificial shadow area efficiency in milk heifers welfare in pastures

Elisabete Maria Mellace 17 June 2009 (has links)
Este estudo teve como objetivo avaliar e quantificar o efeito do sombreamento artificial proporcionado por diferentes áreas de sombra sobre a fisiologia e o comportamento de novilhas leiteiras, em ambiente de pastagens. A pesquisa foi realizada no período de fevereiro a abril de 2008. A área experimental foi dividida em 20 parcelas adjacentes com 84m² para os tratamentos 1, 2 e 3 e com 70m² para os tratamentos 4 e 5. Foram comparados a testemunha (tratamento 1, sem sombra) com 4 áreas de sombreamento por animal, tratamento 2 (com 1,5m²), tratamento 3 (3,0m²), tratamento 4 (5,0m²) e tratamento 5 (8,0m²), As dimensões dos abrigos foram 1,0m x 1,5m x 3,5m (largura, comprimento e altura) (1,5m² de sombra.animal-1), 1,5m x 2,0m x 3,5m (3,0m² de sombra.animal-1), 2,0m x 2,5m x 3,5m (5,0m² de sombra.animal-1) e 2,0m x 4,0m x 3,5m (8,0m² de sombra.animal-1), sem paredes laterais. Foram utilizadas 20 novilhas mestiças, 3/4 Jersey, ½ Holandesa e Jersey e Holandesas puras, com idade entre 12 e 25 meses e peso médio variando de 240 a 360kg, pareadas em função da uniformidade de peso e idade. As novilhas permaneciam em piquetes de Penissetum purpureum e complementação da dieta no cocho, durante a noite e após as 8:00 horas eram conduzidas para as parcelas. A Tgn foi registrada por um minidatalogger da marca LOGEN LS 8856 ALPAX. As variáveis meteorológicas foram obtidas no posto agrometeorológico da ESALQ/USP. Durante nove dias não consecutivos foram registradas FR e TS. As observações comportamentais foram realizadas em dias não consecutivos (nove dias) no período das 10:00 ás 16:00 horas pelo método focal. As condições ambientais em 66,7% do período da pesquisa foram em condição de estresse térmico para as novilhas. Os valores de FR e TS foram menores sob a maior área de sombra (P<0,05) e semelhantes entre os 1,5m², 3,5m² e 5,0m² (P>0,05). Houve correlação da Tgn com a FR e a TS. Não foram observadas alterações comportamentais entre os tratamentos, os animais ficaram sob as sombras nas horas mais quentes do dia, preferencialmente em pé, o comportamento seguiu os padrões conhecidos para bovinos. Para novilhas leiteiras a melhor área de sombreamento artificial é de 3m². / This study had as objective to evaluate and quantify the effect of artificial shading proportioned by different shadow areas under physiology and behavior of milk heifers, in pastures. Research was realized in the period from February to April, 2008. Experimental area was divided in 20 adjacent parcels with 84m2 to treatments 1, 2 and 3 and with 70m2 to treatments 4 and 5. Were compared witness (treatment 1, no shadow) with 4 shading areas per animal, treatment 2 (with 1,5 m²), treatment 3 (3,0 m²), treatment 4 (5,0 m²) and treatment 5 (8,0 m²). Shelters dimensions were 1,0m x 1,5m x 3,5m (width, length and height) (1,5m² of shade.animal-1), 1,5m x 2,0m x 3,5m (3,0m² of shade.animal-1), 2,0m x 2,5m x 3,5m (5,0m² of shade.animal-1) and 2,0m x 4,0m x 3,5m (8,0m² of shade.animal-1), without walls in the sides. Twenty crossbred heifers were used, 3/4 Jersey, ½ Holstein and pure Jersey and Holstein, with ages among 12 and 25 months and average weight varying from 240 to 360 kg, paired in function of weight and age uniformity. Heifers remained in Penissetum purpureum paddocks and had a diet complementation in the trough, during the period of night and after 8:00am they were conducted to the parcels. Tgn was registered by a minidatalogger from LOGEN LS 8856 ALPAX trend. Meteorological variables were obtained in the agrometeorological post from ESALQ/USP. During nine non consecutive days were registered FR and TS. Behavioral observations were realized in non consecutive days (nine days) in the period from 10:00am to 16:00pm by the focal method. 66,7% of environmental conditions in the period of research were in thermal stress conditions to the heifers. Values of FR and TS were minor under the major area of (P<0,05) and similar among 1,5m², 3,5m² and 5,0m² (P>0,05). There was a correlation of Tgn with FR and TS. Behavioral alterations among the treatments were not observed, animals stayed under the shadow in the hotter hours of the day, preferably on foot, behavior followed the known patters to bovine. For milk heifers the better of artificial shading area is 3m².
