Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Renata Cunha Madureira.pdf: 2108717 bytes, checksum: 17e511fe376ace549930ffeb6fed483c (MD5) Previous issue date: 2007-09-17 / Funda??o Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Spirochetes of the genus Borrelia attack animals and humans all over the world, causing different types of diseases. The unique species of Borrelia known and identified in Brazil which infects bovines and equines is B. theileri, transmitted by Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Several studies were been made to identify another spirochete that circulates in the country and infects both animals and humans, providing clinical symptoms regarding Lyme disease (LD). The objectives of this work were to determine the frequency of serum-positive animals for Borrelia burgdorferi stricto sensu in equines of the Maraj? Island and the municipality of Castanhal, State of Par?; to caracterize morfometrically and genotypically isolates of B. theileri from equine and to analyze genotipycally spirochetes the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus, and human, by analysis of partial sequence of the gene 16S rRNA, fla and rpoB. Serum from 105 equines from the Maraj? Island and 103 from Castanhal municipality were collected and analyzed by indirect ELISA test. Fifteen equines (7.2% of the total) were serum-positive, being 10 from the Maraj? Island (9.5%) and five from the Castanhal municipality (4.9%). For the morfometric and genotypic characterization was collected serum of equine from the Rio de Janeiro State. Tick isolate was obtained from supernatant of a cell culture of ticks from the Mato Grosso do Sul State. Human isolate was obtained from blood sample of a woman, from the Serop?dica municipality, RJ, with LDsimile. The PCR was carried through using primers for the gene 16S rRNA, fla and rpoB. The products of amplification were cloned and sequenced. The analysis of the sequences of the isolated of equine for the genes 16S rRNA and fla of 99% (609/611) and 98% (222/226) of identity with sequences of B. theileri, respectively, in set with morfometric analysis (17.2 ? 3.6μm of length; 10 ? 2 espiras) revealed to be the microrganism in question, B. theileri. For the gene rpoB it was observed 92%(250/270) of identity with sequences of B. hermisii. The analysis of the sequences of the tick isolated revealed an identification of 100% (177/177) for the gene 16S rRNA with sequences of B. burgdorferi deposited in "GeneBank", 100% of identity (23/23) for the gene fla with B. theileri and 92% of identity (250/270) for the gene rpoB with sequence of B. hermisii. The analysis of the sequences of the human isolated revealed an identification of 99% (886/889) for the gene 16S rRNA with B. burgdorferi sequences. The presence of antibodies against Borrelia burgdorferi in equines from both places is an indicative of the presence of Borrelia sp., and, despite the lower frequency of infected animals, attention is needed for the possible occurrence of human borreliosis in those areas, considering the importance of this emergent zoonosis. This is the first genotypic characterization of a Brazilian isolate of B. theileri, as well as the first report of species of Borrelia different of B. theileri attack R. (Boophilus) microplus and confirmation of the presence of the genus Borrelia causing LD-simile in Brazil. / Espiroquetas do g?nero Borrelia acometem animais e humanos em todo o mundo determinando diferentes tipos de doen?as. A ?nica esp?cie de Borrelia reconhecida e identificada no Brasil que infecta bovinos e eq?inos ? Borrelia theileri, transmitida por Rhipicephalus (Boophilus) microplus. V?rios estudos t?m sido feitos a fim de se identificar outro espiroquet?deo que circula em nosso meio e infecta animais e humanos, levando a quadro cl?nico semelhante ? borreliose de Lyme (BL). O objetivo do presente trabalho foi determinar a freq??ncia de animais soropositivos para Borrelia burgdorferi sensu stricto em eq?inos da Ilha de Maraj? e munic?pio de Castanhal, Estado do Par?, caracterizar morfometricamente B. theileri isolado de eq?ino e genotipicamente