Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Patrícia Simone Leite Vilamaior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T04:20:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_SergioMarcelinode_D.pdf: 4535012 bytes, checksum: 94d22a407f286cbbf5f47c367a330c46 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A próstata feminina (glândula parauretral de Skene) está localizada na parede da uretra feminina e histologicamente possui as mesmas partes da próstata masculina, apresentando um epitélio colunar pseudoestratificado e componentes celulares, enzimáticos e estromais necessários para sua função exócrina e neuroendócrina. O tecido prostático possui uma alta dependência em relação aos andrógenos, e a ação destes hormônios sobre as células prostáticas é mediada via receptor nuclear. Nem todos os tipos celulares prostáticos possuem receptor para andrógenos, sugerindo que somente certos tipos celulares podem ser considerados alvos diretos da ação de andrógenos. A próstata feminina também é alvo da testosterona, pois estudos recentemente publicados demonstram que a reposição hormonal com este hormônio promove o desenvolvimento morfofuncional da próstata feminina em gerbilos. Mesmo sendo a próstata um tecido andrógeno dependente, os estrógenos são necessários para manutenção do seu funcionamento, o que se explica devido a presença dos dois tipos de receptores de estrógeno (ER- alfa e ER-?). Dados recentes da literatura propõem que os hormônios relacionados com a gravidez e ciclo ovariano promovem certo grau de proteção para o tecido da mama contra o câncer e que a aplicação de estradiol e progesterona previne a carcinogênese de mama em ratas nulíparas, mimetizando o efeito da gravidez, e ainda, que tanto o câncer de próstata quanto o câncer de mama, além de serem os principais tumores que incidem em homens e mulheres, respectivamente, e possuírem associações epidemiológicas e etiológicas, apresentam várias anormalidades genéticas em comum. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as modificações morfo-funcionais na próstata feminina do gerbilo da Mongólia sob a influência da prenhez e avaliar a influencia desse estágio do ciclo reprodutivo na homeostase dos compartimentos prostáticos das fêmeas velhas. Para tanto, foram utilizados 50 animais, sendo: 5 fêmeas adultas nulíparas (AN); 5 fêmeas adultas multíparas (AM); 5 fêmeas velhas nulíparas (VN); 5 fêmeas velhas multíparas (VM); 5 fêmeas velhas nulíparas (VNT) e 5 velhas multíparas (VMT), as quais receberam suplementação de 0,25ml de testosterona em dias alternados (1mg/kg/dia de cipionato de testosterona em óleo vegetal) por 21 dias; 5 fêmeas velhas nulíparas (VND) e 5 velhas multíparas (VMD) as quais receberam suplementação diária de 0,1ml DHEA (5mg/kg diluída em solução salina) por 21 dias; 5 fêmeas velhas nulíparas (VNE2) e 5 velhas multíparas (VME2), as quais receberam suplementação de 0,1ml de estradiol (10mg/ml de óleo vegetal), em dias alternados, por 21 dias. O grupo VM apresentou uma maior incidência de lesões proliferativas, o que nos leva a concluir que o tecido prostático de fêmeas que passam por sucessivas gravidezes possuem maior probabilidade de serem acometidas por tais lesões. Além disso, a reposição hormonal seja com testosterona, estrógeno ou dihidrotestosterona se mostrou mais agressivo no caso de fêmeas multíparas, pois a incidência de lesões proliferativas foi maior neste grupo / Abstract: The gerbil female prostate is located paraurethrally and has all the main histological components of the male prostate, like secretor epithelium and fibromuscular stroma. This gland, like the prostate in males, is targeted by testosterone action, which promotes morphofunctional development. Furthermore, estrogens are required to maintain the male and female prostate and this gland presents both estrogen receptors (ER-alfa and ER-?). In the present work the structural and morphometric-stereological and serological aspects, as well as the quantification of the incidence, multiplicity and percentage of acini affected by different lesions were analyzed. Fifty senile female gerbils were divided into ten groups (five animals each): Adult nulliparous gerbils (AN) and adult multiparous gerbils (AM); senile nulliparous (SN) and senile multiparous (SM) female gerbils; senile nulliparous gerbils (SND) and senile multiparous gerbils (SMD) that received daily 0,1 ml of DHEA during 21 days; senile nulliparous gerbils (SNE) and senile multiparous gerbils (SME) that received 0,1 ml of ?-estradiol on alternate days during 21 days; senile nulliparous gerbils (SNT) and senile multiparous gerbils (SMT) that received 0,2ml of T (1mg/kg/day) for 21 days. This work was performed to quantify the incidence, multiplicity and percentage of acini affected by different lesions in prostate of nulliparous and multiparous senile female gerbils under different types of hormonal replacement using morphometric, stereological and immunohistochemical techniques and to try to establish a relationship between hormonal serum levels in these groups. The proliferative ratio (PCNA/TUNEL) were higher in al multiparous groups when compared with nulliparous groups, mainly in SMT, the same group where were found higher multiplicity of proliferative lesions / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T23:59:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hetzl_AmandaCia_M.pdf: 12135293 bytes, checksum: f1fc50c54b270c1cdccb661cac491ab5 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A senescência é fator determinante para a ocorrência de alterações na biologia molecular da próstata, considerando-se tanto o desequilíbrio hormonal quanto o das interações epitélioestroma. Assim, os objetivos desse estudo foram caracterizar e comparar a biologia celular e molecular da zona periférica prostática de homens senis, com e sem diagnóstico de lesões prostáticas, através da morfologia e imunolocalização dos receptores androgênicos (AR), estrogênicos ? e ? (ER?, ER?), metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP2, MMP9), distroglicanas ? e ? (DG?, DG?), laminina e fator de crescimento homólogo à insulina (IGFR-1). Para tal, foram utilizadas 60 amostras das zonas periféricas prostáticas provenientes de necrópsias e/ou prostatectomias de homens (60-90 anos), as quais foram divididas em 4 grupos (15 amostras cada): Grupo Senil (sem lesões prostáticas); Grupo Neoplasia Intraepitelial Prostática (NIP); Grupo Hiperplasia Benigna Prostática (HBP); Grupo Câncer Prostático (CP). O diagnóstico das lesões prostáticas baseou-se em critérios morfológicos e por imunomarcação para citoqueratina de alto peso molecular. Os resultados foram avaliados por microscopias de luz e eletrônica de transmissão, métodos morfométricos, imunohistoquímicas e Western Blotting. Os resultados mostraram danos morfológicos no estroma e organelas celulares envolvidas no processo secretor da próstata de homens senis. As diferentes lesões prostáticas na senescência demonstraram desequilíbrio nas taxas de proliferação/apoptose, indicando predomínio do processo proliferativo. Além disso, a imunolocalização para AR se manteve similar em todos os grupos estudados, com predominância da imunolocalização no compartimento epitelial. Já o ER? foi preferencialmente localizado no compartimento epitelial, sendo ausente no compartimento estromal do grupo CP. A imunolocalização do ER? foi preferencialmente no compartimento epitelial dos grupos estudados, sendo intensa nos grupos CP e