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Comparação da eficiência de diferentes formulações à base de progesterona para indução da puberdade e desempenho reprodutivo em novilhas da raça Nelore / Effect of different progesterone sources on the induction of puberty and reproductive performance in Nelore heifers

Kleber Menegon Lemes 19 January 2018 (has links)
Foram avaliadas diferentes formulações à base de progesterona (P4) para indução da puberdade e desempenho reprodutivo em novilhas da raça Nelore. Ao início do protocolo (D0), os animais (n=400; 13,5 &#177; 0,05 meses e 241,49 &#177; 1,50kg) foram distribuídos entre os grupos CT (Controle; sem tratamento; n=122), DI (Dispositivo Intravaginal; n=117) e IN (150 mg P4 injetável de longa ação; n=118). Dez dias (D10) após, os grupos tratados receberam 1 mg de benzoato de estradiol (BE) e 150 &micro;g de PGF2&#945;. Após doze dias (D22), todos os animais foram submetidos a protocolos de IATF e avaliados quanto à presença de CL (taxa de ovulação ao protocolo de indução da puberdade). Neste momento, todos os animais receberam um DI de P4 (1 g) e 2 mg de BE. Oito dias e meio após, os DI foram removidos e administrados 1 mg de BE, 150 &micro;g de PGF2&#945; e 300 UI de eCG. A IATF foi realizada no D10. Foram avaliadas características de desenvolvimento ovariano e uterino, assim como o desempenho reprodutivo após dois protocolos de IATF consecutivos. Houve aumento (P &lt; 0,05) do FD nos animais do grupo IN no D10, assim como maior (P &lt; 0,05) diâmetro ovariano nos grupos DI e IN no D22. O tônus e diâmetro uterino foram superiores (P &lt; 0,05) no D10 nos grupos tratados e permaneceram superiores até o início do protocolo de IATF (D22). Adicionalmente, o tônus e diâmetro uterino no grupo IN foram superiores (P &lt; 0,05) ao grupo DI no mesmo período. Houve aumento (P &lt; 0,05) na taxa de indução da puberdade nos animais tratados (DI = 63,25a% e IN = 68,64a%) quando comparados ao grupo CT (4,92b%). Foram observados maior diâmetro (P &lt; 0,05) do FD no D8,5 nos grupos tratados (DI e IN) e tendência (P &lt; 0,10) de aumento no FD no momento da IATF no grupo IN quando comparado ao grupo CT. Houve aumento (P &lt; 0,05) na taxa de concepção à 1ª IATF no grupo IN (42,74%) quando comparado aos grupos CT (24,59%) e DI (26,49%). No entanto, não houve diferença (P &gt; 0,05) na taxa de concepção à 2ª IATF, taxa de concepção acumulada, taxa de prenhez final, perda gestacional entre o DG30 e DG60 ou após o DG60. Desta forma, a utilização de P4 para indução da puberdade em novilhas Nelore é um tratamento eficaz, assim como aumenta o desenvolvimento do aparelho reprodutivo nos animais tratados. A utilização de P4 injetável de longa ação é uma alternativa aos tratamentos utilizados rotineiramente (dispositivos intravaginais) para indução da puberdade em novilhas, além de ser uma ferramenta de menor custo e maior praticidade de manejo, contribuindo também com a questão sanitária do rebanho. O tratamento com P4 para indução da puberdade aumenta a taxa de ciclicidade ao início do protocolo de IATF, porém, não aumenta a taxa de concepção acumulada, taxa de prenhez final e taxa de perda gestacional após a IATF. No entanto, houve aumento na taxa de concepção à 1ª IATF em animais tratados com P4 injetável de longa ação, antecipando o momento da concepção durante a EM. Desta forma, é possível reduzir a idade ao primeiro parto para os 2 anos em novilhas Nelore, possibilitando também uma forma indireta de seleção para precocidade sexual nestes animais com maior potencial genético dentro do rebanho. / Different progesterone (P4) sources were evaluated for induction of puberty and reproductive performance in Nelore heifers. At the beginning of the protocol (D0), animals (n=374, 13.5 &#177; 0.05 months and 241.49 &#177; 1.50 kg) were distributed in CT (Control; without treatment; n=122), ID (Intravaginal Device, n=117) and IN (150 mg long-acting injectable P4, n=118) groups. Ten days (D10) after, the treated groups received 1mg of estradiol benzoate (BE) and 150 &micro;g of PGF2&#945;. Twelve days (D22) after, all animals were submitted to FTAI protocols and evaluated for the presence of CL (ovulation rate