O Vírus Respiratório Sincicial humano (hRSV human Respiratory Syncytial Virus) está entre os principais causadores de doenças do trato respiratório. O hRSV pertence à família Paramyxoviridae. Os sintomas da infecção podem variar de simples estado gripal a doença respiratória grave, e eventualmente levar a óbito. Atualmente não há vacina licenciada ou droga eficaz contra esse vírus. Anteriormente foram obtidos, em nosso laboratório, vetores com genes otimizados. Com essas ferramentas a proteína M foi produzida e purificada tendo sido possível obter anticorpos policlonais específicos e eficientes na sua detecção. Com esses anticorpos confirmamos a interação da proteína M com as proteínas celulares tropomiosina e nucleofosmina. Também foi demonstrado por imunofluorescência e por western blotting que a proteína M quando expressa fora do contexto de infecção apresenta localização nuclear e citoplasmática. Foram feitos testes de imunização com a proteína M purificada ou com um vetor eucariótico que a expressa (DNA). A imunização com proteína M resultou apenas em resposta humoral, enquanto com a vacina de DNA obtivemos apenas resposta celular. Nenhum desses imunógenos, entretanto, foi capaz de conferir proteção contra hRSV. / The human Respiratory Syncytial Virus (hRSV) is among the main causes of respiratory tract diseases, hRSV belongs to the Paramyxoviridae family. The symptoms of the infection can range from simple flulike state to severe respiratory disease eventually leading to death. Currently there is no licensed vaccine or effective drug against this virus. Vectors with genes optimized for of the hRSV Matrix protein (M) expression in bacteria and in eukaryotic cells were previously obtained in our lab. With these tools the M protein was produced and purified. Specific and efficient polyclonal antibodies could then be obtained and used for its detection. Using these antibodies we confirmed M interaction with cellular proteins tropomyosin and nucleophosmin. It was also demonstrated by immunofluorescence and western blotting that protein M when expressed out of viral infection context, presents cytoplasmic and nuclear localization. Immunization tests were made with the purified M protein or with a eukaryotic vector that expresses it (DNA). Immunization with M protein resulted only in humoral response, while with the DNA vaccine only cellular response was obtained. None of these antigens, however, was able to confer protection against hRSV.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:42:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP / FAPESP:10/52170-9

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:14:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AldairSP_DISSERT.pdf: 3401140 bytes, checksum: 29fad07626595e61c30bdf3a90539133 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Chronic lymphoproliferative disorders (DLPC) are lymphoid system diseases characterized by the abnormal proliferation of mature lymphocytes that affect B cells, T lymphocytes and NK cells. The aim of the study was to demonstrate the relevance of immunophenotyping by flow cytometry in patients with prolonged lymphocytosis and / or cytomorphological changes compatible with lymphoproliferative diseases. In this study 460 patients (244 men and 216 women) with DLPC were evaluated. Were analyzed by flow cytometry with a panel of monoclonal antibodies consisting of CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD19, CD22, CD23, CD25, CD38, CD45, CD16/CD56, and HLADR heavy and light chains of immunoglobulins. It also examines information regarding age, gender of patients and laboratory data as leucocytes, cytomorphological analysis, platelet count and hemoglobin determination. The results showed 398 cases of chronic lymphoproliferative disorders and 62 of DLPC B cell lymphoproliferative diseases T. B showed the following distribution : 253 cases of chronic lymphocytic leukemia (CLL), 42 cases of multiple myeloma ( MM ), 37 cases of lymphoma non - Hodgkin lymphoma in leukemic phase (NHL) , 17 cases of pro- B lymphocytic leukemia ( B -PLL), 15 cases of mantle cell lymphoma (MCL ), 12 cases of plasma cell leukemia ( PCL), 9 cases of lymphoma Burkitt (Linf B), 8 cases of leukemia villous cells ( LCV), 3 cases of splenic lymphoma with villous cells (LECV), a case of follicular lymphoma (LF) and a Waldenstr?n macroglobulinemia ( MW). The diseases source NK / T were 23 cases of peripheral T cell lymphoma (LCTP), 14 cases of T prolymphocytic leukemia (T -PLL), 10 cases of leukemia T of large granular lymphocytes (LGL -T) 9 cases of leukemia cells of adult T (LCTA), 5 cases of Sezary syndrome (SS) and a case of large granular NK leukemia (LGL -NK) lymphocytes. In conclusion, the combined use of the monoclonal antibody panel careful cytomorphological analysis was shown to be essential in immune diagnosis and classification of chronic lymphoproliferative disorders. This study was approved by the IRB - HUOL under number 356 / 09 / Os transtornos linfoproliferativos cr?nicos (DLPC) s?o doen?as do sistema linfoide caracterizadas pela prolifera??o anormal de linf?citos maduros que acometem c?lulas B, linf?citos T e c?lulas NK. O objetivo do estudo foi demonstrar a relev?ncia da imunofenotipagem por citometria de fluxo em pacientes portadores de linfocitose prolongada e/ou altera??es citomorfol?gicas compat?veis com doen?as linfoproliferativas. Neste estudo foram avaliados 460 pacientes (244 homens e 216 mulheres) com DLPC. Foram analisados por citometria de fluxo com um painel de anticorpos monoclonais constitu?do por CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD19, CD22, CD23, CD25, CD38, CD45, CD16/CD56, HLADR e cadeias leves e pesadas de imunoglobulinas. Foram tamb?m investigadas informa??es referentes ? idade, ao g?nero dos pacientes e aos dados laboratoriais como: leucometria, an?lise citomorfol?gica, contagem de plaquetas e determina??o da hemoglobina. Os resultados demonstraram 398 casos de doen?as linfoproliferativas cr?nicas B e 62 de DLPC de c?lula T. As doen?as linfoproliferativas B apresentaram a seguinte distribui??o: 253 casos de leucemia linfoc?tica cr?nica (LLC), 42 casos de mieloma m?ltiplo (MM), 37 casos de linfoma n?o Hodgkin em fase leuc?mica (LNH), 17 casos de leucemia pr?-linfoc?tica B (LPL-B), 15 casos de linfoma de c?lulas do manto (LCM), 12 casos de leucemia de c?lulas plasm?ticas (LCP), 9 casos de linfoma de Burkitt (Linf B), 8 casos de leucemia de c?lulas vilosas (LCV), 3 casos de linfoma espl?nico de c?lulas vilosas (LECV), um caso de linfoma folicular (LF) e um de macroglobulinemia de Waldenstr?n (MW). As doen?as de origem T/NK foram: 23 casos de linfoma de c?lulas T perif?ricas (LCTP), 14 casos de leucemia pr?linfoc?tica T (LPL-T), 10 casos de leucemia de grandes linf?citos T granulares (LGLT), 9 casos de leucemia de c?lulas T do adulto (LCTA), 5 casos de S?ndrome de Sezary (SS) e um caso de leucemia de grandes linf?citos NK granulares (LGL-NK). Em conclus?o, o uso do painel de anticorpos monoclonais combinado ? an?lise citomorfol?gica cuidadosa mostrou-se essencial no diagn?stico e classifica??o imune das doen?as linfoproliferativas cr?nicas. O presente estudo foi aprovado pelo CEP HUOL sob n?mero 356/09

Orientador: Leonardo Susumu Takahashi / Resumo: O presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência de dietas com diferentes níveis de proteína (P) e carboidratos (CH) na resposta imunológica e nos índices zootécnicos de juvenis de surubim (Pseudoplatystomasp.). O experimento foi conduzido no Laboratório de Aquicultura da Unesp – Campus de Dracena, distribuído em um delineamento inteiramente casualizado com seis tratamentos e quatro repetições (38P/22CH; 38P/26CH; 38P/30CH; 42P/22CH; 42P/26CH; 42P/30CH). Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias comparadas pelo Teste de Duncan (5%), através do programa estatístico SAS, versão 9.0. Não foram observadas diferenças significativas entre as dietas para os parâmetros de desempenho: ganho em biomassa, taxa de crescimento específico, conversão alimentar e taxa de eficiência protéica. Os grupos alimentados com a dieta 38P/22CH obtiveram melhor desempenho para comprimento padrão, peso final e ganho de peso. Não foram observadas diferenças significativas em albumina, atividade respiratória dos leucócitos e atividade hemolítica complemento. A dieta 38P/30CH obteve valores médios significativamente maiores para as concentrações de proteína, globulina e lisozima. Para os parâmetros hematológicos, entre as dietas, não houve diferença significativa para as concentrações de eritroblasto, linfócito, eosinófilo, volume corpuscular médio e hemoglobina corpuscular média. Após serem desafiados, os peixes apresentaram uma resposta significativa na ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the influence of diets with differentprotein levels (P) and carbohydrates (CH) in the immune response and growth performance of juvenile surubim (Pseudoplatystoma sp.). The experiment was conducted in the Aquaculture Laboratory - Unesp Dracena, distributed in a completely randomized design with six treatments and four replications (38P/22CH; 38P/26CH; 38P/30CH; 42P/22CH; 42P/26CH; 42P/30CH). The results were submitted to analysis of variance (ANOVA) and the means were compared by Duncan test (5%), through the SAS statistical software, version 9.0. No significant differences were observed among diets regarding the growth performance parameters: weight gain, specific growth rate, feed conversion and protein efficiency ratio. Fish fed diets with 38P/22CH diet performed better for standard length, body weight and weight gain. There were no significant differences in albumin, respiratory activity of leukocytes and complement hemolytic activity. The 38P/30CH diet achieved significantly higher average values for the concentrations of protein, globulin and lysozyme. For hematological parameters, there were no significant difference in the concentrations of erythroblast, lymphocytes, eosinophils, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin. After being challenged fish showed a significant response in hemoglobin concentration, and a decrease in hematocrit in response to stress caused by challenge. The best productive response wasobserved in fis... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Adriano Mauro Cansian / Banca: Marcos Antonio Cavenaghi / Banca: Rafael Duarte Coelho dos Santos / Resumo: Os códigos maliciosos (malware) podem causar danos graves em sistemas de computação e dados. O mecanismo que o sistema imunológico humano utiliza para proteger e detectar os organismos que ameaçam o corpo humano demonstra ser eficiente e pode ser adaptado para a detecção de malware atuantes na Internet. Neste contexto, propõe-se no presente trabalho um sistema que realiza coleta distribuída, análise e detecção de programas maliciosos, sendo a detecção inspirada no sistema imunológico humano. Após a coleta de amostras de malware da Internet, as amostras são analisadas de forma dinâmica de modo a proporcionar rastros de execução em nível do sistema operacional e dos fluxos de rede que são usados para criar um modelo comportamental e para gerar uma assinatura de detecção. Essas assinaturas servem como entrada para o detector de malware e atuam como anticorpos no processo de detecção de antígenos realizado pelo sistema imunológico humano. Isso permite entender o ataque realizado pelo malware e auxilia nos processos de remoção de infecções / Abstract: Malicious programs (malware) can cause severe damages on computer systems and data. The mechanism that the human immune system uses to detect and protect from organisms that threaten the human body is efficient and can be adapted to detect malware attacks. In this context, we propose a system to perform malware distributed collection, analysis and detection, this last inspired by the human immune system. After collecting malware samples from Internet, they are dynamically analyzed so as to provide execution traces at the operating system level and network flows that are used to create a behavioral model and to generate a detection signature. Those signatures serve as input to a malware detector, acting as the antibodies in the antigen detection process performed by immune human system. This allows us to understand the malware attack and aids in the infection removal procedures / Mestre

Mucosal immune system comprises not only the major compartment of the immune system but also important interface with the outer environment. It is responsible in maintaining an intricate balance with the danger and non-danger stimuli of the outer world by employing specific anatomical features and unique functional mechanisms. Mucosal immune system has been long understudied, perhaps due to the limited accessibility, and its biological importance is thus still underevaluated. However, it has become evident that it is important to study mucosal immune system not only in local mucosal affections but also when uncovering pathogenic mechanisms and novel prevention strategies of organ specific autoimmune diseases such as type 1 diabetes. Thus, the first, more clinically oriented part of this thesis is focused on mucosal immune system of the upper respiratory tract in disease conditions - in nasal polyposis (NP). Because there is a substantial accumulation of eosinophils and neutrophils in the most frequent type of NP, we investigated and described increased expression of chemokine receptors CCR1 and CCR3 in NP versus nasal mucosa. Both innate immune mechanisms as well as homeostasis of epithelial cells may participate in NP. We have documented increased numbers of iNOS-positive and insulin-like growth...