NIP em relação aos demais. Também, intensa imunoreatividade para IGFR-1, MMP2 e MMP9 foi verificada nos grupos CP e NIP em relação aos demais grupos. As imunolocalizações para DG?, DG? e laminina foram mais fracas nos grupos CP e NIP em relação aos grupos HBP e Senil. Assim, pode-se concluir que o desequilíbrio da interação epitélio-estroma prostático causado pelas mudanças estruturais é fator decisivo para o desenvolvimento e progressão da carcinogênese na senescência. Ainda, a diminuição dos níveis protéicos do complexo das DGs e o aumento dos níveis das MMPs estão associados com a gravidade da lesão prostática e tem importante papel na manutenção do fenótipo maligno. A ocorrência de IGFR-1 sinalizou o grau de comprometimento glandular e a perda da imunolocalização da laminina provavelmente propiciou a progressão das lesões. Também, a localização diferencial dos receptores esteróides nas diferentes lesões prostáticas entre os compartimentos epitelial e estromal de homens senis certamente indicou diferentes sinalizações parácrinas para a dinâmica prostática, indicando ação diferencial desses receptores a partir dos compartimentos prostáticos e apontaram a importância das vias estrogênicas nos mecanismos de ativação dessas alterações. Finalmente, a interação do IGFR-1 com as MMP2 e MMP9 apontaram arelevância dessas moléculas nas investigações e tratamentos das doenças prostáticas. / Abstract: Senescence is a determining factor for the occurrence of morphological changes in the prostate, considering hormonal imbalance and paracrine signaling disturbance between the epithelium and the stroma. Thus, the objective of this work was to characterize and correlate the ? and ?-dystroglycans (?-DG, ?-DG), androgen receptor (AR), ? and ?-estrogen receptors (?ER, ?ER), matriz metalloproteinases 2 and 9 (MMP-2, MMP-9) and insulin-like growth factor receptor (IGFR-1) reactivities in both the stroma and epithelium compartments in the prostatic peripheral zone of elderly men showing Benign Prostatic Hyperplasia (BPH), Prostatic Intraepithelial Neoplasia (PIN) and Prostatic Cancer (PC). Sixty prostate samples from 60-90 year old patients were divided into 4 groups: The Senile Group (without prostatic lesions); The Prostatic Intraepithelial Neoplasia (PIN) Group; The Prostatic Cancer (PC) Group and The Prostatic Benign Hyperplasia (BPH) Group. The lesion diagnosis was based on architectural disturbance according to morphological criteria and by immunostaining for cytokeratin. The results were evaluated by light microscopy and transmission electron, morphometric methods, immunohistochemical and Western Blotting. The different prostatic lesions in senescence showed an imbalance in the rates of proliferation/apoptosis, indicating predominance of proliferative process. The results showed more intense IGFR-1, MMP-2 and MMP-9 immunoreactivities in the PC and PIN groups than in the other groups. The ?-DG and ?-DG immunolocalization were weaker in the PC and PIN groups than in the BPH and Senile groups. Intensified AR reactivity was verified in the epithelial compartment in all studied groups. ?ER immunoreactivity was more intense in the epithelial compartment in the PC and PIN groups than in the other groups. ?ER immunoreactivity was weaker in the epithelial compartment of the PIN and PC groups than in the BPH and Senile groups. Also, this receptor was absent in the stromal compartment in the PC group. The different prostatic lesions showed abnormal epithelial-stromal interaction, due to decreased ?-DG and ?-DG levels and increased IGFR-1, MMP-2 and MMP-9 levels, which are essential elements for the maintenance of glandular paracrine signaling, contributing to disease progression in the senescence. The differential steroid hormone receptor reactivity in the different lesions in both prostatic compartments certainly indicated different paracrine signals to the dynamics of the prostate and pointed out the importance of estrogenic pathways in the activation mechanisms of these changes. Also, these findings indicated that there was a direct correlation between IGFR-1, MMPs and steroid hormone receptors, pointing towards IGFR-1 as a molecule target in prostate therapy, as well as being a possible factor for MMPs positive signaling. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-11T17:31:12Z No. of bitstreams: 1 Santos, Larissa Almenara Silva dos [Dissertação, 2011].pdf: 692855 bytes, checksum: 153140a6b56a719a5213e3977c23a824 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T17:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos, Larissa Almenara Silva dos [Dissertação, 2011].pdf: 692855 bytes, checksum: 153140a6b56a719a5213e3977c23a824 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Os hormônios sexuais femininos influenciam alterações metabólicas durante o ciclo menstrual. Estas, são estudadas em mulheres com síndrome pré-menstrual (SPM) porém, no Brasil há poucas informações em mulheres sadias. O objetivo foi avaliar a concentração sérica de eletrólitos e hormônios esteróides femininos em mulheres jovens, na fase lútea do ciclo menstrual, e sua relação com os sintomas da SPM. Noventa e três voluntárias foram acompanhadas durante três meses. O estado nutricional foi avaliado baseado no Índice de massa corporal (IMC), percentual de gordura e água corporal. Foram utilizados 3 “mapas de sintomas diários” para investigar a frequência de ansiedade, edema, depressão, constipação intestinal, diarréia, mastalgia e náuseas. No 1º mês, foi coletado 10 mL de sangue, após jejum noturno de 12 horas, na fase lútea (FL), para determinar hematócrito, hemoglobina, sódio, potássio, cálcio, magnésio, estrogênio, progesterona, hormônio folículo estimulante (FSH), hormônio luteinizante (LH) e prolactina. Os dados foram analisados por meio da estatística descritiva através do programa GraphPad Instat®. A ingestão alimentar (energética, macro e micronutrientes) foi avaliada através de 6 registros: 03 na FL e 03 na fase folicular (FF) e utilizou-se o Software NutWin®- Programa de Apoio à Nutrição. O estado nutricional manteve-se inalterado porém, na FL, mais da metade (>62%) das voluntárias apresentavam água corporal acima da referência (>500mL/Kg). Os sintomas ansiedade, edema, depressão e mastalgia foram mais percebidos na fase menstrual do ciclo, de forma leve. Foi constatado voluntárias com hiponatremia (4,22%) e hipernatremia (7,04%); hipocalcemia (86,49%); hipocalemia (2,70%), hipomagnesemia (14,08%), hipermagnesemia (5,08%) e a presença de anemia em 24% delas. Quanto aos hormônios: Estrogênio (<25,00%; >2,08%); Progesterona (<22,54%; >14,08%); FSH (<10,17%; >30,51%); LH (<6,12%; >14,28%); Prolactina (>22,53 %). Foi verificado maior (p<0,05) ingestão de energia (Kcal) (FL:1652,50 ± 408,08; FF:1550,99 ± 334,87), carboidrato (g) (FL: 223,54 ± 58,29; FF: 210,75 ± 49,17), proteína (g) (FL: 69,00 ± 18,64; FF: 65,08 ± 17,57) e lipídios (g) (FL: 52,67 ± 17,44; FF: 50,90 ± 14,51) na FL comparado com a FF (p<0,05). A ingestão dos micronutrientes foi inadequada: Sódio (>27,14% FL; >21,74% FF), Potássio (<100,00% FL e FF), Cálcio (<90,00% e >10,00% FL; <97,10% e >2,89% FF) e Magnésio (<90,00% FL; <92,75% FF). Apesar de o estado nutricional estar adequado, foi constatada grande freqüência de voluntárias anêmicas e conclui-se que o ciclo menstrual parece alterar o equilíbrio eletrolítico e hormonal, provoca aumento da ingestão de energia e macronutrientes na fase lútea e favorece a exacerbação de sintomas pré-menstruais na fase