isolados de espiroquetas obtidos de eq?ino, carrapato R. (Boophilus) microplus e humano, por an?lise das seq??ncias parciais dos genes 16S rRNA, fla e rpoB. Coletou-se 105 soros de eq?inos provenientes da Ilha de Maraj? e 103 do munic?pio de Castanhal (n=208), os quais foram analisados pelo ELISA indireto. Observou-se 15 animais soropositivos (7,2%), sendo 10 (9,5%) animais da Ilha de Maraj? e cinco (4,9%) de Castanhal. Para caracteriza??o morfom?trica e genot?pica foi coletado sangue de um eq?ino, proveniente do Estado do Rio de Janeiro. O isolado de carrapato foi obtido a partir de sobrenadante de cultura de c?lulas de carrapatos R. (Boophilus) microplus, proveniente do Estado do Mato Grosso do Sul. O isolado de humano foi obtido do sangue de um indiv?duo do sexo feminino, residente no munic?pio de Serop?dica-RJ, com BLsimile. Realizou-se a t?cnica de PCR utilizando iniciadores para o gene 16S rRNA, fla e rpoB. Os produtos da amplifica??o foram clonados e sequenciados. A an?lise das seq??ncias do isolado de eq?ino para os genes 16S rRNA e fla, 99% (609/611) e 98% (222/226) de identidade com seq??ncias depositadas no GeneBank para B. theileri, respectivamente, em conjunto com a an?lise morfom?trica (17,2 ? 3,6 μm de comprimento; 10 ? 2 espiras) revelou ser o microrganismo em quest?o, B. theileri. Para o gene rpoB observou-se 92%(250/270) de identidade com seq??ncias de B. hermisii. O sequenciamento do isolado de carrapato revelou 100% de identidade (177/177) para o gene 16S rRNA com seq??ncias de B. burgdorferi depositadas no GeneBank , 100% de identidade (23/23) para o gene fla com B. theileri e 92% de identidade (250/270) para o gene rpoB com B. hermisii. O sequenciamento do gene 16S rRNA de sangue humano com sintomatologia para borreliose de Lyme-simile, apresentou identidade de 99% (886/889) com B. burgdorferi. A presen?a de anticorpos hom?logos contra B. burgdorferi em eq?inos na Ilha de Maraj? e munic?pio de Castanhal ? indicativo da presen?a de Borrelia sp. e, apesar da baixa freq??ncia de animais soropositivos ? necess?rio aten??o para ocorr?ncia de borreliose humana nas regi?es estudadas, considerando a import?ncia dessa enfermidade como zoonose emergente. Esta ? a primeira descri??o genot?pica de isolado brasileiro de B. theileri, assim como o primeiro relato de esp?cie de Borrelia diferente de B. theileri infectando R. (Boophilus) microplus e confirma??o da presen?a de espiroquet?deo do g?nero Borrelia causando borreliose de Lyme-simile no Brasil.

A toxoplasmose é uma infecção que pode causar graves lesões fetais quando adquirida durante a gestação. O diagnóstico é sobretudo sorológico e deve ser feito por acompanhamento mensal em gestantes soronegativas, que tem aumentado nos últimos anos. A triagem sorológica para estas gestantes demanda metodologias de alto desempenho e eficiência, que permitam a introdução rápida do tratamento evitando a doença. Para este fim, desenvolvemos um ensaio sorológico fluorescente de fase sólida para a detecção conjunta de IgG, IgM e IgA contra Toxoplasma gondii (FISAt). Nosso grupo tem desenvolvido novos testes fluorimétricos de fase sólida com conjugados fluorescentes refinados sensíveis e específicos com possibilidade de detecções simultâneas numa mesma reação. Para a construção do FISAt, foram selecionados e produzidos conjugados marcados com fluorocromos de emissão não interferente, com alta eficiência e similares à reatividade de conjugados comerciais enzimáticos. Esta seleção de conjugados fluorescentes detectados com filtros de excitação e emissão adequados permitiram um aumento da intensidade do sinal de fluorescência e maior discriminação entre soros positivos e negativos. A reação foi realizada com extrato total de T. gondii adsorvido em fase sólida e para o controle positivo das reações, utilizamos a adsorção de classes de imunoglobulinas purificadas, evitando o uso de raros soros positivos controles. A validação do FISAt foi feita com 500 amostras de soro em sua maioria gestantes do HCFMUSP previamente analisadas por ensaios comerciais realizados em outro laboratório (Elecsys Toxo IgG/IgM, e IFAT IgM) ou ELISA