O chá verde (CV) é um fitoterápico produzido a partir da planta Camellia sinensis e apresenta propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias, anticancerígenas e antiobesidade. Foi realizado um estudo para investigar se o CV seria capaz de modular alguns parâmetros funcionais de linfócitos de animais induzidos à obesidade por dieta hipercalórica. Os grupos suplementados receberam 500 mg/kg de CV durante 22 dias seguida da dieta hipercalórica por mais 44 dias acompanhada também do tratamento com o CV. O tratamento com o CV reduziu a proliferação celular, a atividade das enzimas metabólicas hexoquinase e glicose-6-fosfato desidrogenase, aumentou a atividade de enzimas antioxidantes, diminuiu a produção de espécies reativas de oxigênio, a produção de citocinas pró- inflamatórias (IL-6, IL-1β, TNF-α) e restaurou os índices de IL-10 que se encontrava diminuído no grupo obeso. Os efeitos observados pelo CV podem proporcionar um ambiente mais adequado para o bom funcionamento celular, diminuindo a produção de mediadores inflamatórios que estão presente na obesidade. / Green tea (GT) is a phytochemical produced from Camellia sinensis and it has anti-inflammatory, anti-cancer, anti-obesity and antioxidant properties. This study was conducted to investigate whether the GT was able to modulate some lymphocyte functional parameters of obesity - induced animals by hypercaloric diet. Supplemented groups received 500 mg/kg GT for 22 days followed by hypercaloric diet for additional 44 days, together with the GT treatment. Treatment with GT reduced the cell proliferation capacity, the activity of metabolic enzymes hexokinase and glucose-6-phosphate dehydrogenase, increased the activity of antioxidant enzymes, decreased the production of reactive oxygen species, production of proinflammatory cytokines (IL-6, IL-1β, TNF-α) and restored the levels of IL-10 which was reduced by obesity. The GT effects can provide a more suitable environment for proper lymphocyte function, also reducing production of inflammatory mediators in obesity.

Citocinas geradas durante a I/R-i promovem lesão pulmonar aguda e podem causar imunossupressão. Investigamos se a inflamação pulmonar após dias de reperfusão intestinal está relacionada com alterações no sistema imune. Ratos machos Wistar foram submetidos a oclusão da artéria mesentérica superior por 45 min e a 2 h, 3, 5 ou 20 dias de reperfusão. Observamos que após 5 dias de reperfusão intestinal enterobactérias estão presentes nos linfonodos mesentéricos e que os neutrófilos circulantes estão mais ativos no combate a patógenos, enquanto leucócitos da cavidade peritoneal não. Notamos aumento de IL-1b, TNF-a, IL-17, IL-4 e diminuição de IL-10 no explante pulmonar e aumento de IL-1b, IFN-g e LDH no soro. Já os níveis de nitritos, corticosterona, HMGB-1, ácido úrico, AMPc e a mecânica respiratória não se alteraram. Os resultados apontam para a I/R-i como promotora de modificação temporais no organismo. Alterações nos mecanismos regulatórios da inflamação e do sistema imune contribuem para a inflamação pulmonar e sistêmica, sem alterar a função mecânica pulmonar / Cytokines generated during intestinal I/ R promote acute lung injury and may cause immunosuppression. We investigate if the pulmonary inflammation observed after several days of reperfusion is related to changes in the immune system. Male Wistar rats were subjected to occlusion of the superior mesenteric artery for 45 min and reperfused for 2 h , 3, 5 or 20 days. We observed that after 5 days of reperfusion enterobacteraceae are present in mesenteric lymph nodes and that circulating neutrophils are more effective against pathogens, whereas leukocytes from the peritoneal cavity are not. We noted increase of IL-1b, TNF-a, IL-17, IL -4 and decrease of IL-10 in lung explant and increase of IL-1b, IFN-g and LDH in serum. Furthermore, the levels of nitrites, corticosterone, HMGB -1, uric acid, cAMP, as well as respiratory function, did not change. Based on the foregoing, we observed that alterations in regulatory mechanisms of inflammation and immune system after contribute to pulmonary and systemic inflammation, but do not alter pulmonary mechanical function.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:42:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Imunocomprometidos são pessoas susceptíveis a adquirir doenças graves a partir de alimentos contaminados, por possuírem um baixo número de células de defesa. Em consequência a este fato, apresentam alimentação extremamente restrita, evitando qualquer alimento que represente um risco microbiológico. A irradiação é uma das poucas tecnologias que permite garantir a segurança e a qualidade do alimento, controlando microrganismos patogênicos, sem afetar significativamente qualquer atributo organoléptico. Tomando-se por base a restrição alimentar em relação a produtos frescos, este trabalho destinou-se a estudar o efeito da radiação ionizante (raios gama) em saladas de frutas para pessoas imunocomprometidas. Para tanto, frutas minimamente processadas e saladas de frutas foram submetidas às doses de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 e 3,0 kGy e analisadas juntamente com as amostras controle (não irradiadas). Análises físico-químicas (cor, textura, acidez titulável total, pH, atividade de água, sólidos solúveis totais e açúcares solúveis), microbiológicas (estafilococos coagulase positiva, contagem de bolores e leveduras, contagem de bactérias aeróbias, coliformes totais, E. Coli e Salmonella) e sensoriais (testes de aceitação e degustação) foram realizadas, além da aplicação de questionários com chefes de nutrição de hospitais para o entendimento de práticas acerca da dieta hospitalar de imunocomprometidos. Os resultados demonstraram que a irradiação na dose de 3,0 kGy foi eficaz na eliminação de microrganismos da salada de frutas, garantindo a segurança microbiológica dentro dos níveis exigidos pela legislação. Em relação aos resultados físico-químicos, foram observadas alterações de cor e de textura com o aumento da dose de radiação. Resultados de pH, acidez, sólidos solúveis totais e atividade de água apresentaram flutuações de valores principalmente em função dos fatores intrínsecos da fruta, ao passo que saladas de frutas irradiadas com doses de 3,0 kGy, apresentaram uma tendência de ficar mais doces que as amostras controle, obtendo boa aceitação sensorial. Além disso, os resultados dos questionários realizados em hospitais reportaram uma necessidade de incorporar alimentos frescos à dieta nutricional dos imunocomprometidos, bem como a criação ou o estabelecimento de protocolos nutricionais no país para essa área. Sendo assim, com base nos resultados microbiológicos, físico-químicos e sensoriais pode-se concluir que saladas de frutas podem ser indicadas para o consumo de imunocomprometidos, desde que tratadas com a dose de 3,0 kGy e produzidas com Boas Práticas de Fabricação, respeitando os critérios de produção desde a matéria-prima até o produto final. / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP / FAPESP:10/52170-9

Orientador: Fernando Jose Von Zuben / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e Computação / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:03:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coelho_GuilhermePalermo_M.pdf: 2968179 bytes, checksum: bbea7c9c565907f86eee09155421bfa3 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O uso da abordagem ensembles tem sido bastante explorado na última década, por se tratar de uma técnica simples e capaz de aumentar a capacidade de generalização de soluções baseadas em aprendizado de máquina. No entanto, para que um ensemble seja capaz de promover melhorias de desempenho, os seus componentes devem apresentar bons desempenhos individuais e, ao mesmo tempo, devem ter comportamentos diversos entre si. Neste trabalho, é proposta uma metodologia de criação de ensembles para problemas de classificação, onde os componentes são redes neurais artificiais do tipo perceptron multicamadas. Para que fossem gerados bons candidatos a comporem o ensemble, atendendo a critérios de desempenho e de diversidade, foi aplicada uma meta-heurística populacional imuno-inspirada, denominada opt-aiNet, a qual é caracterizada por definir automaticamente o número de indivíduos na população a cada iteração, promover diversidade e preservar ótimos locais ao longo da busca. Na etapa de seleção dos componentes que efetivamente irão compor o ensemble, foram utilizadas seis técnicas distintas e, para combinação dos componentes selecionados, foram adotadas cinco estratégias. A abordagem proposta foi aplicada a quatro problemas de classificação de padrões e os resultados obtidos indicam a validade da metodologia de criação de ensembles. Além disso, foi verificada uma dependência entre o melhor par de técnicas de seleção e combinação e a população de indivíduos candidatos a comporem o ensemble, assim como foi feita uma análise de confiabilidade dos resultados de classificação / Abstract: In the last decade, the ensemble approach has been widely explored, once it is a simple technique capable of increasing the generalization capability of machine learning based solutions. However, an ensemble can only promote performance enhancement if its components present good individual performance and, at the same time, diverse behavior among each other. This work proposes a methodology to synthesize ensembles for classification problems, where the components of the ensembles are multi-layer perceptrons. To generate good candidates to compose the ensemble, meeting the performance and diversity requirements, it was applied a populational and immune-inspired metaheuristic, named opt-aiNet, which is characterized as being capable of automatically determining the number of individuals in the population at each iteration, promoting diversity and preserving local optima through the search. In the component selection phase, six distinct techniques were applied and, to combine these selected components, five strategies were adopted. The proposed approach was applied to four pattern classification problems and the obtained results indicated the validity of the methodology to synthesize ensembles. It was also verified a dependence of the best pair of selection and combination techniques on the population of candidates to compose the ensemble, and it was made an analysis of the confidence of the classification results / Mestrado / Engenharia de Computação / Mestre em Engenharia Elétrica