menstrual do ciclo, em mulheres jovens / Female hormones influence metabolic changes during the menstrual cycle. These are studied in women with premenstrual syndrome (PMS) but in Brazil there is little information on healthy women. The aim was to evaluate serum electrolytes and female steroid hormones in young women in the luteal phase of the menstrual cycle and its relation to the symptoms of PMS. Ninety-three subjects were followed for three months. Nutritional status was assessed based on body mass index (BMI), percentage of body fat and water. We used 3 "maps of daily symptoms" to investigate the frequency of anxiety, edema, depression, enteric costiveness, diarrhea, nausea and breast tenderness. At 1 month was 10 mL of blood collected after an overnight fast of 12 hours in the luteal phase (LP) to determine hematocrit, hemoglobin, sodium, potassium, calcium, magnesium, estrogen, progesterone, follicle stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH) and prolactin. Data were analyzed using descriptive statistics through the GraphPad Instat ®. Dietary intake (energy, macro and micronutrients) was assessed by 6 records: 03 in LP and 03 in the follicular phase (FP) and used the Software NutWin ® - Nutrition Support Programme. Nutritional status remained unchanged but in LF, more than half (>62%) of the volunteers had body water above the reference (> 500mL/Kg). The anxiety symptoms, edema, depression and breast tenderness were more perceived during the menstrual cycle, lightly. It has been found volunteers with hyponatremia (4,22%) and hypernatremia (7,04%), hypocalcemia (86,49%), hypokalemia (2,70%), hypomagnesemia (14,08%), hypermagnesemia (5,08%) and the presence of anemia in 24% of them. As for the hormones: estrogen (<25,00%; >2,08%), progesterone (<22,54%; >14,08%), FSH (<10,17%; >30,51%), LH (<6,12%; >14,28%), prolactin (>22,53%). It was found higher (p<0,05) energy intake (kcal) (LP: 1652,50 ± 408,08; FP: 1550,99 ± 334,87), carbohydrate (g) (LP: 223,54 ± 58,29; FP: 210,75 ± 49,17), protein (g) (LP: 69,00 ± 18,64; FP: 65,08 ± 17,57) and lipids (g) (LP: 52,67 ± 17,44; FP: 50,90 ± 14,51) in LP compared to FP (p<0,05). The intake of micronutrients was inadequate: Sodium (>27,14% LP; >21,74% FP), potassium (<100,00% LP and FP), calcium (<90,00% and >10,00% LP; <97,10% and >2,89% FP) and magnesium (<90,00% LP; <92,75% FP). Although the nutritional status to be adequate, was found high frequency of voluntary anemic and conclude that the menstrual cycle seems to alter the electrolyte balance and hormonal causes an increase in energy and macronutrient intake in the luteal phase and favors the exacerbation of symptoms pre-menstrual phase of the menstrual cycle in young women.

Orientador: Valeria Helena Alves Cagnon Quitete / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T09:05:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hetzl_AmandaCia_D.pdf: 39910159 bytes, checksum: 9f69d8623d48f1fccdc9aebc181573a3 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A senescência é fator determinante para a ocorrência de alterações morfofuncionais da próstata. O objetivo desse estudo foi caracterizar e correlacionar as interações entre os receptores dos fatores de crescimento fibroblásticos (FGFR2, FGFR7, FGFR8), fator de crescimento epidermal (EGFR), ?-actina e vimentina e os receptores androgênicos (AR), estrogênicos ? e ? (ER?, ER?) e de prolactina (PR) nos compartimentos epiteliais e estromal frente à condição de senilidade e variações hormonais. Além disso, caracterizar e correlacionar o AR, ER?, ER? e PR com os FGFs nos compartimentos epitelial e estromal de amostras humanas com adenocarcinoma de alto grau e baixo grau. 50 ratos machos senis (10 meses de idade) e 10 ratos machos jovens (4 meses de idade) foram divididos em grupos: Jovem (JOV) e Senil (SE): óleo de amendoim por 30 dias; Castrado (CAS): castração cirúrgica e química; Tamoxifeno-Letrozol (TAM): tamoxifeno e de letrozol por 30 dias; Castrado+estrógeno (REEST): tratamento similar ao CAS, e posteriormente recebeu injeções de 17?-estradiol por 30 dias; Tamoxifeno-Letrozol+Andrógeno (RETEST): após tratamento similar ao grupo TAM, os animais receberam injeções de Cipionato de Testosterona por 30 dias. Os animais foram sacrificados e amostras do lobo ventral foram coletadas e submetidas às análises de Microscopia de Luz, imunohistoquímicas, western blotting e dosagem hormonal. 30 amostras prostáticas humanas foram divididas em grupos: Adenocarcinoma de alto grau e Adenocarcinoma de baixo grau. As amostras foram submetidas às análises de Microscopia de luz e imunohistoquímicas. Após a administração estrogênica, presença de microácinos, células inflamatórias e hipertrofia do estroma prostático foram observados. A hiperandrogenização levou à recuperação epitelial. No SE houve aumento de vimentina, ER? e PR em relação ao JOV. No CAS observou-se localização diferencial da prolactina e ?-actina em relação ao SE. No RETEST, observou-se recuperação do padrão de distribuição de reatividade da ?-actina e da prolactina em relação ao SE. No REEST foi observado aumento de ER? e ER? e localização diferencial destes, somando-se a diminuição da ?-actina e vimentina em relação ao SE. No TAM foi observada diminuição de ER? e ?-actina, e aumento de prolactina no compartimento estromal, em relação ao SE. Em humanos, os FGFR2 e FGFR8 apresentaram-se aumentados no estágio inicial do câncer prostático, sugerindo essas moléculas como bons alvos terapêuticos. Pode-se concluir que o envolvimento do ER? na ativação do estroma reativo tornou o microambiente favorável à progressão do câncer, devido à potencialização do desequilíbrio estromal, e o ER? contribuíram para a inibição das lesões précancerosas em homens na senescência. Já, o desequilíbrio causado pela ablação e/ou reposição hormonal não somente alterou o feedback entre os hormônios esteróides como modificou a localização da reatividade das moléculas nos compartimentos prostáticos, provavelmente interferindo nas sinalizações autócrinas e parácrinas dos estrógenos, EGF e prolactina, apontando esses como deflagradores da formação do estroma reativo. A ablação hormonal nos animais senis levou ao aumento da reatividade dos FGFs, sugerindo interações entre os hormônios e suas vias de sinalização e o microambiente prostático senil. As vias dos FGFs podem ser ativadas também de maneira andrógeno-independente, uma vez que os FGFs apresentaram níveis de detecção aumentados mesmo diante da intensa depleção androgênica imposta pela castração / Abstract: Senescence is a determining factor for morphological and functional prostatic alterations. The objective of this study was to characterize and correlate the interactions among fibroblast growth factor receptors (FGFR2, FGFR7, FGFR8), epidermal growth factor (EGFR), ?-actin and vimentin and the androgen receptor (AR), estrogen ? and ? (ER?, ER?) and prolactin (PR) in epithelial and stromal prostatic compartments in elderly rats on hormonal variation. Also, the objective was to characterize and correlate the AR, ER?, ER? and PR with the FGFs in the human prostatic samples, presenting high grade and low grade adenocarcinoma. Fifty male rats (10 months old) and 10 young male rats (4 months old) were divided into groups: Young (JOV) and Senile Groups (SE)- peanut oil injections for 30 days, Castrated Group (CAS)- surgical and chemical castration; Tamoxifen-Letrozole Group (TAM)- tamoxifen and letrozole injections in period of 48 hours for 30 days; Castrated + estrogen Group (REEST)- surgical and chemical castration and subsequently the animals received 17?