after the protocol for induction of puberty). At this moment, an ID (1 g of P4) was placed in all animals plus 2 mg of BE. Eight and a half days later, IDs were removed and 1 mg of BE, 150 &micro;g of PGF2&#945; and 300 UI of eCG were administered. FTAI was performed on D10. Characteristics of ovarian and uterine development were evaluated as well reproductive performance after two consecutive FTAI protocols. An increase (P &lt; 0.05) of FD diameter was observed in the animals of the IN group in D10, as well a greater (P &lt; 0.05) ovarian diameter in ID and IN groups in D22. The uterine tone and diameter was higher (P &lt; 0.05) on D10 in treated groups and remained greater until the beginning of the FTAI protocol (D22). In addition, the uterine tone and diameter in the IN group was higher (P &lt; 0.05) than the ID group in the same period. There was an increase (P &lt; 0.05) on the induction of puberty in treated animals (ID = 63.25a% and IN = 68.64a%) when compared to CT group (4.92b%). A greater diameter (P &lt; 0.05) of the FD in the D8.5 was observed in the treated groups (ID and IN) and a trend (P &lt; 0.10) of increase in the FD at the moment of the FTAI in the IN group when compared to the CT group. There was a higher (P &lt; 0.05) conception rate at the 1st FTAI in the IN group (42.74%) when compared to the CT (24.59%) and ID (26.49%) groups. However, there was no difference (P &gt; 0.05) in the conception rate at the 2nd FTAI, cumulative conception rate, final pregnancy rate, gestational loss between DG30 and DG60 or after DG60. Thus, the use of P4 to induce puberty in Nellore heifers is an effective tool, as well enhances the development of the reproductive tract in treated animals. The use of long-acting injectable P4 is an alternative to commonly used treatments (intravaginal devices) to induce puberty in heifers, as well as being a lower cost and greater practicality tool of management, also contributing to the sanitary issues of the herd. Treatment with P4 for induction of puberty increases the rate of cyclicity at the start of the FTAI protocol, but does not increase the cumulative conception rate, final pregnancy rate, and gestational loss rate after FTAI. However, there was an increase in the conception rate at the 1st FTAI in animals treated with long-acting injectable P4, anticipating the moment of conception during BS in these animals. Thus, it is possible to reduce the age at first calving for 2 years in Nelore heifers, also allowing an indirect selection tool for sexual precocity in these animals with greater genetic potential within the herd.
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Produção in vitro de embriões de doadoras pré-púberes da raça Holandesa / In vitro embryo production of prepubertal Holstein donors

Bruna Martins Guerreiro 04 March 2015 (has links)
A produção in vitro de embriões em vacas Holandesas de alta produção (Bos taurus) ainda apresenta baixa eficiência quando comparada à de fêmeas Bos indicus. Nesse contexto, a utilização de novilhas de 8-10 meses de idade como doadoras de oócitos pode ser uma alternativa para melhorar a eficiência dessa biotecnologia e acelerar o ganho genético pela redução do intervalo de gerações dos rebanhos. Entretanto, as informações acerca da produção in vitro de embriões originados de doadoras pré-púberes são controversas na literatura. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a aspiração folicular, seguida da produção in vitro (PIVE) de embriões de doadoras pré-púberes da raça Holandesa e posteriormente, a taxa de concepção após a transferência dos embriões. Um total de 120 doadoras de quatro categorias animais: novilhas pré-púberes (PP, n = 30), novilhas púberes (PU, n = 30), vacas lactantes (VL, n = 30) e vacas não lactantes (VNL, n = 30) foi submetido à aspiração folicular (OPU), sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com cinco animais de cada categoria, ou seja, vinte doadoras por sessão. Imediatamente antes da OPU, os folículos ovarianos foram quantificados e classificados de acordo com o diâmetro [folículos pequenos (FP = < 6 mm), folículos médios (FM = 6 a 10 mm) e folículos grandes (FG = > 10 mm)]. Posteriormente, todos