A prevalência do câncer de próstata está aumentando ao longo dos anos, o que vem gerando diversos estudos em busca de seu melhor entendimento. O envolvimento dos andrógenos, incluindo a testosterona, como potencial fator etiológico no câncer de próstata tem sido questionado e debatido na literatura, permanecendo o seu papel discutível e não completamente entendido. Método: a população em estudo foi composta por homens submetidos à biópsia de próstata por suspeita de neoplasia prostática no período de Março de 2006 a Dezembro de 2007. Esta população foi dividida em três grupos de acordo com o resultado anatomopatológico da biópsia em ausência de neoplasia, proliferação atípica de pequenos ácinos (ASAP) e câncer de próstata. Os indivíduos foram avaliados quanto aos dados demográficos, como idade, índice de massa corporal, raça, tabagismo e presença de doenças crônicas. Além das dosagens do antígeno prostático específico (PSA), testosterona total (TT), hormônio folículo estimulante (FSH) e luteinizante (LH), prolactina e estradiol. Para fins de significância estatística considerou-se um P<0.05. Resultados: Cento e oitenta e seis homens foram submetidos à biópsia de próstata neste período. Destes, inicialmente 123 tiveram como resultado ausência de neoplasia, 26 com ASAP e 37 com câncer de próstata. Após considerar os resultados da re-biópsia dos indivíduos com ASAP, o número de indivíduos com câncer de próstata passou para 45 e os verdadeiros ASAP para 18 homens. Os grupos foram similares quanto à idade, índice de massa corporal, raça, tabagismo, presença de doenças crônicas e nível sérico de PSA total (P>0.05). Os níveis médios séricos de TT, FSH, LH, prolactina e estradiol foram similares entre os diferentes grupos (P>0.05). Não se encontrou uma maior prevalência de homens hipogonádicos entre aqueles com diagnóstico de câncer de próstata assim como o escore de Gleason foi similar entre os grupos estudados (P>0.05) Conclusão: O presente estudo não demonstrou níveis séricos distintos de TT, FSH, LH, prolactina e estradiol em homens com biópsia de próstata com ausência de neoplasia, proliferação atípica de pequenos ácinos ou câncer de próstata.

BEZERRA, Fernanda Carvalho. Participação dos hormônios tireoideanos no desenvolvimento de hiperreatividade induzida pelo desafio antigênico com ovalbumina em traquèias isoladas de ratos sensibilizados. 2005. 140 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-26T12:16:26Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_fcbezerra.pdf: 6076717 bytes, checksum: 14933ae572a57c7bc7813ee36cd8acfe (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-26T12:24:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_fcbezerra.pdf: 6076717 bytes, checksum: 14933ae572a57c7bc7813ee36cd8acfe (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-26T12:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_fcbezerra.pdf: 6076717 bytes, checksum: 14933ae572a57c7bc7813ee36cd8acfe (MD5) Previous issue date: 2005 / In other to verify the influence of thyroid hormones on the tracheal hyperreactivity development, euthyroid, hypothyroid (propiltiouracil [PTU] - p.o. 0.05% w/v, 4 weeks) or hyperthyroid (L-tiroxine [T4] – 0.5 mg/kg s.c.,7 or 9 days) male rats (200 - 250 g) were sensitized to ovalbumine (OVA) and, 14 days later, challenged with OVA inhalation, (1 mg/ml, followed by 5 mg/ml, 15 min each). Animals sacrifice was carried out 24 later by means of anaesthesia with chloral hydrate (400 mg/Kg). Isolated trachea was mounted in 10 ml bath chamber filled with modified Krebs-Henseleit (37 oC, 5% de CO2 em O2). Concentration-effect curves (CEC) were carried out for potassium chloride (KCl), carbachol (CCh) or serotonin (5-HT). CEC to Ca2+ added in tissues maintained in Ca2+-free medium stimulated with KCl, CCh or 5-HT also were carried out. Antigenic challenge produced significant increase (p < 0.05, two-way ANOVA) of the maximal response (Emax) of the CCE for KCl from 0.96 ± 0.10 gF to 1.53 ± 0.11 gF (n = 7), for CCh from 1.98 ± 0.06 gF to 2.92 ± 0.07 gF (n = 7) and for 5-HT from 1.64 ± 0.14 gF to 2.41 ± 0.15 (n = 6) in tissues obtained from sensitized or challenged animals, respectively. Tracheae also showed increase on the Emax to Ca2+ (p < 0.05, two-way ANOVA) when stimulated with KCl from 0.54 ± 0.06 gF to 0.86 ± 0.07 gF (n = 6), with CCh from 1.20 ± 0.14 gF to 1.77 ± 0.14 gF (n = 6) or with 5-HT from 0.59 ± 0.10 gF to 1.15 ± 0.05 gF (n = 6) on sensitized or challenged tissues, respectively. The hypothyroidism did not modify significantly the KCl- or CCh-induced Emax, while the 5-HT-induced contractile effect was reduced from 1.64 ± 0.14 gF in euthyroid tissues to 0.34 ± 0.07 gF in hypothyroid tissues (p < 0.001, two-way ANOVA). After challenge, 5-HT produced in hypothyroid tissues a contraction corresponding to 0.56 ± 0.11 gF (n = 7, p < 0.001, two-way ANOVA). Hypothyroidism prevented hyperreactivity development for KCl and CCh. It was observed an increased EC50 value in CCE for CCh from 0.49 x 10-6M to 4.65 x 10-6 M (p < 0,05, two-way ANOVA). After challenge, CE50 value was reduced to 1.53 x 10-6 M (n = 6, p < 0,05, two-way ANOVA). Tracheae from challenged hypothyroid animals showed decreased Emax to Ca2+ when they were stimulated with KCl, CCh and 5-HT. It was observed an increased EC50 value in CCE to Ca2+ in challenged tissues stimulated with CCh from 5.77 x 10-4 M to 22.50 x 10-4 M (n = 6, p < 0.01, two-way ANOVA). Hyperthyroidism significantly increased Emax of the KCl-induced CCE (0.96 ± 0,10 gF in control versus 1.58 ± 0.15 on hyperthyroid tissue). Hyperreactivity was not showed after antigenic challenge (Emax = 1.87 ± 0.14 gF). It was observed a reduction of the EC50 value to CCh from 0.67 x 10-4 M in control to 0.14 x 10-4 M after T4 treatment. Our results show that there is a putative thyroid hormones involvement in hyperreactivity development on rat trachea, after an antigenic challenge. / Com o objetivo de verificar a influência dos hormônios tireoideanos no desenvolvimento de hiperreatividade traqueal, ratos machos (200 - 250 g) eutireóideos, hipotireóideos (propiltiouracil [PTU] - v.o. 0,05% p/v, durante 4 semanas) ou hipertireóideos (L- tiroxina [T4] - 0,5 mg/kg s.c., por 7 ou 9 dias) foram sensibilizados à ovalbumina (OVA) e, 14 dias depois, desafiados através da inalação de OVA (1 mg/ml, seguida de 5 mg/ml, 15 min cada). O sacrifício dos animais para a realização dos experimentos ocorreu 24 h após o desafio antigênico por anestesia com hidrato de cloral (400 mg/Kg). A traquéia isolada foi montada em cubas contendo 10 ml de Krebs-Henseleit modificado (37 oC, 5% de CO2 em O2). Foram obtidas curvas concentração-efeito (CCE) para cloreto de potássio (KCl), carbacol (CCh) ou serotonina (5-HT). Também foram realizadas CCE ao Ca2+ em preparações estimuladas por KCl, CCh ou 5-HT e mantidas em solução sem Ca2+. A reapresentação do antígeno promoveu significativo aumento (p < 0,05, two-way ANOVA) da resposta máxima (RM) das CCE ao KCl de 0,96 ± 0,10 gF para 1,53 ± 0,11 gF (n = 7), ao CCh de 1,98 ± 0,06 gF para 2,92 ± 0,07 gF (n = 7) e à 5-HT de 1,64 ± 0,14 gF para 2,41 ± 0,15 (n = 6) nos tecidos obtidos de animais sensibilizados ou desafiados, respectivamente. As traquéias também apresentaram aumento (p < 0,05, two-way ANOVA) da RM ao Ca2+ quando estimuladas com KCl de 0,54 ± 0,06 gF para 0,86 ± 0,07 gF (n = 6), com