IgG/IgM/IgA. Comparado com o Elecsys Toxo IgG/IgM, o FISAt IgG mostrou boa concordância (Kappa=0.77), com sensibilidade de 76.2% e especificidade de 96.8%, enquanto que o FISAt IgM mostrou boa concordância (Kappa=0.63), menor sensibilidade de 62.1% e especificidade de 97.6%. O FISAt foi mais concordante com o ELISA tanto na detecção de IgG, quanto de IgM anti-T. gondii (Kappa>70%), com maior sensibilidade de 82% e similar especificidade. E o FISAt IgA obteve excelente concordância com o ELISA (Kappa=0.77), com sensibilidade de 92.0% e especificidade de 98.3%. Em comparação com o método confirmatório IFAT IgM, o FISAt IgM mostrou sensibilidade de 100% e especificidade de 94.6%. Das 420 gestantes, 0.7% obtiveram resultado de baixa avidez de anticorpos IgG anti-T. gondii e foram identificadas na triagem como IgG, IgM e/ou IgA positivas em todos os testes avaliados, mostrando a eficiência discriminante do FISAt. O FISAt mostrou excelente reprodutibilidade (r2>0.82) e alto rendimento na triagem de grande número de amostras. Este novo teste múltiplo rápido e de detecção quantitativa pode ser usado em sistemas robóticos e tem uma aplicabilidade essencial para a triagem e tratamento de gestantes em risco de toxoplasmose congênita, ou para outras abordagens diagnosticas de alto volume de amostras. / Toxoplasmosis is an infection that can cause serious fetal damage when obtained during pregnancy. The diagnosis is mainly serological and should be done monthly monitoring seronegative pregnant women, which has increased in recent years. The serological screening for these pregnant women demands high performance and efficiency methodologies which allow the rapid introduction of the treatment avoiding the disease manifestation. With this in mind, our goal was to develop a solid phase fluorescent serological assay for IgG, IgM and IgA detection against Toxoplasma gondii (FISAt). Our group has been develop new solid phase fluorimetric assays with sensitive and specific refined fluorescent conjugates with the possibility of simultaneous detection in the same reaction. For the construction of the FISAt, conjugates labeled with non-interfering emission fluorochromes were designed and produced with high efficiency and similar reactivity of enzymatic commercial conjugates. This design of conjugates with suitable filters generated an increase in fluorescence intensity with a higher signal between positives and negatives sera. The reaction was made with total extract of T. gondii adsorbed solid phase. Also, for the positive control of the reactions, we have used the adsorption of purified classes of immunoglobulins, avoiding the use of rare positive control sera. FISAt validation was performed with 500 serum samples, mostly from HCFMUSP pregnant women previously analyzed by commercial tests (Elecsys Toxo IgG/IgM, and IFAT IgM) or ELISA IgG/IgM/IgA. In comparation to Elecsys Toxo IgG/IgM, FISAt IgG has shown excellent agreement (Kappa=0.77), with a sensitivity of 76.2% and specificity of 96.8%, whereas IgM FISAt has shown a good agreement (Kappa=0.63), with a lower sensitivity (62.1%) and similar specificity (97.6%). FISAt was more consistent with ELISA in both anti-T. gondii IgG and IgM detection (Kappa> 70%), with greater sensitivity (82%) and similar specificity. FISAt IgA obtained excellent agreement with the ELISA (Kappa = 0.77), showing 92.0% of sensitivity and 98.3% of specificity. In comparison with the IFAT IgM confirmatory method, FISAt IgM showed excellent sensitivity of 100% and specificity of 94.6%. Amongst 420 pregnant women, 0.7% had a low avidity anti-T. gondii IgG antibody result and were identified in the screening as IgG, IgM and/or IgA positive in all the evaluated tests, showing the discriminant efficiency of the FISAt. FISAt showed excellent reproducibility (r2>0.82) and a great income for high throughput screening. This new rapid and quantitative multiple detection assay can be used in robotic systems and has an essential applicability for screening and treatment of pregnant women at congenital toxoplasmosis risk, as well as for others diagnostic approaches of high volume samples.