os folículos &ge; 2 mm foram puncionados e o total de estruturas recuperadas, quantidade e qualidade de oócitos viáveis foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à produção in vitro e o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto) foi avaliado. Sêmen sexado do mesmo touro e partida foi utilizado para fertilização dos oócitos de todas as categorias de doadoras. Os embriões produzidos (n = 206) foram transferidos em receptoras cruzadas (Bos taurus x Bos indicus) de corte. Número de folículos no dia da OPU, proporção de folículos conforme o diâmetro, número de oócitos totais e viáveis recuperados, taxa de recuperação, taxa de clivagem, número de embriões produzidos por OPU e taxa de blastocisto foram variáveis analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg; e a taxa de concepção pelo teste exato de Fisher. Não foi observada diferença entre os grupos experimentais quanto ao número total de folículos aspirados (PP: 18,3 ± 2,1; PU: 17,3 ± 1,2; VL: 14,0 ± 1,0; VNL: 17,7 ± 1,7; P = 0,08). Entretanto, verificou-se que as doadoras PP apresentaram maior proporção de folículos pequenos (PP: 58,4% a; PU: 45,7% b; VL: 41,7% b; VNL: 50,6% b; P < 0,0001) quando comparado às demais categorias. Apesar do semelhante número de oócitos totais recuperados (PP: 14,2 ± 2,2; PU: 13,1 ± 1,1; VL: 9,8 ± 1,1; VNL: 14,6 ± 1,7; P = 0,12), PP apresentaram quantidades intermediárias de oócitos viáveis (PP: 10,5 ± 1,8ab; PU: 8,3 ± 0,8 ab), sendo que VNL obtiveram maior número de oócitos viáveis (11,5 ± 1,4 a; P = 0,03) quando comparadas às VL (6,5 ± 0,9 b). Ainda, doadoras PP apresentaram menor taxa de clivagem (PP: 68,6% b; PU: 98,8% a; VL: 87,6% a; VNL: 90,1% a; P < 0,0001), menor número de embriões produzidos por sessão de OPU (PP: 0,5 ± 0,2 b; PU: 1,1 ± 0,2 b; VL: 1,2 ± 0,4 b; VNL: 4,2 ± 0,6 a; P < 0,0001) e menor taxa de blastocisto (PP: 4,8% c; PU: 12,7% b; VL: 18,0% b; VNL: 36,5% a; P < 0,0001) quando comparada às demais categorias. Por fim, observou-se diferença na taxa de concepção após transferência de embriões oriundos de doadoras novilhas e vacas [PP: 0,0% (0/15) b; PU: 9,7% (3/28) b; VL: 28,6% (10/25) a; VNL: 32,7% (36/74) a; P < 0,05]. Dessa forma, conclui-se que doadoras pré-púberes da raça Holandesa apresentam baixa competência para produção in vitro de embriões, sendo vacas não lactantes a categoria mais eficiente para programas de PIVE. Ainda, embriões de novilhas pré-púberes apresentam taxas de concepção inferiores a de embriões de vacas lactantes e não lactantes. Entretanto, taxas de concepção semelhantes foram verificadas entre embriões de novilhas pré-púbere e púberes. / The in vitro embryo production of high productive dairy cows (Bos taurus) presents low efficiency in comparison to Bos indicus females. In this context, the use of heifers of 8-10 months age as oocyte donors could be an alternative in order to improve results of this biotechnology and accelerate the genetic gain by the reduction of the interval between generations. However, informations about the in vitro production of embryos coming from prepubertal donors are controversial at literacture. Thus, the objective of the present study was to evaluate the in vivo ovum pick-up (OPU), followed by in vitro embryo production of prepubertal Holstein donors and the conception rate after embryo transfer. The study was performed at Santa Rita farm, with a completely randomized experimental design, performed in six consecutive replicates with distinct animals. A total of 120 donors of four animal categories: prepubertal heifers (PP, n = 30), pubertal heifers (PU, n = 30), lactating cows (LC, n = 30) and non-lactating cows (NLC, n = 30) were submitted to OPU without previous synchronization of follicular wave. Six OPU sessions ware performed with five animals of each category i.e., 20 donors per session. Immediately before the OPU, all follicles were quantified and classified according to their diameter [small (SF &le; 6 mm), medium (MF = 6 to 10 mm) and large (LF &ge; 10 mm) follicles]. Subsequently, all visible follicles (&ge; 2 mm) were punctured and the total recovered structures, quantity and quality of viable oocytes were registered. All viable oocytes were