CCh de 1,20 ± 0,14 gF para 1,77 ± 0,14 gF (n = 6) ou com 5-HT de 0,59 ± 0,10 gF para 1,15 ± 0,05 gF (n = 6) nos tecidos obtidos de animais sensibilizados ou desafiados, respectivamente. O hipotireoidismo não alterou significativamente a RM induzida por KCl e CCh, enquanto que aquela induzida pela 5-HT foi reduzida de 1,64 ± 0,14 gF nos animais eutireóideos para 0,34 ± 0,07 gF nos animais hipotireóideos (p < 0,001, two-way ANOVA). Após desafio, a 5-HT produziu 0,56 ± 0,11 gF (n = 7) no tecido hipotireóideo (p < 0,001, two-way ANOVA). O hipotireoidismo aboliu o desenvolvimento de hiperreatividade para KCl e CCh. Ocorreu um aumento na CE50 nas CCE obtidas ao CCh de 0,49 x 10-6M para 4,65 x 10-6M (P < 0,05, two-way ANOVA ). O desafio reduziu a CE50 novamente para 1,53 x 10-6M (n = 6, p<0,05, two-way ANOVA). As traquéias de animais hipotireóideos desafiados apresentaram diminuição da RM ao Ca2+ quando estimuladas com KCl, CCh e 5-HT. Ocorreu aumento na CE50 nas CCE ao Ca2+ em traquéias desafiadas e estimuladas com CCh de 5,77 x 10-4 M para 22,50 x 10-4 M (n = 6, p<0,01 two-way ANOVA). O hipertireoidismo promoveu um significativo aumento na RM das CCE apenas ao KCl (0,96 ± 0,10 gF no controle versus 1,58 ± 0,15 no tecido hipertireóideo). Não houve desenvolvimento de hiperreatividade após o desafio antigênico (RM = 1,87 ± 0,14 gF). Ocorreu diminuição da CE50 ao CCh de 0,67 x 10-4 M no controle para 0,14 x 10-4 M após tratamento com T4. Os resultados mostram que há envolvimento dos hormônios tireoideanos no desenvolvimento de hiperreatividade em traquéia de rato, induzida após reapresentação do antígeno a animais previamente sensibilizados.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-06-06T13:50:59Z No. of bitstreams: 1 2011_MarianiCarlaPrudenteBatista.pdf: 2376937 bytes, checksum: 7fb074f870b25dd1772145cb9a2403b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-14T14:36:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MarianiCarlaPrudenteBatista.pdf: 2376937 bytes, checksum: 7fb074f870b25dd1772145cb9a2403b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-14T14:36:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MarianiCarlaPrudenteBatista.pdf: 2376937 bytes, checksum: 7fb074f870b25dd1772145cb9a2403b8 (MD5) / Síndrome dos Ovários Policísticos (SOP) é um distúrbio endócrino complexo, de etiologia multifatorial, comum nas mulheres em fase reprodutiva, considerada a principal causa de infertilidade anovulatória, distúrbios menstruais e hiperandrogenismo nessa população. Dados atuais suportam que a SOP pode aumentar o risco para o desenvolvimento de diabetes mellitus tipo 2, dislipidemia, doenças cardiovasculares e carcinoma endometrial, enfatizando a necessidade de diagnóstico precoce da síndrome. Embora ainda não completamente elucidados, seus mecanismos moleculares e celulares envolvem anormalidades intrínsecas na esteroidogênese ovariana e adrenal, sugerindo um defeito esteroidogênico primário. Anormalidades neuroendócrinas parecem estar envolvidas na sua etiopatogenia, representadas principalmente pela pulsatilidade excessiva do LH, com aumento na amplitude dos seus pulsos, resultado de um aumento da sensibilidade da hipófise à estimulação GnRH. A base genética da SOP é desconhecida. Reporta-se significativa agregação familiar, entretanto, a determinação do seu modo de herança é difícil, uma vez que a apresentação clínica é muito heterogênea. Vários genes candidatos já foram avaliados com foco, recentemente, naqueles que codificam as enzimas esteroidogênicas na via de biossíntese de andrógenos e os envolvidos na secreção e ação da insulina. Considerando a repercussão funcional de variantes da subunidade beta específica do LH na fisiopatogenia de disfunções reprodutivas, o estudo ampliado da freqüência dos polimorfismos do gene LHB deve ajudar a esclarecer a heterogeneidade de suas manifestações clínicas, particularmente aquelas relacionadas à hiperandrogenemia. Estudamos assim a prevalência desses polimorfismos em controles (n=85) e casos de SOP (n=130) e sua associação com parâmetros clínicos e laboratoriais da síndrome. Através de seqüenciamento genético detectamos 11 polimorfismos na região codante do LHB, sendo 1 deles (233C>A/Thr78Asn) ainda não descrito na literatura. Na análise de associação entre a detecção destes polimorfismos e a presença de SOP, o poder estatístico consequente ao tamanho de nossas amostras não permitiu a observação de associações estatisticamente significativas, mas o nível de associação entre a presença do novo polimorfismo descoberto (233C>A/Thr78Asn) com a presença de SOP revelou um OR= 3,96 (95% IC= 0,43-189,12), sugerindo uma ligação a ser mais explorada em amostras maiores. A distribuição dos parâmetros clínicos estudados ficaram dentro dos níveis reportados na literatura. Observamos, entretanto, que dois polimorfismos, que segregam em desequilíbrio de ligação, são significativamente mais prevalentes na presença da hiperandrogenemia: rs1800447/rs34349826 (Trp28Arg/Ile35Thr) (p=0,015) e outros 2 parecem proteger contra hirsutismo severo embora estas associações não tenham apresentado resultados estatisticamente significativos em nível de p<0,05, mas de p<0,01: rs6521 (Val38=) (p=0,094) e 233C>A (p=0,063). Os resultados do nosso estudo corroboram outros recentemente publicados na literatura em que não foi possível demonstrar um papel causal para os polimorfismos conhecidos do gene LHB no desenvolvimento da SOP. Revelamos, no entanto, que o novo polimorfismo detectado (233C>A) deve ser objeto de mais investigações. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) is a complex endocrine disorder, of multifactorial a etiology, common in women of reproductive age and considered the leading cause of anovulatory infertility, menstrual disorders, and hyperandrogenism in this population. PCOS is also a risk factor for the development of type 2 diabetes mellitus, dyslipidemia, cardiovascular disease, and endometrial carcinoma, which emphasizes the need for early diagnosis of the syndrome. Although not yet fully understood, its molecular and cellular mechanisms involve intrinsic ovarian and adrenal steroidogenesis abnormalities, suggesting these to be a primary defect. It appears that there are also accompanying neuroendocrine abnormalities along the natural history of PCOS, represented mainly by excessive luteinizing hormone (LH) pulsatility, with the amplified pulse amplitude resulting from increased sensitivity of the pituitary gland to GnRH stimulation. The genetic basis of PCOS is still largely unknown despite significant family clustering; determining its mode of inheritance is particularly difficult given the wide variability in clinical presentation. Several candidate genes have been evaluated with focus switching recently to genes that encode steroidogenic enzymes that regulate androgen biosynthesis and those involved in insulin secretion and action. The crucial functional role played by specific LH beta (LHB) subunits in various reproductive disorders makes these units natural candidates for elucidating the causal pathway and the many clinical manifestations of PCOS, particularly those related to hyperandrogenemia. The present project is a study of the prevalence of these polymorphisms in 85 controls and 130 PCOS cases and their association with clinical and laboratory parameters of the syndrome. Through