-estradiol injections for 30 days; Tamoxifen- Letrozole + Androgen Group (RETEST): after treatment similar to the TAM group, the animals received testosterone cypionate injections for 30 days. After the treatment, the animals were sacrificed and the ventral lobe samples were collected and analyzed for the Light Microscopy, immunohistochemistry and Western blotting. Thirty human prostatic samples were collected from elderly men and divided into High-grade and Low-grade Adenocarcinoma Groups. The samples were submitted to light microscopy and immunohistochemical analyses. After estrogen administration, epithelial atrophy, microacini, inflammatory cells and stromal hypertrophy were observed. The hyperandrogenization led to the recovery of epithelium. The vimentin, ER? and PR increase was verified in the SE group in relation to JOV one. Differential localization of PR and ?-actin was seen in the CAS group in relation to SE one. Recovery of the distribution pattern of ?-actin and prolactin reactivities was observed in the RETEST group in relation to SE. In the REEST group, it was observed the ER? and ER? increase and differential localization of these receptors, and the ?-actin and vimentin decrease in relation to SE. In the group TAM, it was observed the ER? and ?-actin decrease and the prolactin increase in the stromal compartment in relation to SE group. Regarding to human samples, increased FGFR2 and FGFR8 were observed in the early stages of prostate cancer, suggesting these molecules as good therapeutic targets. Thus, it can be concluded that the involvement of ER? in activation of reactive stromal led to the favorable microenvironment to cancer progression considering the strong stromal imbalance, and the ER? contributed to the inhibition of precancerous lesions in elderly men. The imbalance caused by ablation and/or hormone therapy not only changed the feedback between steroid hormones but also changed the reactivity localization of molecules in prostatic compartments, probably interfering in the autocrine and paracrine signaling of estrogen, prolactin and EGF, and pointing these molecules as possible triggers of the formation of reactive stroma. The present results demonstrated that hormone ablation in senile rats led to increased reactivities of the FGFs, suggesting interactions among hormones and their signaling pathways and senile prostatic microenvironment. Furthermore, it can be concluded that the ways of FGFs can be activated also androgen-independent manner, considering that the FGFs showed increased levels in the severe androgen depletion characterized by castration / Doutorado / Anatomia / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

No primeiro capitulo deste trabalho, é apresentada a classificação e a importância dos esteróides sexuais para manutenção da vida humana. Na seqüência, o próximo capítulo mostra aspectos gerais sobre eletroforese capilar, tais como modo de operação, terminologia utilizada e considerações sobre o fluxo eletrosmótico e mobilidade eletroforética. O terceiro capítulo exibe um estudo da interação solvente/micela de SDS/soluto, baseado na otimização da geometria da molécula, análise conformacional, com descritores moleculares e modelos de regressão, baseados no coeficiente de partição. Foram realizadas medidas experimentais dos tempos de retenção, de onze esteróides, a partir da MEKC, em eletrólitos modificados por solvente, conforme suas propriedades de seletividade. O efeito do solvente na modulação da retenção do soluto foi discutido em termos da LSER, a qual indicou a concentração total de solvente no meio como o principal fator de controle do tempo de retenção. A separação dos compostos selecionados, na melhor condição, foi testada em um extrato de uma amostra de urina obtida de um voluntário humano - sexo feminino - em fase de puberdade. A composição do eletrólito (20 mmol L-1 SDS, 20% EtOH e 20 mmol L-1 tetraborato de sódio a pH 9,4) proposta pode ser aplicada potencialmente para a determinação de estrógenos em estudos clínicos (0.80% C.V. para tempo de migração e 2.5% C.V. para área do pico, n = 5). Posteriormente, já no quarto capítulo, o uso do planejamento fatorial foi uma forma rápida de otimizar a composição do eletrólito para separar uma mistura-teste com onze esteróides. Uma triagem das variáveis indicou que as concentrações de ACN, SDS e &#946;-CD mais influenciavam a resolução e o tempo de análise. O estudo dos efeitos mostrou que a interação ACN/ &#946;-CD e a ACN mais contribuía para resolução dos pares críticos. O sistema micelar constituído por 20 mmol L-1 SDS, 10% ACN, 5 mmolL-1 &#946;-CD e 20 mmolL-1 TBS, pH 9.2, foi o meio no qual se obteve a melhor resposta em relação à resolução dos pares críticos e tempo de análise Este método foi usado avaliar a presença dos esteróides em extrato etanólico de excrementos de Pantera onca. Em outra etapa um método MEEKC foi desenvolvido e validado para a determinação de 17 &#946;-estradiol em adesivo transdérmico usando uma microemulsão contendo 0.5% (m/m) acetato de etila, 1.2% (m/m) butan-1-ol, 0.6% (m/m) SDS, 15% (v/v) ACN e 82.7% (m/m) TBS 12 mmol L-1 , pH 9.4. Foi obtida aceitável precisão (<1.2% RSD), linearidade, sensibilidade (LOD=0.89 &#181;g/mL; LOQ=2.68 &#181;g/mL) e recuperação (100.4 &#177;0.9 %). Por fim, o ultimo capítulo traz o desenvolvimento e validação de um método via MEKC para determinação etinilestradiol em comprimidos usando um eletrólito constituído por 20 mmol L-1 SDS, 22,5 % (v/v) ACN e 10 mmol L-1 TBS, pH 9,2. Apresentando valores de precisão (<1.0% RSD), linearidade, sensibilidade (LOD=0.84 &#181;g/mL; LOQ=2.55 &#181;g/mL) e recuperação (99.4&#177; 0.7 %) aceitáveis. E ainda, via MEEKC, para determinação simultânea de etinilestradiol e levonorgestrel usando uma microemulsão contendo: 0.5% (m/m) acetato de etila, 1.2% (m/m) butan-1-ol, 0.6% (m/m) de SDS, 15% (v/v) etanol e 82.7% (m/m) TBS 12 mmol L-1 , pH 9.2. Injeção: pelo outlet 3s/0.5 psi. Com alta precisão (<0.8% RSD), linearidade, sensibilidade (LOD=1.04 &#181;g/mL; LOQ=3.15 &#181;g/mL para etinilestradiol e LOD=1.35 &#181;g/mL; LOQ=4.10 &#181;g/mL para o levonorgestrel) e recuperação (98.6&#177; 0.8 % para etinilestradiol), os métodos mostraram-se sensíveis e precisos para serem utilizados no controle de qualidade de formulações farmacêuticas. / In the first chapter of this work, the classification and importance of the sexual steroids for maintenance of the life human is presented. The next chapter presents general aspects on capillary electrophoresis, such as operation, terminology and considerations on the electroosmotic flow and electroforetic mobility. The third chapter shows a study of interaction solvent/ SDS micelle /solute, based on the optimization of molecule geometry, conformational analysis, with molecular descriptors and regression models, based in the partition coefficient. The retention times were measured experimentally for eleven steroids, in MEKC electrolytes modified by solvents. The solvent effect in modulating the retention of solute was explaned in terms of LSER, which indicated the total organic solvent percentage in the electrolyte as the main factor controlling retention. The separation of selected compounds, in the best condition, was tested in urine extract sample from a human volunteer - feminine -1 sex - in puberty phase. The composition of the proposed electrolyte (20 