A Cannabis sativa L., conhecida popularmente no Brasil como maconha, tem sido apontada como a droga de uso ilícito de maior consumo no mundo contemporâneo. As análises toxicológicas utilizadas para verificar o seu uso vem ganhando cada vez maior importância em diversos ambientes de trabalho, desportivos, prisões, clínicas para tratamento de farmacodependência, centros de emergência toxicológica, enfermarias de psiquiatria, entre outros. A presença de canabinóides na urina indica o uso de produtos derivados da planta Cannabis. A maioria dos estudos encontrados na literatura especializada se refere ao perfil de eliminação do 11-nor-&#916 9-THC-COOH, principal produto de biotransformação do &#916 9-THC, que, dependendo da sensibilidade e especificidade da técnica analítica utilizada, poderá ser detectado a longo prazo na urina. Uma constante preocupação é determinar o período de detecção, ou seja, o tempo transcorrido desde a interrupção do uso da droga até a obtenção do primeiro resultado negativo na urina. Este trabalho teve como objetivo investigar o período de detecção de canabinóides urinários em uma população usuária de Cannabis, residentes em uma clínica de tratamento, pela técnica de imunofluorescência polarizada, considerando 50 ng/mL como valor de referência. Foi avaliada a influência do padrão de uso da droga no período de detecção de canabinóides. Entre os pacientes estudados, o período de detecção foi de grande variação: de 33 a 498 horas. Não houve correlação estatística relevante entre o período de detecção e as variáveis freqüência de uso, tempo total de utilização e quantidade de cigarros utilizada na última exposição. / The marijuana, one of the products originated from the Cannabis sativa L., is the illicit used drug of major consume in the world. The toxicological analysis to verify the use of the drug are increasing importance in several workplaces drug-testing programs, sportive, prisions, drug treatment and rehabilitation clinics, emergency toxicology departments and other. The cannabinoids in urine indicates the exposition of products originated from the Cannabis. An important concern is to determine the detection times of cannabinoids in urine i.e. the time from the use of the drug until the first negative result. Most of the studies in the speciallized literature report the elimination profile of the 11-nor-9-carboxy- &#916 9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), which the primary cannabinoid metabolite. According to those studies, the urinary cannabinoids detection times can be made for a long time depending on the sensibility and accuracy of the methods used. The purpose of this work was estudy the detection time of the urinary cannabinoids in the marijuana users population after drug abstaining, by FPIA, using a 50ng/mL cutoff. The pattern in drug use influence on the urinary cannabinoids detection times was evaluated. The detection time in the studied population ranged from 33 to 498 hours. The statistic correlation between the detection time and the drug use pattern was not significant (p&#8804 0,05).

A Cannabis sativa L., conhecida popularmente no Brasil como maconha, tem sido apontada como a droga de uso ilícito de maior consumo no mundo contemporâneo. As análises toxicológicas utilizadas para verificar o seu uso vem ganhando cada vez maior importância em diversos ambientes de trabalho, desportivos, prisões, clínicas para tratamento de farmacodependência, centros de emergência toxicológica, enfermarias de psiquiatria, entre outros. A presença de canabinóides na urina indica o uso de produtos derivados da planta Cannabis. A maioria dos estudos encontrados na literatura especializada se refere ao perfil de eliminação do 11-nor-&#916 9-THC-COOH, principal produto de biotransformação do &#916 9-THC, que, dependendo da sensibilidade e especificidade da técnica analítica utilizada, poderá ser detectado a longo prazo na urina. Uma constante preocupação é determinar o período de detecção, ou seja, o tempo transcorrido desde a interrupção do uso da droga até a obtenção do primeiro resultado negativo na urina. Este trabalho teve como objetivo investigar o período de detecção de canabinóides urinários em uma população usuária de Cannabis, residentes em uma clínica de tratamento, pela técnica de imunofluorescência polarizada, considerando 50 ng/mL como valor de referência. Foi avaliada a influência do padrão de uso da droga no período de detecção de canabinóides. Entre os pacientes estudados, o período de detecção foi de grande variação: de 33 a 498 horas. Não houve correlação estatística relevante entre o período de detecção e as variáveis freqüência de uso, tempo total de utilização e quantidade de cigarros utilizada na última exposição. / The marijuana, one of the products originated from the Cannabis sativa L., is the illicit used drug of major consume in the world. The toxicological analysis to verify the use of the drug are increasing importance in several workplaces drug-testing programs, sportive, prisions, drug treatment and rehabilitation clinics, emergency toxicology departments and other. The cannabinoids in urine indicates the exposition of products originated from the Cannabis. An important concern is to determine the detection times of cannabinoids in urine i.e. the time from the use of the drug until the first negative result. Most of the studies in the speciallized literature report the elimination profile of the 11-nor-9-carboxy- &#916 9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), which the primary cannabinoid metabolite. According to those studies, the urinary cannabinoids detection times can be made for a long time depending on the sensibility and accuracy of the methods used. The purpose of this work was estudy the detection time of the urinary cannabinoids in the marijuana users population after drug abstaining, by FPIA, using a 50ng/mL cutoff. The pattern in drug use influence on the urinary cannabinoids detection times was evaluated. The detection time in the studied population ranged from 33 to 498 hours. The statistic correlation between the detection time and the drug use pattern was not significant (p&#8804 0,05).