genetic sequencing 11 polymorphisms were detected in the coding region of LHB, one of them, 233C>A/Thr78Asn, not yet described in the literature. No statistically significant associations were found between polymorphisms and the presence of PCOS, probably due to small sample size and consequent lack of statistical power, however, the level of association between detection of the newly discovered polymorphism (233C>A) and PCOS revealed an OR=3.96 (95% CI = 0.43-189.12), suggesting a possible connection to be further explored in larger samples. The distribution of the clinical parameters studied matched those already reported in the literature. Notable exceptions included two polymorphisms that secrete in link imbalance and were found to be significantly more prevalent in the presence of hyperandrogenemia: rs1800447/rs34349826 (Trp28Arg/Ile35Thr) (p=0.015) and two other which seemed to be protective against severe hirsutism. The latter however, were not found to be statistically significant at the level of p<0,05, but instead, at the level of p<0,01: rs6521 (Val38=) (p=0,094) e 233C>A (p=0,063). The results of this study corroborate other recently published in the literature in that it was not possible to demonstrate a causal role for the known LHB gene polymorphisms in PCOS. However, a newly detected polymorphism (233C>A) should probably be the object of further investigation.

A amígdala medial (MeA) é uma área sexualmente dimórfica que modula atividades neuroendócrinas e comportamentais e onde hormônios desempenham um importante papel na plasticidade neuro-glial e sináptica. Filamentos intermediários, como a proteína ácida fibrilar glial (GFAP) e a vimentina (VIM) são eficientes marcadores do citoesqueleto de astrócitos e sofrem modificações sob ação de hormônios gonadais. Os objetivos do presente estudo foram mensurar e estudar pela densitometria óptica a imunorreatividade dos filamentos intermediários e marcadores astrocitários GFAP e VIM (GFAP-ir; VIM-ir) nos três subnúcleos da amígdala medial, ântero-dorsal (MeAD), póstero-dorsal (MePD) e pósteroventral (MePV), de ratos machos e fêmeas durante o desenvolvimento pós-natal. Além disso, também foi investigada a GFAP-ir nas mesmas regiões de fêmeas adultas, tanto em condições fisiológicas de variação hormonal (ao longo do ciclo estral), como em situações suprafisiológicas (reposição hormonal após ovariectomia). Três experimentos foram realizados: o primeiro utilizou ratas Wistar nulíparas adultas durante as fases do ciclo estral (diestro, proestro, estro e metaestro; n = 20) para revelar diferenças provocadas pelos hormônios gonadais femininos na composição astrocitária dos subnúcleos da MeA. No segundo experimento, utilizaram-se fêmeas adultas nulíparas submetidas à ovariectomia (OVX) (n = 18) e tratadas com substituição hormonal de benzoato de estradiol adicionado ou não à progesterona. No terceiro experimento foram utilizados ratos machos e fêmeas durante o desenvolvimento pós-natal (n=72), cujas idades foram: 1 dia pós-natal (PN1), 5, (PN5), 11 (PN11), 21 (PN21), 31 (PN31) e 45 (PN45). Todos os animais foram fixados por perfusão transcardíaca e seus encéfalos foram removidos, pós-fixados e processados para técnica de imunoistoquímica do anticorpo não marcado. Os dados foram comparados entre os grupos por meio de um teste de análise da variância (ANOVA) de duas vias para medidas repetidas,sendo aplicados testes post-hoc Tukey-Kramer. Além disso, ratas em proestro apresentaram maior GFAP-ir do que nas outras fases do ciclo estral (diestro, estro e metaestro; P<0,02). GFAP-ir é maior no MePD do que no MePV ou no MeAD (P<0,02). Em fêmeas ovariectomizadas, injeções de estradiol adicionado ou não à progesterona provocaram aumento da GFAP-ir no MePD e no MePV (P<0,001), mas não no MeAD (P>0,3). Esses achados sugerem que a GFAP astrocitária pode ser afetada tanto por níveis fisiológicos de hormônios ovarianos quanto por manipulação hormonal destes esteróides, o que pode contribuir para a plasticidade neuro-glial relacionada a atividades locais e integradas destas áreas encefálicas em fêmeas. Ratos em desenvolvimento apresentam dimorfismo sexual nos subnúcleos da MeA investigados. VIM é substituída por GFAP ao longo do desenvolvimento pós-natal. Houve diferença entre os sexos na VIM-ir em PN1, sendo que machos apresentaram maior VIM-ir no MeAD (P=0,001) e no MePV, (P<0,0001); em PN5, no MePD, com fêmeas apresentando maior VIM-ir (P<0,0001); e, em PN21, em todos os três subnúcleos estudados, machos apresentaram maior VIM-ir (MeAD, P = 0,009; MePD, P<0,001; e, MePV, P=0,012). A comparação dos dados de GFAP-ir também apresentou diferenças significativas. A interação entre sexo e idade demonstrou que há dimorfismo sexual em PN1 (machos com maior GFAP-ir; P < 0,001) e em PN45 (fêmeas com maior GFAP-ir; P=0,033). Quanto à interação de sexo e subregiões da MeA, houve diferença estatística no MePV, onde machos apresentaram maior GFAP-ir (P<0,001). Já quanto à interação das idades e subregiões da MeA, houve diferenças entre as áreas estudadas em PN1 (MePV>MeAD e MePD; P<0,001), em PN5 (MePV>MeAD; P<0,003), e em PN45 (MePD>MeAD e MePV; P<0,001). Esses achados permitem concluir que o dimorfismo sexual da MeA está presente ainda em fases iniciais do desenvolvimento do SN de ratos, apresentando particularidades subregionais nesta estrutura.Além disso, as diferenças de composição astrocitárias encontradas nas subregiões estudadas da MeA, ao longo dodesenvolvimento, provavelmente se relacionam com a interação neurônio-glia em consonância com aspectos comportamentais e ajustes neuroendócrinos pertinentes a cada sexo, e a cada fase de diferenciação do sistema nervoso. / The medial amygdala (MeA) is a sexually dimorphic area that modulates neuroendocrinol and behavioral activities and where gonadal hormones play an important role in neuron-gial and synaptic plasticity. Intermediate filaments, like the glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM) are efficient markers of astrocytic cytoskeleton and are modified by gonadal hormones. The present study aimed to measure and study the optic densitometry of immunoreactivity in intermediate filaments and astrocytic markers GFAP and VIM (GFAP-ir; VIM-ir) in the three subnuclei; anterodorsal (MeAD), posterodorsal (MePD) and posteroventral (MePV) of the medial amygdala, of male and female rats during postnatal development. Moreover, the GFAP-ir in the same regions of adult females were also studied, in physiological conditions (across the estrous cycle), and by ovariectomy followed by ovarian hormone treatment. Three experiments were performed: the first used adult virgin females across the different phases of estrous cycle, diestrus, proestrus, estrus and metaestrus (n=20) in order to reveal any ovarian hormone induced alterations to astrocytic morphology in the MeA subnuclei. The second experiment used ovariectomized adult virgin (OVX) females (n=18) that received hormonal substitution with estradiol benzoate alone or plus progesterone. The third experiment used male and female Wistar rats (n=72) at different stages of postnatal development; postnatal day 1 (PN1), PN5, PN11, PN21, PN31 and PN45. All the animals were fixed by transcardiac perfusion and had their brains removed, post-fixed and processed following the unlabeled antibody procedure. The data were compared by