mmol L-1 SDS, 20% (v/v) EtOH and 20 mmol L-1 sodium tetraborate, pH 9.4) can potentially be applied for determination of estrogens in clinical studies (0.80% C.V. for migration time and 2.5% C.V. for peak area, n = five consecutive injections). Later, in fourth chapter, the use of factorial design was introduced to optimize the composition of the electrolyte to separate a mixture-test with eleven steroids. The selection of variable indicated that the concentrations of ACN, SDS and &#946;-CD influenced the most resolution and analysis time. The study of the effect showed that interaction ACN/ &#946;-CD and ACN were important for resolution of the critical pairs. The micelle system constituted of 20 mmol L-1 SDS, 10% (v/v) ACN, 5 mmolL-1 &#946;-CD and 20 mmolL-1 TBS, pH 9.2, was composition to achieve resolution of the critical pairs and analysis time. This method was used to evaluate the presence of the steroids in fecal ethanolic extract of Pantera onca. In another work a MEEKC method was developed and validated for determination of 17 &#946;-estradiol in transdermical adhesive using a microemulsion containing 0.5% (w/w) ethyl acetate, 1.2% (w/w) butan-1-ol, 0.6% (w/w) sodium dodecyl sulfate, 15% (v/v) ACN and 82.7% (w/w) 12 mmol L-1 sodium tetraborate aqueous buffer at pH 9.4. Acceptable precision (<1.2% RSD), linearity, sensitivity (LOD=0.89 &#181;g/mL; LOQ=2.68 &#181;g/mL) and recovery (100.4&#177; 0.9 % at three concentration levels) were obtained. The last chaper, the development and validation of MEKC method for determination of ethynylestradiol in a commercial tablet formulation using a micellar medium containing, 25 mmol L-1 sodium dodecyl sulfate, 22,5% (v/v) ACN and 10 mmol L-1 sodium tetraborate aqueous buffer at pH 9.2 was presented. Acceptable precision (<1.0% RSD), linearity, sensitivity (LOD=0.84 &#181;g/mL; LOQ=2.55 &#181;g/mL) and recovery (99.8&#177; 1.8 % at three concentration levels) were obtained. A MEEKC method for the simultaneous determination of ethynylestradiol and levonorgestrel using microemulsion containing 0.5% (w/w) ethyl acetate, 1.2% (w/w) butan-1-ol, 0.6% (w/w) sodium dodecyl sulfate, 15% (v/v) ethanol and 82.7% (w/w) 12 mmol L-1 sodium III tetraborate aqueous buffer at pH 9.2 was developed. High precision (<0.8% RSD), linearity, sensitivity (LOD=1.04 &#181;g/mL; LOQ=3.15 &#181;g/mL to ethynylestradiol and LOD=1.35 &#181;g/mL; LOQ=4.10 &#181;g/mL to levonorgestrel) and recovery (98.6&#177; 0.8 % at three concentration levels of ethynylestradiol) were obtained.

No primeiro capitulo deste trabalho, é apresentada a classificação e a importância dos esteróides sexuais para manutenção da vida humana. Na seqüência, o próximo capítulo mostra aspectos gerais sobre eletroforese capilar, tais como modo de operação, terminologia utilizada e considerações sobre o fluxo eletrosmótico e mobilidade eletroforética. O terceiro capítulo exibe um estudo da interação solvente/micela de SDS/soluto, baseado na otimização da geometria da molécula, análise conformacional, com descritores moleculares e modelos de regressão, baseados no coeficiente de partição. Foram realizadas medidas experimentais dos tempos de retenção, de onze esteróides, a partir da MEKC, em eletrólitos modificados por solvente, conforme suas propriedades de seletividade. O efeito do solvente na modulação da retenção do soluto foi discutido em termos da LSER, a qual indicou a concentração total de solvente no meio como o principal fator de controle do tempo de retenção. A separação dos compostos selecionados, na melhor condição, foi testada em um extrato de uma amostra de urina obtida de um voluntário humano - sexo feminino - em fase de puberdade. A composição do eletrólito (20 mmol L-1 SDS, 20% EtOH e 20 mmol L-1 tetraborato de sódio a pH 9,4) proposta pode ser aplicada potencialmente para a determinação de estrógenos em estudos clínicos (0.80% C.V. para tempo de migração e 2.5% C.V. para área do pico, n = 5). Posteriormente, já no quarto capítulo, o uso do planejamento fatorial foi uma forma rápida de otimizar a composição do eletrólito para separar uma mistura-teste com onze esteróides. Uma triagem das variáveis indicou que as concentrações de ACN, SDS e &#946;-CD mais influenciavam a resolução e o tempo de análise. O estudo dos efeitos mostrou que a interação ACN/ &#946;-CD e a ACN mais contribuía para resolução dos pares críticos. O sistema micelar constituído por 20 mmol L-1 SDS, 10% ACN, 5 mmolL-1 &#946;-CD e 20 mmolL-1 TBS, pH 9.2, foi o meio no qual se obteve a melhor resposta em relação à resolução dos pares críticos e tempo de análise Este método foi usado avaliar a presença dos esteróides em extrato etanólico de excrementos de Pantera onca. Em outra etapa um método MEEKC foi desenvolvido e validado para a determinação de 17 &#946;-estradiol em adesivo transdérmico usando uma microemulsão contendo 0.5% (m/m) acetato de etila, 1.2% (m/m) butan-1-ol, 0.6% (m/m) SDS, 15% (v/v) ACN e 82.7% (m/m) TBS 12 mmol L-1 , pH 9.4. Foi obtida aceitável precisão (<1.2% RSD), linearidade, sensibilidade (LOD=0.89 &#181;g/mL; LOQ=2.68 &#181;g/mL) e recuperação (100.4 &#177;0.9 %). Por fim, o ultimo capítulo traz o desenvolvimento e validação de um método via MEKC para determinação etinilestradiol em comprimidos usando um eletrólito constituído por 20 mmol L-1 SDS, 22,5 % (v/v) ACN e 10 mmol L-1 TBS, pH 9,2. Apresentando valores de precisão (<1.0% RSD), linearidade, sensibilidade (LOD=0.84 &#181;g/mL; LOQ=2.55 &#181;g/mL) e recuperação (99.4&#177; 0.7 %) aceitáveis. E ainda, via MEEKC, para determinação simultânea de etinilestradiol e levonorgestrel usando uma microemulsão contendo: 0.5% (m/m) acetato de etila, 1.2% (m/m) butan-1-ol, 0.6% (m/m) de SDS, 15% (v/v) etanol e 82.7% (m/m) TBS 12 mmol L-1 , pH 9.2. Injeção: pelo outlet 3s/0.5 psi. Com alta precisão (<0.8% RSD), linearidade, sensibilidade (LOD=1.04 &#181;g/mL; LOQ=3.15 &#181;g/mL para etinilestradiol e LOD=1.35 &#181;g/mL; LOQ=4.10 &#181;g/mL para o levonorgestrel) e recuperação (98.6&#177; 0.8 % para etinilestradiol), os métodos mostraram-se sensíveis e precisos para serem utilizados no controle de qualidade de formulações farmacêuticas. / In the first chapter of this work, the classification and importance of the sexual steroids for maintenance of the life human is presented. The next chapter presents general aspects on capillary electrophoresis, such as operation, terminology and considerations on the electroosmotic flow and electroforetic mobility. The third chapter shows a study of interaction solvent/ SDS micelle /solute, based on the optimization of molecule geometry, conformational analysis, with molecular descriptors and regression models, based in the partition coefficient. The retention times were measured experimentally for eleven steroids, in MEKC electrolytes modified by solvents. The solvent effect in modulating the retention of solute was explaned in terms of LSER, which indicated the total organic solvent percentage in the electrolyte as the main factor controlling retention. The separation of selected compounds, in the best condition, was tested in urine extract sample from a human volunteer - feminine -1 sex - in puberty phase. The composition of the proposed electrolyte (20 mmol L-1 SDS, 20% (v/v) EtOH and 20 mmol L-1 sodium tetraborate, pH 9.4) can potentially be applied for determination of estrogens in clinical studies (0.80% C.V. for migration time and 2.5% C.V. for peak area, n = five consecutive injections). Later, in fourth chapter, the