submitted to the in vitro embryo production and their development (cleavage and blastocyst rate) was evaluated. Sex-sorted sperm from the same bull and semen batch were used for the oocytes fertilization of all donor categories. The embryos produced (n = 206) were transferred in crossbred recipients (Bos taurus x Bos indicus). Number of follicles at OPU day, proportion of follicles according to its diameter, number of total and viable oocytes, recovery rate, clivage rate, number of embryos produced per OPU and blastocyst rate were the variables analyzed by the GLIMMIX procedure of SAS&reg; and conception rate by the Fishers exact test. No difference was observed between the experimental groups, regarding the total number of aspirated follicles (PP: 18.3 ± 2.1; PU: 17.3 ± 1.2; LC: 14.0 ± 1.0; NLC: 17.7 ± 1.7; P = 0.08). However, PP donors presented higher proportion of small follicles (PP: 58.4% a; PU: 45.7% b; LC: 41.7% b; NLC: 50.6% b; P < 0.0001) in comparison to other categories. Despite the similar number of total recovered oocytes (PP: 14.2 ± 2.2; PU: 13.1 ± 1.1; LC: 9.8 ± 1.1; NLC: 14.6 ± 1.7; P = 0.12), PP presented intermediate quantity of viable oocytes (PP: 10.5 ± 1.8 ab; PU: 8.3 ± 0.8 ab) and NLC produced more viable oocytes (11.5 ± 1.4 a; P = 0.03) in comparison to LC (6.5 ± 0.9 b). Still, PP donors presented lower clivage rate (PP: 68.6% b; PU: 98.8% a; LC: 87.6 a; NLC: 90.1 a; P < 0.0001), fewer embryos produced per OPU session (PP: 0.5 ± 0.2 b; PU: 1.1 ± 0.2 b; LC: 1.2 ± 0,4 b; NLC: 4.2 ± 0.6 a; P < 0.0001) and lower blastocyst rate (PP: 4.8% c; PU: 12.7% b; LC: 18.0% b; NLC: 36.5% a; P < 0.0001) in comparison to other categories. Lastly, it was observed a different conception rate among heifers and adult cows [PP: 0.0% (0/15)b; PU: 9.7% (3/28)b; LC: 28.6% (10/25)a; NLC: 32.7% (36/74)a; P < 0.05]. Thus, it is concluded that prepubertal Holstein donors present low competence for in vitro embryo production, being non-lactating cows the most efficient category for IVEP. Yet, PP embryos resulted in inferior conception rate in comparison to LC and NLC embryos. However, similar conception rate was verified between PP and PU embryos.
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Efeito da categoria (pré púberes, púberes e prenhes) na produção in vitro de embriões de novilhas da raça Holandesa / Effect of category (prepubertal pubertal and pregnant) on in vitro embryo production in Holstein heifers

Bernardo Marcozzi Bayeux 02 June 2017 (has links)
O objetivo do presente estudo foi avaliar a produção in vitro de embriões (PIVE) em novilhas da raça Holandesa. Um total de 179 novilhas de três categorias [novilhas pré púberes (PP), n = 60; novilhas púberes (PU), n = 60 e novilhas prenhes (PR), n = 59)] foram submetidas à aspiração folicular (OPU) sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com dez animais de cada categoria por réplica. O total de estruturas recuperadas e a quantidade e qualidade de oócitos foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à PIVE e foi avaliado o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto). Foi utilizado sêmen de um único touro e de mesma partida para fertilização dos oócitos. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg;. Novilhas PU apresentaram maior população folicular quando comparadas às novilhas PP e PR (PP = 13,7b&#177; 1,43; PU = 20,2 &#177; 1,64a; PR = 14,0 &#177; 1,74b; P = 0,0002). Não foi verificada diferença na taxa de recuperação de oócitos entre os grupos experimentais (PP = 66,6%; PU = 75,4%; PR = 62,9%; P = 0,26). No entanto, houve maior número de oócitos recuperados em novilhas PU quando comparado às demais categorias (PP = 9,75 &#177; 1,29b; PU = 15,6 &#177; 1,42a; PR = 9,85 &#177; 1,60b; P = 0,002). Não houve diferença na taxa de oócitos viáveis (PP = 48,5%; PU = 58,9% e PR = 58,3%; P = 0,41), entretanto, a taxa de clivagem foi inferior em novilhas PP (PP = 28,2%c; PU = 55,2%b; PR = 67,8%a; P &lt; 0,0001). Além disso, a taxa de blastocisto (PP = 2,3%c; PU = 11,9%b; PR = 20,3%a; P &lt; 0,0001) e o número de embriões produzidos por OPU (PP = 0,13 &#177; 0,05c; PU = 0,90 &#177; 0,17b; PR = 1,76 &#177; 0.32a; P &lt; 0,0001) foi inferior em novilhas PP. Os dados do presente estudo são indicativos de que novilhas PR apresentam maior eficiência na PIVE quando comparadas às novilhas PP e PU. Ainda, observa-se que os resultados da PIVE em novilhas PP são significativamente inferiores às novilhas PU. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a produção in vitro de embriões (PIVE) em novilhas da raça Holandesa. Um total de 179 novilhas de três categorias [novilhas pré púberes (PP), n = 60; novilhas púberes (PU), n = 60 e novilhas prenhes (PR), n = 59)] foram submetidas à aspiração folicular (OPU) sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com dez animais de cada categoria por réplica. O total de estruturas recuperadas e a quantidade e qualidade de oócitos foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à PIVE e foi avaliado o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto). Foi utilizado sêmen de um único touro e de mesma partida para fertilização dos oócitos. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg;. Novilhas PU apresentaram maior população folicular quando comparadas às novilhas PP e PR (PP = 13,7b&#177; 1,43; PU = 20,2 &#177; 1,64a; PR = 14,0 &#177; 1,74b; P = 0,0002). Não foi verificada diferença na taxa de recuperação de oócitos entre os grupos experimentais (PP = 66,6%; PU = 75,4%; PR = 62,9%; P = 0,26). No entanto, houve maior número de oócitos recuperados em novilhas PU quando comparado às demais categorias (PP = 9,75 &#177; 1,29b; PU = 15,6 &#177; 1,42a; PR = 9,85 &#177; 1,60b; P = 0,002). Não houve diferença na taxa de oócitos viáveis (PP = 48,5%; PU = 58,9% e PR = 58,3%; P = 0,41), entretanto, a taxa de clivagem foi inferior em novilhas PP (PP = 28,2%c; PU = 55,2%b; PR = 67,8%a; P &lt; 0,0001). Além disso, a taxa de blastocisto (PP = 2,3%c; PU = 11,9%b; PR = 20,3%a; P &lt; 0,0001) e o número de embriões produzidos por OPU (PP = 0,13 &#177; 0,05c; PU = 0,90 &#177; 0,17b; PR = 1,76 &#177; 0.32a; P &lt; 0,0001) foi inferior em novilhas PP. Os dados do presente estudo são indicativos de que novilhas PR apresentam maior eficiência na PIVE quando comparadas às novilhas PP e PU. Ainda, observa-se que os resultados da PIVE em novilhas PP são significativamente inferiores às novilhas PU. The objective of the present study was to evaluate the in vitro embryo production in Holstein heifers. A total of 179 heifers of three categories [prepubertal heifers (PP), n = 60; pubertal heifers (PU), n = 60 and; pregnant heifers (PR), n = 59)] were submitted to Ovum Pick-Up (OPU) without previous synchronization of follicular wave. Six OPU sessions were conducted with ten animals of each category per session. The total number of retrieved structures and the quantity and quality of the oocytes were registered. The viable oocytes were submitted to in vitro embryo production and the embryonic development (cleavage and blastocyst rates) was assessed. Semen from a single sire was used for oocytes fertilization. The variables were analyzed using the GLIMMIX procedure of SAS&reg;. PU heifers presented greater follicular population when compared to the PP and PR heifers (PP = 13.7b &#177; 1.43; PU = 20.2 &#177; 1.64a; PR = 14.0&#177; 1.74b; P = 0.0002). No difference was observed among the experimental groups regarding the oocyte recovery rate (PP = 66.6%; PU = 75.4%; PR = 62.9%; P = 0.26). However, PU heifers had more recovered oocytes when compared to the other categories (PP = 9.75 &#177; 1.29b; PU = 15.6 &#177; 1.42a; PR = 9.85 &#177; 1.60b; P = 0.002). There was no significant differences on the viable oocytes rate (PP = 48.5%; PU = 58.9% and PR = 58.3%; P = 0.41). Moreover, the cleavage rate was lower in PP heifers (PP = 28.2%c; PU = 55.2%b; PR = 67.8%a; P &lt; 0.0001). The blastocyst rate (PP = 2.3%c; PU = 11.9%b; PR = 20.3%a; P &lt; 0.0001) and the number of produced embryos per OPU (PP = 0.13 &#177; 0.05c; PU = 0.90 &#177; 0.17b; PR = 1.76 &#177; 0.32a; P &lt; 0.0001) was lower for PP heifers. The data of the present study indicate that PR heifers present higher efficacy on the in vitro embryo production when compared to PP and PU heifers. Furthermore, it is observed that the IVEP results in PP heifers is significantly inferior to PU heifers.