two-way ANOVA for repeated measures and by the post-hoc Tukey-Kramer and t tests. The results show that the structural characteristics of GFAP-ir astrocytes in the MeA subnuclei are similar to those of other areas of the brain. Also, females in proestrus phase show higher GFAP-ir than the other phases of estrous cycle (diestrus, estrus and metaestrus) (P<0.02). GFAP-ir is higher in the MePD than in either the MePV or MeAD (P<0.02). In ovariectomized females,injections of estradiol alone or combined with progesterone led to an increase in GFAP-ir in both the MePD and MePV (P<0.001), but not in the MeAD (P>0.3), when compared to the control group data. These findings suggest that astrocytic GFAP may be affected by physiologic levels of ovarian hormones as well as by hormonal manipulation of these steroids, which may contribute to the neural plasticity related to local and integrated activities of these areas in the female rat brain. Developing rats showed sexual dimorphism in the investigated subnuclei of the MeA. VIM is apparently substituted by GFAP during postnatal development. In relation to VIM-ir, differences were found between the sexes: at PN1, males showed higher VIM-ir in the MeAD (P=0.001) and in the MePV (P<0.0001); at PN5, females showed higher VIM-ir in the MePD, (P<0.0001); and, at PN21, in all studied subnuclei, males showed higher VIM-ir in the (MeAD, P=0.009; MePD, P<0.001 and MePV, P=0.012). Significant differences were also found in relation to the GFAP-ir data. The interaction between sex and age showed that there is sexual dimorphism at PN1 (males with higher GFAP-ir; P<0.001) and at PN45 (females with higher GFAP-ir; P=0.033). The interaction between sex and the MeA subregions showed a significant difference in the MePV, where males showed higher GFAP-ir (P<0.001). With regard the interaction between age and the MeA subregions there were differences at PN1 (MePV>MeAD and MePD; P<0.001), at PN5 (MePV>MeAD; (P<0.003), and at PN45 (MePD>MeAD and MePV; P<0.001 in both sexes). These findings suggest the presence of sexual dimorphism in the MeA at early developmental phases of rat nervous system, exhibiting regional particularities in the MeA. Moreover, the morphological differences found in the astrocytes from the studied MeA subnuclei across the development are probably related to the neuron-glia interaction, in accordance with behavioral aspects and neuroendocrine adjustments pertinent to each sex, and each phase of differentiation of the nervous system.

A prevalência do câncer de próstata está aumentando ao longo dos anos, o que vem gerando diversos estudos em busca de seu melhor entendimento. O envolvimento dos andrógenos, incluindo a testosterona, como potencial fator etiológico no câncer de próstata tem sido questionado e debatido na literatura, permanecendo o seu papel discutível e não completamente entendido. Método: a população em estudo foi composta por homens submetidos à biópsia de próstata por suspeita de neoplasia prostática no período de Março de 2006 a Dezembro de 2007. Esta população foi dividida em três grupos de acordo com o resultado anatomopatológico da biópsia em ausência de neoplasia, proliferação atípica de pequenos ácinos (ASAP) e câncer de próstata. Os indivíduos foram avaliados quanto aos dados demográficos, como idade, índice de massa corporal, raça, tabagismo e presença de doenças crônicas. Além das dosagens do antígeno prostático específico (PSA), testosterona total (TT), hormônio folículo estimulante (FSH) e luteinizante (LH), prolactina e estradiol. Para fins de significância estatística considerou-se um P<0.05. Resultados: Cento e oitenta e seis homens foram submetidos à biópsia de próstata neste período. Destes, inicialmente 123 tiveram como resultado ausência de neoplasia, 26 com ASAP e 37 com câncer de próstata. Após considerar os resultados da re-biópsia dos indivíduos com ASAP, o número de indivíduos com câncer de próstata passou para 45 e os verdadeiros ASAP para 18 homens. Os grupos foram similares quanto à idade, índice de massa corporal, raça, tabagismo, presença de doenças crônicas e nível sérico de PSA total (P>0.05). Os níveis médios séricos de TT, FSH, LH, prolactina e estradiol foram similares entre os diferentes grupos (P>0.05). Não se encontrou uma maior prevalência de homens hipogonádicos entre aqueles com diagnóstico de câncer de próstata assim como o escore de Gleason foi similar entre os grupos estudados (P>0.05) Conclusão: O presente estudo não demonstrou níveis séricos distintos de TT, FSH, LH, prolactina e estradiol em homens com biópsia de próstata com ausência de neoplasia, proliferação atípica de pequenos ácinos ou câncer de próstata.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-12-01T17:14:06Z No. of bitstreams: 1 2014_AryanaDiasdeAbreu.pdf: 3642603 bytes, checksum: a30042e06dc63d97939caacfa7bcefbd (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-12-02T12:16:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AryanaDiasdeAbreu.pdf: 3642603 bytes, checksum: a30042e06dc63d97939caacfa7bcefbd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-02T12:16:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AryanaDiasdeAbreu.pdf: 3642603 bytes, checksum: a30042e06dc63d97939caacfa7bcefbd (MD5) / A superestimulação ovariana em bovinos é uma técnica caracterizada pelo aumento do número de folículos ovarianos que continuam o seu crescimento até à ovulação. Essa técnica consiste na administração de múltiplas injeções de hormônios gonadotrópico para manter o crescimento folicular, e com a finalidade de buscar novas formas de aplicações para diminuição do custo e do manejo dos animais o estudo in vitro apresenta-se como o passo inicial. A produção in vitro (PIV) de embriões bovinos compreende de três etapas, a maturação dos oócitos, a fecundação e o cultivo embrionário, sendo muito utilizada para fins econômicos e de pesquisa. O presente estudo visa ao desenvolvimento de micro e nanopartículas poliméricas para entrega sustentada, em sistemas de PIV, de hormônios adeno-hipofisários com o intuito de testar as suas atividades na expansão das células do cumulus. Após análise de produtos comerciais que oferecem atividade de FSH, por meio de espectrometria de massa MALDI TOF/TOF, a proteína precursora do hormônio adrenocorticotrópico (ACTH) foi identificada em algumas frações. Portanto, foi realizada sua síntese manualmente, pelo método da fase sólida, e purificação em sistema de cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e, em uma etapa subsequente foi realizada uma avaliação do papel do ACTH não encapsulado na maturação in vitro de oócitos bovinos. Posteriormente, foram formuladas nanopartículas (NPs) de quitosana pelo método de geleificação iônica para encapsular o ACTH e hormônio folículo estimulante (FSH). As NPs apresentaram diâmetro hidrodinâmico médio de 85 nm (ACTH) e de 159 nm (FSH), potencial Zeta de 51,83±1,67 mV (ACTH) e 48,5±5,41 mV (FSH) onde se obteve eficiência de encapsulamento de 30% (ACTH) e 60% (FSH). A microscopia de forma atômica (MFA) possibilitou uma avaliação qualitativa no que diz respeito à morfologia das NPs, onde as contendo ACTH apresentaram formatos variados e pequenos aglomerados, enquanto que as contendo FSH, formato aproximadamente esférico sem aglomerados. As NPs contendo FSH apresentaram atividade semelhante ao hormônio livre mesmo com 40% a