use of factorial design was introduced to optimize the composition of the electrolyte to separate a mixture-test with eleven steroids. The selection of variable indicated that the concentrations of ACN, SDS and &#946;-CD influenced the most resolution and analysis time. The study of the effect showed that interaction ACN/ &#946;-CD and ACN were important for resolution of the critical pairs. The micelle system constituted of 20 mmol L-1 SDS, 10% (v/v) ACN, 5 mmolL-1 &#946;-CD and 20 mmolL-1 TBS, pH 9.2, was composition to achieve resolution of the critical pairs and analysis time. This method was used to evaluate the presence of the steroids in fecal ethanolic extract of Pantera onca. In another work a MEEKC method was developed and validated for determination of 17 &#946;-estradiol in transdermical adhesive using a microemulsion containing 0.5% (w/w) ethyl acetate, 1.2% (w/w) butan-1-ol, 0.6% (w/w) sodium dodecyl sulfate, 15% (v/v) ACN and 82.7% (w/w) 12 mmol L-1 sodium tetraborate aqueous buffer at pH 9.4. Acceptable precision (<1.2% RSD), linearity, sensitivity (LOD=0.89 &#181;g/mL; LOQ=2.68 &#181;g/mL) and recovery (100.4&#177; 0.9 % at three concentration levels) were obtained. The last chaper, the development and validation of MEKC method for determination of ethynylestradiol in a commercial tablet formulation using a micellar medium containing, 25 mmol L-1 sodium dodecyl sulfate, 22,5% (v/v) ACN and 10 mmol L-1 sodium tetraborate aqueous buffer at pH 9.2 was presented. Acceptable precision (<1.0% RSD), linearity, sensitivity (LOD=0.84 &#181;g/mL; LOQ=2.55 &#181;g/mL) and recovery (99.8&#177; 1.8 % at three concentration levels) were obtained. A MEEKC method for the simultaneous determination of ethynylestradiol and levonorgestrel using microemulsion containing 0.5% (w/w) ethyl acetate, 1.2% (w/w) butan-1-ol, 0.6% (w/w) sodium dodecyl sulfate, 15% (v/v) ethanol and 82.7% (w/w) 12 mmol L-1 sodium III tetraborate aqueous buffer at pH 9.2 was developed. High precision (<0.8% RSD), linearity, sensitivity (LOD=1.04 &#181;g/mL; LOQ=3.15 &#181;g/mL to ethynylestradiol and LOD=1.35 &#181;g/mL; LOQ=4.10 &#181;g/mL to levonorgestrel) and recovery (98.6&#177; 0.8 % at three concentration levels of ethynylestradiol) were obtained.

Orientador: Marcos Nogueira Eberlin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-26T03:09:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Steola_MarcosPaulo_M.pdf: 3243022 bytes, checksum: 9b7450eb5a75ce0b22ccba84584755de (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A utilização da espectrometria de massas como ferramenta de quantificação de moléculas em matrizes biológicas complexas vem sendo difundida durante os últimos anos, devido ao sua versatilidade, facilidade no preparo das amostras, alta sensibilidade e rapidez na quantificação. A utilização da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas uniu o poder de separação da cromatografia líquida com o poder de identificação da espectrometria de massas, proporcionando corridas analíticas mais rápidas e menores limites de detecção. O presente trabalho teve como objetivo validar metodologia para a quantificação de 5 hormônios esteroides (estradiol, cortisol, testosterona, progesterona e androstenediona) em plasma e 2 hormônios esteroides ( estradiol e progesterona) em fluído folicular bovino, utilizando-se cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massas, para uso na quantificação de amostras provenientes de duas raças diferentes, Bós taurus e Bós indicus, principais constituintes do rebanho brasileiro, submetidas a duas dietas diferentes. Devido à dificuldade de encontrar matrizes biológicas isentas de hormônios esteroides optou-se pelo uso da técnica de diluição isotópica na validação da metodologia, técnica em que o sinal do hormônio a ser analisado é comparado com seu análogo deuterado, minimizando o efeito da matriz biológica. A metodologia desenvolvida e validada poderá ser utilizada na quantificação de hormônios em matrizes biológicas provenientes de outras raças bovinas, bem como ser aplicada para a quantificação de hormônios esteroides em plasma e fluído folicular em humanos / Abstract: The use of mass spectrometry and quantification of molecules in complex biological matrices tool has been widespread over the last years due to its versatility, ease of sample preparation , high sensitivity and fast quantification . The use of high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry attached the separation power of the liquid chromatography and identification mass spectrometry, giving analytical runs faster and lower detection limits. This study aims to validate the methodology for quantification of 5 steroid hormones ( estradiol , cortisol , testosterone , progesterone and androstenedione ) in plasma and 2 steroid hormones ( estradiol and progesterone ) in bovine follicular fluid , using liquid chromatography with mass spectrometry detector , for use in the quantification of samples from two different breeds , Bos taurus and Bos indicus , the main constituent of the Brazilian herd , subjected to two different diets . Due to the difficulty of finding in biological matrices free steroid hormones, we opted for the use of the isotope dilution technique to validate the methodology , a technique in which the signal of the hormone being examined is compared with its deuterated analogue, minimizing the effect of the biological matrix . The methodology developed and validated may be used in the quantification of hormones in biological matrices from other cattle breeds , as well as be applied to quantify steroid hormones in plasma and follicular fluid in humans / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

Orientador: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T10:44:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Montico_Fabio_M.pdf: 7570263 bytes, checksum: a775095a6141dbe3b18c6ec768585813 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A reposição androgênica representa uma alternativa para minimizar os efeitos prejudiciais do desequilíbrio hormonal em homens senis, embora seus efeitos sobre o desenvolvimento de doenças prostáticas ainda seja assunto controvertido. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar aspectos estruturais e moleculares do lobo ventral da próstata de ratos senis frente à reposição de hormônios esteróides, relacionando as alterações decorrentes da terapia hormonal a possíveis condições de lesões prostáticas. Ratos machos (Sprague- Dawley) foram divididos em um grupo Jovem (JOV) (4 meses), que recebeu óleo de amendoim (5 mL/Kg, s.c.), e grupos senis (10 meses), submetidos aos tratamentos: grupo Senil (SEN): óleo de amendoim (5 mL/Kg, s.c.); grupo Testosterona (TEST): cipionato de testosterona (5 mg/Kg, s.c.); grupo Estrógeno (EST): 17?-estradiol (25 ?g/Kg, s.c.); grupo Castrado (CAS): castração cirúrgica; grupo Castrado-Testosterona (CT): castração e após 30 dias tratamento similar ao grupo TEST; grupo Castrado-Estrógeno (CE): castração e após 30 dias tratamento similar ao grupo EST. Após 30 dias de tratamento, foram coletadas amostras de sangue, para dosagens hormonais séricas, e do lobo ventral, para análises em microscopias de luz e eletrônica de transmissão, morfométricas, imunohistoquímicas e Western Blotting. As moléculas investigadas foram: distroglicanas ? e ? (?-DG e ?