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Ganho de Peso de Novilhas Mesti?as Leiteiras Submetidas ou N?o ? Restri??o Alimentar Antes do Per?odo Seco / Compensatory Growth of Crossbred heifers (Holstein-zebu) Fed a Proteic-energetic Supplement in the Dry Season

Valente, Tiago Neves Pereira 31 July 2006 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-28T14:59:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Tiago Neves Pereira Valente.pdf: 399035 bytes, checksum: 03083e58f68f730df2aa96f8f9ff5034 (MD5) Previous issue date: 2006-07-31 / This study was carried out on the Serop?dica Experimental Station of Pesagro, Rio de Janeiro, Brazil, from April 7 to October 6 of 2005 (182 days of dry season) and utilized two groups of 11 dairy heifers (Holstein/Zebu) weighting 177,6?6 kg and 15,7?4 months age. In the pre-experimental period, for 49 days (April 7 to May 26), 11 heifers were mantained closed into a stall and submitted to a forced restriction in their daily dry matter intake which resulted in small lost of body weight (-2,9 kg in relation of initial weight) and others 11 heifers were mantained free on the pasture and gained 30,2 kg in relation to their initial weight. After this pre-experimental period, both groups were kept on the same grazing area and received a proteic-energetic supplement containing 30% urea, 30% NaCl and 40% of wheat middlings. Both groups were weighted at each 21 days; on the same data, only the group that suffered forced alimentary restriction was evaluated for their body condiction score (BCS). The animals that suffered an alimentary restriction had higher daily weight gain troughout the dry season. At the end of the experimental period the difference between the two groups was 15,6 kg. The values for body condiction score were different in the period of lost of body weight and in the re-growth phase; i.e. for a lost of 14,3 kg of body weigth the heifers had 0,68 units in their BCS and for a gain of 48,2 kg of body weigth, during the proteic-energetic supplementary phase, the same heifers had + 0,31 units of BCS. / O experimento foi realizado na ?rea de bovinos leiteiros da Esta??o Experimental de Serop?dica (EES) da Pesagro-Rio com dura??o de 182 dias de 07/04/05 a 06/10/05. Foram utilizadas 22 novilhas mesti?as leiteiras (Holand?s-Zebu), com idade de 15,7?4 meses e peso m?dio de 177,6?6 kg no in?cio do experimento, o objetivo foi avaliar o ganho de peso das novilhas que passaram por restri??o alimentar antes do per?odo seco e a utiliza??o de um suplemento prot?ico-energ?tico durante o per?odo de estiagem. A ?rea foi dividida em dois piquetes de tamanho similar formados por pastagens naturais de grama batatais (Paspalum notatum) e capim bel?m (Sporobulus poiretii), foram vedados 50 dias antes do in?cio do experimento, e os animais manejados em regime de pastejo cont?nuo. O per?odo pr?-experimental teve dura??o de 49 dias e um lote de onze novilhas permaneceu preso no curral com alimenta??o volumosa limitada, esta restri??o alimentar gerou uma diferen?a entre os dois lotes de 31,5 kg no in?cio do experimento. O lote controle permaneceu mantido no pasto. Ap?s o per?odo de restri??o alimentar os dois lotes foram mantidos nos piquetes e receberam um suplemento prot?ico-energ?tico que continha 30% de ur?ia, 30% NaCl e 40% de farelo de trigo. Juntamente com as pesagens a cada 21 dias, notas para escore corporal foram dadas aos animais de ambos os lotes. As novilhas que foram submetidas ? restri??o alimentar antes do per?odo seco tiveram um ganho de peso superior ao lote controle durante a esta??o seca, indicando que um poss?vel crescimento compensat?rio, mesmo no per?odo desfavor?vel do ano. Na pesagem ap?s 69 dias do final da suplementa??o verificou-se que a diferen?a de peso foi reduzida de 15,6 kg ao final da suplementa??o prot?ico-energ?tica para 13,5 kg. Os escores corporais foram diferentes para o emagrecimento e engorda.