menos do ativo, enquanto as ACTH-NPs não foram ativas sobre a maturação in vitro de oócitos bovinos. No que se refere à fecundação, a taxa de clivagem e de produção de blastocistos foi satisfatória apenas com as FSH-NPs. Conclui-se que as NPs contendo FSH são efetivas no processo de PIV de embriões bovinos, provendo a expansão das células do cumulus e a produção de blastocistos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The ovarian superstimulation in bovine is a technique characterized by an increase in the number of ovarian follicles which continue their growth until ovulation. This technique consists of administering multiple injections of gonadotropin hormones to maintain follicular growth, and in order to pursue new forms of applications to decrease the cost and handling of animals the in vitro study is presented as an initial step. In vitro production (PIV) of bovine embryos comprises three steps, oocyte maturation, fertilization and embryo culture, commonly used for economic and research purposes. This study aims at the development polymeric micro-and nanoparticles for sustained delivery in vitro production systems, hormones of the pituitary in order to test their activities in the expansion of cumulus cells. After analyzing the commercial product Folltropin-V that provides FSH activity through of MALDI TOF/TOF mass spectrometry, the adrenocorticotropic hormone (ACTH) was identified in some fractions. Therefore, its synthesis was performed manually by the solid phase method and following purification by reverse-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), and in a subsequent evaluation step it was investigated the role of ACTH unencapsulated on bovine oocytes maturation in vitro. Subsequently, chitosan NPs were formulated by the ionic gelation method in order to encapsulate both adrenocorticotropic hormone (ACTH) and follicle stimulating hormone (FSH). The NPs presented a mean hydrodynamic diameter of 85 nm (ACTH) and 159 nm (FSH), Zeta potential of 51,83±1,67 mV (ACTH) and 48,5±5,41 mV (FSH) in which was obtained encapsulation efficiency of 30% (ACTH) and 60% (FSH). The atomic form microscopy (AFM) allowed a qualitative assessment with regard to the morphology of NPs where the ACTH containing showed various shapes and small agglomerates, whereas FSH, shape approximately spherical without agglomerates. NPs containing FSH showed similar activity to that of the free hormone with 40% less active, whereas ACTH-NPs were not active on the in vitro maturation of bovine oocytes. With regard to fertilization, cleavage rate and blastocyst production were satisfactory only in the case of FSH-NPs. We conclude that NPs which contained FSH are effective in the PIV bovine embryos, providing the expansion of the cumulus cells and producing blastocysts.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Sabrina Silva de Macedo (sabrinamacedo@bce.unb.br) on 2012-07-18T12:33:45Z No. of bitstreams: 1 2012_AngelinaMariaMoreschiBasso.pdf: 3146930 bytes, checksum: f2b004fd79a242867e007125e99964ac (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-08-23T13:35:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AngelinaMariaMoreschiBasso.pdf: 3146930 bytes, checksum: f2b004fd79a242867e007125e99964ac (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-23T13:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AngelinaMariaMoreschiBasso.pdf: 3146930 bytes, checksum: f2b004fd79a242867e007125e99964ac (MD5) / De acordo com a Organização Mundial da Saúde – OMS, um terço da população mundial não tem acesso a medicamentos (NWOBIKE, 2006). No Brasil, o Sistema Único de Saúde – SUS disponibiliza a aquisição gratuita destas drogas para a população. Estes fármacos são classificados em três categorias: componentes básicos, componentes estratégicos e componentes especializados da assistência farmacêutica. Dentre estas categorias, esta última se destaca devido aos medicamentos serem de alto custo, importados e utilizados em tratamentos prolongados. O Ministério da Saúde criou em 1993, o Programa de Medicamentos Especializados, anteriormente denominado excepcionais. Este programa fornece fármacos de alto custo e acesso restrito. No primeiro ano, o programa ofereceu 31 apresentações em 15 diferentes itens. Atualmente, a lista de medicamentos oferece 150 itens sob 310 apresentações distintas. O aumento da disponibilidade destes fármacos e a importação dos mesmos acarretaram em uma sobrecarga de gastos ao Ministério da Saúde. Durante o ano de 2011, foram gastos R$ 3 bilhões com estes fármacos. Os componentes especializados incluem fármacos para o tratamento de diversas doenças, tais como hepatites virais, doença de Alzheimer, esclerose múltipla e diabetes. Desde 2008, o fármaco glucagon está incluído na lista deste componente, utilizado principalmente em casos de hipoglicemia em diabéticos. Porém, este fármaco pode ser utilizado para diversas finalidades, como em diagnósticos e emergências hospitalares. Para reduzir o alto custo com estes medicamentos, o Governo Federal criou, em 2004, a Lei de Inovação Tecnológica. De acordo com o decreto número 6.041 de Fevereiro de 2007, foram instituídas a Política Nacional de Biotecnologia e a criação do Comitê Nacional de Biotecnologia, com o desenvolvimento da biotecnologia na área da saúde humana, cujo foco na indústria farmacêutica brasileira foi priorizado. A produção de glucagon pela bioindústria brasileira está inserida neste contexto. Desta forma o objetivo deste trabalho é desenvolver um processo de produção, expressão, purificação e avaliação da atividade biológica de um peptídeo glucagon recombinante. O peptídeo foi expresso em sistema heterólogo usando Escherichia coli, utilizando um vetor de expressão com a tecnologia de fusão do tag GST ao glucagon. A estratégia escolhida visou obter o peptídeo na fração solúvel, o que correspondeu a 50% da expressão total de proteínas na bactéria, na presença de 0,25 mM de IPTG, a 30°C. A purificação ocorreu através de cromatografia de afinidade e o glucagon fusionado foi obtido com 90% de pureza, que posteriormente foi clivado para liberação da fusão utilizando a enzima enteroquinase. A sequência dos primeiros 16 resíduos de aminoácidos, a partir da porção N-terminal, foi obtida por meio de espectrometria de massa e a avaliação da atividade biológica confirmou a atividade do peptídeo. Neste ensaio ratos Wistar hipoglicêmicos foram utilizados para monitorar a glicemia após aplicação de glucagon recombinante, onde o mesmo apresentou desempenho semelhante ao controle positivo (p < 0,00001). ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / According to the World Health Organization - WHO, one third of the world population does not have access to therapeutic drugs. In Brazil, the Brazilian National Health System - SUS is the Policy Strategy for Pharmaceutical Assistance, which aiming to make available drugs for the treatment of specific diseases. The pharmaceutical drugs are classified into three categories: basic compounds, strategic compounds and specialized compounds. Among those categories, the last one is special because they present high-cost-drugs, imported and prolonged treatment. In 1993, the Ministry of Health created a program for distributing these drugs to the population for free. In the first year, the program offered 31 presentations in the 15 different drugs. The program includes, nowadays, 150 drugs in 310 presentations. The increased disponibility of these drugs and the import resulted in overhead costs to the Ministry of Health. During the year of 2011, the Brazilian Government spent R$ 3 billion on the acquisition of such therapeutic drugs. Some of the drugs are included in the list of specialized medicines, in order to treating various diseases, such viral hepatitis, Alzheimer’s disease, multiple sclerosis and diabetes mellitus. The glucagon peptide was added to the list in 2008 aiming to be used in on the control of recurring blood glucose falls in diabetics patients. It can also be used for other purposes, such in diagnostic procedures and emergency rooms. To reduce the high cost on the acquisition of drugs, the Government created the law of technological innovation in 2004. According to the decree 6.041 of February, 2007, in which was instituted the National Biotechnology Policy and created de National Committee of Biotechnology, the development of the Human Health Biotechnology Area, with focus on Biopharmaceutical was priorized. The glucagon production by brazilian industry is inserted in this context. The purpose of this work is the development of a methodology for the production, expression, purification, and evaluation of biological activity of recombinant glucagon. The peptide was expressed in a heterologous system using Escherichia coli. The vector used has a fusion system and GST tag was previously selected to obtain most of the peptide in the soluble fraction, thereby resulting in lower production costs. The expression level obtained was 50% of the total expression of the bacterium, using 0.25 mM IPTG. The purification of the fused peptide was performed on affinity chromatography, showing 90% purity. The partial sequence of the peptide was confirmed by mass spectrometry and the peptide was separated from the fusion using the enzyme enterokinase. In order o confirm the activity of glucagon, a biological assay was done using hypoglycemic Wistar rats, whose blood glucose was monitored after application of recombinant glucagon. The test confirmed the activity of the peptide (p < 0,00001).

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-09-30T04:31:21Z No. of bitstreams: 1 2006_Carina Tostes Abreu.pdf: 2153544 bytes, checksum: 4df81bdc1c65d03805b568d3131bf79e (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-02-11T23:19:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Carina Tostes Abreu.pdf: 2153544 bytes, checksum: 4df81bdc1c65d03805b568d3131bf79e (MD5) / Made available in DSpace on 2010-02-11T23:19:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Carina Tostes Abreu.pdf: 2153544 bytes, checksum: 4df81bdc1c65d03805b568d3131bf79e (MD5) Previous issue date: 2006 / A memória é a habilidade dos seres vivos de adquirir, reter e utilizar informações ou conhecimentos. O benefício da emoção na memória pode ser considerado adaptativo, uma vez que aumenta as chances de informações relevantes estarem disponíveis no futuro. Dessa forma, eventos com significado emocional serão memorizados mais facilmente do que eventos sem conteúdo emocional. Além disso, os hormônios das gônadas afetam permanentemente a organização cerebral e uma variedade de comportamentos. Há indícios de que os estrógenos modulem o funcionamento cognitivo e intensifiquem a memória. Assim sendo, este trabalho propôs investigar a ação dos hormônios sexuais (estradiol e progesterona) no desempenho cognitivo de fêmeas de macacos-prego em testes de memória operacional emocional e verificar se a memória operacional pode ser facilitada pelo conteúdo emocional do estímulo visual na tarefa de escolha-diferente-do-modelo com atraso de 8 segundos. Para isso, foi desenvolvido um conjunto de 384 fotografias de faces de macacos-prego (Cebus spp.) classificadas de acordo com a valência emocional em positivas/agradáveis, negativas/aversivas ou neutras/indiferentes. Cinco fêmeas e dois machos de macacos-prego adultos foram testados utilizando um programa computacional específico e com um monitor do tipo tela sensível ao toque. Figuras geométricas (controles) e fotos de faces co-específicas foram utilizadas como estímulos. Foi também comparado o desempenho de quatro fêmeas entre duas fases experimentais, sendo uma com administração via oral de 0,11 mg/dia de valerato de estradiol e outra durante a flutuação natural do ciclo menstrual, utilizando placebo. Os resultados não indicaram diferenças significativas no desempenho dos sujeitos entre as fotos com valências positiva, negativa e neutra. Entretanto, os macacos apresentaram desempenho acima do limite superior da aleatoriedade para todos os tipos de estímulos, demonstrando assim a sua capacidade de responder ao teste utilizando fotografias de faces co-específicas como estímulo visual. O desempenho dos animais no teste foi superior com figuras geométricas quando comparadas com fotografias faciais de macacos-prego. Quanto ao experimento hormonal, as dosagens fecais de estradiol mostraram que houve aumento significativo nos níveis fecais de estradiol na semana de tratamento com valerato de estradiol. Além disso, constatou-se um aumento significativo nos comportamentos sexuais das fêmeas durante a semana com administração exógena de estradiol e correlação positiva entre os níveis de estradiol e a duração e a freqüência dos comportamentos sexuais. Os resultados do presente estudo não confirmam nossa hipótese inicial de que as fêmeas de macaco-prego poderiam apresentar um melhor desempenho no teste DNMS quando os níveis de estrogênio estivessem altos, mesmo para estímulos com valor emocional, mas corroboram os estudos realizados com macacas rhesus jovens. Não foi encontrada correlação significativa entre os níveis de hormônios e o vi desempenho nos testes para nenhum dos tipos de estímulo, reforçando a idéia de que o desempenho das macacas Cebus no teste de memória operacional utilizado não foi sensível às alterações nos níveis hormonais. Este primeiro estudo demonstra a importância de se entender melhor a influencia da expressividade emocional na memória e indica a possível aplicação do paradigma adotado neste trabalho na investigação da memória operacional emocional em primatas não-humanos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Memory is the ability of living beings to acquire, retain and retrieve information or knowledge. The benefit of emotion on memory can be considered adaptive as it increases the chances that survival-relevant information will be available in the future. Therefore, emotionally meaningful events are more easily remembered than events devoid of emotional content.Moreover, gonadal hormones affect brain organization permanently, as well as a variety of behaviors. There are indications that estrogens modulate cognitive functioning and intensify memory. Thus, this research proposes to investigate the role of sexual hormones (estradiol and progesterone) on the cognitive performance of female capuchin monkeys during emotional working memory tests and to examine whether working memory can benefit from the emotional content of visual stimuli in the non-matching-to-sample task with 8 seconds delay. In this study a pool of 384 pictures of capuchin monkey Cebus spp.) faces classified according to the emotional valence (positive/pleasant, negative/unpleasant and