-DG), receptor do fator de crescimento homólogo à insulina tipo I (IGFR-1), metaloproteinase-9 de matriz (MMP-9), fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e endostatina. Redução dos níveis séricos de testosterona foi verificada na senescência, com aumento destes após a reposição hormonal no grupo TEST. O estroma do grupo SEN apresentou hipertrofia e células inflamatórias. Após a reposição hormonal na senescência ou frente à castração, verificou-se atrofia no epitélio, células epiteliais com halo citoplasmático claro ao redor do núcleo, microácinos e manutenção do estroma hipertrófico com células inflamatórias. Diminuição dos níveis das DGs foi verificada na senescência, sendo que após a terapia hormonal ocorreu aumento dos níveis protéicos dessas moléculas, especialmente nos grupos que receberam estradiol. Aumento do IGFR-1 e da MMP-9, bem como distribuição diferencial dessas moléculas no compartimento epitelial, foram observados nos grupos submetidos à reposição hormonal e no grupo CAS. O grupo SEN caracterizou acréscimo dos níveis de VEGF, sendo o inverso observado para a endostatina. A terapia hormonal e a castração levaram à elevação dos níveis de VEGF, sobretudo nos grupos EST, CAS e CE. Em oposição, a endostatina demonstrou-se aumentada especialmente nos grupos submetidos à reposição de testosterona. Os presentes resultados sugeriram que o desequilíbrio entre andrógenos e estrógenos verificado na senescência foi acentuado após a terapia hormonal e a castração, potencializando as alterações estruturais associadas a esse período e rompendo o equilíbrio das sinalizações parácrinas prostáticas, com aumento simultâneo de IGFR-1 e MMP-9 e geração de fatores pró e anti-angiogênicos em resposta ao tratamento com estrógenos e andrógenos, respectivamente. Assim, concluiu-se que a terapia hormonal, apesar de seus efeitos positivos sobre as DGs, gerou microambiente prostático reativo, caracterizado por aumento de um fator mitogênico e da remodelação tecidual bem como por desequilíbrio da angiogênese, o que possivelmente comprometeu a função do órgão e o predispôs a desordens glandulares / Abstract: Androgen replacement is an alternative to minimize the harmful effects of hormonal imbalance in elderly men, even though its influence on the development of prostatic diseases is unclear. Thus, the aim herewith was to characterize structural and molecular features of the ventral prostate of senile rats submitted to steroid hormone replacement, relating the alterations resulting from hormonal therapy to possible prostatic lesions. Male rats (Sprague-Dawley) were divided into Young group (YNG) (4 months old rats), which received peanut oil (5 mL/Kg, s.c.), and senile groups (10 months old rats), submitted to the treatments: Senile group (SEN): peanut oil (5 mL/Kg, s.c.); Testosterone group (TEST): testosterone cipionate (5 mg/Kg, s.c.); Estrogen group (EST): 17?-estradiol (25 ?g/Kg, s.c.); Castrated group (CAS): surgical castration; Castrated-Testosterone group (CT): castration and after 30 days treatment similar to TEST group; Castrated-Estrogen group (CE): castration and after 30 days treatment similar to EST group. After 30 days treatment, blood samples were collected for hormonal analysis and ventral prostate samples were processed for light and transmission electronic microscopies, morphometric, immunohistochemical and Western Blotting analysis. The investigated molecules were alfa and beta dystroglycans (?DG and ?DG), insulin-like growth factor receptor-1 (IGFR-1), matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), vascular endothelial growth factor (VEGF) and endostatin. Decreased serum testosterone levels were verified in senescence, with an increase after hormonal replacement in the TEST group. Hypertrophied stroma with inflammatory cells was seen in the SEN group. After hormonal therapy in the senescence or following castration, atrophic and pale cytoplasmatic epithelial cells, microacini and hypertrophied stroma were observed. Decreased DG levels were verified in senescence, but there was an increase of these levels following hormonal therapy, especially in the groups treated with estradiol. Increased IGFR- 1 and MMP-9 protein levels and differential distribution of these molecules were observed in epithelial compartment in those groups which received hormone replacement and in the CAS group. SEN group showed increased VEGF levels in contrast to decreased endostatin levels. Hormonal therapy and castration led to raised VEGF levels, mainly in EST, CAS and CE groups. On the other hand, endostatin was increased especially in those groups submitted to testosterone replacement. The present results suggested that the imbalance between androgens and estrogens in senescence was enhanced after hormone replacement and castration, intensifying structural changes associated with this period. Also, there was a disruption of prostatic paracrine signaling balance, with simultaneous increase of IGFR-1 and MMP-9 and generation of pro and anti-angiogenic factors in response to treatment with estrogens and androgens, respectively. Thus, it could be concluded that despite its positive effects on DGs levels, hormonal therapy created a reactive prostatic microenvironment, characterized by increase of a mitogenic factor and tissue remodelling as well as prostatic angiogenesis imbalance, which could compromise glandular functions and lead to the emergence of prostatic lesions / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

A matriz extracelular (MEC) dos tecidos uterinos é altamente remodelada na gestação de camundongos. Os objetivos deste estudo foram avaliar a influência dos hormônios ovarianos estrógeno (E2) e progesterona (P4) sobre a estrutura dos tecidos uterinos de camundongo e a deposição dos proteoglicanos decorim, biglicam, fibromodulim, lumicam, perlecam e versicam nestes tecidos. Para isto, utilizamos um modelo de castração e reposição hormonal, e o ciclo estral como parâmetro fisiológico. Verificamos que, como na gestação, durante o ciclo estral ocorre intensa remodelação na estrutura e na MEC dos tecidos uterinos. Verificamos ainda que a resposta aos hormônios ovarianos é: compartimento-específica; hormônio-específica e molécula-específica. Notável foi a modulação do versicam pelos hormônios ovarianos. P4 induz a deposição de versicam no estroma, enquanto o miométrio responde apenas a E2. A modulação dos proteoglicanos pelos hormônios ovarianos mostra a relevância destas moléculas para a composição de um ambiente uterino propício para o desenvolvimento do embrião. / The extracellular matrix (ECM) of the mouse uterine tissues is highly remodeled during pregnancy. The aim of this study was to demonstrate the influence of estrogen (E2) and progesterone (P4) on the uterine structure and on the deposition of the proteoglycans decorin, biglycan, fibromodulin, lumican, perlecan and versican in these tissues. For that purpose, we used a model of castration e hormone replacement as main strategy, and the estrous cycle as physiological parameter. We verified that, as in pregnancy, during the estrous cycle an intense remodeling occurs on the structure and the ECM of the uterine tissues. We also showed that the response to the ovarian hormones is: compartment-; hormone- and molecule- specific. Noteworthy was the modulation of versican by the hormones: P4 induces the deposition of versican in the stroma, whereas the myometrium responds only to E2. The modulation of proteoglycans by the ovarian hormones indicates the relevance of these molecules for the composition of a proper microenvironment for embryo development.