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Gene expression analyses on adipose tissue of Nellore peripubertal heifers reveal genes that have an impact on reproductive physiology / Análise da expressão gênica do tecido adiposo em novilhas Nelore púberes revela interação entre tecidos reprodutivos

Paula Suarez Henriques 14 February 2017 (has links)
Pubertal development is an outcome of genes\' interaction producing molecular signals that rule physiological mechanisms. Understanding the genetic changes surrounding the peripubertal period in Nellore heifers could unveil certain differences in age at puberty because they reach sexual maturity much later than European heifers. The adipose tissue regulates energy metabolism and is an endocrine organ with active participation in reproductive processes .The present study aimed at understanding the functions of the adipose tissue around pubertal time in Nellore heifers. Our strategy was to search for differences in gene expression between prepubertal and pubertal animals. We quantified gene expression in the adipose tissue for Nellore heifers who reached puberty according to either the early or late pattern. This research was done on 30 Nellore heifers monitored weekly from 230 kg bodyweight until the onset of puberty through gynaecological ultrasound examination. The onset of puberty was defined by the presence of corpus luteum in the ovary and blood progesterone > 1 ng/ml. Adipose tissue was collected through subcutaneous biopsy; the first biopsy was done when heifers reached 230 kilos bodyweight and subsequently once a month until they entered puberty. Biopsies were collected of each heifer that reached puberty alongside its half-sister who had not reached puberty. We analysed samples of six early pubertal heifers and their six late pubertal sisters at two different stages: at the time of ovulation and approximately 50 days before ovulation. The RNA was extracted from the biopsies\' tissue and gene expression quantified through RNA sequencing. There were nine genes differentially expressed in pubertal heifers that have been found previously correlated with reproductive traits and/or processes in mammals on other studies. These genes were APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B and CYP26B1, already found expressed in adipocytes, hypothalamus, ovaries and uterus, corroborating previous knowledge of a link among energy metabolism, reproductive organs and neural influence. By measuring the genetic changes and correlating them with known physiological mechanisms on the nervous system and reproductive organs during puberty, we detected genes expressed here that are related to modifications in the organism as a whole. Therefore the adipose tissue may be regarded as an instrument to indicate what is going on during reproductive processes. The results presented here may aid in a better understanding of genetic changes happening during peripubertal period. / O desenvolvimento púbere é o resultado da interação de genes que produzem sinais moleculares regulando os mecanismos fisiológicos. A compreensão das mudanças genéticas que permeiam o período peripuberal em novilhas Nelore (Bos indicus) poderia desvendar o porquê das diferenças em idade a puberdade, pois elas atingem a maturidade sexual mais tarde que o gado europeu (Bos taurus). O tecido adiposo regula o metabolismo de energia e é um órgão endócrino que tem participação ativa em processos reprodutivos. O presente estudo teve como objetivo entender as funções do tecido adiposo na época peripubertal em novilhas Nelore. Nossa estratégia foi procurar diferenças em expressão gênica entre animais pré-púberes e púberes. Nós quantificamos a expressão gênica no tecido adiposo de novilhas Nelores precoces ou tardias. A pesquisa foi feita em 30 novilhas Nelore, monitoradas semanalmente a partir do momento em que atingiram 230 kg de peso até a manifestação da puberdade por exame de ultrassom ginecológico. O momento da puberdade foi definido pela presença de corpo lúteo no ovário e concentração sanguínea de progesterona maior que > 1 ng/ml. O tecido adiposo foi coletado por biópsia subcutânea; a primeira biópsia foi feita quando as novilhas alcançaram 230 quilos de peso e subsequentemente uma vez por mês ate que elas entrassem em puberdade. As biópsias foram coletadas de cada novilha que atingiu a puberdade e de sua meia-irmã que não tinha atingido a puberdade. Nós analisamos amostras de seis novilhas púberes precoces e de seis novilhas púberes tardias em dois estágios diferentes: no momento da ovulação e aproximadamente 50 dias antes da ovulação. O RNA foi extraído do tecido das biopsias e a expressão genica quantificada através de sequenciamento de RNA. Encontramos nove genes diferencialmente expressos em novilhas púberes que foram previamente relacionados com características e/ou processos reprodutivos de mamíferos em outros estudos. Esses genes foram APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B e CYP26B1, já encontrados expressos em adipócitos, hipotálamo, ovários e útero, comprovando conhecimento prévio da conexão existente entre metabolismo de energia, órgãos reprodutivos e influencia neural. Ao medir as mudanças genéticas e correlacioná-las com mecanismos fisiológicos conhecidos em sistema nervoso e órgãos reprodutivos durante a puberdade, nós conseguimos identificar genes expressos em adiposo que são relacionados a modificações no organismo como um todo. Sendo assim, o tecido adiposo pode ser considerado um instrumento para indicar o que está acontecendo durante os processos reprodutivos. .Os resultados apresentados aqui podem ajudar na melhor compreensão de mudanças genéticas durante o período peripuberal.

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