neutral/indifferent) was developed. Five female and two male adult capuchin monkeys were tested with a computer system and touch screen. Geometric figures (control) and the cospecific face pictures were used as stimuli. Moreover, four female performances between two experimental phases, one with the oral administration of 0,11 mg/day of estradiol valerato and another one during the natural fluctuation of the menstrual cycle, were compared. The subjects showed a similar performance to positive, negative and neutral pictures. However, the monkeys performed above the upper confidence limits around chance to all kinds of stimuli, indicating that they are able to learn the tests that use emotional faces. Furthermore, the performances of the capuchin monkeys improved when using the geometric figures as oposed to the co-specific pictures. Concerning the hormonal experiment, there was a significant increase in the estradiol levels found in the feces during the week of treatment with estradiol valerato. There was also a statistical increase in the females’ sexual behaviors during that same week. In addition, a positive correlation was found between the levels of estradiol and the duration and the frequency of sexual behaviors. These females’ performances on the DNMS tasks between the treatments (estradiol x placebo) did not reveal statistical differences for any of the stimuli (geometric, positive, negative and neutral). These results do not confirm our initial hypothesis that female capuchin monkeys could present better performances in DNMS test with higher levels of estrogen, including for emotional value stimuli, although they corroborate the studies with young rhesus monkeys. No significant correlation between the hormone levels and the performance in the tests for any of the stimulus types was found, granting the idea that the performance of the Cebus females in the working memory test used was not sensitive to the hormonal levels alterations. This preliminary study provides relevant information concerning the understanding of the influences of emotional expressiveness on memory and indicates the possible usefulness of applying the paradigm adopted by it in the investigation of emotional working memory in non-human primates.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by leandro spinola (l.spinolafla@gmail.com) on 2009-11-20T21:51:13Z No. of bitstreams: 1 dissertacao F N M Viana.PDF: 2137567 bytes, checksum: 87da30dd1e4f284e75ac1059c71edb17 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2009-11-24T17:59:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertacao F N M Viana.PDF: 2137567 bytes, checksum: 87da30dd1e4f284e75ac1059c71edb17 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-24T17:59:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao F N M Viana.PDF: 2137567 bytes, checksum: 87da30dd1e4f284e75ac1059c71edb17 (MD5) Previous issue date: 2006-05 / A Síndrome de Resistência aos Hormônios Tireoideanos (SRHT) é caracterizada pela resposta reduzida dos tecidos-alvo aos hormônios tireoideanos (HTs). É comumente devida a mutações em um alelo do gene do receptor do hormônio tireoideano b (TRb) que codifica para um TR mutante, o qual inibe a função do TR nativo, fenômeno conhecido como dominância negativa. Em genes regulados positivamente pelo T3, o mecanismo molecular da dominância negativa envolve a dimerização do TR mutado com o TR nativo ou com RXR, sobre o DNA. Porém, pouco se sabe como isso ocorre em genes cuja transcrição é reprimida por T3. O objetivo desse estudo foi investigar o mecanismo de dominância negativa em genes regulados negativamente por T3, bem como a importância da dimerização envolvida nesse processo. Para isso, células U937 foram co-transfectadas com vetores de expressão do TRâ1 nativo ou TR mutado associados ao gene repórter da luciferase dirigido por promotores regulados negativamente: AP-1, TRH ou TSHá. Os TRs mutados utilizados foram os descritos na SRHT (F451X e G345R). Além disso, o mutante L422R, que é deficiente na sua propriedade de dimerização também foi utilizado. Os resultados mostraram que o F451X e G345R, quando comparado ao TR nativo, não reprimem a transcrição na presença de T3. Quando co-transfectado com TR nativo, F451X (1:5) reduz em 61% a inibição transcricional do TSHá, mas em apenas 16% em AP-1 e não prejudica a repressão em TRH. Efeito similar foi observado com outro mutante da SRHT, o G345R. A dominância negativa não foi observada no promotor com sítio AP-1 ou no TRH, mesmo quando a concentração dos mutantes, F451X e G345R, foi 10x maior que TR nativo. A introdução da mutação L422R no mutante F451X (L422R/F451X) e no G345R (L422R/G345R) corrigiu o forte efeito dominante negativo desses mutantes na regulação do promotor do TSH. É interessante observar que o mutante L422R, na presença de T3, apresentou uma taxa de repressão transcricional semelhante ao TR nativo no promotor do TRH (74%) e AP-1 (78%) mas significativamente inferior na regulação do promotor do TSH, 11% em relação ao TR nativo. Nossos resultados sugerem que a dimerização está envolvida na dominância negativa do TR mutado quando este regula a transcrição do promotor do TSH, enquanto que no promotor do TRH e AP-1, a ligação via monômeros de TR parece ser a forma oligomérica preferida e incapaz de induzir a dominância negativa. Coletivamente, esses resultados sugerem que o efeito dominante negativo imposto pelo TR mutado varia de acordo com o promotor que é regulado negativamente por TR e que a forma monomérica não parece exercer a dominância negativa. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Resistance to thyroid hormone (RTH) is characterized by the reduced response of the target tissue to thyroid hormone (TH). Usually is related with mutations in one allele of thyroid hormone receptor beta (TRâ) that is encoded for TR mutant, which impairs the normal function of TR wild type (TRwt), a phenomenon described as a dominant-negative effect. ln positive regulated genes for T3, this effect involves the dimerization of TR mutant with TRwt or with RXR on DNA. However, it is not well understood how this occur in genes which transcription is down regulated by T3. The aim of this study was to investigate the importance of dimerization in the dominant-negative mechanism in negative regulated genes by T3. For this, the U937 cells were co-transfected with TRâ1wt expression vectors or TR mutant, associated to luciferase reporter gene, driven by negative regulated promoters such as AP-l, TRH or TSH. The TR mutants were described in the RTH (F451X or G345R). The mutant L422R, that is defective in the dimerization, was also utilizated. The results showed that F451X and G345R, when compared with TRwt, did not suppress the transcription in the presence of T3. When co-transfected with TRwt, F451X (1:5) reduced in the 61 % the TSHá transcription inhibition, but only 16% in AP1 and did not damage the suppression in TRH. The same effect was observed with other RTH utant, the G345R. The dominant-negative effect was not observed in the promoter with AP-l or TRH, even so the concentration of the mutants, F451X and G345R, was ten times higher than TRwt. The presence of the mutation L422R in the mutant F451X (L422R/F451X) and in the G345R (L422R/G345R) corrected the strong dominantnegative effect these mutants in the regulation of the TSH. Is interesting to observe that the mutant L422R, in the presence of T3, show the suppression rate was similar to TRwt in the TRH promoter (74%) and AP-l (78%) but significant1y lower in the regulation of the TSH promoter (11%). Our results suggest that dimerization is involved in the dominant-negative effect of TR mutant in the regulation of the transcription of the TSH promoter, while in the TRH and AP-l promoter, TR seems preferentially to bind as monomers and it is incapable to persuade the dominantnegative effect. Taken together, these results suggest that the dominant-negative effect of the mutants varies with the type of promoter which is negative regulated for TR and the monomers can not practice the dominant-negative effect.