INTRODUÇÃO: A insuficiência cardíaca (IC) é uma síndrome sistêmica, cuja uma das possíveis evoluções se caracteriza pela perda de massa magra e intolerância aos esforços, quadro conhecido como caquexia cardíaca (CC). Estudos realizados usando homens e ratos demonstram que na associação da IC com hipogonadismo há um pior quadro clínico e desenvolvimento de CC, levando a um mal prognóstico e aumento da mortalidade. Para o sexo feminino, tanto no período pré ou pós-menopausa, não é conhecida a associação de possível deficiência de hormônios sexuais, tampouco seu impacto no prognóstico, mortalidade e desenvolvimento de CC em pacientes com IC. Os objetivos deste estudo foram: 1) Avaliar o efeito da IC sobre o possível desenvolvimento de CC em ratas. 2) Avaliar o efeito da IC sobre a produção de hormônios sexuais: Testosterona total, estradiol, FSH. MÉTODOS: Ratas da linhagem Sprague Dawley, com 60 dias de vida, foram divididas de acordo com os procedimentos cirúrgicos: Ratas intactas (INT) ou com ooforectomia (OVX), ratas com cirurgia fictícia (SHAM) do infarto do miocárdio (IM) ou cirurgia IM. A combinação destes procedimentos originou quatro grupos experimentais: INT+SHAM, INT+IM, OVX+SHAM e OVX+IM. Trinta dias após a OVX, amostras de sangue foram coletadas, para a dosagem hormonal e os animais foram submetidos à cirurgia de indução ao IM ou SHAM. Após oitos semanas, as ratas passaram pela avaliação ecocardiográfica. A partir desta, estabeleceu-se um corte de Fração de Ejeção (FE) <= 50% para definir o desenvolvimento de disfunção cardíaca a partir da realização do IM, constituindo dessa forma, os grupos INT+IM e OVX+IM. Com quatro semanas adicionais (totalizando 12 semanas após a indução do IM), houve a consolidação do quadro crônico de IC; então as ratas foram submetidas à avaliação hemodinâmica, da capacidade funcional e a nova coleta de sangue para dosagem hormonal. Após a eutanásia, os tecidos foram coletados para as análises morfológicas e histológicas. RESULTADOS: As ratas dos grupos OVX (OVX+SHAM e OVX+IM) não apresentaram ciclos ovarianos, demonstraram hipertrofia dos úteros e aumento do peso corporal final quando comparadas aos grupos INT (INT+SHAM e INT+IM), além de alterações na morfologia das glândulas adrenais - caracterizando o quadro de privação de hormônios ovarianos. As ratas dos grupos IM (INT+IM e OVX+IM) não tiveram alterações hemodinâmicas, contudo demonstraram reduzida capacidade funcional e piora nas variáveis ecocardiográficas (FE, FS, DSVE, TCIV) quando comparadas aos grupos SHAM (INT+SHAM e OVX+SHAM); as avaliações histológicas apontam valores de área infartada entorno de 40% e hipertrofia de septo nos grupos IM. Os animais não caracterizaram quadro de CC - caracterizada por diminuição do peso corporal, diminuição da densidade capilar na musculatura e atrofia das fibras musculares (m. sóleo) - após12 semanas de disfunção cardíaca / Introduction: Heart failure (HF) is a systemic disease, which one of the possible progress is characterized by lean mass loss and intolerance to efforts, this framework is known as cardiac cachexia (CC). Studies in men and rats have shown that when HF is associated with hypogonadism it has a worse clinical condition and CC evolution, leading to a poor prognosis and increased mortality. For females, both in the pre menopause period than in the post menopause it is not known how the association of sex hormones deficiency with HF can impact the prognosis and mortality of female patients, as well as the development of CC. The objectives of this study were: 1) Evaluate the effect of HF on the possible CC development in female rats. 2) Evaluate the effect of HF on the production of sex hormones: Total testosterone, estradiol, FSH. METHODS: Female rats (Sprague Dawley strain, 60 days old) were divided according to the surgical procedures: intact rats (INT) or ovariectomy (OVX) rats with sham surgery (SHAM) of myocardial infarction (MI) or MI surgery. The combination of these procedures led to four groups: INT + SHAM, INT + MI, OVX + SHAM and OVX + MI. 30 days after OVX, blood samples were collected for hormone dosage and the animals have been underwent to surgery to the MI induction or SHAM. After eight weeks, the rats have gone through echocardiographic evaluation. From this procedure, it was established a cutting Ejection Fraction (EF) <= 50% to define the development of cardiac dysfunction from the realization of MI, constituting INT + IM and IM + OVX groups. With four additional weeks (totaling 12 weeks after MI induction), there was the consolidation of HF\'s chronic condition; female rats were subjected to evaluation of functional and hemodynamic capacity and a new blood collection for hormonal dosage. After euthanasia, tissues were collected for morphological and histological analyzes. RESULTS: The rats of the OVX groups (OVX + SHAM and OVX + MI) showed no ovarian cycles, demonstrated uterus\' hypertrophy and an increase in final body weight when compared to INT groups (INT + SHAM and INT + MI), changes in morphology of the adrenal glands - evidencing the situation of ovarian hormones deprivation. The rats of the MI group (INT + MI and OVX + MI) had no hemodynamic changes, but showed reduced functional capacity and deterioration of echocardiographic variables (EF, FS, LVSD, IVCT) when compared to SHAM groups (INT + SHAM and OVX + SHAM ); the histological evaluations indicate infarcted area values around 40% and septal hypertrophy at MI groups. The animals did not characterize CC - characterized by decreased body weight, decreased capillary density in the muscle and muscle fiber atrophy (m. soleus) - even after 12 weeks of cardiac dysfunction