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2007. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-12-08T16:59:10Z No. of bitstreams: 1 2007_DanielaLimaGoncalves.PDF: 1164033 bytes, checksum: 18dfa193c85680956315bccef9302271 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-12-23T22:14:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_DanielaLimaGoncalves.PDF: 1164033 bytes, checksum: 18dfa193c85680956315bccef9302271 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-23T22:14:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_DanielaLimaGoncalves.PDF: 1164033 bytes, checksum: 18dfa193c85680956315bccef9302271 (MD5) Previous issue date: 2007 / A cocaína, atuando sobre o Sistema Nervoso Central, induz alterações neuroquímicas, fisiológicas e comportamentais. De fato, a administração deste psicoestimulante influência diversas funções neuroendócrinas como, por exemplo, a ativação do eixo HPA e a inibição da liberação de prolactina. Entretanto, os circuitos neurais ativados e as respostas fisiológicas e comportamentais provocadas pela cocaína, assim como suas possíveis interações, ainda não foram totalmente elucidadas. Desta forma, este trabalho teve como objetivo determinar os efeitos da administração sistêmica aguda de cocaína sobre os hormônios adrenocorticotrópico (ACTH), cortisol e prolactina em micos-estrela (Callithrix penicillata). Para tanto, foi dosada – por imunoensaio com detecção quimioluminescente – a concentração plasmática/sérica dos hormônios acima citados em nove micos adultos e ingênuos ao procedimento experimental. Este consistiu em coletar, em intervalos de 7-dias, amostras de sangue de cada sujeito 30 e 60-min após a administração ip de 10 e 20 mg/kg de cocaína, e após 0, 30 e 60-min pós-injeção ip de salina. Ademais, os níveis basais de ACTH e cortisol foram determinados de 2 em 2 meses, durante 6 meses após a última injeção da droga. A administração de 20 mg/kg de cocaína aumentou a concentração plasmática basal de ACTH 30-min após a sua injeção, enquanto que depois de 60-min foi observada uma diminuição significativa. Este psicoestimulante também aumentou significativamente a concentração sérica de cortisol dos micos, porém apenas depois de 60-min da injeção de 20 mg/kg. Por outro lado, os níveis séricos de prolactina diminuíram significativamente após a administração de ambas as doses da droga (10 e 20 mg/kg), sendo este efeito observado 30 e 60-min pós-injeção. Por fim, um aumento persistente e gradual – mas não significativo – foi observado na concentração plasmática de ACTH, principalmente 4 e 6 meses da primeira injeção de cocaína, apesar da concentração circulante de cortisol ter permanecido constante. A concentração dos hormônios avaliados não alterou significativamente após 0, 30 e 60-min da administração de salina. Ademais, os resultados não parecem ter sido influenciados pela administração da droga/salina, coleta de sangue ou análises de imunoensaio quimioluminescente. Contudo, a divisão dos sujeitos em grupos experimentais deve ser considerada ao interpretar os dados de alguns hormônios (ex. prolactina). Portanto, os resultados sugerem que a administração sistêmica aguda de cocaína induz alterações neuroendócrinas significativas em micos-estrela, similares às observadas em outros animais. Estes efeitos seguiram um padrão (temporal) distinto para cada um dos hormônios analisados, possivelmente devido ao seu respectivo mecanismo de controle de liberação (ex. feedback negativo). Novos estudos são necessários para melhor elucidar os efeitos neuroendócrinos – e seus mecanismos centrais subjacentes – da administração de cocaína, visando possíveis novos alvos farmacológicos para o tratamento de dependentes. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cocaine, via its actions on the Central Nervous System, induces neurochemical, physiological and behavioral changes. In fact, the use of this psycostimulant influences several neuroendocrine functions, such as activation of the HPA axis and decrease in prolactin release. However, the neural circuits activated and the physiological and behavioral responses induced by cocaine, in addition to their possible interactions, have not been completely elucidated. Thus, the present study aimed at determining the effects of an acute systemic cocaine administration on the adrenocorticotropic hormone (ACTH), cortisol and prolactin circulating levels of black tufted-ear marmosets (Callithrix penicillata). The plasma/serum concentrations of the aforementioned hormones were dosed – by immunoassay with quimioluminescent detection – in nine adult and experimentally naïve marmosets. For each subject, blood samples were collected at 7-day intervals, 30 and 60-min after an ip injection of 10 and 20 mg/kg of cocaine, as well as 0, 30 and 60-min following the ip administration of saline. Furthermore, basal levels of ACTH and cortisol were determined every 2-months, during 6 months after the last cocaine injection. The administration of 20 mg/kg of this drug increased plasma ACTH concentrations 30-min following its injection, while a significant decrease was observed after 60-min. This psycostimulant also significantly increased the marmosets’ serum cortisol levels, although only after 60-min of a 20 mg/kg injection. On the other hand, serum prolactin levels decreased significantly after the administration of both cocaine doses (10 and 20 mg/kg), being this effect observed 30 and 60-min post-injection. Lastly, a gradual and persistent non-significant increase in plasma ACTH was observed, particularly 4 and 6 months after the first cocaine injection, although the circulating levels of cortisol remained constant. The concentration of the hormones analyzed 0, 30 and 60-min after saline administrations were also similar. Furthermore, the results do not seem to have been influenced by the drug/saline injections, blood samplings or immunoassay quimioluminescent analysis. However, when interpreting data for some hormones (e.g. prolactina), the use of two experimental groups should be considered. The results, therefore, suggest that an acute systemic cocaine administration induces significant neuroendocrine changes in black tufted-ear marmosets, similar to previous results in other species. For each of the hormones analyzed, the effects followed a distinct (temporal) pattern possibly due to specific control mechanisms (e.g. negative feedback). Further studies are necessary to better elucidate the neuroendrocine effects – and their underlying central mechanisms – of cocaine administration, as new pharmacological target may be identified for the treatment of cocaine dependence.